血府逐瘀汤对人脐静脉内皮细胞VEGF与PDGF分泌的影响

目的 探讨血府逐瘀汤对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分泌血管内皮生长因子(VEGF)、血小板源性生长因子(PDGF)的影响及其与促进HUVEC增殖的关系.方法 采用血府逐瘀汤含药血清体外干预HUVEC培养,通过MTT法和酶联免疫吸附分析(ELISA)法观察血府逐瘀汤对HUVEC的体外增殖和分泌VEGF、PDGF的影响作用.结果 MTT检测结果显示血府逐瘀汤含药血清浓度为10%时对HUVEC具有显著增殖作用;ELISA检测结果显示血府逐瘀汤具有促进HUVEC分泌VEGF的作用,而对PDGF的分泌无明显的作用.结论 血府逐瘀汤在一定剂量范围内能促进HUVEC增殖和促进HUVEC分泌VEGF,而对PDGF的分泌无明显促进作用;提示血府逐瘀汤可能通过促进HUVEC分泌VEGF而促进细胞增殖,从而起到祛瘀生新的作用.     

五味子多糖对人结肠癌HT29细胞增殖的抑制作用及其机制

目的探讨五味子多糖含药血清对人结肠癌细胞株HT29体外增殖的影响及作用机制。方法采用人结肠癌细胞株HT29作为研究对象,MTT法检测不同浓度的五味子多糖含药血清对细胞增殖的抑制作用;倒置显微镜和荧光显微镜观察细胞形态和细胞核的改变;流式细胞仪分析细胞凋亡的情况。结果五味子多糖含药血清对HT29细胞的增殖有抑制作用而且呈剂量和时间依赖性。五味子多糖含药血清作用72 h后,荧光显微镜可见凋亡细胞及凋亡小体;流式细胞仪检测凋亡。结论五味子多糖含药血清对HT29结肠癌细胞的增殖有抑制作用,其作用机制与诱导细胞凋亡有关。     

六味地黄丸含药血清对软脂酸诱导人脐静脉内皮细胞损伤抗氧化的机制

目的探讨六味地黄丸(LWDHP)含药血清对软脂酸(PA)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤抗氧化的保护作用及机制。方法噻唑蓝(MTT)法观察HUVEC的存活率;氮蓝四唑(NBT)显色法测定细胞裂解上清液总超氧化物歧化酶(SOD)的活力;硫代巴比妥酸(TBA)反应法检测细胞裂解上清液丙二醛(MDA)的含量;RT-PCR及Western印迹检测细胞内NADPH氧化酶4(NOX4)mRNA和蛋白的表达。结果 LWDHP含药血清能促进PA损伤的HUVEC增殖,增加细胞裂解上清液总SOD活力,降低细胞内MDA含量,减少NOX4 mRNA和蛋白的表达。结论 LWDHP含药血清能够对PA诱导的HUVEC氧化损伤发挥保护作用,此作用可能与LWDHP降低HUVEC内NOX4的表达量有关。     

消瘤汤含药血清对人肝癌细胞Bel-7402增殖和凋亡的影响

[目的]观察消瘤汤含药血清对人肝癌细胞Bel-7402增殖和凋亡的影响。[方法]采用消瘤汤含药血清,应用血清药理学方法,选择不同浓度的含药血清体外培养人肝癌细胞Bel-7402 96 h。通过MTT法和细胞形态学观察检测细胞的增殖抑制率和细胞凋亡。[结果]MTT法检测表明,消瘤汤高、中、低剂量组与0.95%氯化钠（对照）组相比,对人肝癌细胞增殖均有抑制作用（P〈0.01）。细胞形态学检测表明消瘤汤各剂量组含药血清均可诱导细胞凋亡。[结论]消瘤汤能明显抑制肝癌Bel-7402细胞的增殖,其抑瘤作用有细胞毒作用和诱导细胞凋亡2种途径。     

中药芪红合剂含药血清对人外周血内皮祖细胞增殖的影响

目的 观察中药芪红合剂含药血清对体外培养的人外周血内皮祖细胞(EPCs)增殖的影响.方法 将12只雄性Wistar大鼠随机分为中药芪红合剂组(低剂量组、中剂量组、高剂量组)和对照组,制备含药血清和空白血清.采用密度梯度离心法分离获得人外周血单个核细胞,经激光共聚焦显微镜、流式细胞仪鉴定为EPCs.加入各实验血清组培养液培养EPCs,分别作用不同时间(24 h、48 h、72 h)后,倒置相差显微镜下观察EPCs生长情况,噻唑蓝比色试验(MTT法)测定EPCs的吸光度值.结果 与对照组比较,中药芪红合剂含药血清低、中、高剂量组EPCs增殖明显(P＜0.05),且呈一定的量效、时效关系.在同一作用时间,低剂量芪红合剂含药血清干预后EPCs 的增殖明显(P＜0.05).在同一剂量组中,芪红合剂含药血清干预后EPCs 的增殖随时间推移逐渐增强,于72 h达到高峰(P＜0.05).结论 中药芪红合剂含药血清对体外培养的人外周血EPCs的增殖具有一定的促进作用,可能是其防治血管内皮损伤及内皮功能障碍相关性疾病的作用机制之一.     

复方肝癌宁含药血清诱导肝癌HepG2细胞凋亡的实验研究

目的:观察复方肝癌宁含药血清对肝癌HepG2 细胞凋亡的诱导作用．方法:运用中药血清药理学方法,选择不同浓度的含药血清与人肝癌HepG2细胞共同孵育观察,并与阳性血清组、无药血清组作对照．结果:复方肝癌宁含药血清可显著抑制HepG2 细胞的增长;TUNEL法检测HepG2细胞在显微镜下呈现典型的凋亡形态学改变,可见“凋亡小体”,高、中、低剂量含药血清组凋亡率分别为:14．50％,13．61％和10．19％,与无药血清组比较P<0．01;流式细胞仪检测可见亚G1峰, 凋亡呈含药血清浓度依赖性特点,高、中、低剂量含药血清组凋亡率分别为15．1％,12．0％, 5．5％．与无药血清组比较P<0．01或P<0．05 结论:复方肝癌宁可通过诱导肿瘤细胞凋亡, 发挥临床抗肝肿瘤、抗转移的作用．     

健脾益气方含药血清对人胃癌细胞株MKN-28凋亡的影响

目的观察健脾益气方含药血清对人胃癌细胞株MKN-28凋亡的影响。方法采用健脾益气方含药血清培养MKN-28,分别在培养24、48、72 h时采用MTT法测算MKN-28增殖抑制率;采用激光共聚焦法及流式细胞术观察MKN-28细胞形态和细胞周期变化。结果健脾益气方含药血清可显著抑制MKN-28增殖,且抑制率与含药血清浓度及其作用时间呈正相关;含药血清可改变MKN-28细胞周期,诱导其凋亡。结论健脾益气方含药血清对人胃癌细胞株MKN-28具有抑制增殖、促进凋亡的作用。     

肿瘤甲基化抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷抑制人皮静脉内皮细胞及生长因子受体2

目的分析肿瘤甲基化抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、迁移、管室结构及血管内皮生长因子受体(VEGFR)2的影响来探讨5-Aza-CdR对肿瘤血管形成HUVEC的抑制作用。方法将HUVEC以胰酶消化传代至第3代,5-Aza-CdR含药血清进行干预,噻唑蓝(MTT)法检测5-Aza-CdR对HUVEC增殖的影响,Transwell小室观察5-Aza-CdR对HUVEC迁移的速度,管样结构检测5-Aza-CdR对HUVEC管腔结构形成的影响,Western印迹检测5-Aza-CdR对HUVEC受体VEGFR2表达的影响。结果在72 h时5-Aza-CdR 10μmol/L药物组对HUVEC的增殖分化和迁移抑制最为明显,10μmol/L药物组对HUVEC管样结构形成的抑制最为明显,5-Aza-CdR明显抑制VEGFR2蛋白表达,并与剂量浓度大小有正相关关系,浓度越大其抑制蛋白表达的作用也越明显。结论5-Aza-CdR可能通过抑制HUVEC的增殖、迁移、分化、管样结构形成及其主要的促生长因子VEGFR2来阻滞肿瘤血管生长、扩散。     

芎芍胶囊及丹参对大鼠缺血心肌血管新生的作用

目的探讨中成药芎芍胶囊及丹参对心肌梗死大鼠缺血心肌血管新生的影响。方法采用开胸结扎冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型,清洁级(或SPF级)SD大鼠24只(雌雄各半)分为3组,即模型组、芎芍胶囊组、丹参组,每组8只,分别用生理盐水、芎芍胶囊、丹参按中剂量进行灌胃给药,连续给药。6周后采集血,分离样本,并按规定保存,用免疫组化评分法、血管新生相关因子检测法;检测各组缺血心肌内皮细胞生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、表皮细胞生长因子(EGF)、转化生长因子(TGF)、血小板源生长因子(PDGF)等促血管生成因子的表达。结果芎芍胶囊组对VEGF、EGF的促进作用较丹参组、对照组有统计学意义(P<0.05),其中芎芍胶囊组、丹参组对FGF的促进作用与对照组比较均有统计学意义(P<0.05),对照组对TGF、PDGF促进作用较芎芍胶囊组、丹参组有统计学意义(P<0.05)。结论中药具有促进心肌梗死大鼠缺血心肌血管新生、提高心肌梗死大鼠心肌细胞VEGF、FGF、EGF蛋白的表达、具有保护心肌缺血性损伤的作用。     

超声下观察芎芍胶囊对心肌梗死大鼠缺血心肌血管新生的作用

目的探讨中成药芎芍胶囊对心肌梗死大鼠缺血心肌血管新生作用。方法采用开胸冠状动脉左前降支的方法建立心肌梗死模型,清洁级(或SPF级)SD大鼠32只(雄性)分为空白组、模型组、芎芍组、丹参组,每组8只,分别用生理盐水、芎芍胶囊、丹参粉末进行灌胃给药,连续给药。6周后采集数据分离样本,通过二维超声观察大鼠心功能指标,以及大鼠心肌组织中外源性血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达。结果芎芍组、丹参组与模型组比较,左心室收缩末期内径(LVESD)、舒张末期内径(LVEED)、左心室射血分数(LVEF)差异均有统计学意义(P<0.01),芎芍组、丹参组与AMI组比较,VEGF、bFGF差异均有统计学意义(P<0.01)。VEGF、bFGF与LVEF呈正相关(r值分别为0.813、0.589,P<0.01)。结论芎芍胶囊较丹参更具有促进心肌梗死大鼠缺血心肌血管新生,提高心肌梗死大鼠心功能,保护心肌缺血性损伤的作用。     

The mitogenic and anti-apoptotic activity of tumor conditioned medium on endothelium

This study was designed to observe the effect of tumor conditioned medium (TCM) on the proliferation and apoptosis of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). HUVECs were exposed to TCM from breast carcinoma cell line MDA-MB-231, then we measured their proliferation, apoptosis and cell cycle distribution by MTT and flow cytometery (FCM). Following the stimulation of TCM, HUVECs showed higher pro-mitogenic and anti-apoptotic ability than did the negative control group (ECGF-free medium with 20% FBS), but a similar ability to the positive control group (medium with ECGF and 20% FBS). From these results, we can conclude that breast carcinoma cell line MDA-MB-231 could secret soluble pro-angiogenic factors that induce HUVEC angiogenic switching, including cell cycle progression, proliferation and growth. The role and character of these factors remain to be further studied.     

重组人血管内皮抑制素对多发性骨髓瘤内皮细胞增殖和迁移的影响

目的观察重组人血管内皮抑制素注射液(内皮抑素)对人脐静脉内皮细胞株(HUVEC)和多发性骨髓瘤细胞株KM3抑制增殖及诱导凋亡的作用,研究其对KM3细胞培养上清诱导的HUVEC迁移效果的影响。方法 WST-1法观察不同浓度的内皮抑素分别对HUVEC和KM3细胞株的增殖抑制作用,Annexin V-FITC法检测有效浓度的内皮抑素对HUVEC和KM3细胞株的凋亡作用,改良的Boyden小室法检测内皮抑素对KM3细胞株培养上清诱导的HUVEC迁移的影响。结果 50～500 ng/mL内皮抑素对HUVEC具有抑制增殖作用,而对KM3细胞未见明显作用。100、200 ng/mL的内皮抑素对HUVEC具有诱导凋亡作用;而对KM3细胞未见明显作用。与不加药组相比,内皮抑素能抑制KM3细胞培养上清促内皮细胞迁移的作用(P<0.01)。结论内皮抑素能抑制HUVEC的增殖及诱导其凋亡,并能抑制骨髓瘤细胞的促内皮细胞迁移作用。     

人脂联素基因重组腺病毒对内皮细胞丙二醛和超氧化物歧化酶水平的影响

目的 检测人脂联素基因重组腺病毒(Ad-apM1)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)丙二醛和超氧化物歧化酶(SOD)水平的影响,探讨Ad-apM1的抗氧化效应.方法 将Ad-apM1转染HUVEC,观察对HUVEC增殖的影响.双抗体夹心酶联免疫法(ELISA)检测细胞培养液中人脂联素蛋白水平,硫代巴比妥酸法检测丙二醛水平,黄嘌呤氧化酶法测定SOD水平.结果 Ad-apM1对HUVEC增殖无明显影响,用感染复数(MOI)为50的Ad-apM1转染HUVEC 24、48、72 h后培养液中脂联素浓度显著升高.转染AdapM1的HUVEC细胞SOD显著升高,而丙二醛显著降低(均P<0.05).100μmol/L H2O2处理HUVEC 6、12和24 h后丙二醛水平显著升高,SOD水平显著降低(均P<0.05),而转染Ad-apM1可逆转其作用(P<0.05).结论 本研究制备的Ad-apM1能有效转染HUVEC并分泌人脂联素,具有抗氧化、减轻过氧化氢对内皮细胞的氧化损伤作用.     

同型半胱氨酸血症对人脐静脉内皮细胞增殖活性的影响

目的 观察不同浓度的同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作用不同时间后对细胞增殖和形态结构的影响.方法 在含有不同浓度的同型半胱氨酸培养环境及对照培养环境中,分别孵育内皮细胞24 h、48 h、72 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测同型半胱氨酸对内皮细胞增殖活性的影响,并进行细胞形态学观察.结果 同型半胱氨酸低浓度时对细胞生长的抑制不明显,随着浓度的增高,细胞生长抑制越明显,且呈浓度、时间依赖性.结论 高同型半胱氨酸可损伤内皮细胞,抑制细胞生长,有助于糖尿病和胰岛素抵抗致动脉粥样硬化等血管病变的发生和发展.     

miR-206对血管内皮细胞增殖的影响及其机制

目的研究miR-206对血管内皮细胞增殖的影响及其机制,为临床动脉硬化疾病提供新的诊疗方向。方法收集临床病理首次确诊为糖尿病下肢动脉粥样硬化病变的患者病变处动脉内皮组织和正常内皮组织,qPCR检测miR-206的表达;而后通过基础实验研究将HUVEC分为未转染组、miR-206-mimics组和miR-206-inhibitor组,观察转染效率;三组细胞均采用CCK8检测细胞增殖情况,Transwell进行迁移能力评估,流式细胞仪检测细胞周期情况,Western blot检测Cx43表达情况。结果糖尿病动脉硬化患者下肢动脉(均为胫腓动脉)病变处内皮细胞miR-206的mRNA表达较正常组织内皮细胞明显增加(P0.05);HUVEC转染miR-206-mimics后,miR-206表达显著升高(P0.05),转染miR-206-inhibitor后,miR-206表达明显降低(P0.05);在HUVEC转染miR-206-mimics 24 h后,细胞增殖率相比于未转染组和miR-206-inhibitor组要明显降低(P0.05);在HUVEC转染miR-206-mimics后,细胞迁移能力明显降低(P0.05),细胞周期在G2期发生阻滞,而HUVEC转染miR-206-inhibitor后细胞迁移能力提高(P0.05);miR-206-mimics组细胞Cx43表达明显降低,而miR-206-inhibitor组细胞Cx43表达明显增加。结论 miR-206可以抑制血管内皮细胞的增殖,将内皮细胞阻滞在有丝分裂G2期,并且抑制内皮细胞迁移,其对内皮细胞增殖的影响可能是通过调节Cx43表达来实现的。     

Nitric oxide inhibits proliferation of human endothelial cells via a mechanism independent of cGMP.

Endothelial cell-derived nitric oxide (NO) has been suggested to inhibit smooth muscle cell proliferation, resulting in the reduction of intimal hyperplasia during atherogenesis. The present study investigates the role of NO from exogenous and endogenous sources on the proliferation of human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) and human coronary artery endothelial cells (CAEC). Three different NO-generating compounds [sodium nitroprusside (SNP), S-nitroso-glutathione (GSNO) and S-nitroso-acetylpenicillamine (SNAP)] were found to inhibit endothelial cell proliferation measured with three independent methods (cell counting, [3H]thymidine incorporation, DNA histograms) with significant inhibition occurring at concentrations > or = 100 microM. Growth-inhibiting effects were observed after long-term treatment (18-96 h) as well as after short stimulation with NO donors (10 min with a subsequent NO donor-free culture period of 18 h) and were comparable in culture medium (20% serum, growth factor supplementation) and serum-deficient medium (1% serum). The NO donor effects were mediated by the release of NO as they were prevented by NO scavenging. Superoxide dismutase (SOD) was found not to interfere with these effects suggesting that peroxynitrite formation was unlikely to be involved. 1H-[l,2,4]Oxadiazolo[4,3,-alpha]quinoxalin-1-one (ODQ), a specific inhibitor of the soluble guanylate cyclase, was observed not to alter the antiproliferative effects of NO donors although it completely prevented NO-mediated increase of cyclic guanosine 3',5'-monophosphate (cGMP), suggesting that the NO-induced growth inhibition was not mediated by cGMP. Furthermore, inhibition of endogenous NO production by N-nitro-L-arginine methylester (L-NAME) did not affect endothelial cell growth regardless of using serum plus growth factor supplement, growth factor supplement alone, or thrombin to stimulate proliferation. We suggest that constitutively synthesized NO may not regulate endothelial cell proliferation whereas the growth-inhibiting NO effects may occur when an inducible NO synthase associated with a persistently high NO production is expressed in the atherosclerotic vessel wall.     

腺苷对人静脉内皮细胞增殖的影响

目的探讨腺苷对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell，HUVEC）增殖的影响。方法MTT法观察腺苷的最佳作用浓度及最佳作用时问。结果4％FBS浓度下，腺苷具有明显的促HUVEC增殖作用，为最佳浓度。在10-^4 mol／L腺苷终浓度对细胞增殖有明显的促进作用，为最佳腺苷浓度。腺苷的促生艮作用在24h即出现，在48h已达到较高水平。结论在血供基本被阻断或血流基本正常的情况下，腺苷可能对细胞增殖尤影响；但在m流减少的情况下，腺苷的应用可以促进内皮细胞增殖，可能对血管新生有启动作用。     

Effects of endocrine peptides on proliferation, migration and differentiation of human endothelial cells

AIMS: We aimed to evaluate the effects of several peptides (substance P, VIP, neuropeptide Y, bombesin, glucagon and somatostatin) on the proliferation, migration and differentiation of human endothelial cells and their modulation by an anti-angiogenic factor, endostatin. METHODS: Human endothelial cells (HUVEC) were isolated from umbilical veins. Their proliferation was measured by the incorporation of tritiated thymidine. Their migration was evaluated by using an haptotactic assay performed in Boyden chambers, after metabolic labeling of HUVEC through (35) S-methionin. Differentiation was evaluated as the capacity for HUVEC to form capillaries. RESULTS: Endothelial cell proliferation was increased by neuropeptide Y, bombesin and glucagon. Somatostatin induced a significant decrease in basal and stimulated endothelial cell proliferation. The migration of HUVEC increased in the presence of substance P, VIP, neuropeptide Y, bombesin, glucagon and somatostatin. The number of capillaries was increased by substance P and VIP and decreased by neuropeptide Y, bombesin and somatostatin. Endostatin induced a significant decrease in endothelial cell proliferation in the basal state and after stimulation by neuropeptide Y and bombesin. Endostatin had no additive effect on the anti-proliferative action of somatostatin. CONCLUSIONS: Our results suggest a role for endocrine peptides in the regulation of tumor angiogenesis. The potent anti-angiogenic effect of somatostatin may promote new therapeutic strategies.