五味子乙素通过线粒体凋亡途径诱导凋亡的机制研究

五味子是吉林省中药材的优势产业,它具有抗衰老、抗氧化和抗肿瘤等多种作用,五味子乙素是五味子抗肿瘤的主要活性成分之一.在凋亡发生时线粒体途径一直是研究的热点内容,因此,我们将Sch B与凋亡线粒体途径中caspases及Bcl-2家族成员的关系进行综述.     

葛根素通过调节TLR4-MyD88-NF-κB信号通路对糖尿病小鼠肾损伤的改善作用

目的：研究葛根素(puerarin)通过调节TLR4-MyD88-NF-κB信号通路对糖尿病小鼠肾损伤的改善作用。方法：小鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)构建糖尿病小鼠模型,分为糖尿病模型组(模型组)、二甲双胍组、葛根素组,另设正常对照组。正常对照组和模型组小鼠灌胃予生理盐水,二甲双胍组灌胃予二甲双胍320 mg/kg·d^-1,葛根素组腹腔注射葛根素65 mg/kg·d^-1,各实验组共干预4周。每周测定各组小鼠的空腹血糖(FBG),称量体重,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各组小鼠血清肌酐、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α),苏木精—伊红(HE)染色观察小鼠肾组织病理损伤情况,免疫组化观察Toll样受体-4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子κB(NF-κB)蛋白在肾组织的表达水平。结果：与正常对照组比较,模型组FBG、肌酐、IL-6、TNF-α水平明显升高(P<0.05),肾小球增大,肾组织正常结构被破坏,肾小球基底膜增厚,且肾组织TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达增多(P<0.05);...     

清肠栓脐贴调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路减轻小鼠溃疡性结肠炎

目的:研究清肠栓脐贴对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)小鼠的作用,并基于Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)信号通路探讨其作用机制。方法:取40只雄性Balb/c小鼠,采用3.5%DSS自由饮用连续7 d的方法制备UC模型,另取10只小鼠作为正常组。造模7 d后,造模小鼠随机分为模型组、美沙拉嗪组、清肠栓方组和清肠栓脐贴组,每组10只。美沙拉嗪组灌胃给予0.1 g/kg美沙拉嗪溶液;清肠栓方组和清肠栓脐贴组分别采用灌胃和脐贴方式给予0.118 g/kg清肠栓生药;正常组和模型组灌胃给予等量0.9%NaCl溶液。均每日1次,连续9 d。造模期间,观察小鼠的一般活动和排便情况,计算疾病活动指数(DAI)。末次给药后采集血液和结肠样本,HE染色后光镜下观察各组结肠组织的病理学变化;ELISA检测血清TNF-α和IL-6水平,PCR检测结肠组织TNF-α、IL-6、IL-1β基因表达,Western blot检测结肠组织TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达。结果:①造模第7天,造模小鼠均出现明显血便,且精神萎靡、体质量明显下降;DAI评分较正常组显著升高(P0.01)。②结肠组织病理观察显示,与正常组比较,模型组小鼠结肠上皮组织部分缺损,腺管萎缩或消失,结构紊乱,杯状细胞减少,炎症细胞浸润严重。美沙拉嗪组、清肠栓方组、清肠栓脐贴组小鼠结肠黏膜及黏膜下层可见少量炎症细胞浸润,病变程度较模型组明显减轻。③与正常组比较,模型组小鼠血清IL-6和TNF-α水平显著升高(P0.01);与模型组比较,美沙拉嗪组、清肠栓方组、清肠栓脐贴组血清IL-6和TNF-α水平显著降低(P0.05,P0.01)。不同药物组间比较,差异无统计学意义(P0.05)。④与正常组比较,模型组小鼠结肠TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA表达水平及TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达水平显著升高(P0.01);与模型组比较,美沙拉嗪组、清肠栓方组、清肠栓脐贴组结肠TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA表达水平及TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达水平显著下调(P0.01)。不同药物组间比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:清肠栓脐贴可明显改善UC小鼠的一般活动及排便情况,减轻肠道黏膜上皮损伤和炎症浸润,其作用机制与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。     

姜黄素通过抑制TLR4信号通路下调脂多糖诱导的肺巨噬细胞分泌TNF-a、IL-6和IL-8

目的：研究姜黄素对原代培养的肺巨噬细胞表达TLR4mRNA及分泌TNF-a、IL-6和IL-8的影响。方法用脂多糖（LPS）建立体外肺巨噬细胞体外炎症损伤模型,用ELISA观察肺巨噬细胞分泌TNF-a、IL-6和IL-8和用RT-PCR、western blot观察肺巨噬细胞TLR4的表达。结果 LPS明显诱导肺巨噬细胞分泌TNF-a、IL-6和IL-8增加及TLR4的增量表达（P〈0.01）,姜黄素可抑制这种作用（P〈0.05）,且与姜黄素药物浓度有关（P〉0.05）。结论姜黄素对肺巨噬细胞的抗炎机制可能是通过抑制TLR4的表达,通过脂多糖-TLR4信号传导通路,从而减少炎性细胞因子的释放;姜黄素有可能作为一种有研究潜力的抗感染治疗的中药。     

基于HMGB1/TLR4信号通路评价五味子乙素对 2型糖尿病肾病大鼠肾脏功能的保护作用

目的 研究五味子乙素(SchB)对2型糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏功能的保护作用及其对HMGB1/TLR4炎性通路的影响。方法 40只SD大鼠随机分为正常对照组、DN组、DN低剂量SchB组及DN高剂量SchB组,采用尾静脉注射链脲佐菌素构建DN模型,并同时给予药物治疗。治疗4周后处死大鼠取材,检测谷丙转氨酶(ALT)、尿肌酐(Ucr)、血肌酐(Scr)、血胱抑素C(Cys-c)及内生肌酐清除率(Ccr);HE染色观察大鼠肾脏组织结构变化;Western blot法分析肾脏组织HMGB1、TLR4、IL-1β、IL-6及TNF-α蛋白表达量。结果 与正常对照组比较,DN组大鼠Scr、Cys-c及ALT水平显著升高,Ucr、Ccr水平则显著降低(P<0.05),肾脏组织形态明显异常,并且HMGB1、TLR4、IL-1β、IL-6及TNF-α蛋白表达量均显著升高(P<0.05);与DN组大鼠比较,经低、高剂量SchB治疗后大鼠Scr、Cys-c及ALT水平明显降低,Ucr、Ccr水平则显著升高(P<0.05),并且HMGB1、TLR4、IL-1β、IL-6及TNF-α蛋白表达量均显著降低(P<0.05)。结论 SchB可改善DN大鼠肾脏功能,其机制可能与降低HMGB1/TLR4信号蛋白表达、发挥抗炎作用有关。     

右美托咪定对博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠TLR4/MyD88信号通路的影响

目的：　探究右美托咪定（dexmedetomidine,DEX）对博莱霉素（bleomycin,BLM）诱导的肺纤维化小鼠的保护作用以及对Toll样受体4/髓样分化因子（toll-like receptor 4/myeloid differentiation factor88,TLR4/MyD88）信号通路的影响。方法：　通过注射BLM诱导实验性小鼠肺纤维化。将小鼠分为生理盐水（Sham）组、BLM组、BLM+DEX组、BLM+PFD组和BLM+DEX+LPS组。苏木素-伊红（hematoxylin and eosin,HE）染色和Masson染色分析肺组织病理学变化;免疫组织化学检测纤连蛋白（fibronectin,Fn）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）和Ⅰ型胶原蛋白（collagenⅠ）表达情况;原位缺口末端标记法（TdT mediated dUTP nick end labeling,TUNEL）检测肺组织中细胞凋亡;检测支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）中总细胞数量及蛋白质含量;Western blot检测肺组织中TLR4/MyD88信号通路和细胞凋亡相关蛋白水平。结果：　与Sham组相比,BLM刺激后肺组织中肺泡炎评分[（2.56±0.24）分vs.（0.15±0.02）分]和Ashcroft评分[（5.68±0.52）分vs.（0.09±0.01）分]明显增高,Fn[（63.63±5.48）% vs.（25.12±2.16）%]、α-SMA[（58.63±5.03）% vs.（17.56±1.25）%]和collagen Ⅰ[（55.32±5.16）% vs.（12.03±1.20）%]表达升高（P<0.05）,肺部炎症程度和纤维化程度增加;同时TUNEL阳性细胞率增高,细胞中bcl-2相关X蛋白（bcl-2 associated X protein,Bax）水平增高,B淋巴细胞瘤-2蛋白（B-cell lymphoma-2 protein,Bcl-2）水平降低（P<0.05）;BALF中总细胞数量[（3.54±0.06）×10⁵个/mL vs.（0.98±0.07）×10⁵个/mL]和蛋白质含量[（2.85±0.20）mg/mL vs.（0.29±0.03）mg/mL]升高（P<0.05）;肺组织中TLR4和MyD88蛋白水平升高（P<0.05）。DEX治疗可减轻BLM诱导的小鼠肺纤维化和炎症,降低TUNEL阳性细胞率,并逆转Fn、α-SMA、collagen Ⅰ、Bax和Bcl-2表达（P<0.05）;同时DEX也降低BLM诱导的小鼠BALF中总细胞数量和蛋白质含量（P<0.05）。此外,DEX降低BLM诱导的小鼠肺组织中TLR4和MyD88蛋白水平（P<0.05）。吡非尼酮（pirfenidone,PFD）与DEX具有相似的作用效果。脂肪酶（lipase,LPS）可以部分逆转DEX对BLM诱导的肺纤维化小鼠保护作用（P<0.05）。结论：　DEX可能通过抑制TLR4/MyD88信号通路改善BLM诱导的小鼠肺纤维化。     

大豆异黄酮下调TLR4/MyD88介导的信号通路保护心肌肥厚的作用机制

目的 研究大豆异黄酮(SI)对压力负荷性大鼠心肌肥厚的保护作用及其作用机制.方法 采用主动脉弓缩窄法制备大鼠心肌肥厚模型,造模后将大鼠分为假手术组(Sham组)、主动脉缩窄模型组(TAC组)、溶剂对照组(TAC+placebo组)和SI治疗组(TAC+SI组);4周后处死大鼠,测量大鼠全心质量指数(HW/BW)和左心室质量指数(LVW/TL);左心室组织切片Masson染色和HE染色后观察胶原沉积和心肌细胞形态;免疫共沉淀法测定TLR4和MyD88的交互情况.结果 模型组大鼠的HW/BW和LVW/TL的值显著升高(t=4.344,P=0.012 2和t=8.762,P=0.000 9,n=6);胶原沉积增多,心肌细胞直径增大,TLR4和MyD88的交互增加(t=16.07,P=0.003 9,n=6);SI能显著减轻心脏质量指数(t=3.432,P=0.026 5和t=5.738,P=0.105 0,n=6),使得心肌细胞横截面积减小,同时能明显抑制TLR4和MyD88的交互(t=13.88,P=0.005 1,n=6).结论 SI对主动脉缩窄所致心肌肥厚具有一定的保护作用,其机制与降低TLR4和MyD88的交互,抑制压力负荷激活的TLR4/MyD88信号通路有关.     

阿托伐他汀对人脐静脉内皮细胞TLR4及下游MyD88依赖性信号转导通路的影响

目的研究阿托伐他汀(ATV)对Toll样受体4(TLR4)及其下游信号转导通路主要元件下游髓样分化因子88(MyD88)及肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6)表达的影响,探讨ATV防治动脉粥样硬化(AS)的机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,用脂多糖(LPS)刺激并加入ATV干预24h,收集细胞,用荧光定量PCR方法测定TLR4、MyD88及TRAF-6mRNA表达;用Western blotting法测定TLR4、MyD88及TRAF-6蛋白表达。结果用LPS刺激人脐静脉内皮细胞后,引起TLR4、MyD88和TRAF-6的高表达(与空白对照组比较差异有统计学意义,P<0.01),用ATV干预以后显著抑制TLR4、MyD88及TRAF-6的表达(与模型组比较差异有统计学意义,P<0.01)。结论 ATV可阻断TLR4高表达,同时阻断TLR4胞内信号转导的MyD88依赖性途径,这可能是ATV抗AS的作用机制之一。     

MyD88、TLR4和STAT3在肝细胞癌组织中的表达及意义

目的 探讨TLR4、MyD88、STAT3在肝细胞癌组织中的表达及生物学意义.方法 采用免疫组化方法检测TLR4、MyD88、STAT3在82例肝癌组织及其对应的癌旁肝组织中的表达水平.结合肝癌临床病理指标分析相关性.结果 TLR4、MyD88、STAT3蛋白在癌组织中的阳性表达率为76.8％(63/82)、67.1％(55/82)、69.5％(57/82),高于在癌旁肝组织中的阳性表达率25.9％( 12/82)、12％(9/82)、8.5 ％(7/82),差异均具有统计学意义(P＜0.05);在肝癌组织中TLR4、MyD88、STAT3的阳性表达呈正相关[TLR4和MyD88 (r=0.612,P =0.011),MyD88和STAT3(r=0.578,P =0.002),TLR4和STAT3 (r=0.542,P=0.016)]. MyD88和STAT3表达与性别、分化程度、有无HBV感染和肝硬化有关(P＜0.05),而与肿瘤大小、有无静脉浸润无关(P＞0.05).结论 TLR4、MyD88、STAT3表达上调,导致肝癌细胞增殖和免疫逃逸是肝癌发生发展的重要分子机制.     

参芍口服液调控TLR4/MyD88通路改善糖尿病大鼠心肌炎症损伤

目的探讨参芍口服液在糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)大鼠结构功能损伤中的作用及其可能机制。方法一次性腹腔注射大剂量链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型。测定血浆心肌酶(CK、LDH)、超敏C反应蛋白(hs CRP)的变化,左心室插管测定大鼠心功能,苏木素-伊红染色、透射电镜观察大鼠心肌病理改变,免疫组织化学法检测Toll样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白(My D88)及核因子κB P65(NF-κB P65)表达。结果治疗6周后,DCM大鼠左心室舒张和收缩功能明显改善;心肌纤维及线粒体肿胀、断裂、坏死减少,结构紧密,排列整齐;CK、LDH、hs CRP含量降低(P0.05),且hs CPR与CK、LDH呈正相关(r=0.753,r=0.819,P0.05);TLR4、My D88、NF-κB P65表达明显下调(P0.05)。而参芍口服液干预的正常大鼠上述指标无明显改变(P0.05)。结论参芍口服液可减轻糖尿病心肌病大鼠心肌损伤,改善心脏舒张和收缩功能,其机制可能与抑制TLR4/My D88信号通路诱导的炎症反应有关。     

基于TLR4/MyD88/MAPK信号通路探讨脉络舒通丸抗血栓性浅静脉炎的作用机制研究

[目的] 探讨脉络舒通丸抗血栓性浅静脉炎（STP）的作用机制。[方法] 将36只日本大耳白兔随机分为正常组、模型组、脉络舒通丸低、中、高剂量组、地奥司明组（阳性药对照），每组6只。除正常组外，其余各组均采用耳缘静脉注射20%甘露醇建立STP兔模型。造模同时各给药组连续灌胃给药14 d。苏木精-伊红（HE）染色法检测各组兔耳组织病理变化；酶联免疫吸附（ELISA）法检测各组血清中白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）的水平；测定凝血4项；蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测耳组织Toll样受体4（TLR4）、髓样分化因子88（MyD88）、细胞外信号调节激酶（ERK1/2）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）和c-氨基酸末端激酶（JNK）蛋白表达及相关磷酸化水平。[结果] 与正常组比较，模型组病理损伤评分显著增加（P<0.01）；血清中IL-1β、TNF-α和IL-6的表达水平明显升高（P<0.05）；活化部分凝血酶时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）缩短，纤维蛋白原（FIB）含量升高（P<0.05）；TLR4、MyD88、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK，包括p38MAPK、ERK1/2和JNK）蛋白及相关磷酸化水平均显著上调（P<0.01）。与模型组比较，脉络舒通丸低、中、高剂量组、地奥司明组兔耳组织病理损伤显著改善，病理损伤评分明显降低（P<0.05或P<0.01）；血清中IL-1β、TNF-α和IL-6的表达水平显著降低（P<0.05或P<0.01）；APTT、PT、TT明显延长，FIB含量明显降低（P<0.05或P<0.01）；TLR4、MyD88、MAPK（p38MAPK、ERK1/2和JNK）蛋白及相关磷酸化水平均显著下调（P<0.05或P<0.01）。[结论] 脉络舒通丸可能通过抑制TLR4/MyD88/MAPK信号通路，减轻炎症反应，改善凝血功能，从而发挥抗血栓性浅静脉炎作用。     

Role of progesterone in TLR4-MyD88-dependent signaling pathway in pre-eclampsia

The role of progesterone in the Toll-like receptor 4 （TLR4）-MyD88-dependent signaling pathway in pre-eclampsia was studied. Peripheral blood mononuclear cells （PBMCs） from pre-eclampsia （PE） patients were subjected to primary culture, and stimulated with different concentra- tions of progesterone （0, 10^-8, 10^-6, and 10^-4 mol/L）. The mRNA expression of TLR4, MyD88 and nu- clear factor-kappaB （NF-κB） was detected by using real-time PCR. The Ikappa-B protein expression was detected by using Western blotting. The expression of tumor necrosis factor-or （TNF-α and inter- leukin-6 （IL-6） in the supernatant was determined by using ELISA. With the concentrations of proges- terone increasing, the mRNA expression levels of TLR4, MyD88 and NF-κB in 2^△△CT value were sig- nificantly decreased, and the IkappaB protein expression levels were significantly increased. The TNF-α and IL-6 expression showed a downward trend when the progesterone concentration increased, and there were significant differences among all of the groups （P〈0.05）. It was suggested that progesterone can inhibit the TLR4-MyD88-dependent signaling pathway in PE significantly and benefit for the preg- nancy.     

KAE Alleviates LPS-induced Neuroinflammation in the Striatum of Mice via Down-regulating TLR4/ MyD88 Signaling Pathway

Objective：Kaempferol（ KAE） is a natural fl avonoid with many biological activities including anti-oxidation and anti-inflammation. Nevertheless,the relevant mechanism of its antineuroinfl ammation remains unclear. The present study was to investigate the mechanism of KAE against LPS-induced neuroinfl ammation in the striatum of mice. Methods：Lipopolysaccharide （LPS）,a lipid polysaccharide,can be used to establish animal inflammation model. Adult male BALB/c mice were treated with KAE 20 mg·kg-1 and 50 mg·kg-1 for 7 days. On the 7th day,the mice were treated with LPS 5 mg·kg-1 for 6 h. The levels of IL-1β,IL-6,TNF-α,MCP-1 and ICAM-1 in the striatum were determined by ELISA. The protein expression of TLR4,MyD88,HMGB1 and P2X7 in the striatum were detected by Western blotting. Results：KAE significantly decreased cytokines release including IL-1β,IL-6,TNF-α,MCP-1 and ICAM-1 in the striatum of mice induced by LPS. In addition,KAE also inhibited the infl ammatory proteins expression,such as TLR4,MyD88,HMGB1 and P2X7,in the striatum of mice induced by LPS. Conclusion：KAE alleviates LPS-induced neuroinfl ammation in the striatum of mice via inhibiting TLR4/MyD88 signaling pathway.     

TLR2、TLR4在乙型肝炎病毒转染的HepG2细胞株的表达

目的探讨乙肝病毒全基因组瞬时转染HepG2细胞后，对HBV抗原分泌，病原识别受体Toll样受体2、4（TLR2、4）的表达及细胞增殖的影响。方法已构建pBlueScript—HBV质粒并经测序，转化宿主菌，摇菌后提取质粒，用Sapl酶切，获得HBV 3．2kb基因组，采用脂质体瞬时转染肝癌细胞株HepG2，IMX检测HBV所分泌抗原，台盼蓝计数检测细胞增殖活性，直接免疫荧光流式细胞术（FCM）检测TLR2、4在细胞株上表达的阳性细胞率，并与空白对照绗对比。结果HBsAg利HBeAg的分泌随着转染HBV DNA量的增加而升高，除4μg和6μg组两组间比较的表面抗原外，差异均有显著性意义（P〈0．05）。TLR2、4在转染后均有上调，TLR4在各组间差异显著（P〈0.05），但TLR2只在最大剂量转染组时差异有显著性（P〈0．05）。台盼蓝拒染法示细胞存活随转染剂量的升高而减少（P〈0．05），但4μg和6μg两组间比较无显著意义（P〉0．05）。而各转染剂量组HBsAg和e抗原的分泌及细胞的存活数均与TLR2、4的表达呈显著正相关（P〈0．01）。结论研究结果初步表明乙肝病毒可能直接引起HepG2细胞TLR2、4的上调，而且TLR的上调可能启动了细胞的凋亡或坏死机制，成为HBV损伤细胞的非免疫细胞介导机制。     

乙型肝炎患者血清中TLR2和TLR4的表达及其意义

目的 检测乙肝患者血清标本中TLR2和TLR4的含量,关注其表达特征,探讨其表达的意义.方法 本实验以130例乙肝患者的血清标本作为观察组,60例正常体检成人的血清标本作为对照组,应用酶联免疫吸附实验检测二组中TLR2和TLR4的表达,分析其在不同临床病理特征之间意义及相互关系.结果 乙肝患者血清中TLR2和TLR4的表达明显高于对照组[(85.46±15.46) ng/L vs (28.75±2.35) ng/L;(100.23±23.25) ng/L vs (64.34±4.32) ng/L],血清中TLR2和TLR4的含量与乙肝患者病情的严重程度有关,乙型肝炎患者血清中TLR2和TLR4的表达呈正相关(P=0.021 4,r=0.39).结论 乙型肝炎患者血清中TLR2和TLR4高表达,二者可能具有协同作用.联合检测血清中TLR2和TLR4的含量可能与判断病情的严重程度有关.