消退训练对大鼠条件性恐惧行为及海马CA1区突触超微结构的影响

目的研究消退训练对大鼠条件性恐惧行为和海马CA1区突触超微结构的影响。方法成年雄性SD大鼠40只,简单随机抽样分为正常组(n=8)、消退对照组(n=16)和消退组(n=16)。在训练后不同时间(消退后7、21 d,恐惧建立后8、22 d)进行恐惧行为测试。采用透射电镜观察各组大鼠海马CA1区突触超微结构。结果①在消退后7 d和21 d,消退组的消退保持成绩显著高于消退对照组(P<0.05,P<0.01),而与正常组无显著差异(P>0.05)。②消退训练后7 d,消退组海马突触数密度显著高于消退对照组(P<0.05),与正常组之间无显著差异(P>0.05);消退训练后21 d,3组之间均无显著差异(P>0.05)。③消退训练后7 d和21 d,消退组海马突触间隙宽度显著低于正常组(P<0.05,P<0.01),并且在消退训练后21 d,消退组突触间隙宽度显著低于消退对照组(P<0.05)。④与正常组相比,消退训练后7 d和21 d,消退组PSD厚度均显著升高(P<0.01);且在消退训练后21 d,消退组PSD厚度显著高于消退对照组(P<0.05)。⑤各组之间活性区长度均无显著差异(P>0.05)。结论恐惧建立后24 h进行消退训练能够部分改变条件性恐惧引起的海马CA1区突触超微结构的变化,减轻条件性恐惧大鼠的僵立行为。     

D-环丝氨酸促进大鼠条件性恐惧消退记忆的长期保持

目的研究D-环丝氨酸(D-serine,DCS)对条件性恐惧消退记忆的长时保持的影响。方法成年雄性SD大鼠40只,采用完全随机方法分为空白对照组、消退对照组、消退训练组、消退训练前DCS干预组、消退训练后DCS干预组,每组8只。在消退训练后3 d时进行僵立行为测试与旷场行为测试。结果①消退训练组的僵立时间百分比[(39.77±22.69)%]显著低于消退对照组[(61.46±11.10)%](P<0.05),但仍高于空白对照组[(2.82±1.27)%](P<0.01);旷场测试中消退训练组的中央路程百分比及直立次数[(2.82±2.89)%,(7±4)]显著高于消退对照组[(0.50±0.84)%,(3±4)],但低于空白对照组[(19.29±6.08)%,(20±6)](P<0.05);②消退训练后DCS干预组的僵立时间百分比与旷场行为测试成绩与其他组比较均有统计学差异(P<0.05)。结论消退训练后给予D-环丝氨酸能够促进条件化恐惧消退记忆的长时保持。     

条件性恐惧消退早期海马CA1区细胞周期依赖性蛋白激酶5的变化

目的 研究条件性恐惧消退后1周内海马CA1区细胞周期依赖性蛋白激酶5(CDK5)的变化,探索其在恐惧消退中的作用.方法 成年雄性SD大鼠42只,采用完全随机方法 分为正常组(6只),消退对照组(3组,每组6只)和24h消退组(3组,每组6只).在消退训练后不同时间(消退后第1,3,7天)进行消退保持测试.采用免疫组织化学方法 检测各组大鼠海马CA1区CDK5表达情况,用图像分析软件计数CDK5免疫反应阳性细胞.结果 (1)大鼠在恐惧消退后的第1,3,7天消退保持成绩整体呈现逐渐增加的趋势.24h消退组在消退训练后第1天[(15.62±10.28)%]、第3天[(20.58±7.79)%]的不僵立时间百分比均比正常组[(75.60±2.51)%]显著降低(P＜0.01);在消退训练后第7天,24h消退组[(71.04±11.65)%]的消退保持成绩比消退对照组[(35.48±12.37)%]显著增加(P＜0.01).(2)24h消退组CDK5阳性细胞数在消退后第1天[(24.94±5.20)个]、第3天[(32.25±6.14)个]、第7天[(33.28±6.56)个]均比正常组[(15.60±2.90)个]显著升高(P＜0.01);24h消退组在消退后3d、7 d,比消退对照组[(25.09±4.83)个,(26.70±4.57)个]显著升高(P＜0.01;P＜0.05);24h消退组内,1 d组显著低于3d组(P＜0.05)和7d组(P＜0.01).结论 在恐惧消退训练后1～7d内,海马CA1区CDK5可能参与了恐惧消退早期的保持.     

厌恶与恐惧情绪条件性消退的性别差异研究

背景　男女情感障碍患病率差异显著,原因可能是男女处理负性经历的情绪调节策略不同,已有研究表明不同性别在负性情绪调节中使用不同脑区,但缺乏两者在相关神经活动的时间进程上的研究。目的　本研究旨在用条件性反射范式探讨厌恶与恐惧情绪消退的性别差异。方法　于2015年1-7月采用招募被试的方法,选取广州地区在校大学生38名,剔除3名,采用事件相关电位技术研究35名大学生在习得条件性厌恶与恐惧情绪之后,条件性消退的脑电性别差异。结果　行为结果表明,被试均能成功进行条件性消退,但相对于男性,女性对条件性恐惧刺激更难以消退。脑电结果表明,脑成分早期,女性的P1、N1、P2成分波幅均大于男性。对于男性,3类条件性刺激诱发的早期成分波幅比较,差异均无统计学意义（P>0.05）;对于女性,条件性恐惧刺激诱发的早期成分波幅均小于条件性厌恶和条件性中性刺激诱发的波幅（P<0.05）。中晚期N2和P3成分,性别主效应均不显著（P>0.05）。结论　女性对恐惧刺激的条件性消退较男性难,但均可以成功消退。     

条件性恐惧消退保持早期边缘下区细胞周期素依赖性蛋白激酶5的动态变化

目的 研究内侧前额叶皮层边缘下区(IL区)细胞周期素依赖性蛋白激酶5(Cdk5)在条件性恐惧消退保持早期的动态变化.方法 成年雄性SD大鼠56只,随机分为消退组(n=24)、假消退组(n=24)和正常组(n=8).采用声音结合足底电击建立大鼠条件性恐惧模型,消退组在恐惧建模后24h进行消退训练,假消退组则不进行消退训练,2组均在不同时间点(恐惧建模后第2、4和8天)测定消退保持成绩,并用免疫组织化学法检测各组大鼠内侧前额叶皮层IL区Cdk5的表达.结果 (1)与正常组相比,消退组和假消退组在恐惧建立后第2天和第4天的不僵立时间百分比显著较少(P＜0.01),而在恐惧建立后第8天,消退组的保持成绩明显好于假消退组[分别为(71.04±11.65)%和(35.48±12.37)%,P＜0.01],与正常组无显著差异;(2)在恐惧建立后第2天,消退组大鼠IL区Cdk5免疫阳性细胞数与正常组无差异,假消退组大鼠则明显多于正常组[均值分别为(429±70)个和(322±52)个,P＜0.05];在恐惧建立后第4天,消退组大鼠的Cdk5阳性细胞数明显减少[为(208±30)个,P＜0.01],而假消退组基本恢复正常;在恐惧建立后第8天,2组与正常组比较,Cdk5阳性细胞数差异无显著性.结论 条件性恐惧训练可能引起IL区Cdk5的水平升高;而消退训练则可能促使Cdk5的表达降低,有利于消退记忆的早期保持.     

神经细胞黏附分子L1促进神经细胞突起和功能性突触的形成

目的 :探讨神经细胞黏附分子 L 1(以下简称 L 1)在神经细胞突起生长和功能性突触形成中的作用。方法 :在体外培养 ,用脂质转染剂将 L 1c DNA表达到 NG10 8- 15细胞 ,用光学显微镜观察细胞形态和用电生理学检测技术测定细胞 -肌突触的突触后膜电位变化。结果 :以分化剂 c AMP处理 4 d后 ,L 1-转染组有突起分叉的细胞占细胞总数的百分数为 (31± 8) % ,明显高于非转染组的 (13± 2 ) %或 Mock-转染组的 (15± 5 ) % (P <0 .0 0 1)。 L 1-转染组的细胞突起平均长度为 (14 2 .5± 12 .3)μm ,明显高于非转染组的 (94 .2± 12 .3)μm或 Mock-转染组的 (86 .8± 6 .7)μm(P <0 .0 5 )。 L 1-转染组功能性突触的形成率为 (5 8.0± 11.5 ) % ,也高于非转染组的 (36 .7± 0 .83) %或 Mock-转染组的 (39.2± 0 .84 ) % (P <0 .0 0 1)。但突触后膜电位的频率在 3组之间差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论 :L 1在 NG10 8- 15细胞的高度表达 ,提高 c AMP诱发的神经细胞突起和功能性突触的形成 ,功能性突触形成率的增加是通过增加神经细胞突起分叉和突起的长度 ,从而增加神经 -肌连接数量来实现 ,而不是通过增加递质的释放量     

普萘洛尔对条件性恐惧大鼠恐惧记忆保持与海马CA3区神经元形态的影响

目的研究不同时间给予普萘洛尔对条件性恐惧大鼠恐惧记忆保持及海马CA3区神经元形态的影响。方法成年雄性SD大鼠24只,采用声音结合强烈足底电击建立大鼠条件性恐惧模型。大鼠建模成功后分为对照组(不给药,只在相应时间点进行恐惧水平测验)、立即给药组(15 min内给予普萘洛尔)和24 h后给药组(24 h后给予普萘洛尔),每组8只。给药组在建模后前3 d每天恐惧测试前给予普萘洛尔后再检测各组大鼠条件性恐惧记忆水平,于第20天完成恐惧记忆测试后处死大鼠,用高尔基染色法检测大鼠海马神经元形态和数量,电镜观察海马超微结构的变化。结果①条件性恐惧建模后,第1天3组大鼠恐惧水平差异无统计学意义(P>0.05);第2、3、20天时,两给药组大鼠恐惧水平逐渐降低,且3组大鼠在同一时间点恐惧水平差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),立即给药组恐惧水平最低,对照组恐惧水平最高。建模后第20天,对照组大鼠恐惧水平仍然较高。②建模后第20天,两给药组海马神经元CA3区锥体细胞数量[立即给药组(4.94±2.67)个,24 h后给药组(4.65±1.98)个]均大于对照组[(3.58±2.03)个],其中立即给药组明显大于对照组(P<0.05)。③电镜显示对照组海马CA3区超微结构出现异常改变,而两给药组超微结构变化不明显。结论条件性恐惧水平与海马结构发生的形态学异常变化有关,而早期应用β受体阻断剂普萘洛尔阻断β受体抑制去甲肾上腺能神经系统活性,可以在一定程度上降低条件性恐惧、减轻海马神经元结构功能损害。     

氚照射对大鼠海马神经细胞黏附分子 L1、NCAM 表达的影响

目的：探讨低剂量氚照射对大鼠海马神经细胞黏附分子 L1、神经细胞黏附分子(NCAM)表达的影响。方法取24 h 新生鼠脑海马细胞培养,培养第7天以3．7×102、3．7×103、3．7×104、3．7×105、3．7×106 Bq/ ml 终浓度氚水照射细胞24 h,并设对照组(0 Bq/ ml),活细胞工作站测定各处理组细胞的迁移距离;Western blot 法、免疫细胞化学法检测各浓度氚水照射下神经细胞黏附分子 L1及 NCAM 蛋白的表达情况。结果神经细胞迁移距离测定结果显示,与对照组相比,受照组细胞迁移距离明显缩短,且随着氚水浓度的不断增加而逐渐缩短(P <0．05);Western blot 法、免疫细胞化学法检测显示受照组神经细胞黏附分子 L1、NCAM 蛋白表达含量均低于对照组,并随氚水浓度的升高表达量呈递减趋势(P <0．05)。结论氚照射可致神经细胞黏附分子表达量减少进而可影响神经细胞的正常迁移。     

条件性恐惧消退早期大鼠边缘下区NR2B的动态变化

目的探讨条件性恐惧消退早期(1周内),记忆保持成绩与内侧前额叶皮层边缘下区(infra-limbic cortex,IL)NMDA受体2B亚基(NR2B)免疫反应阳性物质的动态变化。方法将70只成年雄性SD大鼠随机分成:正常对照组、恐惧消退组和恐惧对照组,其中恐惧对照组(条件恐惧建立后不进行消退训练),恐惧消退组(条件恐惧建立24 h后进行消退训练),采用以声音为提示的足底电击建立大鼠恐惧记忆,然后仅给予声音信号进行恐惧消退训练。在恐惧消退后第1、3、7天分别进行消退保持测试,并在各时间点取边缘下区标本进行NR2B的免疫组化实验。结果在消退保持过程中:①恐惧对照组和恐惧消退组大鼠消退成绩整体呈上升趋势,但均低于正常对照组,恐惧消退组消退成绩好于恐惧对照组(P<0.01);②恐惧对照组和恐惧消退组大鼠边缘下区NR2B免疫反应阳性物质逐渐增加,但均低于正常对照组,第1天无明显差异,第3、7天差异明显,恐惧消退组NR2B免疫反应阳性物质高于恐惧对照组(P<0.05)。结论恐惧消退训练后3～7 d,边缘下区NR2B水平与消退记忆保持成绩一致。     

条件性恐惧消退的药理学干预

条件性恐惧记忆及其消退的异常参与焦虑障碍如创伤后应激障碍的精神病理机制。大量的动物研究已经展示了药理学手段增强条件性恐惧消退的可能性;对此,本文从作用于gamma-氨基丁酸能、谷氨酸能、胆碱能、肾上腺素能、多巴胺能和大麻素能以及从改变表观遗传学和神经营养机制的药理学方面进行综述,表明临床上开发和使用药理学干预来增强基于消退原理的暴露疗法治疗焦虑障碍可能具有远大的前景。     

氯胺酮对新生大鼠认知功能和海马突触素表达的影响

目的:观察氯胺酮对新生大鼠认知功能的影响及其机制以及对海马突触素的影响。方法:1周龄Wistar大鼠30只,随机分为3组,每组10只。对照组给予与氯胺酮组相同体积的等渗盐水;氯胺酮100 mg组和50 mg组麻醉诱导时分别腹腔注射氯胺酮100和50mg/kg,以后每小时追加首次剂量的1/2,维持麻醉6h。麻醉后21d进行旷场实验和Morris水迷宫实验,后取海马标本行突触素免疫组化染色,共聚焦显微镜观察并采集图像,用Image J图像处理软件分析荧光半定量A值。结果:氯胺酮可导致大鼠的认知功能的降低,海马突触素表达增加(P<0.05),氯胺酮100 mg组和50 mg组之间海马突触素表达无统计学意义(P>0.05)。结论:氯胺酮可降低新生大鼠的认知功能,并上调海马突触素表达。     

条件性恐惧记忆形成中大鼠海马CA1/CA3区丝裂原活化蛋白激酶p38表达变化

目的 探讨大鼠恐惧记忆形成过程中海马CA1/CA3区丝裂原活化蛋白激酶p38(p38MAPK)表达及活性变化.方法 电击组及对照组大鼠各9只,分别给予或不给足底电击,1h和24h 后检测大鼠的僵住反应,然后处死动物,分别提取海马CA1和CA3区蛋白,western blot检测p38 MAPK和磷酸化p38 MAPK表达情况.结果 电击组的大鼠在lh和24h的僵住反应的时间分别为(49.1±18.6)s,(75.7±19.6)s,明显高于对照组[分别为(14.0±4.5)s,(32.1±22.7)s],差异有统计学意义(n=9,P ＜0.05);在24h电击组大鼠海马CA1区p38 MAPK及磷酸化p38 MAPK (Thr180/Tyr182)表达平均灰度值比值分别为9.4±2.6和7.8±2.1,与对照组(1.0±0.1和1.0±0.2)比较表达显著增加(n=9,P＜0.05);24h电击组大鼠海马CA3区p38 MAPK及磷酸化p38 NAPK(Thr180/Tyr182)表达平均灰度值比值分别为6.2±3.3和2.6±0.6,与对照组(2.1±0.5和1.4±0.5)比较表达显著增加(n=9,P＜0.05).结论 条件性恐惧记忆形成中大鼠海马CA1/CA3区p38 MAPK蛋白表达升高,活性增强.p38 MAPK可能参与了条件恐惧长时记忆的形成.     

条件恐惧刺激对成年大鼠海马齿状回新生神经细胞的影响

目的 研究条件恐惧刺激后大鼠海马内新生神经细胞的表达变化,探讨恐惧情绪性记忆的神经牛物学机制.方法 24只成年雄性大鼠随机分成条件恐惧刺激组和对照组,实验动物刺激前3 d腹腔内注射Brdu标记神经干细胞,实验组动物采用单调声配对电击大鼠足底造成条件恐惧刺激模型,对照组仅给予单调声刺激.刺激前和刺激后7,14d分别行动物行为学检测(静止不动时间);动物存活7,14d后处死,冰冻切片行Brdu的免疫组织化学染色.结果 条件恐惧刺激后,行为学检测结果显示实验组大鼠静止不动时间百分比显著高于对照组[分别为(88.68%、91.33%)和(11.18%、14.23%),P<0.01]及电击前(24.11%、16.11%,P<0.01);Brdu免疫组化染色显示条件恐惧刺激后实验组7,14d组大鼠海马齿状回内Brdu免疫阳性细胞少于同时间点的对照组[分别为(1364±21)个、(296±22)个和(1567±28)个、(580±5)个,14d组差异具有显著性P<0.05].结论 条件恐惧刺激后大鼠海马齿状回新生神经元的减少可能与恐惧等情绪性记忆有关.

Abstract：

Objective To investigate neurogenesis in the dentate gyrus of adult rat following conditioned fear stimulus.Methods 24 adult male rats were randomly divided into conditioned fear stimulus group and control group,and all rats were intraperitoneally injected bromodeoxyuridine(BrdU)3 days before conditioned fear stimuli.Animals in conditioned fear stimulus group were given monotone matching foot shock and made conditioned fear stimulus model,animals in control group only give monotone.Freezing time was detected before stimuli and 7th,14th days after stimuli,then rats were sacrificed 7th or 14th day after fear conditioned stimulus,and immunohistochemistry for Brdu was detected.Results Behavioral assessment showed that the percents of freezing time in conditioned fear stimulus group 7th,14th days after conditioned fear stimulus were significantly high(88.68%,91.33%)than those in control group(11.18%,14.23%,P<0.01)and before stimulus(24.11%,16.11%,P<0.01).Compared to control group(1567±28,580±5),Brdu positive cells in dentate gyrus of rat in conditioned fear stimulus group(1364±21,296±22)were decreased,and it reached to a statistical significance on 14th day (P<0.05).Conclusion The decreased neurogenesis in the dentate gyrus of adult rat following conditioned fear stimuli may have relation to fear and other emotion memory.     

幼龄期音乐暴露对大鼠成年后焦虑行为和恐惧记忆消退的影响

目的 研究幼龄期音乐暴露对成年大鼠焦虑样行为和恐惧记忆消退的影响.方法 健康2周龄Sprague-Dawleyda大鼠4窝(共28只),投币法随机分为2组:音乐组每晚8:00～ 10:00给予音乐暴露,持续3周;对照组不作处理.5周龄后雌、雄鼠分笼,雄鼠音乐组与对照组各8只,雌鼠音乐组与对照组各6只.各组大鼠8周龄时,对其进行恐惧条件化训练、旷场实验、高架十字迷宫实验和恐惧消退训练.结果 高架十字迷宫实验结果,电击前音乐组雌、雄大鼠开放臂停留时间百分比[雌鼠(7.07±1.14)％,雄鼠(5 12±1.95)％]与对照组雌、雄大鼠[雌鼠(4.65±0.86)％,雄鼠(4.86±1.95)％]相比差异无统计学意义(P＞0.05);电击后音乐组雌、雄大鼠开放臂停留时间百分比[雌鼠(8.63±3.35)％,雄鼠(7.79±2.49)％]高于对照组雌、雄大鼠[雌鼠(1.48±0.1 J)％,雄鼠(4.29±1.68)％](P＜0.01).旷场实验结果,电击前音乐组雌、雄大鼠中央格停留时间百分比[雌鼠(6.16±2.17)％,雄鼠(6.25±3.47)％]与对照组雌、雄大鼠[雌鼠(5.27±1.95)％,雄鼠(6.22±3 13)％]相比差异无统计学意义(P＞0.05):电击后音乐组雌、雄大鼠中央格停留时间百分比[雌鼠(8.52±1.93)％,雄鼠(6.95±2.46)％]大于对照组雌、雄大鼠[雌鼠(3.47±0.93)％,雄鼠(4.36±2.22)％](P＜0.05).消退训练显示,消退训练第1天第一个block音乐组雌、雄大鼠与对照组雌、雄大鼠呆立水平差异无统计学意义;音乐组雌鼠第3天呆立水平显著低于对照组雌鼠(P＜0.05),音乐组雄鼠笫2,3天呆立水平均显著低于对照组雄鼠(分别为P＜0.05,P＜0.01).结论 幼龄期音乐暴露有助于改善大鼠创伤应激后的焦虑水平,不影响大鼠的条件恐惧记忆水平,有助于恐惧记忆的长时程消退.     

抗癫痫药对大鼠认知及海马GluR2和Syn表达的影响

目的 探讨抗癫痫药丙戊酸钠（VPA）、奥卡西平（OXC）、左乙拉西坦（LEV）对大鼠认知、海马谷氨酸受体2（GluR2）和突触体素（Syn）表达的影响。方法 随机将60只Wistar大鼠分为正常对照组（CON组）、VPA组、LEV组、OXC组、LEV+VPA组、LEV+OXC组,每组10只,灌胃给药,90d后行Moriss水迷宫和穿梭箱实验测试,比较各组大鼠的空间和条件性学习记忆能力,采用免疫组化技术检测海马GluR2和Syn的表达。结果 与对照组比较,VPA组水迷宫测试逃避潜伏期、正确率、运行时间及穿梭箱实验主动回避次数、主动回避潜伏期、被动回避潜伏期差异均有统计学意义(P均＜0.05）,免疫组化检测显示,VPA组GluR2和Syn的表达及LEV+VPA组的GluR2表达显著下降（P均＜0.05）。结论 LEV、OXC、LEV+OXC、LEV+VPA不影响认知功能,VPA影响认知功能可能与其使GluR2和Syn的表达下降有关。     

Neurturin和NGF促进AD鼠学习记忆恢复及海马突触素表达

目的探讨Neurturin(NRTN)和神经生长因子 (nervegrowthfactor ,NGF)联合治疗对AD鼠学习记忆和海马突触素表达的影响。方法切断成年SD大鼠左侧穹窿海马伞 (Fimbria Fornix ,FF) ,建立AD鼠模型。治疗组左侧脑室注射NRTN、NGF ,用Y型迷宫检测大鼠学习记忆能力、免疫组化方法和图象分析技术对大鼠海马突触素进行定量分析。结果与NGF组、损伤组相比 ,联合组学会Y型迷宫所需训练次数减少 ( 5 9.2 0± 3 .60vs 98.40± 4.5 1)和正确反应次数增加 ( 9.0 0± 0 .40vs 3 .82± 0 .64 ) ,但未完全达到正常水平 ;联合组海马CA1区多形层、辐射层、腔隙分子层和齿状回分子层突触素免疫反应物的COD值均明显增高 ,差异有高度显著性。结论NRTN和NGF联合治疗能促进AD鼠学习记忆恢复和海马突触素的表达 ,效果较单用NGF治疗好。