miRNA-126/miRNA-126*在大鼠正常胎肺发育过程中的作用

目的：探讨miRNA-126/miRNA-126*在大鼠胎肺发育中的表达水平及其作用。方法：12只孕鼠随机分为3组,每组4只,3组仔鼠分别于胎龄16 d、19 d组和21 d时取出,运用苏木精-伊红染色在仔鼠胎肺发育的这3个关键时期对胎肺进行形态学观察,随后通过建立microRNA（miRNA）芯片,了解miRNA-126/miRNA-126*在3组仔鼠胎肺中的基本表达趋势,进而挑选出miRNA-126*并应用real-time PCR对其表达水平行进一步研究。结果：miRNA-126在3组芯片间表达无明显差异,而miRNA-126*随着肺发育进程表达量逐渐上升;采用real-time PCR对miRNA-126*表达进行进一步检测,结果亦显示miRNA-126*随着肺发育进程表达量逐渐上升,组间两两比较差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：miRNA-126*可能在大鼠胎肺发育中起着重要作用。     

肥大细胞microRNA-126表达差异对白介素-4分泌影响观察

目的观察micro RNA(mi R)-126在哮喘患儿外周血中的表达特点,检测其下调对肥大细胞白介素(IL)-4分泌的影响及可能机制。方法以2015年9~12月在南京医科大学附属南京儿童医院哮喘专科门诊就诊的哮喘患儿6例作为观察组,收集同期健康体检儿童作为对照组。应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测2组外周血mi R-126的表达差异。采用RT-PCR检测小鼠肥大细胞株(P815)中mi R-126的变化。将P815细胞分别转染mi R-126阴性对照序列(阴性对照组)及mi R-126抑制物(mi R-126下调组),应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测2组细胞上清IL-4水平,应用免疫印迹法(Western Blot)验证2组细胞磷酸化P38水平。结果哮喘组外周血mi R-126水平显著高于对照组(P0.05)。在细胞水平的研究发现,脂多糖(LPS)刺激后P815中mi R-126表达量增加(P0.05)。而mi R-126下调组的IL-4及磷酸化P38水平均低于阴性对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 mi R-126在哮喘患儿外周血表达升高。下调mi R-126可能通过减少磷酸化P38蛋白表达抑制肥大细胞IL-4分泌。     

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目的 研究白三烯D4是否参与调节支气管上皮细胞表达嗜酸性粒细胞趋化因子-3(eotaxin-3,Eot-3),探讨白三烯和支气管上皮细胞在气道变态反应性炎症中的作用.方法 用白三烯D4预处理支气管上皮细胞1h,然后用白细胞介素-4(IL-4)刺激细胞24h,RT-PCR法检测Eot-3在mRNA水平的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中Eot-3蛋白的表达.结果 未经处理的支气管上皮细胞仅表达微量的Eot-3,用IL-4刺激细胞并培养24h后,在mRAN和蛋白水平的Eot-3表达明显增强,白三烯D4预处理细胞1h,可以使IL-4的这种诱导作用加强.结论 支气管上皮细胞不仅是一种屏障细胞,也是一种效应细胞,在炎症介质的刺激下能表达Eot-3,参与支气管炎症的产生.白三烯D4通过上调IL-4诱导Eot-3在上皮细胞的表达可能是其参与支气管哮喘嗜酸性粒细胞炎症的机制之一.     

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目的研究肺炎支原体肺炎(MPP)患儿血清及诱导痰中白细胞介素-4(IL-4)及γ-干扰素(IFN-γ)质量浓度变化,探讨其在MPP发病机制中的作用。方法2003年2~8月对中国医科大学附属二院儿科住院的MPP患儿38例,用ELISA法测定38例血清及24例诱导痰中急性期及恢复期的IL-4及IFN-γ质量浓度。结果MPP患儿血清及诱导痰IL-4质量浓度急性期明显高于恢复期和正常对照组(P<0·01);IL-4/IFN-γ比值急性期高于恢复期和正常对照组(P<0·05)。MPP患儿急性期血清及诱导痰IL-4质量浓度重症组明显高于轻症组(P<0·01),急性期血清及诱导痰IL-4/IFN-γ比值重症组高于轻症组(P<0·05);诱导痰与血清两种标本检测结果一致,诱导痰中的质量浓度高于血清中的质量浓度,两者呈正相关。结论MPP患儿存在TH1/TH2功能紊乱,MPP患儿TH2反应占优势,IL-4及IFN-γ参与MPP患儿的免疫状态改变,在MPP发病机制中发挥一定作用。     

过敏性紫癜性肾炎患儿共刺激分子4-1BB/4-1BBL 变化及其临床意义

目的探讨共刺激分子4-1BB/4-1BBL在过敏性紫癜性肾炎(HSPN)患儿外周血单个核细胞(PBMC)中的表达及其临床意义。方法选取初发过敏性紫癜无肾炎(HSP组)、初发过敏性紫癜性肾炎(HSPN组)患儿各20例(其中15例进行了肾脏病理检查),20例正常儿童为对照组,分离培养PBMC。应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测并比较三组PBMC中4-1BB m RNA和4-1BBL m RNA的变化,分析4-1BB/4-1BBL m RNA变化与肾脏病理的关系。结果HSPN、HSP患儿PBMC中4-1 BB m RNA、4-1 BBL m RNA的表达均高于对照组,差异有统计学意义(P均0.01)。HSPN患儿的病理积分与4-1BB/4-1BBL m RNA表达呈正相关关系(r=0.570、0.515,P均0.05)。PBMC中,加入植物血凝素后,HSPN组、HSP组和对照组4-1 BB/4-1 BBL m RNA的表达均高于空白对照组,差异有统计学意义(P均0.01),其中HSP、HSPN组增高幅度较对照组明显,HSPN组增高幅度较HSP组更为显著,差异有统计学意义(P均0.01);加入地塞米松后,HSPN组、HSP组4-1 BB/4-1 BBL m RNA的表达均较空白对照组减少,差异有统计学意义(P均0.01)。结论 HSPN患儿PBMC中共刺激分子4-1BB/4-1BBL m RNA的表达显著增高,植物血凝素能诱导其高表达,而地塞米松能抑制其表达,提示4-1BB/4-1BBL可能参与HSPN的发病。     

支气管哮喘患儿诱导痰液中白细胞介素-4及γ-干扰素水平的研究

目的研究支气管哮喘患儿诱导痰液中白细胞介素（IL）-4及γ-干扰素（IFN-γ）水平变化，探讨其在哮喘发病机制中的作用。方法2004年2月～2006年6月儿科住院哮喘患儿36例，用ELISA法测定诱导痰中急性期及缓解期IL-4及IFN-γ水平。结果哮喘患儿诱导痰IL-4水平急性期明显高于缓解期和正常对照组（P〈0．01）；IFN-γ水平急性期低于缓解期及对照组（P〈0．05）；IL-4／IFN-γ比值急性期高于缓解期及对照组（P〈0．05）。急性期患儿诱导痰IL-4水平重症组明显高于轻症组（P〈0．01），IFN-γ水平重症组明显低于轻症组（P〈0．05），IL-4／IFN-γ比值重症组高于轻症组（P〈0．05）。结论哮喘患儿存在Thl／Th2功能紊乱，IL-4及IFN-γ参与哮喘患儿的免疫状态改变，在哮喘发病机制中发挥一定作用。     

白介素-4基因启动子多态性与儿童哮喘关系的研究

目的　探讨白介素 4(IL 4)基因启动子 (C5 90 T)多态性与儿童哮喘发病之间的关系。方法　采用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性分析 (PCR RFLP)方法检测 2 7例哮喘儿童、30例健康儿童IL 4基因C5 90 T基因型 ;采用ELISA法检测研究对象血IgE值。结果　哮喘组与健康对照组三种基因型 (CC、TT、CT)在分布上无显著性差异 (P >0 0 5 ) ;哮喘组T等位基因出现的频率为 0 6 48,对照组则为 0 5 83 ,两组比较无显著性差异(P >0 0 5 ) ;哮喘组与对照组三种基因型之间血IgE水平无显著性差异 (P >0 0 5 ) ;IgE升高与IgE正常组间基因多态性亦无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论　IL 4基因 (C5 90 T)多态性可能与儿童哮喘发病及IgE水平调节无关。     

哮喘患儿血浆白细胞介素-17、-10、-4及干扰素-γ的相关性及其临床意义

目的探讨哮喘患儿血浆IL17、IL10、IL4及IFNγ水平的相关性及其临床意义。方法哮喘患儿22例,正常对照20例。采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(SELISA)检测其血浆IL17、IL10、IL4及IFNγ水平。结果1.哮喘患儿急性期、缓解期血浆IL17均显著低于对照组(P均<0.01);而缓解期血浆IL17明显低于急性期(P<0.05)。2.哮喘患儿急性期血浆IL10显著高于缓解期及对照组(P均<0.01);缓解期与对照组比较无显著差异。3.哮喘患儿缓解期血浆IL4明显低于急性期及对照组(P均<0.05);急性期与对照组之间无显著差异。4.与对照组比较,哮喘患儿血浆IFNγ无明显改变。5.哮喘患儿急性期血浆中IL17、IL10、IL4、IFNγ水平之间均存在显著正相关(P均<0.01)。结论哮喘患儿T细胞因子水平的改变具有特殊性。糖皮质激素对IL17、IL10、IL4的分泌可能具有抑制作用。     

肺炎支原体脑炎患儿血清细胞因子干扰素-γ、白细胞介素-4的变化

目的探讨肺炎支原体(MP)脑炎患儿急性期血清干扰素-γ(IFN-γ)和IL-4水平变化及其意义。方法采用酶联免疫吸附(ELISA)双抗体夹心法检测MP脑炎24例急性期和24例健康儿童外周血血清IFN-γ和IL-4水平,并对确诊的MP脑炎患儿予阿奇霉素静脉滴注,10例同时应用地塞米松,15例应用丙种球蛋白治疗。结果健康对照组血清IFN-γ、IL-4为(85.35±6.91)、(26.78±9.89)ng/L;MP脑炎组IFN-γ、IL-4为(98.56±12.93)、(45.55±17.58)ng/L。MP脑炎组患儿IFN-γ、IL-4水平均较健康对照组升高,差异有显著性(Pa<0.05)。结论MP脑炎患儿血清INF-γ、IL-4均升高,提示MP脑炎发病可能与免疫功能紊乱相关,且可引起继发性免疫功能低下。     

过敏性紫癜患儿血浆白细胞介素-17、-10、-4 及干扰素-γ水平的临床意义

目的 探讨过敏性紫癜(HSP)患儿血浆白介素(IL)-17、IL-10、IL-4及干扰素-γ(IFN-γ)水平的相关性及其临床意义。方法 HSP患儿21例,正常对照组20例。采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(SELISA)检测其血浆IL-17、IL-10、IL-4、IFN-γ水平。结果 1.HSP患儿急性期及缓解期血浆IL-17均明显下降(P<0.01,<0.05),急性期及缓解期比较无显著差异.2.HSP患儿急性期血浆IL-10水平显著升高(P<0.01),急性期及缓解期间无差异。3.HSP患儿血浆IFN-γ无明显改变(P>0 05)。4.HSP患儿急性期及缓解期血浆IL-4略升高,但无差异(P>0.05)。5.HSP患儿急性期血浆中IL-17、IL-10、IL-4、IFN-γ水平均存在显著相关性。结论HSP患儿血浆中存在T细胞因子分泌紊乱,且这种紊乱可能是HSP患儿发病的分子生物学基础。T细胞因子在HSP全身血管炎发生、发展中起作用。IL-10可能具有一定的保护作用。     

哮喘患儿IL-4、IL-12与IgE水平的初步研究

采用双抗夹心EIASA法测定30例哮喘发作期、12例哮喘缓解期患儿血浆及外周血单个核细胞(PBMC)白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素12(IL-12)与血清IgE的水平,结果表明:哮喘患儿发作期、缓解期血清IgE水平、血浆及PBMC经PHA和LPS刺激后的IL-4水平较正常对照组明显升高(P<0.01),IL-12水平较正常对照组明显降低(P<0.01)。且缓解期IgE、IL-4及IL-12水平较发作期均有明显差异(P<0.05)。提示哮喘患儿发作期及缓解期均存在IgE、IL-4及IL-12水平失衡。     

哮喘患儿外周血单个核细胞microRNA-206表达及意义

目的探讨哮喘患儿外周血单个核细胞(PBMCs)microRNA-206(miR-206)表达在哮喘发生发展中的作用。方法收集27例哮喘患儿发作期和缓解期,以及25名健康对照儿童的外周血标本,分离PBMCs,采用实时定量PCR(qRT-PCR)方法检测PBMCs中microRNA-206及锌指样转录因子4(KLF4)、白介素-17(IL-17)mRNA的相对表达量。结果miR-206、KLF4 mRNA和IL-17 mRNA水平在哮喘发作期、缓解期患儿以及健康对照组儿童三组间的差异均有统计学意义(F=46.58~72.81,P均=0.000)。哮喘发作期的miR-206水平分别低于缓解期和健康对照组,而KLF4 mRNA和IL-17 mRNA水平均分别高于缓解期和健康对照组,差异有统计学意义(P均0.01);缓解期和健康对照组间miR-206、KLF4 mRNA和IL-17 mRNA水平的差异无统计学意义(P均0.05)。哮喘患儿发作期,microRNA-206水平与KLF4和IL-17 mRNA相对表达量均呈负相关(r=–0.66、–0.81,P均0.01),KLF4和IL-17 mRNA相对表达量呈正相关(r=0.70,P0.01)。结论哮喘患儿外周血单个核细胞microRNA-206表达水平下降,与疾病的发生发展关系密切。     

IL-4IL-5及IgE在儿童咳嗽变异性哮喘中的价值

目的：咳嗽变异性哮喘(CVA)是一种与气道炎症相关的疾病,有研究表明IL-4,IL-5与IgE的产生有相关性,而且与哮喘的形成有关,因此推测IL-4,IL-5在CVA发病中起重要作用。该文旨在观察IL-4,IL-5及IgE在咳嗽变异性哮喘中的诊断价值。方法：用酶联免疫吸附实验(ELISA法)检测咳嗽变异性哮喘患儿、哮喘急性发作期患儿、正常同龄儿童各30例外周血单个核细胞(PBMC)内IL-4,IL-5及血清IgE水平。结果：①咳嗽变异性哮喘患儿发作期PBMCIL-4为91.57±12.19ng/L、IL-5为13.28±0.31ng/mL,显著高于缓解期的74.68±11.54ng/L,6.53±0.28ng/mL及正常对照组70.32±18.16ng/L,5.29±0.36ng/mL,(均P<0.01),但缓解期及正常对照组间差异无统计学意义;②咳嗽变异性哮喘发作期患儿血清IgE水平为279.6±41.3KU/L,显著高于缓解期153.8±37.5KU/L,两组均显著高于正常对照组的90.6±44.8KU/L,(均P<0.01);③咳嗽变异性哮喘患儿发作期IL-4,IL-5及IgE水平与哮喘患儿发作期的92.21±3.12ng/L,15.11±1.37ng/mL,287.5±41.9KU/L之间相比差异无统计学意义。结论：联合检测单个核细胞内IL-4,IL-5及血清IgE水平对咳嗽变异性哮喘的诊断有重要价值;IL-4,IL-5可能在咳嗽变异性哮喘的发病机制中起重要作用;咳嗽变异性哮喘可能存在与哮喘相同的发病机制,是典型哮喘的前驱表现。     

IL-17F基因多态性和儿童哮喘易感性相关性分析

目的探讨IL-17F基因多态性和哮喘易感性、IL-17水平的关系。方法选择133例哮喘患儿和114例对照儿童,测定IL-17F基因rs763780、rs1889570位点多态性,并分析其与儿童支气管哮喘易感性及外周血IL-17水平的相关性。结果哮喘组和对照组两组间等位基因、基因型频数分布在rs1889570位点的差异有统计学意义(P=0.049、P=0.043),哮喘组携带A等位基因者明显高于对照组(OR=1.43,95%CI:1.001～2.004,P=0.049);rs763780位点等位基因、基因型分布在两组间的差异均无统计学意义(P0.05)。哮喘组rs763780和rs1889570位点各基因型间IL-17水平差异均无统计学意义(P0.05)。结论 IL-17F基因rs1889570位点与儿童哮喘易感性有关,携带A等位基因者发生哮喘的危险性高。     

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目的 探讨功能性消化不良(FD)患儿胃黏膜肥大细胞(MC)的密度及其活化状态与胃电图之间的相互关系。方法 按罗马Ⅲ标准选择2007年1月至2010年1月于中山大学附属第一医院就诊的FD患儿40例,取胃窦黏膜1块,通过免疫组化法检测MC数及其脱颗粒数,然后行胃电图检测。结果 (1)FD患儿的胃黏膜MC脱颗粒指数均值为(65.7±23.9)%,其中>50%者占82.5%;(2)与胃电节律正常组相比,胃电节律异常组的MC密度显著升高(P<0.05);(3)与MC平均密度正常组相比,MC平均密度异常组在餐前正常慢波百分比明显降低(P=0.005);与MC峰密度正常组相比,MC峰密度异常组的餐前正常慢波百分比明显降低(P=0.01);(4)MC脱颗粒指数与胃电无明显关系;(5)餐前正常慢波百分比与MC平均密度及MC峰密度呈负相关(P<0.05)。结论 FD患儿的胃电异常与MC密度升高有关,MC可能通过影响胃电介导了儿童FD的发生和发展。     

IL-13 基因+2044G/A 多态性与儿童哮喘风险和血清IL-13 水平的相关性研究

目的探讨IL-13基因+2044G/A多态性与儿童哮喘发病风险及哮喘儿童血清IL-13水平的关系。方法采用PCR-RFLP和ELISA方法,对90例支气管哮喘患儿(哮喘组)和82例健康儿童(对照组)IL-13基因+2044G/A多态性和血清IL-13水平进行检测,计算基因型、等位基因频率及其所对应的血清IL-13水平。结果哮喘组和对照组IL-13+2044G/A多态性3种基因型的分布差异有统计学意义(P0.001);与GG基因型比较,GA基因型儿童哮喘风险增加3.52倍(95%CI:1.82~6.82),AA基因哮喘风险增加3.71倍(95%CI:1.06~12.97)。哮喘组A等位基因频率为36.1%,高于对照组的18.3%,差异有统计学意义(P0.001)。与G等位基因比较,A等位基因携带儿童哮喘风险增加2.53倍(95%CI:1.53~4.16)。哮喘组患儿血清IL-13水平为151.82(134.33~166.68)ng/L,对照组为79.00(58.74~111.09)ng/L,两组差异有统计学意义(P0.001)。哮喘组GG、GA和AA基因型的血清IL-13水平均分别高于对照组,差异有统计学意义(P均0.01)。哮喘组GG、GA和AA 3种基因型之间血清IL-13水平的差异也有统计学意义(P0.01),其中GA和AA基因型血清IL-13水平高于GG基因型。结论 IL-13基因+2044G/A多态性与支气管哮喘儿童血清IL-13水平具有关联性,且A等位基因可能造成了哮喘儿童血清高IL-13水平,携带A等位基因的儿童哮喘风险增加。     

The influence of intravenous hydrocortisone on cytokine levels in children with asthma

Nocturnal airway obstruction occurs frequently in childhood asthma and results from increased airway inflammation. Lymphocytes are believed to be key effector cells of airway wall inflammation, releasing pro-inflammatory mediators and cytokines. A previous study showed that hydrocortisone infusion, an effective anti-inflammatory treatment, improves nocturnal and daytime FEV(1) values. This study in 16 children with moderate asthma was designed to assess whether there exists day and night differences in IL-4, IL-5, IL-8, and IFN-gamma production of concanavaline A stimulated peripheral blood mononuclear cells. Furthermore, we investigated whether substitution of low serum cortisol levels with intravenous hydrocortisone would affect those parameters. Saline (as a placebo) or hydrocortisone (30 microg/m(2) body surface area/24 h) was intravenously administered in a randomized, double blind, cross-over design. Measurements under saline or hydrocortisone infusions were separated by 1 wk. At 04:00 and 16:00 hours 10 ml blood was taken for determination of peripheral blood mononuclear cell isolation and stimulation, and an eosinophil count. Hydrocortisone infusion significantly reduced the nocturnal fall in FEV(1). Median values of IFNgamma, IL-4, IL-5, and IL-8 produced by peripheral blood mononuclear cells did not significantly differ at 04:00 and 16:00 hours, both with saline and hydrocortisone infusion. Our results suggest that FEV(1) improvement is not due to suppression of circulating peripheral blood mononuclear cell activation. We hypothesize that it is rather due to its effect on local lung tissue epithelial and/or fibroblasts thereby reducing airway inflammation and vascular leakage.     

毛细支气管炎患儿血清MCP-4、MDC和IL-4水平及临床意义

目的研究毛细支气管炎患儿外周血中单核细胞趋化蛋白4（MCP-4）、巨噬细胞衍生趋化因子（MDC）和白介素4（IL-4）水平的变化,探讨其临床意义。方法采用酶联免疫吸附法（ELISA）分别测定31例毛细支气管炎患儿（毛支组）和30例健康儿童（正常对照组）血清MCP-4、MDC和IL-4水平,并进行比较。结果毛支组患儿急性期血清MCP-4、MDC和IL-4水平为（103.56±27.31,692.67±107.22,19.48±7.40）pg/ml,明显高于正常对照组（86.34±14.50,242.12±27.40,9.22±4.10）pg/ml（P均〈0.01）。MCP-4、IL-4的升高程度与病情严重程度相关,且两者之间呈正相关。结论MCP-4、MDC参与调节毛细支气管炎Th2细胞因子IL-4的募集、释放,参与毛细支气管炎的发病;监测血清MCP-4水平可反映毛细支气管炎的病情严重程度,具有重要的临床价值。     

哮喘患儿细胞内IL-4 IFN-γ和血清IgE 测定及临床意义

目的 研究哮喘患儿细胞内ＩＬ－４，ＩＦＮ－γ表达率，ＩＬ－４ ／ＩＦＮ－γ比值及血清ＩｇＥ水平的变化。方法 用流式细胞术分别对哮喘发作期和缓解期患儿进行ＩＬ－４，ＩＦＮ－γ检测，同时用酶联免疫法测定血清中ＩｇＥ含量。结果 细胞内ＩＬ－４表达率，ＩＬ－４／ＩＦＮ－γ比值在发作期明显高于缓解期。两组比较分别为ｔ＝２．１２，５．１６。Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１。而发作期ＩＮＦ－γ表达率则低于缓解期，两组比较ｔ＝５．１６，Ｐ＜０．０１。经直线相关分析显示发作期哮喘患儿ＩＬ－４，ＩＬ－４／ＩＦＮ－γ比值与ＩｇＥ呈正相关（ｒ＝０．９０６４，０．８９５０，均Ｐ＜０．０１）。而ＩＦＮ－γ与ＩｇＥ呈负相关（ｒ＝－０．７８５，ｔ＝６．０７７，Ｐ＜０．０１＝。结论 ＩＬ－４升高，ＩＦＮ－γ降低，ＩＬ－４／ＩＦＮ－γ比值失衡是哮喘发病的重要因素，ＩｇＥ水平与哮喘的发作密切相关。