左归丸调节β2AR介导的RANKL/OPG信号通路改善去卵巢大鼠骨量和显微结构水平

目的:探讨左归丸治疗绝经后骨质疏松症的分子机制之一是通过对β_2-肾上腺素能受体(β_2AR)介导的核转录因子-κB受体激活因子配体(RANKL)/骨保护素(OPG)信号通路的调节。方法:通过去卵巢法建立骨质疏松模型,将40只雌性SPF级SD大鼠随机分为模型组、假手术组、雌二醇(50μg·kg~(-1)·d~(-1))组、左归丸低、高剂量(2. 3,4. 6 g·kg~(-1))组。采用酶联免疫吸附实验检测血清骨转换标志物;显微CT对右侧股骨远端骨密度水平和骨小梁微结构进行测量和分析;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胫骨和下丘脑组织中β_2AR,OPG,RANK mRNA和蛋白表达水平。结果:与模型组比较,左归丸可显著降低大鼠血清中Ⅰ型胶原交联羧基端肽(β-CTX)水平(P 0. 01),增加骨特异性碱性磷酸酶(BALP)水平(P 0. 01),减少卵巢摘除诱导引起的大鼠骨量丢失,改善股骨远端骨小梁显微结构水平。同时,左归丸高、低剂量组均能显著上调胫骨组织中OPG mRNA和蛋白表达(P 0. 01),下调下丘脑组织β_2AR mRNA和蛋白表达水平(P 0. 01),同时也能显著下调胫骨组织中RANKL mRNA和蛋白表达水平(P 0. 01)。结论:左归丸改善围绝经期综合症,增加骨量和改善骨小梁显微结构水平的分子机制可能与对β_2AR介导的RANKL/OPG信号通路的调节有关。     

补肾法对去卵巢大鼠OPG/RANK/RANKL信号通路影响的Meta分析

目的 随着全球老龄化趋势的发展,绝经后骨质疏松症（PMOP）已成为世界性的女性健康问题。目前常用的生物制剂存在不良反应多、无法长期用药等缺陷。多项Meta分析已证明补肾法对PMOP患者的安全性和有效性,但其治疗机制尚不明确。该文Meta分析评估基于PMOP动物模型的补肾法对骨保护素（OPG）/核转录因子（NF）-κB受体激活因子（RANK）/NF-κB受体激活因子配体（RANKL）信号通路的影响,为用补肾法治疗PMOP提供实验依据。方法 计算机检索PubMed,Ovid Medline,Embase,中国知网（CNKI）,维普和万方数据库,以收集检索从建库至2020年1月的研究,并对每篇纳入文章的研究质量进行了评估。根据SYRCLE的偏倚风险工具对每一篇纳入的文章的研究质量进行评价。使用RevMan 5.3软件根据Cochrane系统评价方法进行Meta分析。结果 包括619只大鼠的32项研究,纳入研究的质量分数都在3~5分。Meta分析结果表明,补肾法在增加骨密度（BMD）值方面优势明显［标准化均数差（SMD）=2.01,95%置信区间（CI）=1.50~2.52,P<0.000 01］。同时补肾法可增加卵巢切除（OVX）大鼠骨组织中血清OPG水平（SMD=3.33,95% CI=2.59~4.07,P<0.000 01）,提高OPG mRNA表达（SMD=11.81,95% CI=7.49~16.13,P<0.000 01）和促OPG蛋白生成（SMD=4.95,95% CI=3.09~6.81,P<0.000 01）。补肾法可以降低血清RANKL水平（SMD=-4.88,95% CI=-6.01~-3.75,P<0.000 01）和RANK水平（SMD=-7.30,95% CI=-9.53~-5.07,P<0.000 01）;补肾法还可降低骨RANKL mRNA（SMD=-6.22,95% CI=-8.95~-3.49,P<0.000 01）和骨RANK mRNA（SMD=-3.18,95% CI=-6.19~-0.18,P<0.05）及RANKL蛋白在骨组织中的表达（SMD=-3.99,95% CI=-5.47~-2.50,P<0.000 01）。结论 该研究发现补肾法在调节PMOP的动物模型中OPG/RANK/RANKL信号通路平衡方面具有重要优势,但仍然需要更多的样本,合理的设计和高质量的动物实验来进行进一步的验证。     

左归丸对去势骨质疏松模型大鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:观察左归丸对去势骨质疏松大鼠模型骨代谢和Wnt/β-链蛋白(β-catenin)信号通路的影响,探讨左归丸防治骨质疏松症的分子生物学机制。方法:采用双侧卵巢切除法制备绝经后骨质疏松症大鼠模型,60只雌性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,雌二醇组(戊酸雌二醇片0.05 mg·kg^-1·d^-1),左归丸低、中、高剂量组(5.5,11,22 g·kg^-1·d^-1)。从造模成功后(第13周)开始,每日灌胃(ig)1次,共持续12周。给药结束后,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察大鼠股骨组织结构变化;双能X射线仪检测各组大鼠股骨骨密度(BMD)和骨矿质(BMC);MTS Acumen3型生物力学测试系统检测各组大鼠骨生物力学性能;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中骨碱性磷酸酶(BALP),骨钙素(BGP),抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP),Ⅰ型前胶原氨基端前肽(PINP)等骨代谢标志物含量及雌二醇(E2)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠胫骨组织中Wnt2,β-catenin,低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP5)水平及糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)磷酸化水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠BMD,BMC,最大载荷和刚度显著降低(P<0.01),血清E2和PINP含量显著降低(P<0.01),BALP,BGP,TRAP含量显著升高(P<0.01),骨组织中Wnt2,p-GSK-3βSer9,LRP5和β-catenin蛋白表达水平显著降低(P<0.01),股骨骨小梁稀疏变细,数量减少;与模型组比较,雌二醇组和左归丸各组BMD,BMC,最大载荷和刚度明显升高(P<0.05,P<0.01),血清E2和PINP含量明显升高(P<0.05,P<0.01),BALP,BGP,TRAP含量显著降低(P<0.01),骨组织中Wnt2,p-GSK-3βSer9,LRP5,β-catenin蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),股骨骨小梁较模型组变粗,数量增加,结构基本清晰。结论:左归丸对去势大鼠骨质疏松症具有一定的防治作用,其机制可能与提高雌激素水平,激活Wnt/β-catenin信号通路,上调Wnt2和LRP5蛋白表达,抑制GSK-3β的活性,减少β-catenin的降解,协调骨形成与骨吸收的动态耦联平衡,纠正骨代谢紊乱,从而改善骨组织形态相关。     

补肾中药基于OPG/RANKL/RANK信号通路对原发性骨质疏松症作用机制的研究进展

原发性骨质疏松症(primary osteoporosis,POP)是老年男性及绝经后女性常见的退行性骨代谢疾病,其并发症所导致的致残率或致死率已成为全球公共难题。骨保护素(osteoprotegerin,OPG)/核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)/核因子-κB受体活化因子(receptor activator of nuclear factor-κB,RANK)信号通路与骨代谢有着密切的联系。中药通过该信号通路治疗POP具有明显的优势,尤以补肾类中药最为突出。但是,关于补肾中药基于该信号通路治疗POP的调节机制仍然缺乏相对全面且系统的归纳总结。因此,基于OPG/RANKL/RANK信号通路在骨代谢的调节机制,从单味中药及中药复方的角度综述补肾中药防治POP的作用机制,为今后POP相关基础及临床研究提供理论依据。     

二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病大鼠β2AR/β-arrestin2信号通路的影响

目的:探讨二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型β_2肾上腺素受体(β_2AR)/β-抑制蛋白2(β-arrestin2)信号通路的影响,以及血清、肺组织匀浆液和支气管肺泡灌洗液中IL-17表达的影响。方法:将70只SD大鼠随机分为7组,即正常组、模型组、二陈汤加味高、中、低剂量(40,20,10 g·kg~(-1)·d~(-1))组、消咳喘组(5 g·kg~(-1)·d~(-1))、二陈汤组(5 g·kg~(-1)·d~(-1)),每组10只。以烟熏与脂多糖(LPS)气管滴注并用的方法制备大鼠COPD大鼠模型。造模成功后,治疗组分别灌胃给药,正常及模型组则灌等量的生理盐水。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠血清、肺组织匀浆液和支气管肺泡灌洗液中白细胞介素-17(IL-17)的含量;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测β_2AR的mRNA表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织β_2AR的蛋白表达;采用免疫组化检测肺组织β_2AR,β-arrestin2的蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组肺组织中β_2AR的蛋白表达显著降低(P0.01);与模型组比较,肺组织中β_2AR的蛋白表达显著增加(P0.01),其中二陈汤加味中剂量组与其他各组均有差异(P0.05)。与正常组比较,模型组β_2AR mRNA表达显著降低(P0.01);与模型组比较,二陈汤加味高、中、低剂量组、消咳喘组、二陈汤组中β_2AR的mRNA表达均显著升高(P0.01)。其中二陈汤加味中剂量组与其他各给药组比较升高显著(P0.01)。与正常组比较,模型组血清中IL-17含量显著升高(P0.01),与模型组比较,各给药组血清中IL-17的含量均受到一定程度的抑制,其中二陈汤加味中剂量组受到的抑制程度尤为明显(P0.05)。结论:二陈汤加味可能通过升高β_2AR,β-arrestin2的表达,并以此降低IL-17的含量,来对抗COPD大鼠的炎症反应,并改善肺功能。     

左归丸对去卵巢骨质疏松大鼠肾脏 TGF-β1/Smad4 mRNA表达的影响

目的:研究左归丸对去卵巢骨质疏松大鼠的治疗作用及其机制.方法:SD雌性大鼠分为正常组,假手术组,模型组,左归丸高、中、低剂量组,及尼尔雌醇组,采用去卵巢的方法建立绝经后骨质疏松症模型,术后21 d开始给药:正常组,假手术组ig生理盐水;左归丸高、中、低剂量组分别ig6.4,3.2,1.6g·kg-1,1次/d;尼尔雌醇组ig0.021 g·kg-1,1次/周,连续60d.取大鼠左后肢股骨远端1/3做病理切片,光镜下观察骨组织形态学变化,测定骨小梁面积百分比(Tb· Ar);采用双能X射线骨密度仪测定右后肢离体股骨近端1/3及股骨整体的骨密度(BMD);采用RT-PCR法检测大鼠肾髓质的转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad4 mRNA表达.结果:与模型组比较,左归丸高、中剂量组骨小梁面积百分率(Tb· Ar)显著升高(P＜0.05),左归丸高、中剂量组的股骨的骨密度显著升高(P＜0.05);各组肾脏组织病理形态学未见明显病理变化;与正常组相比,模型空白组TGF-β1,Smad4 mRNA水平过高表达(P＜0.05);与模型组相比,各给药组肾组织中TGF-β1,Smad4 mRNA表达均显著下调(P＜0.05),且左归丸各剂量组的下调力度均强于尼尔雌醇组,但以左归丸低剂量组下调最为显著.结论:左归丸能有效防治绝经后骨质疏松症,其作用机制之一可能与其干预肾组织中TGF-β1/Smad4的信号转导通路有关.     

基于OPG/RANK/RANKL信号通路防治股骨头坏死的中医药研究进展

股骨头坏死（ONFH）是由于股骨头内的供血发生损害,细胞组织等发生变性,逐渐造成骨结构被破坏,股骨头进行性塌陷引起的疼痛及功能障碍性疾病。ONFH的主要病理机制在于微循环损害细胞组织能力下降、骨的吸收与新生骨的重建之间的平衡被破坏,其生物力学发生改变,加速股骨头坏死的病理进展。早期临床表现并不明显,主要为髋部或腹股沟区疼痛或酸痛,休息后可缓解,疾病发展后期可出现疼痛加剧,肢体短缩,下肢无力,行走困难或跛行。目前临床上西医常用促骨形成药、抗凝药和人工关节置换等治疗,但也存在假体松动、感染等诸多问题。研究表明,中医药治疗ONFH从整体出发,应用多功能、多靶点、多系统的中药治疗,保障了治疗途径的安全性和有效性。骨保护素（OPG）/核转录因子-κB受体活化因子（RANK）/核转录因子-κB受体活化因子配基（RANKL）信号通路在维持骨重建的动态平衡中具有关键地位,该通路利用中医药等治疗方式促进生物体内破骨细胞凋亡,减少骨吸收,加速骨形成,对于防治ONFH具有重要作用。该文通过查阅国内外相关文献,对OPG/RANK/RANKL信号通路影响相关细胞因子表达在ONFH中的作用,中药单体、中药复方及中药复方联合物理治疗增加成骨细胞分泌,促进OPG表达,提高细胞因子等表达水平,抑制破骨细胞活性等方式以防治ONFH的研究现状进行综述,为中医药防治ONFH提供新的思路和方向。     

治尪汤联合甲氨蝶呤调节RANKL/OPG通路改善胶原诱导关节炎大鼠骨破坏的作用机制

目的 探究治尪汤联合甲氨蝶呤改善胶原诱导关节炎模型（CIA）大鼠的骨破坏作用及机制。方法 SD雄性大鼠随机分为正常组,模型组,甲氨蝶呤组（1.5 mg·kg^-1）,甲氨蝶呤+治尪汤低（40.8 g·kg^-1）,高（102.0 g·kg^-1）剂量组。除正常组外,其余大鼠分别于第1,7天尾部注射浓度为2 g·L^-1的Ⅱ型胶原乳剂50 μL建立CIA模型;第8天开始连续给药21 d,每7 d检测1次体质量、足趾厚度,进行关节炎指数（AI）评分,酶联免疫吸附测定法检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,白细胞介素-6（IL-6）,白细胞介素-1β（IL-1β）含量,抗酒石酸酸性磷酸酶染色法检测踝关节破骨细胞的数量,免疫组化（IHC）,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测踝关节核转录因子-κB受体活化因子配体（RANKL）,骨保护素（OPG）的表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠体质量显著降低（P<0.01）,足趾厚度显著增加（P<0.01）,踝关节AI评分显著增加（P<0.01）,血清TNF-α,IL-6,IL-1β含量显著升高（P<0.01）,踝关节破骨细胞数量显著增加（P<0.01）,踝关节RANKL mRNA和蛋白表达显著升高（P<0.01）,OPG mRNA和蛋白表达明显降低（P<0.05）,RANKL/OPG显著升高（P<0.01）。与模型组比较,甲氨蝶呤+治尪汤低、高剂量可改善大鼠体质量,降低足趾厚度,AI评分,RANKL mRNA和蛋白表达并增加OPG mRNA和蛋白表达,使RANKL/OPG降低（P<0.05,P<0.01）,且甲氨蝶呤+治尪汤高剂量效果最好,甲氨蝶呤+治尪汤低剂量次之,甲氨蝶呤再次之。结论 治尪汤联合甲氨蝶呤能更好地改善类风湿关节炎的骨破坏,可能是通过抑制RANKL/OPG通路实现的,本研究为中西医结合方案治疗类风湿关节炎骨破坏提供了实验基础。     

基于β2AR/β-arrestin2/NF-κB信号通路的清肠化湿颗粒防治溃疡性结肠炎的作用机制

目的:观察清肠化湿颗粒对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型大鼠及人结肠癌上皮细胞株HT-29炎症模型β_2肾上腺素受体(β_2AR)/β-抑制蛋白2(β-arrestin2)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的干预作用。方法:取8只大鼠作为空白组,其余大鼠采用三硝基苯磺酸(trinitro-benzene-sulfonic acid,TNBS)灌肠法复制UC大鼠模型;待模型建立成功后,随机分为模型组,柳氮磺胺吡啶(SASP,1.0 g·kg~(-1))组,清肠化湿颗粒低、中、高剂量(2.8,5.5,11.0 g·kg~(-1))组,每组8只,灌胃给药10 d,每日1次;酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定UC大鼠结肠组织中巨噬细胞移动抑制因子(MIF),基质金属蛋白酶-1(MMP-1),MMP-2,MMP-9,胰岛素样生长因子-1(IGF-1),超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),髓过氧化物酶(MPO),一氧化氮(NO),一氧化氮合成酶(iNOS),谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px);免疫组化法检测模型大鼠结肠黏膜β_2AR,β-arrestin2,NF-κB定位表达;采用肿瘤坏死因子与脂多糖诱导HT-29细胞炎症模型;噻唑蓝(MTT)比色法检测清肠化湿颗粒对细胞增殖的影响,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中β_2AR,β-arrestin2,NF-κB蛋白表达量。结果:造模后,模型组大鼠较空白组大鼠结肠黏膜的结肠损伤分数明显升高;与模型组比较,3个剂量的清肠化湿颗粒给药组结肠黏膜损伤明显下降(P0.05,P0.01),大鼠结肠组织IGF-1,SOD,GSH-Px含量与β_2AR,β-arrestin2表达明显上升,MIF,MMP-2,MMP-9,MDA,MPO,NO,iNOS含量及NF-κB表达明显下降(P0.05,P0.01)。结论:清肠化湿颗粒可缓解UC氧化应激反应及肠道炎症,其作用与激活β_2AR/β-arrestin2/NF-κB信号通路有关。     

壮骨止痛方对骨质疏松大鼠Wnt/β-catenin、RANKL/RANK/OPG信号通路的影响

目的探讨壮骨止痛方对骨质疏松雌鼠Wnt/β-链蛋白(Wnt/β-catenin)、核因子κB受体活化因子配体/核因子κB受体活化因子/骨保护蛋白(RANKL/RANK/OPG)信号通路的影响。方法将大鼠分为假手术组、模型组、壮骨止痛方高剂量组、壮骨止痛方低剂量组、雌二醇组,用酶联免疫法测定大鼠血清中β-catenin、OPG、RANKL的水平。结果模型组大鼠血清β-catenin明显降低,RANKL/OPG比值升高,经壮骨止痛方药物干预后,β-catenin水平明显升高,RANKL/OPG比值明显下降。结论壮骨止痛方可能通过提升大鼠血清β-catenin的含量,降低RANKL/OPG的比值,从而激活Wnt/β-catenin、RANKL/RANK/OPG信号通路,起到防治骨质疏松的作用。     

黄芩苷对扩张型心肌病大鼠心室重构、心室肌细胞凋亡及β1-AR/PKA/CaMKⅡ信号通路的影响

目的:探讨黄芩苷对阿霉素(ADR)诱导扩张型心肌病大鼠心室重构、心室肌细胞凋亡及β_1肾上腺素受体(β_1-AR)/蛋白激酶A(PKA)/钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)信号通路的影响。方法:雄性Wistar大鼠60只,随机分为正常组、模型组、黄芩苷低、中、高剂量组及卡维地洛组;模型组给予ADR 2 mg·kg~(-1)腹腔注射,黄芩苷组及卡维地洛组在模型组基础上分别给予黄芩苷(25,50,100 mg·kg~(-1)·d~(-1)),卡维地洛10 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃,正常组给予等体积0.9%NaCl腹腔注射,1次/周,共3次;7周末各组大鼠行心脏超声检测心室变化及心功能指标;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠血清氨基末端脑钠肽前体(N-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-pro BNP),人基裂解素(human stromelysin-2,ST2)含量;采用原位末端转移酶标记法(TUNEL)染色观察各组大鼠心室肌细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠心室肌组织中β_1-AR,PKA及CaMKⅡ表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠出现心室重构明显及心功能减弱(P0.05),血清NT-proBNP,ST2含量增多(P0.05),心室肌细胞凋亡数量增加(P0.05),心室肌组织中β_1-AR,PKA及CaMKⅡ表达增多;与模型组比较,黄芩苷及卡维地洛组大鼠心室重构及心功能改善(P0.05),血清NT-pro BNP,ST2含量降低(P0.05),心室肌凋亡数量减少(P0.05),心室肌组织中β_1-AR,PKA及CaMKⅡ表达减少(P0.05)。结论:黄芩苷可有效改善ADR诱导的扩张型心肌病大鼠心室重构,减少心肌细胞凋亡,其机制可能与抑制心室肌细胞β-AR/PKA/CaMKⅡ信号通路表达有关。     

黄芪甲苷通过调控FoxO3a/Wnt2/β-catenin通路抑制去卵巢大鼠骨质疏松的作用

目的:通过调控转录因子叉头框蛋白O3a(FoxO3a)/分泌型糖蛋白2(Wnt2)/β-连环蛋白(β-catenin)通路评价黄芪甲苷对去卵巢大鼠骨质疏松的作用,并探讨其作用机制。方法:雌性SD大鼠随机均分6组,分别为假手术组,模型组,阳性药组(尼尔雌醇,1.5 mg·kg-1),黄芪甲苷低、中、高剂量组(20,40,80 mg·kg-1),每组8只。通过摘除大鼠双侧卵巢复制绝经后大鼠骨质疏松模型。术后6周,灌胃给药,每日1次,连续8周。酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测大鼠骨钙素(bone gla protein,BGP),降钙素(calcitonin,CT),骨保护素(osteoprotegerin,OPG),核转录因子-κB(NF-κB)受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL),丙二醛(malondialdehyde,MDA),过氧化氢酶(catalase,CAT),谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量,双能X射线骨密度检测仪分别测定股骨和腰椎的骨密度值(bone mineral density,BMD),采用三点弯曲法测量胫骨生物力学指标,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠股骨组织中β-catenin,FoxO3a,Wnt2,p66~(shc),p-p66~(shc)蛋白的表达。结果:与模型组比较,黄芪甲苷组CT和OPG水平显著升高,BGP和RANKL水平则显著降低(P0.05,P0.01);黄芪甲苷显著升高腰椎、股骨的BMD和胫骨的最大载荷及最大应力(P0.05,P0.01);同时,黄芪甲苷显著降低MDA水平(P0.05),升高CAT,SOD和GSH-Px水平(P0.05,P0.01)。Western blot显示,黄芪甲苷显著降低p-p66~(shc)/p66~(shc)水平(P0.05);升高β-catenin和Wnt2蛋白表达水平(P0.05,P0.01),抑制FoxO3a蛋白表达水平(P0.01)。结论:黄芪甲苷能够有效缓解氧化应激介导的去卵巢大鼠的骨质疏松,该作用可能与其调节FoxO3a/Wnt2/β-catenin通路有关。     

二十五味鬼臼丸通过Wnt/β-catenin信号通路改善去卵巢大鼠骨质疏松症

目的 探讨藏族药二十五味鬼臼丸通过经典Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路改善去卵巢大鼠的骨质疏松症的机制。方法 将48只3月龄SD雌性大鼠随机分为模型组（OVX）、假手术组（Sham）、雌二醇组（E₂）、二十五味鬼臼丸高、中、低剂量组,除假手术组大鼠摘取卵巢附近部分脂肪组织外,其余各组大鼠均摘取卵巢构建去卵巢骨质疏松大鼠模型。术后2周开始给药处理,雌二醇组给予戊酸雌二醇0.1 mg·kg^-1,二十五味鬼臼丸组给予二十五味鬼臼丸高剂量800 mg·kg^-1,中剂量400 mg·kg^-1,低剂量200 mg·kg^-1,模型组及假手术组给予同体积的生理盐水,连续灌胃12周,每日1次。取材后,苏木素-伊红（HE）染色法观察大鼠右侧股骨及腰椎的骨形态变化;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRAP5b）、Ⅰ型胶原C端肽（CTX-Ⅰ）、骨特异性碱性磷酸酶（BALP）、Ⅰ型前胶原氨基端原肽（PINP）、骨钙素（BGP）的水平,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测股骨中β-catenin、矮小相关转录因子2（Runx2） mRNA表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测β-catenin、Runx2和低密度脂蛋白受体相关蛋白-5（Lrp‐5）蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠骨小梁紊乱且稀疏,骨小梁间连接较少,血清BALP、BGP、PINP水平显著下降（P<0.01）,CTX-Ⅰ、TRAP5b水平显著升高（P<0.01）;股骨组织中β-catenin、Runx2 mRNA的表达水平下降（P<0.01）;Lrp‐5、β‐catenin和Runx2的蛋白表达显著下降（P<0.01）。与模型组比较,二十五味鬼臼丸高、中、低剂量组大鼠上述指标的异常改变得到不同程度的恢复（P<0.05,P<0.01）。结论 藏族药二十五味鬼臼丸对于治疗去卵巢大鼠骨质疏松症具有较好的效果,其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关,通过上调信号通路中成骨相关基因的表达影响骨代谢。     

补肺益肾方对TGF-β1/BMP-4诱导的肺血管平滑肌细胞TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的:探讨补肺益肾方对转化生长因子-β1(TGF-β1)/骨形成蛋白-4(BMP-4)诱导的肺血管平滑肌细胞增殖及TGF-β1/Smad信号传导的影响,并探讨其相关的作用机制。方法:应用TGF-β1/BMP-4诱导人肺动脉平滑肌细胞增殖。细胞分为正常组(10%正常大鼠血清),诱导增殖组(含7.5μg·L-1TGF-β1与5.0μg·L-1BMP-4的10%正常大鼠血清),4%补肺益肾方含药血清(含7.5μg·L-1TGF-β1与5.0μg·L-1BMP-4,6%正常大鼠血清及4%补肺益肾大鼠血清),6%补肺益肾方含药血清(含7.5μg·L-1TGF-β1与5.0μg·L-1BMP-4,4%正常大鼠血清及6%补肺益肾大鼠血清)及8%补肺益肾方含药血清组(含7.5μg·L-1TGF-β1与5.0μg·L-1BMP-4,2%正常大鼠血清及8%补肺益肾大鼠血清)。24 h后,显微镜下观察细胞的密度,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine,Brd U)法检测细胞增殖,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Smad1,2,3和5以及p-Smad2/3蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1),结缔组织生长因子(CTGF),分化抑制因子-1(ID-1)和ID-2 mRNA的表达。结果:TGF-β1/BMP-4作用24 h后,细胞密度增加、细胞增殖率显著增加(P0.05),补肺益肾方抑制TGF-β1/BMP-4诱导的细胞增殖,显示出浓度依赖性,其中8%浓度显著抑制细胞增殖(P0.01)。TGF-β1/BMP-4及补肺益肾方均不影响Smad1,2,3和5蛋白的表达;但TGF-β1/BMP-4诱导p-Smad2/3的表达(P0.05),8%补肺益肾方显著抑制TGF-β1/BMP-4诱导的p-Smad2/3表达(P0.05)。TGF-β1/Smad2通路的下游效应基因的检测发现,TGF-β1/BMP-4及补肺益肾方均不影响PAI-1,ID-1和ID-2 mRNA的表达;但TGF-β1/BMP-4诱导后,CTGF mRNA表达水平的显著增加(P0.01),8%补肺益肾方抑制TGF-β1/BMP-4诱导的CTGF mRNA的表达(P0.05)。结论:补肺益肾方抑制TGF-β1与BMP-4合用诱导的肺动脉平滑肌细胞的增殖,抑制p-Smad2/3/CTGF通路的活化是可能的作用途径。     

基于RANKL/OPG探讨桂枝芍药知母汤对骨质疏松症模型大鼠的治疗作用

目的 基于大鼠卵巢切除术（OVX）联合糖皮质激素注射致骨质疏松模型探讨桂枝芍药知母汤（GSZT）对骨质疏松症（OP）模型SD雌鼠的治疗作用。方法 OVX手术1周后,除假手术组外,大鼠分为OP模型组、骨化醇组（0.1 mg·kg^-1）,GSZT低、中、高剂量组（0.8,1.6,3.2 g·kg^-1）。除假手术组,大鼠肌肉注射地塞米松（1 mg·kg^-1,2次/周）,连续6周;给药8周后,处死动物收集股骨样本,计算机微断层扫描（Micro CT）扫描股骨远端1/3,检测骨矿物质密度（BMD）,骨体积（BV）,组织体积（TV）,结构模式指数（SMI）,骨小梁连接密度（Conn.D）,骨小梁数目（Tb.N）,骨小梁厚度（Tb.Th）,和骨小梁分离度（Tb.Sp）。采用苏木素-伊红（HE）染色和马松（Masson）染色检查股骨组织病理学改变。采用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色分析骨组织中破骨细胞。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测骨组织基质金属蛋白酶-9（MMP-9）,组织蛋白酶K（CTSK）,抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRAP5b）的含量;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测骨组织中核转录因子-κB受体活化因子配体（RANKL）,骨保护素（OPG）,碱性磷酸酶（ALP）,骨碱性磷酸酶（BALP）蛋白表达。结果 与正常组比较,OP模型大鼠骨松质部位骨小梁数量明显减少,间距增宽,厚度变薄,连续性差;与模型组比较,GZST中、高剂量组对股骨骨松质的骨小梁改变均有改善作用。Masson染色表明与正常组比较,OP模型组股骨远端骨骺生长板厚度变薄,新生骨面积变小,骨化醇及GZST高剂量组可抑制新生骨的减少。TRAP染色结果表明,与正常组比较,OP组破骨细胞数目明显增加,与模型组比较,GZST中、高剂量组可减少OP大鼠破骨细胞数量。Micro CT结果表明,与正常组比较,OP大鼠BMD,BV,Tb.N,Tb.Th和Conn.D减小,SMI和Tb.Sp显著升高（P<0.01）;与模型组比较,GZST中、高剂量可改善OP大鼠骨质疏松程度,BV,Tb.N显著升高,SMI,Tb.Sp显著降低（P<0.01）。ELISA结果表明,与正常组比较,OP模型组ALP含量显著减少（P<0.01）,MMP-9,TRAP5b和CTSK含量显著增多（P<0.01）;与模型组比较,GSZD高剂量ALP含量显著升高（P<0.01）,MMP-9,TRAP5b和CTSK显著减少（P<0.01）。Western blot结果表明,与模型组比较,骨化醇组及GSZD高剂量组均抑制RANKL蛋白的表达（P<0.05）,提高OPG表达（P<0.05）。结论 本研究表明GZST对OVX联合激素引起的大鼠骨质疏松具有治疗作用,其机制与调节RANKL,OPG相关,为其进一步的临床应用和现代制剂开发奠定了一定基础。     

淫羊藿苷通过Wnt/β-catenin信号通路抑制淀粉样蛋白Aβ 25-35所诱导的神经毒性

 目的 研究淫羊藿苷（icariin）对β-淀粉样蛋白（Aβ_25-35）所致的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株（PC12细胞）神经毒性的抑制作用和潜在机制。 方法 将PC12细胞分为正常对照组、Aβ_25-35损伤组、淫羊藿苷与Aβ_25-35共同给药组、淫羊藿苷单独给药组,然后考察淫羊藿苷对PC12细胞损伤的保护作用,以及淫羊藿苷对Wnt/β-catenin信号通路的调节作用。结果 淫羊藿苷可以显著的抑制Aβ_25-35所诱导的PC12细胞神经毒性,提高细胞存活率,此外其还可以降低凋亡相关蛋白caspase-3和PARP的激活。机制研究发现,淫羊藿苷可以激活Wnt/β-catenin信号通路中的关键蛋白β-catenin的活性,抑制其磷酸化,并促进该蛋白向细胞核中的转运。此外,淫羊藿苷还可以通过调节不同的磷酸化位点来抑制GSK-3β信号蛋白的活化。结论 淫羊藿苷可显著抑制Aβ_25-35所致的PC12细胞的毒性作用,其潜在机制可能是通过激活Wnt/β-catenin信号通路来实现的。     

断藤益母汤对破骨细胞RANKL信号通路及MMP-9的影响

目的:探讨断藤益母汤(DTYMD)对破骨细胞(OC)核转录因子-κB(NF-κB)受体活化因子配体(RANKL)信号通路及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的影响及其骨保护的作用机制。方法:通过诱导RAW264.7巨噬细胞建立体外破骨细胞培养体系;设空白组,模型组,DTYMD(400,600,800,1 000 mg·L~(-1))组和甲氨蝶呤(2 mg·L~(-1))组,然后通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色对破骨细胞进行鉴定;细胞增殖检测(CCK-8)各组细胞生存率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测RANKL信号通路关键蛋白表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组细胞MMP-9表达水平的变化。结果:TRAP染色显示,与模型组相比,DTYMD 400,600 mg·L~(-1)组融合细胞数量有所减少,但差异无统计学差异;DTYMD 800,1 000 mg·L~(-1)组融合细胞数目显著减少(P0.01)。CCK-8结果显示,与模型组比较,DTYMD 600,800,1 000 mg·L~(-1)组和甲氨蝶呤2 mg·L~(-1)组生存率明显下降(P0.05,P0.01)。Western blot结果显示,与模型组相比,DTYMD 1 000 mg·L~(-1)组、甲氨蝶呤2 mg·L~(-1)组中RANKL蛋白表达有所下降(P0.05)。DTYMD各组中的OPG蛋白表达水平无明显变化。ELISA结果显示,与模型组相比,DTYMD各组及甲氨蝶呤组中的MMP-9表达水平均有所下降,且DTYMD质量浓度越高,下降越明显(P0.05,P0.01)。结论:断藤益母汤可能是通过下调RANKL和MMP-9的表达以及抑制破骨细胞的分化和增殖而起到骨保护作用。     

盆炎方对盆腔炎性疾病后遗症大鼠卵巢、子宫组织TGF-β1、TβRⅡ蛋白的影响

目的通过观察盆腔炎方对盆腔炎性疾病后遗症雌性大鼠子宫组织、卵巢组织转化生长因子(transforming growth factor-β1,TGF-β1)及其受体Ⅱ(transforming growth factor-βreceptorⅡ,TβRⅡ)水平的影响,探讨其治疗盆腔炎性疾病后遗症的机制。方法将124只SD雌性大鼠随机抽取空白组10只、假手术组10只后造模,造模成功后按体质量随机分为盆炎方高、中、低剂量组,模型组及妇科千金胶囊组各15只。药物干预21天后,采用免疫组化法检测大鼠卵巢、子宫组织TGF-β1、TβRⅡ的表达。结果与空白组和假手术组比较,模型组子宫、卵巢组织TGF-β1、TβRⅡ表达均升高,差异有统计学意义(P0.01)。与模型组比较,盆炎方各剂量组和妇科千金胶囊组能不同程度地降低模型大鼠子宫组织、卵巢组织TGF-β1及TβRⅡ水平,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。盆炎方各剂量组中,以高剂量组的疗效最佳,且与妇科千金胶囊相当。结论盆炎方可能通过降低盆腔炎性疾病后遗症模型大鼠子宫组织、卵巢组织中粘连修复相关指标TGF-β1及TβRⅡ的表达,缓解和消除局部炎症过程,从而治疗盆腔炎性疾病后遗症。     

鳖甲煎丸对肝纤维化大鼠TGF-β1/samd信号通路的影响

目的 探讨鳖甲煎丸抗肝纤维化的作用机制。方法 SD大鼠随机分成6组：对照组,模型组,秋水仙碱（0.1 mg/kg）阳性对照组,鳖甲煎丸低、中、高剂量（0.55、1.1、2.2 g/kg）组。除对照组外,其他各组大鼠sc 40% CCl₄橄榄油溶液,每周2次,连续给予6周,建立大鼠肝纤维化模型。在造模同时,各给药组每天给予相应药物10 mL/(kg?d) 1次,连续给药11周。于11周末处死大鼠,免疫组化法检测肝组织中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测大鼠肝组织中转化生长因子（TGF-β₁）及smad 3基因的表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠肝组织α-SMA蛋白及TGF-β₁、smad 3基因的表达显著上调（P＜0.05）。与模型组比较,鳖甲煎丸和秋水仙碱可显著降低大鼠肝组织α-SMA蛋白及TGF-β₁、smad 3基因的表达,其中以鳖甲煎丸2.2 g/kg的效果更显著。结论 鳖甲煎丸抗肝纤维化作用机制可能与其下调TGF-β₁/smad 3信号通路、抑制肝星状细胞活化和增殖有关。     

湿热痹清丸治疗类风湿关节炎湿热痹阻证的临床观察及对OPG/RANKL/RANK通路和TNF-α的影响

目的 通过研究湿热痹清丸治疗类风湿关节炎湿热痹阻证的临床疗效及对患者血清骨保护素（OPG）、核转录因子-κB受体活化因子配体（RANKL）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的影响,从骨破坏的角度探讨其作用机制。方法 采用随机数字表法将纳入的类风湿关节炎湿热痹阻证患者分为两组,每组各36例患者。对照组给予口服甲氨蝶呤片、塞来昔布胶囊治疗;治疗组在对照组的基础上配合口服中成药湿热痹清丸治疗,其治疗周期为3个月。分别记录治疗前和治疗后疼痛视觉模拟（VAS）评分、关节压痛数、关节肿胀数、疾病活动度评分（DAS28-ESR）、中医症状量化积分及相关不良反应并检测外周血清OPG、RANKL、TNF-α、红细胞沉降率（ESR）、C反应蛋白（CRP）水平。结果 治疗后,治疗组总有效率为88.57%（31/35）,对照组总有效率为79.41%（27/34）,治疗组总有效率高于对照组（Z=-2.089,P<0.05）。与本组治疗前比较,两组疼痛VAS评分、关节压痛数、关节肿胀数及DAS28-ESR均明显降低（P<0.05）;治疗后与对照组比较,治疗组疼痛VAS评分、关节压痛数、关节肿胀数及DAS28-ESR改善更明显（P<0.05）。与本组治疗前比较,两组中医症状量化积分明显降低（P<0.05）;治疗后与对照组比较,治疗组中医症状量化积分降低更明显（P<0.05）。与本组治疗前比较,两组RANKL、TNF-α、ESR、CRP水平均明显降低,OPG水平明显升高（P<0.05）;治疗后与对照组比较,治疗组RANKL、TNF-α、ESR、CRP水平降低更明显,OPG水平升高更明显（P<0.05）。在本次临床试验期间未出现任何严重不良事件及严重不良反应。结论 湿热痹清丸可以有效改善湿热痹阻型类风湿关节炎患者的临床症状,有较好的安全性;湿热痹清丸可以有效调控OPG/RANKL/RANK系统,同时降低促炎因子TNF-α,这有可能是其干预RA骨破坏的作用机制。