淫羊藿对成骨细胞及破骨细胞影响的研究进展

综述淫羊藿对成骨细胞及破骨细胞影响的研究进展。淫羊藿通过增加成骨相关因子的表达,增加Ca2+浓度,激活BMP/Smad、Wnt/β-catenin信号通路促进成骨细胞增殖、分化,提高成骨细胞骨形成的功能,并从能量代谢、骨架结构、MAPK信号通路、雌激素水平等方面抑制破骨细胞增殖和吸收。     

淫羊藿苷对Ⅱ型胶原诱导型关节炎大鼠骨破坏及血清RANKL/OPG的干预作用

目的 观察淫羊藿苷对Ⅱ型胶原诱导型关节炎（collagen-induced arthritis,CIA）大鼠血清破骨细胞分化因子（receptor activator of NFκB-ligand,RANKL）和护骨素（osteoprotegerin,OPG）的影响及对骨破坏的保护作用。方法 除正常组（8只）外,其余大鼠用牛Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂注射诱导建立CIA大鼠模型。选取关节炎指数（arthritis index,AI）≥6分的CIA大鼠24只,根据其AI评分分为模型组、甲氨喋呤组和淫羊藿苷组,每组8只。正常组和模型组给予生理盐水灌胃,甲氨喋呤组给予甲氨喋呤每周 5 mg/kg灌胃,淫羊藿苷组给予淫羊藿苷20 mg/（kg?d）灌胃,均连续给药4周。每周记录大鼠AI评分。给药结束后,HE染色观察踝关节组织形态学变化;X射线检查足趾骨质破坏与骨质疏松情况;ELISA法测定血清RANKL、OPG水平。结果 给药4周后,与模型组比较,淫羊藿苷组AI评分、Larsen评分、血清RANKL水平及RANKL/OPG比值明显降低,OPG水平明显升高,差异均有统计学意义（P<0.05,P<0.01）;甲氨喋呤组上述指标均降低,差异无统计学意义（P>0.05）。HE染色示淫羊藿苷组关节滑膜增生、炎症细胞浸润与软骨面破坏程度明显减轻。结论 淫羊藿苷能缓解或减轻CIA大鼠骨破坏程度,其作用机制可能与降低CIA大鼠血清RANKL水平,提高OPG浓度进而降低RANKL/OPG比例有关。     

淫羊藿总黄酮含药血清对成骨细胞OPG/OPGL基因表达的影响

目的研究淫羊藿总黄酮含药血清对体外培养成骨细胞骨保护素(OPG)和骨保护素配体(OPGL)基因表达的影响,进一步揭示淫羊藿"补肾壮阳,益精健骨"的作用机制。方法采用中药血清药理学方法制备含淫羊藿总黄酮大鼠血清;用多次酶消化法体外培养成骨细胞;将含淫羊藿总黄酮大鼠血清(SRAT)以5%的质量浓度加入新生大鼠颅骨成骨细胞培养液中,研究它们对OPG/OPGL基因表达水平的影响。OPG/OPGL基因表达水平用RT-PCR法检测。结果半定量RT-PCR显示5%含淫羊藿总黄酮大鼠血清干预成骨细胞时,存在OPG mRNA的转录,在此浓度下,随着时间的延长转录水平逐渐增加,而OPGL mRNA水平随着时间的延长转录水平逐渐减弱。结论淫羊藿总黄酮代谢产物能上调成骨细胞中OPG mRNA的表达、抑制OPGL mRNA的表达,说明淫羊藿总黄酮代谢产物具有促进骨形成活性。     

淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素联合作用对牙周炎大鼠牙周组织中RANKL和OPG表达的影响

目的研究淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素联合作用对牙周炎大鼠牙周组织中RANKL表达的影响。方法牙周组织局部注射大肠杆菌内毒素制造牙周炎动物模型,将淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素联合作用于实验动物,用原位杂交法检测用药前后牙周组织中RANKL的表达。结果空白对照组大鼠牙周组织中RANKL表达上升(P<0.01),OPG表达降低(P<0.05),RANKL/OPG比值上升(P<0.01);实验组RANKL表达量明显较空白对照组低(P<0.05),虽然OPG表达量与空白对照组相比无统计学意义(P>0.05),但RANKL/OPG比值明显低于空白对照组(P<0.05)。结论淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素联合作用能够抑制牙周炎大鼠牙周组织中RANKL的表达。     

淫羊藿苷对颅脑损伤大鼠血清MBP、GFAP表达的影响

目的:探讨不同剂量淫羊藿苷对颅脑损伤大鼠血清MBP、GFAP含量的影响。方法:100只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、ICA低剂量治疗组(30mg/kg·d)、中剂量治疗组(60mg/kg·d)及高剂量治疗组(120mg/kg·d)。各组分别在造模后第1、3、7、14天取血,测定血清MBP、GFAP含量。结果:模型组与假手术组同期比较,MBP及GFAP含量增高,差异有统计学意义(P0.05);各治疗组与模型组同期比较,MBP及GFAP含量降低,差异有统计学意义(P0.05);高剂量治疗组与低剂量治疗组同期比较,MBP及GFAP含量降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论:Ica对创伤性脑损伤大鼠有脑保护作用,其作用与Ica剂量呈正相关,其机制与抑制MBP、GFAP表达有关。     

加味三根汤含药血清对成骨-破骨细胞共育体系中破骨细胞功能及IL-1β、TNF-α表达的影响

目的检测成骨-破骨细胞共育体系中应用加味三根汤含药血清后抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)以及白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的变化,探讨加味三根汤的作用机制。方法建立成骨-破骨细胞共育体系,制作SD大鼠含药血清,分为空白对照组,加味三根汤低、中、高剂量组,每组设6个复孔,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测共培养体系上清液中TRACP及IL-1β、TNF-α的含量。结果经鉴定成功培养成骨细胞和破骨细胞,并建立成骨-破骨细胞共育体系。加味三根汤含药血清中、高剂量组TRACP活性低于空白血清对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。与空白血清对照组比较,加味三根汤中、高剂量组IL-1β含量有所下降,加味三根汤高剂量组TNF-α含量降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论加味三根汤能够抑制共育体系中破骨细胞的功能,此作用可能是通过抑制IL-1β、TNF-α的分泌而达到。     

淫羊藿苷和补肾复方对肾阳虚大鼠下丘脑CRH基因和垂体POMC基因表达的影响

肾为先天之本，主生长、发育、衰老等。下丘脑-垂体-肾上腺轴的功能紊乱是肾阳虚症的病理基础之一。其中下丘脑分泌的CRH刺激并影响垂体中ACTH的前体物质POMC的产生并促其水解生成ACTH，然后作用于肾上腺调节糖皮质激素的合成与分泌，给予适量外源性的糖皮质激素后，通过负反馈调节影响该轴的功能，从而造成一系列阳虚症状。同时，动物体内激素含量也有一定程度的变化。本文拟比较淫羊藿苷和几个补肾复方对肾阳虚动物体征和体内激素水平的影响，并考察其对CRH和POMC基因表达的调控作用。     

淫羊藿苷对Dahl盐敏感大鼠心肌重塑模型外周血树突状细胞及Th17/Treg平衡的影响

目的 探讨淫羊藿苷介导维生素D系统对Dahl盐敏感大鼠心肌重塑模型外周血树突状细胞（DCs）表型及辅助性T细胞17（Th17）/调节性T细胞（Treg）平衡的影响。方法 将50只SPF级Dahl盐敏感大鼠分为模型组、维生素D组（3×10^-5 mg·kg^-1·d^-1）、淫羊藿苷高、中、低剂量组（给药剂量分别为120、60、30 mg·kg^-1·d^-1）,10只Dahl盐抵抗大鼠作为正常组。通过给予含8% NaCl高盐饲料喂养构建心肌重塑模型。造模6周后,除正常组和模型组给予等体积超纯水灌胃外,连续给药6周。采用心脏超声心动图、苏木素-伊红（HE）及马松（Masson）染色法观察大鼠心脏病理变化和纤维化改变;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清25-羟基维生素D₃［25（OH）D₃］、N-末端脑钠肽前体（NT-ProBNP）、白细胞介素（IL）-17、转化生长因子（TGF）-β₁、IL-12、IL-10水平;流式细胞术检测大鼠外周血DCs表型及Th17/Treg细胞比例;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测大鼠外周血树突状细胞维生素D受体（VDR）、1α-羟化酶（CYP27B1）、24-羟化酶（CYP24A1） mRNA及蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠发生心肌细胞排列紊乱,胞浆肥大肿胀等病理改变;心肌胶原纤维增生显著、心肌纤维排列较紊乱;血清25（OH）D₃、IL-10水平降低,血清IL-17、TGF-β₁、IL-6、IL-12、NT-ProBNP含量明显升高（P<0.05）;外周血DCs细胞高表达共刺激分子CD40、CD80、CD86及主要组织相容性复合体Ⅱ（MHC-Ⅱ）,低表达CD11、CD11b（P<0.05）;外周血Th17细胞比例明显升高,Treg细胞比例明显降低,Th17/Treg值明显升高（P<0.05）;外周血树突状细胞CYP24A1 mRNA表达量和蛋白明显升高,CYP27B1、VDR mRNA和蛋白表达明显降低（P<0.05）。与模型组比较,各给药组心肌纤维排列相对规整,心肌细胞肿胀明显减轻,心肌组织病理形态均有不同程度的改善;心肌组织病理改变均有不同程度的改善和减轻;明显降低血清NT-ProBNP、IL-17、TGF-β₁、IL-6、IL-12含量,明显升高血清25（OH）D₃、IL-10含量（P<0.05）;明显降低大鼠外周血树突状细胞共刺激分子CD40、CD80、CD86及MHC-Ⅱ表达量,升高CD11、CD11b分子表达（P<0.05）;明显降低外周血Th17细胞比率、Th17/Treg值,升高Treg细胞比率（P<0.05）;明显降低大鼠外周血树突状细胞CYP24A1 mRNA和蛋白表达量、明显提高VDR、CYP27B1 mRNA和蛋白表达（P<0.05）。结论 淫羊藿苷可通过调控维生素D系统调节外周血树突状细胞表型及Th17/Treg细胞比例,从免疫平衡角度发挥改善心肌重塑的作用。     

淫羊藿苷对维生素D缺乏大鼠肾上腺皮质维生素D轴及VDR蛋白表达的影响

目的:观察淫羊藿苷对维生素D缺乏大鼠肾上腺皮质维生素D轴的影响。方法:选用60只雄性SD大鼠,随机分为:正常组;模型组(生理盐水4.0 mL·kg~(-1)·d~(-1)灌胃);淫羊藿苷高剂量组(120 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃);淫羊藿苷中剂量组(60 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃);淫羊藿苷低剂量组(30 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃);维生素D组(30ng·kg~(-1)·d~(-1)灌胃)。造模1月后,药物干预2月,酶联免疫法(ELISA法)检测血清25(OH)D_3、1,25(OH)D_3。免疫组化检测VDR蛋白表达。Real-Time PCR法检测肾上腺皮质维生素D受体(VDR)、25-羟维生素D_3-24-羟基化酶(CYP24A1)、25-羟维生素D1α-羟化酶(CYP27B1)mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组血清25(OH)D_3、1,25(OH)D_3含量下降(P0.05);淫羊藿苷干预后血清25(OH)D_3、1,25(OH)D_3含量均上升(P0.05)。免疫组化显示,与正常组比较,模型组VDR蛋白表达下降(P0.05);经淫羊藿苷干预后,表达上升(P0.05)。Real-Time PCR显示,经淫羊藿苷干预后,表达量上调(P0.05),除VDRmRNA外,CYP24A1mRNA与CYP27B1mRNA变化趋势均与维生素D组表现一致。模型组基因表达均高于正常组(P0.05),Real-Time PCR检测结果与免疫组化检测的蛋白表达不完全一致。结论:淫羊藿苷可能调节维生素D轴促进VDR蛋白表达改善维生素D缺乏。     

淫羊藿总黄酮对雄性自发性高血压病大鼠血压、性功能的作用及机制研究北大核心CSCD

目的观察淫羊藿总黄酮对自发性高血压病大鼠(SHR)血压、性功能的作用,并探讨其作用机制。方法16只雄性SHR按随机数字表法分为2组:中药组(淫羊藿总黄酮617 mg/kg)、模型组(生理盐水),每组8只;另取8只雄性WKY大鼠作为正常组(生理盐水);各组均灌胃4周。干预前后测定各组大鼠尾动脉压及动情期雌鼠捕捉频数;ELISA法测定大鼠血清睾酮浓度;Western Blot、免疫组化法检测各大鼠阴茎海绵体内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、5型磷酸二酯酶(PDE5)、Rho激酶(ROCK1/ROCK2)表达。结果与正常组比较,模型组干预前、后收缩压和舒张压升高,干预后动情期雌鼠捕捉频数、血清睾酮值及e NOS表达下降,PDE5表达升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,中药组干预后收缩压、舒张压及PDE5、ROCK1/ROCK2表达下降(P<0.05),动情期雌鼠捕捉频数、血清睾酮值及阴茎海绵体中的e NOS表达增加(P<0.05,P<0.01)。结论淫羊藿总黄酮可降低SHR血压并提高性功能,机制可能与提高血清睾酮水平和e NOS表达,降低阴茎海绵体内PDE5、ROCK1/ROCK2表达有关。     

淫羊藿苷基于ERα-Wnt/β-catenin信号通路对骨质疏松大鼠成骨分化的影响及机制研究

目的:探讨淫羊藿苷基于ERα-Wnt/β-catenin信号通路对骨质疏松大鼠体内成骨分化的影响及作用机制。方法:80只雌性SD大鼠随机分为4组:假手术+生理盐水组(Sham-Veh)20只,假手术+淫羊藿苷组(Sham-Icariin)20只,去势+生理盐水组(Ovx-Veh)20只,去势+淫羊藿组(Ovx-Icariin)20只。分别在术后4周、8周进行Micro-CT相关参数(Tb.N、Tb.Th、Tb.Sp、BV、BV/TV及BMD)、RT-PCR相关指标(ALP、COL-1、OPG/RANKL、OCN、Run X2、ERα和GAPDH)及染色(β-catenin免疫荧光染色、HE染色及TRAP染色)评价。结果:骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨体积(BV)、骨与组织体积比(BV/TV)及骨密度(BMD)在术后4周和8周时,淫羊藿苷组均高于生理盐水组,差异具有统计学意义(P0.05);而骨小梁间距(Tb.Sp)在术后4周和8周时,淫羊藿苷组均低于生理盐水组,差异具有统计学意义(P0.05)。淫羊藿苷组在ALP、COL-1、OCN、Run X2和ERα方面均高于生理盐水组,差异具有统计学意义(P0.05);而淫羊藿苷组在OPG/RANKL方面低于生理盐水组,差异具有统计学意义(P0.05)。淫羊藿苷组(Sham+Ovx)的β-catenin免疫荧光染色明显多于生理盐水组(Sham+Ovx);在HE染色方面,淫羊藿苷组(Sham+Ovx)的骨组织明显多于生理盐水组(Sham+Ovx);而在TRAP染色方面,淫羊藿苷组(Sham+Ovx)的破骨细胞明显少于生理盐水组(Sham+Ovx)。结论:淫羊藿苷在大鼠体内可以通过ERα-Wnt/β-catenin信号通路促进BMSCs的成骨分化,促进骨生成,并可通过ERα相关的OPG/RANKL/RANK系统抑制破骨细胞的生成,抑制骨吸收。     

淫羊藿苷对脑缺血再灌注大鼠的神经保护及小胶质细胞TLR4/NF-κB通路的影响

目的:探讨淫羊藿苷对脑缺血再灌注大鼠的神经保护及小胶质细胞Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)通路的影响。方法:假手术组大鼠只分离不结扎阻塞血管,并予等体积的生理盐水腹腔注射,其余各组采用线栓法复制一侧大脑中动脉脑缺血再灌注模型(MCAO),造模成功后随机分为模型组,丁苯酞组(6 mg·kg~(-1)),淫羊藿苷高、中、低(40,20,10 mg·kg~(-1))剂量组,分别于缺血5,12,24 h各腹腔给药1次。进行神经功能评分,2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色测脑梗死率,免疫组化法检测大鼠脑皮层小胶质细胞标志物海马离子钙结合适配分子1(Iba1)和TLR4的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大脑皮层NF-κB p65表达水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测炎症因子白细胞介素-1α(IL-1α),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经评分增加、大脑梗死率显著增加,小胶质细胞Iba1,TLR4活化量显著增加,NF-κB p65的蛋白水平上升(P0.01),炎症因子IL-1α,TNF-α含量显著增加(P0.01);经淫羊藿苷治疗后,与模型组比较,大鼠神经功能评分、脑梗死率均有改善,小胶质细胞Iba1,TLR4活化量减少,NF-κB p65的蛋白水平下降,炎症因子IL-1α,TNF-α含量明显下降(P0.05,P0.01)。结论:淫羊藿苷可能是通过调控小胶质细胞的活化,抑制TLR4及其下游NF-κB信号通路的活化,降低相关炎症因子IL-1α,TNF-α的表达,发挥卒中后的脑保护作用。     

淫羊藿对大鼠骨量及骨髓基质干细胞增殖、分化过程中Cbfa1和Osterix表达的影响

目的:研究淫羊藿对大鼠骨量及骨髓基质干细胞增殖、分化过程中Cbfa1和Osterix表达的影响。方法:24只雌性SD大鼠被随机分成观察组和对照组各12只,其中观察组给予淫羊藿0.5 g/0.1 kg,每天1次灌胃,持续两周;对照组给予相同剂量的生理盐水。于分组时间将大鼠处死,取右侧股骨远侧段用于骨组织形态计量学检测;抽取左侧股骨骨髓用于细胞培养,于培养21 d时提取细胞总RNA,经PCR方法分离获得cbfa1,osterix扩增产物。结果两组大鼠的骨形态计量学进行比较,观察结果表明,观察组大鼠骨组织计量学动态参数以及静态参数BV/TV、BFR/BS、tb.th、MAR比着对照组明显要高,差异具有统计学意义(P0.05)。两组大鼠的Cbfa1,Cbfb和OSX m RNA表达的差异比较,研究组Cb fa1 m RNA,OSX m RNA在各时间点的表达均明显增加(P0.05),并且这种差异随SIM作用时间增加而增强,研究组与对照组Cbfbm RNA差异无统计学意义(P0.05)两组大鼠的骨形态蛋白-2以及转化因子β1相比,骨形态蛋白-2观察组明显高于对照组,差异存在统计学意义(P0.05),转化因子β1比较观察组明显高于对照组,差异存在统计学意义(P0.05)。结论:骨组织形态计量学方法显示淫羊藿组促进骨量增加;细胞分子生物学显示淫羊藿能够促进成骨细胞分化增殖作用,为中药抗骨质疏松提供组织细胞和分子生物学基础证据。     

淫羊藿苷对线粒体损伤模型大鼠脑内β-淀粉样蛋白和神经营养因子的影响

该研究主要是观察中药淫羊藿苷(ICA)对线粒体损伤模型大鼠脑内β-淀粉样蛋白(Aβ)含量和神经营养因子表达的影响.SD大鼠随机分为假手术组、模型组、ICA低、高剂量组(12,36 mg· kg-1).各组大鼠皮下埋植Alzet微泵,假手术组给予生理盐水,其余各组给予线粒体呼吸链复合体Ⅳ抑制剂叠氮钠(0.Smg·kg-1 ·h-1),共28 d,建立大鼠线粒体损伤模型.生化法测定大鼠海马线粒体复合体Ⅳ(即细胞色素C氧化酶)活性;EHSA法测定大鼠脑内Aβ含量;Westem blot法和免疫组织化学法测定大鼠脑内神经营养因子及其受体的表达.结果显示叠氮钠微泵灌注可引起模型大鼠脑内线粒体细胞色素C氧化酶(COX)活性明显下降,Aβ含量升高,神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体TrkB的表达减少.ICA灌胃给药明显改善模型大鼠的上述异常.结果表踢ICA能够增强叠氮钠模型大鼠脑内线粒体活性,抑制Aβ产生,增强神经营养因子表达,提示ICA具有良好的治疗阿尔茨海默病的应用前景.     

淫羊藿苷经PI3K/Akt/mTOR通路调控激素对骨微血内皮细胞自噬的影响

目的 探讨淫羊藿苷（ICA）介导磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）信号通路对激素性骨微血管内皮细胞（BMECs）自噬的影响。方法 从人工全髋关节置换术中获得的股骨头分离培养BMECs,并通过免疫荧光染色法鉴定细胞种类。实验细胞分为空白组、激素组（100 mg·L^-1氢化可的松）、ICA组（100 mg·L^-1氢化可的松+ 6.7×10^-3 mg·L^-1 ICA）及雷帕霉素组（100 mg·L^-1氢化可的松+6.7×10^-3 mg·L^-1 ICA+1 mg·L^-1雷帕霉素）,使用100 mg·L^-1的氢化可的松诱导BMECs自噬,运用荧光染色观察不同时间节点下BMECs自噬出现的峰值,蛋白免疫印迹法（Western blot）分析各组自噬及PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白表达,以电镜观察各组细胞自噬小体及自噬溶酶体的产生。结果 100 mg·L^-1氢化可的松可诱导BMECs自噬并在5 h左右出现自噬峰值,但随着干预时间的进一步增加,自噬峰值下降。与空白组比较,激素组细胞膜破坏,细胞器排列紊乱,可见大量自噬小体及自噬溶酶体;与激素组比较,ICA组细胞膜较为完整,细胞器排列较为稀疏,自噬小体数量及自噬溶酶体数量低于激素组;与ICA组比较,雷帕霉素组细胞膜破坏,细胞器排列紊乱,有较多自噬小体及自噬溶酶体。与空白组比较,激素组自噬相关蛋白4B（Atg4B）、人微管相关蛋白/轻链3B（LC3B）、p62表达显著提高（P<0.01）;与激素组比较,ICA组LC3B、Atg4B、p62、自噬效应蛋白-1（Beclin-1）表达显著下降（P<0.01）;与ICA组比较,雷帕霉素组Atg4B、p62表达显著升高（P<0.01）;与空白组比较,激素组磷酸化（p）-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR表达显著降低（P<0.01）;与激素组比较,ICA组p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR显著提高（P<0.01）;与ICA组比较,雷帕霉素组p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR表达显著降低（P<0.01）;与空白组比较,激素组泛素化水平显著降低（P<0.01）;与激素组比较,ICA组泛素化表达显著提高（P<0.01）;与ICA组比较,雷帕霉素组泛素化水平显著下降（P<0.01）。结论 激素所诱导的BMECs自噬具有时间依赖性,ICA对激素诱导的BMECs的自噬具有抑制作用,且该作用可能与调控PI3K/Akt/mTOR通路有关。     

当归芍药散含药血清调控UPP途径对Aβ1-40损伤PC12细胞的保护作用及机制

目的 探讨当归芍药散（DSS）含药血清对β淀粉样蛋白（Aβ）_1-40损伤大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤（PC12）细胞的保护作用及对泛素-蛋白酶体途径（UPP）的调控作用机制。方法 采用Aβ_1-40干预PC12细胞制备损伤模型。实验分为空白组、模型组、DSS含药血清高、中、低剂量组（10%、5%、2.5%）。细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测细胞Aβ和磷酸化（p）-Tau蛋白含量,免疫荧光细胞化学（ICC）标记UPP重要靶点泛素（Ub）、泛素连接酶E3（E3）、26S蛋白酶体、泛素羧基端水解酶1（UCHL1）和UCHL3蛋白的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Ub、E3、26S、UCHL1、UCHL3 mRNA和蛋白的表达。结果 根据CCK-8实验结果,筛选5 μmol·L^-1、48 h为PC12细胞损伤最佳造模条件。与空白组比较,模型组细胞存活率降低（P<0.05）、凋亡率升高（P<0.05）,Aβ及p-Tau表达升高（P<0.05）,Ub蛋白及mRNA表达升高,26S、E3、UCHL1+3蛋白及mRNA表达降低（P<0.05）。与模型组比较,DSS中剂量组细胞存活率升高（P<0.05）;DSS各剂量组细胞凋亡率下降（P<0.05）;DSS各剂量组Aβ含量降低（P<0.05）,DSS高、中剂量组p-Tau 含量降低（P<0.05）;DSS各剂量组Ub mRNA表达降低（P<0.05）,DSS各剂量组26S mRNA表达升高（P<0.05）,DSS中剂量组UCHL1 mRNA表达升高（P<0.05）,DSS高、中剂量组E3和UCHL 3mRNA表达升高（P<0.05）;DSS各剂量组Ub蛋白表达降低,DSS高、中剂量组26S、E3、UCHL1+3蛋白表达升高,以DSS中剂量效果最佳。结论 DSS含药血清可提高细胞存活率、降低细胞凋亡率、清除Aβ和p-Tau蛋白沉积,对Aβ_1-40损伤PC12细胞有保护作用,其作用可能是通过调控UPP降低Ub表达及升高26S、E3、UCHL1及UCHL3表达来发挥。     

基于p38 MAPK/NF-κB信号通路探讨淫羊藿多糖对运动性疲劳小鼠的影响及作用机制

目的 研究淫羊藿多糖对运动性疲劳小鼠的影响并探讨其可能的作用机制。方法 将游泳训练筛选后的ICR雄性小鼠随机分为正常组、模型组、维生素C组和淫羊藿多糖低、中、高剂量组,每组8只。除正常组外各组通过负重游泳训练建立运动性疲劳模型。负重游泳2周后,淫羊藿多糖低、中、高剂量组分别给予100、200、400 mg?kg^-1淫羊藿多糖灌胃,维生素C组给予200 mg?kg^-1维生素C灌胃,正常组和模型组灌服等量的生理盐水,连续2周。实验结束后,纪录各组小鼠体质量、末次力竭游泳时间;试剂盒检测各组小鼠血清尿素氮（BUN）、乳酸（LA）、乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、过氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平,骨骼肌中肌糖原（MG）、肝脏中肝糖原（HG）含量,苏木素-伊红（HE）染色法观察肌组织病理形态变化;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肌组织中p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）、磷酸化（p）-p38 MAPK、细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）、核转录因子-κB（NF-κB）、p-NF-κB、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）的蛋白表达;免疫荧光法（IF）检测各组小鼠骨骼肌组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达。结果 与正常组比较,模型组小鼠体质量下降、游泳力竭时间降低（P<0.01）,血清中疲劳代谢产物LA、LDH、BUN和脂质过氧化产物MDA含量显著升高（P<0.01）,MG、HG、SOD、GSH-Px水平下降（P<0.01）,骨骼肌组织p-p38 MAPK、ERK1/2、p-NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,淫羊藿多糖低、中、高剂量组和维生素C组小鼠体质量、游泳力竭时间增加（P<0.05,P<0.01）,LA、LDH、BUN、MDA含量明显下降（P<0.05,P<0.01）,MG、HG、SOD、GSH-Px水平升高（P<0.05,P<0.01）,骨骼肌组织p-p38 MAPK、ERK、p-NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达水平降低（P<0.05,P<0.01）。结论 淫羊藿多糖可通过抑制p38 MARK/NF-κB信号通路,从而减少代谢产物的堆积、提高抗氧化酶活性、增加机体糖原含量、减轻骨骼肌炎症,起到缓解运动性疲劳的作用。     

淫羊藿苷对中动脉阻塞大鼠脑源性神经营养因子及酪氨酸激酶受体B表达的影响

目的:探讨淫羊藿苷对中动脉阻塞模型大鼠脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)、酪氨酸激酶受体B(Trk B)表达的影响及其对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法:本研究采用插线法制作大鼠中动脉阻塞模型(MCAO)。成年雄性SD大鼠被随机分为四组:假手术组;缺血再灌注组;淫羊藿苷高剂量组:100 mg/kg,淫羊藿苷中剂量组:50 mg/kg,淫羊藿苷低剂量组:25mg/kg和剂量为10 mg/kg的尼莫地平阳性对照组。观察淫羊藿苷对神经功能缺损评分和脑含水量的影响,运用蛋白质印迹法(Western Blot)检测BDNF蛋白和Trk B的表达;苏木精伊红(H&E)染色观察脑组织的形态学改变;并运用细胞凋亡检测(TUNEL法)的方法检测海马CA1区神经元的凋亡情况。结果:50mg/kg和100 mg/kg的淫羊藿苷均可改善MCAO大鼠神经损伤症状;降低其脑含水量;减轻脑缺血再灌注损伤的脑组织形态学改变及CA1区神经元凋亡;上调BDNF和Trk B的表达。其中100 mg/kg效果最为明显,而最低剂量25 mg/kg几乎为无效剂量。结论:淫羊藿苷对脑缺血再灌注具有保护作用,此作用可能是由上调BDNF与Trk B的表达引起的。     

淫羊藿对颈椎病模型大鼠退变颈椎骨组织钙磷代谢及血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量变化的实验研究

目的:研究淫羊藿对颈椎病模型大鼠退变颈椎骨组织中Ca、P代谢及血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量的影响,探讨淫羊藿防治颈椎病的机制.方法:30只SD大鼠,随机分为模型组20只和假手术对照组10只,采用切除动物C2～C7棘上韧带、棘间韧带和分离椎旁两侧肌肉,建立颈椎退变动物模型.在1月、3月两个时间点拍摄颈椎X线片,证实模型成立后,将模型组分为淫羊藿模型组(A组)和生理盐水模型组(B组)各10只,分别喂服淫羊藿水提液和生理盐水,假手术对照组(C组)喂服生理盐水,喂服2个月取大鼠的颈椎骨组织和血清,用全自动生化分析仪测定各组颈椎骨组织中Ca、P、ALP含量和发射免疫法测定血清样本中IL-1β、IL-6、TNF-α指标.结果:①B组颈椎骨组织中Ca、P的水平低于其他两组(P＜0.01).A组Ca、ALP的水平高于其他两组(P＜0.01),P的水平高于B组(P＜0.01).②B组血清中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量高于C组(P＜0.05、P＜0.01),A组血清中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量显著的低于B组(P＜0.01).结论:①颈椎Ca、P含量的减低,是颈椎退变的病理结果.淫羊藿可提高退变颈椎骨组织Ca、P含量,抑制颈椎退变.②淫羊藿能下调退变颈椎血清中IL-1β、IL-6和TNF-α炎性细胞因子的含量,具有阻止炎性反应和抑制颈椎退变的作用.     

十一味益肾降糖方对2型糖尿病模型大鼠血糖及肾组织Wnt/β-catenin信号通路表达的影响

目的:探讨十一味益肾降糖方对2型糖尿病(NIDDM)大鼠的降血糖作用以及对肾脏Wnt/β-catenin信号通路表达的影响。方法:采用高糖高脂饲养联合注射链脲佐菌素(STZ)的方法制备2型糖尿病模型大鼠。60只SD大鼠随机均分为6组,即正常对照组、模型组、达格列净组和十一味益肾降糖方低、中、高剂量组,每组10只。达格列净组每天灌胃达格列净片1 mg/(kg·d),十一味益肾降糖方低、中、高剂量组分别灌胃十一味益肾降糖方水煎液2、4、16 g/(kg·d),正常对照组和模型组灌胃等量的生理盐水,每天给药1次,连续给药7周。测定大鼠空腹血糖(FBG)水平、糖化血红蛋白(HbA1c)水平和空腹胰岛素(FINS)水平,并计算胰岛素抵抗指数(IRI)。采用Western blot法检测Wnt4、β-catenin蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠FBG、HbA1c、FINS水平升高,IRI升高,Wnt4、β-catenin蛋白的表达量均明显增多,差异均有统计学意义(P0.05)。给药后,与模型组比较,达格列净组、十一味益肾降糖方中、高剂量组大鼠FBG、HbA1c、FINS水平显著降低,IRI显著降低,Wnt4、β-catenin蛋白的表达量均明显减少,差异均有统计学意义(P0.05)。与给药前比较,达格列净组、十一味益肾降糖方高剂量组大鼠FBG水平显著降低,差异均有统计学意义(P0.05)。与给药前比较,达格列净组、十一味益肾降糖方中、高剂量组大鼠HbA1c、FINS水平显著降低,IRI显著降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:十一味益肾降糖方可有效控制2型糖尿病大鼠的空腹血糖水平,调节糖代谢,能够抑制糖尿病大鼠肾脏Wnt/β-catenin信号通路的高表达。