IL-12对CIK细胞体外增殖及细胞毒活性影响的研究

目的观察IL-12对细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）体外扩增和细胞毒活性的影响。方法采用3种不同的细胞因子组合扩增CIK细胞,即IL-2组：IFN-1、CD3单抗、IL-1和IL-2;IL-2加IL-12组：IFN-γ、CD3单抗、IL-1、IL-2和IL-12;IL：12组：IFN-γ、CD3单抗、IL-1和IL-12。细胞计数法测定细胞的增殖、流式细胞术分析细胞表型,MTT法测定细胞毒作用。结果3种方法均可使细胞增殖能力显著增加,对CD3^＋CD56^＋细胞的诱导作用也无明显差异,IL-12与IL-2联合作用组促增殖能力和细胞毒性作用明显强于其他两组,P〈0．05,差异有统计学意义。结论IL-12同样可以用于CIK细胞的诱导,而联合IL-12与IL-2可以显著增强CIK细胞的增殖能力和细胞毒性。     

脐血CIK细胞诱导K562细胞的凋亡作用

探讨脐血CIK细胞对K562细胞的杀伤活性及诱导凋亡作用。通过第1天在脐血淋巴细胞中加入IFN-r，第2天再加入IL-2和CD3单抗进行细胞培养获得多种细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokines induced killer cells)即脐血CIK细胞。用MTT法测定其抗肿瘤活性，原位末端标记法进行凋亡分析，台盼蓝拒染法计数细胞。脐血CIK细胞及培养上清抗K562活性明显优于CD3AK细胞，短期培养后其增殖活性低于CD3AK细胞；但是加入G-CSF可以提高CIK细胞的增殖活性，且CIK细胞的抗K562活性仍高于CD3AK细胞。CIK细胞诱导K562细胞凋亡率大于CD3AK细胞，G-CSF能部分抑制CIK细胞诱导的K562细胞的凋亡。脐血CIK细胞是一种有效的杀伤活化细胞，脐血在多种细胞因子适当组合的诱导下可提高杀瘤活性。     

体外大量扩增CIK细胞的研究

目的：探讨影响CIK细胞体外增殖的因素（如共刺激、培养时间和血清等），以及其进行无血清培养。方法：用乳酸脱氢酶分析细胞毒活性，用流式细胞术分析细胞表型。结果：培养至第14d，在胎牛血清、自身血浆或无血清3种培养条件下，CIK细胞的纯度分别为：21．68％、28．28％和29．50％；增殖倍数分别为：31．7、33．3和27．1倍。培养21d后，CIK细胞的纯度分别为：36．73％、37．29％和29．7％，增殖倍数分别为：58．2、67．4和52．7倍。3种培养条件来源的CIK细胞，对K562细胞的细胞毒活性分别为：63．4％、72．3％和53．6％；而对Raji细胞的细胞毒活性分别为：47．6％、56．2％和43．4％。效应细胞：靶细胞为10：1时，培养14d和21d的CIK细胞，对K562细胞的细胞毒活性分别为68．13％和56．4％；而对Raji细胞的细胞毒活性分别为49．9％和39．2％。在共刺激或无共刺激信号存在的条件下，效应细胞：靶细胞为10：1时，对K562细胞的细胞毒活性分别为69．7％和41．9％；而对Raji细胞的细胞毒活性分别为42．6％和37．8％。结论：共刺激和培养时间的延长，有利于增强CIK细胞的细胞毒活性。用无血清培养基可促进CIK细胞体外增殖。     

肿瘤细胞来源的胞外体对CIK细胞活性的影响

目的 探讨恶性肿瘤对于细胞因子诱导的杀伤（cytokine induced killer，CIK）细胞的增殖抑制以及诱导凋亡等方面的作用，并探讨肿瘤细胞影响CIK的作用机制。方法 在CIK细胞培养体系中分别加入胃癌细胞系BGC-823、结肠癌细胞系HCT-8细胞的培养上清，观察对于CIK细胞的增殖倍数、主要效应细胞（CD3^＋CD56^＋细胞）的含量以及杀伤活性的影响。为探讨肿瘤细胞来源的胞外体在影响CIK细胞活性中的作用，采用超速离心技术分离肿瘤细胞培养上清中的胞外体结构，观察其对于CIK细胞的抑制作用。结果 培养体系中肿瘤培养上清的加入降低了CIK细胞的增殖倍数和CD3^＋CD56^＋细胞的比例，并且肿瘤培养上清的加入抑制了CIK细胞对于同类肿瘤细胞的细胞毒活性。肿瘤细胞和CIK细胞的共同培养增加了CIK细胞中凋亡细胞的比例，同时降低了增殖细胞比例。通过超速离心方法从BGC-823胃癌细胞培养上清液中分离出胞外体结构，电镜显示为直径介于40～100ml之间的膜性微小囊泡，并且BGC-823细胞培养上清中胞外体结构的去除可以减轻其对于CIK细胞的增殖抑制。结论 肿瘤细胞对于CIK细胞的增殖和生物学活性具有抑制作用，免疫抑制性细胞因子和胞外体都是可能的作用机制。     

人外周血细胞因子诱导的自然杀伤细胞的体外高效扩增

使用干细胞生长培养基 (SCGM )和RPMI16 4 0培养基 ,设计不同浓度的抗CD3单抗、IL 2和PHA的培养条件 ,从健康成人外周血单个核细胞 (PBMC )中高效扩增细胞因子诱导的自然杀伤细胞 (CINK ) ,并用MTT法检测其细胞毒活性 ,优化CINK细胞的体外扩增技术。用优化的方法扩增 12例不同类型恶性肿瘤患者CINK细胞。结果显示 ,在以SCGM为基础培养基时 ,PBMC经抗CD3单抗、IL 2作用后获得大量增殖 ,在PHA存在时获得最大增殖 (P <0 0 5 ) ,扩增的CINK细胞以CD3 CD5 6 + NK细胞为主 ,扩增细胞的细胞毒活性显著高于相同来源的CIK细胞和CD3AK细胞 ,为应用CINK细胞进行自体肿瘤过继免疫治疗奠定了基础     

CIK在无血清培养体系中的增殖、表型变化和抗肿瘤活性

目的:探索细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)在无血清体系中的增殖规律、表型变化及其抗瘤活性。方法:不同培养基培养CIK细胞,采用活细胞计数法观察CIK细胞的增殖,流式细胞仪检测CIK细胞的表型,CytoTox96非放射性细胞毒试剂盒检测CIK细胞的细胞毒活性。结果:经过细胞因子和抗体刺激后,CIK细胞能明显增殖,无血清培养基加自体血浆组最高可扩增473.28±27.53倍,无血清培养基组可扩增218.24±16.86倍,而RPMI1640加FCS只扩增11.52±1.04倍。CD3 CD8 、CD3 CD56 、CD226 CD11a 和CD305 CD11a 细胞随着培养时间的延长而增加,而CD3 CD4 细胞则明显减少。CIK细胞对肿瘤细胞的细胞毒作用明显高于LAK细胞(P<0.01),且其细胞毒活性随着培养时间的延长而增高。结论:CIK细胞在体外扩增能力强,对肿瘤细胞的杀伤活性高,有望成为新一代抗肿瘤过继免疫细胞制剂而应用于临床。     

PHA-CIK细胞的免疫表型和细胞毒活性

目的：探讨PHA-CIK细胞的免疫表型和细胞毒活性。方法：分离健康人外周血单个核细胞，用PHA先刺激单个核细胞24小时，然后按培养CIK细胞的传统方法继续培养至第15天。用流式细胞术检测免疫表型和MTT法检测细胞毒作用。结果：培养体系中CD3^ 、CD8^ 、CD3^ CD8^ 、CD3^ CD56^ 细胞较多，PHA-CIK细胞有较强的细胞毒活性。结论：PHA-CIK(细胞有较强的抗肿瘤活性，可作为生物治疗应用于临床。     

小鼠CTL体外非特异性扩增对其杀瘤活性的影响

目的 在体外用抗CD3单抗、抗CD28单抗和白细胞介素2（IL－2）扩增肿瘤特异性CTL,为肿瘤过继治疗提供足够数量的、具有高度杀瘤活性的效应细胞。方法 采用两种方案培养肿瘤细胞免疫的小鼠脾细胞。（1）抗CD3单抗刺激48h后,加入抗CD3单抗和20U／mlrIL－2（抗－CD3＋IL－2组）;（2）抗CD3单抗和抗CD28单抗同时刺激48h后,加入抗CD3单抗、抗CD28单抗和20U／ml rIL－2（抗－CD3＋抗－CD2＋IL－2组）。分别检测2组效应细胞的增殖水平、杀瘤活性及表型。结果 抗CD3＋IL－2组细胞的^3H－TdR掺入量在第6天、12天、20天分别为22126、52426、2072,抗－CD3＋抗－CD28＋IL－2组细胞的^3H-TdR掺入量在第6天、12天、30天分别为32168、12922、3265,后者明显高于前者。在培养12d时,抗－CD3＋IL－2组细胞对FBL03的最大杀伤活性为66．4％,抗－CD3＋抗－CD28＋IL－2组细胞对FBL－3的最大杀伤活性为77．8％。细胞表型FACS分析结果表明,抗－CD3＋抗－CD28＋IL－2组培养12d后的细胞90％以上为Thy1.2^ 细胞,且CD25^ 细胞在抗－CD3＋抗－CD28＋IL－2组、抗－CD3＋IL－2组分别为23．00％、8．15％。结论 抗CD3单抗、抗CD28单抗和低剂量IL－2同时非特异性刺激,可获得大量扩增的、具有高度杀瘤活性的肿瘤特异性CTL。     

不同激活方式影响细胞因子诱导杀伤细胞的扩增与活性

目的：研究不同激活方式对CIK细胞(Cytoline-induced killer cells，CIK)体外扩增的影响。方法：使用植物血球凝集素(pHYTOHEMAGGLUTININ，PHA)或抗CD3单抗刺激细胞增殖，从脐血单个核细胞定向诱导CIK细胞，用乳酸脱氢酶(LDH)分析法分析细胞毒活性，用流式细胞分析法对不同培养条件下CIK细胞的纯度进行分析。结果:使用抗CD3 mAb刺激生成的CIK细胞在扩增能力、纯度和细胞毒性方面都优于使用PHA刺激生成的CIK细胞。在细胞因子和有丝分裂原加入3d后，将其洗脱，但仍加入IL-2，有利于提高细胞的扩增能力。另外，使用包被的方法将抗CD3 mAb固定在孔板上比悬浮加入效果好。结论：这一结果对于CIK细胞的大量扩增和临床应用具有指导意义。     

CD3AK细胞过继免疫治疗的实验研究

目的: 分析抗CD3分子的单克隆抗体 (mAb)yCD3的免疫学特性和生物学活性, 观察其激活的免疫活性细胞CD3AK体外及动物体内的抑瘤作用。方法: 用流式细胞术(FCM)测定yCD3的特异性, 以及CD3AK细胞的免疫表型和产生细胞因子的情况。用 3H -TdR法测定yCD3对淋巴细胞转化的作用; 乳酸脱氢酶法 (LDH)测定CD3AK细胞的体外细胞毒活性。建立荷瘤小鼠模型, 观察静脉注射CD3AK细胞后肿瘤生长的情况、转移灶数量和小鼠存活天数。结果: yCD3与T细胞呈特异性反应, 5μgyCD3可竞争抑制 70%的标准抗CD3抗体与细胞表面CD3分子的结合。yCD3刺激外周血淋巴细胞增殖的有效浓度为 8μg/L, 并与IL- 2、抗CD28抗体有协同作用。活化的CD3AK细胞中CD3 、CD8 和CD25 细胞增多; 产生IL- 2和IFN γ的CD3 细胞均有不同程度的增加, 在抗CD28抗体协同刺激下分别增加 3. 29和 2. 47倍。当效靶细胞比为 80∶1时, CD3AK细胞对体外肿瘤细胞杀伤的百分率为 57. 54%。分组观察荷瘤动物, CD3AK细胞治疗组的抑瘤率为 33. 17%, 对小鼠肿瘤肺转移的抑制率为39. 70%, 与LAK细胞联合治疗的疗效更显著。结论: yCD3可活化T细胞, 诱导的CD3AK细胞在体外及动物体内显示抑制肿瘤的作用, 在临床抗肿瘤过继性免疫治疗中具有重要意义。     

胸腺肽α1联合DC疫苗对结肠癌体内外抗肿瘤的效应

目的观察胸腺肽α1(Tα1)对结肠癌细胞裂解物(TuLy)负载DC(LyDC)的表型和功能的影响,以及二者联合应用对裸鼠结肠癌的治疗作用.方法从健康人外周血单个核细胞中常规诱导培养未成熟DC(imDC),并负载TuLy后制备LyDC疫苗.Tα1体外刺激imDC、LyDC,流式细胞术(FCM)检测DC表型变化;ELISA法检测LyDC与自体T细胞共培养时,Tα1对LyDC分泌IL-12以及活化T细胞分泌IFN-γ水平的影响;MTT法检测LyDC经Tα1刺激后所诱导的细胞毒活性的变化.对HT-29结肠癌裸鼠模型行人源化T细胞免疫重建,观察LyDC与Tα1联合应用时的体内抗肿瘤效果.结果Tα1刺激后的imDC、LyDC表型HLA-DR、CD80、CD86、CD83均上调(P＜0.01);Tα1刺激组上清液中细胞因子IL-12和IFN-γ的水平较未刺激组增加(P＜0.05,P＜0.01);LyDC经Tα1刺激后诱导的CTL细胞毒活性较未经Tα1刺激组增强(P＜0.01).结肠癌裸鼠模型体内的人源化细胞免疫重建成功,在接种HT-29细胞58 d后,LyDC Tα1组和LyDC组的抑瘤率分别为60.41%和37.20%,二组之间瘤体积及瘤质量比较具有统计学意义(P＜0.01).结论Tα1可促进DC分化成熟,并能增强LyDC诱导的CD4 Th1细胞反应和CTL的杀伤效应.Tα1与LyDC疫苗联合应用时具有较好的免疫佐剂活性和抗肿瘤作用.     

细胞因子诱导的杀伤细胞的生物学特性研究

目的:探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)的生物学特性。方法:健康人非贴壁单个核细胞用含IFN-γ、IL-1β、IL-2、CD3单抗诱导CIK细胞。以LAK细胞作为对照。流式细胞仪和免疫细胞化学染色检测细胞表型特征;乳酸脱氢酶释放法分析细胞毒活性。结果:诱导2周后,CIK细胞的增殖率达到高峰,CD3⁺细胞占95％以上;第3周细胞生长进入平台期。诱导15d时,CD3⁺CD56⁺NKT亚群占16.5％,比例在2-4周区间内无明显变化。LAK细胞增殖缓慢,显著低于同期CIK细胞增殖率(P＜0.01)。不同效:靶比例CIK细胞对肝癌细胞BeL-7402的特异性溶解率显著高于LAK细胞(P＜0.01)。免疫细胞化学染色结果显示,CIK细胞高度表达HLA-DR和CD54抗原,NKT细胞体积较CD3⁺CD56^-细胞略大,细胞表面有大量伪足。结论:CIK细胞具有高度增殖能力,其体外杀瘤活性明显优于LAK细胞。诱导14-21d,CIK细胞增殖率和CD3⁺CD56⁺阳性细胞率均达到高峰,此时期的CIK细胞适合临床应用。     

含人Fc重组凋亡融合蛋白体内外抗肿瘤活性初步研究

目的初步研究含人抗体Fc片段的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL-Fc）重组融合蛋白的体内外抗肿瘤活性。方法①体外实验：将人急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞、人结肠癌LOVO细胞、人胃癌MKN45细胞、人表皮癌A431细胞、人肝癌HEPG2细胞、人乳腺癌MCF-7细胞和小鼠肝癌H22细胞均随机分为TRAIL-Fc重组融合蛋白组、对照组和空白对照组,分别加入浓度为1000、250、62.5、15.6、3.9、0.97ng/ml的TRAIL-Fc重组融合蛋白和TRAIL对照品以及完全培养液,采用MTT法检测TRAIL-Fc重组融合蛋白对7种肿瘤细胞株的体外生长抑制率。②体内实验：腹腔和腋下接种H22细胞建立小鼠肝癌模型,据治疗药物的不同将小鼠随机分为空白对照组、5-Fu组和TRAIL-Fc重组融合蛋白组。测量记录腹腔接种小鼠的腹围和体重以及腋下接种小鼠的肿瘤体积,15d后取外周血处死各组小鼠,计算抑瘤率并检测血清中AST、ALT含量。结果体外实验结果显示,TRAIL-Fc重组融合蛋白对7种肿瘤细胞株的生长均有不同程度的抑制作用,且抑制作用呈剂量依赖效应;其中对MCF-7细胞的抑制作用最强,其最大生长抑制率为82.5%,其次依次为LOVO（81.9%）、MKN45（52.3%）、H22（51.2%）、Jurkat（50.9%）、HEPG2（35.4%）和A431细胞（20.3%）。与对照品相比,TRAIL-Fc重组融合蛋白对LOVO（IC50为83.5）、MKN45（IC50为243.2）、MCF-7（IC50为84.6）细胞更敏感。体内实验结果显示,空白对照组小鼠腹部明显膨出,后期体重略有下降,肿瘤体积持续显著增加;TRAIL-Fc重组融合蛋白组小鼠腹部轻微膨胀,体重维持较好,肿瘤体积后期略有增加;5-Fu组小鼠腹部无膨胀,体重急剧下降,肿瘤体积明显缩小。TRAIL-Fc重组融合蛋白的抑瘤率为45.79%,AST和ALT检测结果显示其对小鼠肝功能无明显影响。结论 TRAIL-Fc重组融合蛋白具有较强的抑制肿瘤细胞生长的能力,且在体内半衰期明显延长。     

树突状细胞激活的CTLs在裸鼠体内外诱导抗喉癌作用

目的探讨树突状细胞(Dendritic cells,DCs)激活的细胞毒性T细胞(eytotoxic T lymphocytes,CTLs)在裸鼠体内外能否诱导抗喉癌免疫。方法用细胞因子从健康人外周血诱导DCs,MTT法检测DCs激活的CTLs在体外对喉癌细胞的作用。将裸鼠接种CTLs,1w后用喉癌细胞攻击,观察成瘤潜伏期、成瘤率、瘤重量及瘤体积。结果用细胞因子能从健康人外周血诱导大量DCs,该DCs激活的CTLs在体外对喉癌细胞产生了高效而特异的抑制及杀伤作用(P<0.01)。在裸鼠体内,负载抗原的DCs激活的CTLs有免疫保护作用,其成瘤率减低(84%,P<0.01),潜伏期延长(14±2d,P<0.01),瘤重及瘤体积均显著降低(0.47±0.10g,12.64±3.98mm~3,P<0.01)。结论DCs激活的CTLs能在裸鼠体内外诱导高效的抗喉癌作用。     

CD3AK细胞在裸鼠体内抗转移作用的研究

目的研究肿瘤引流淋巴结的淋巴细胞在体外用ＣＤ３单克隆抗体激活（ＣＤ３ＡＫ）后在体内是否仍然具有抗肿瘤作用。方法取卵巢癌病人盆腔引流淋巴结淋巴细胞,在体外用ＣＤ３单抗激活后输注载高转移人卵巢癌裸鼠体内实验性治疗。实验分４组：顺铂组,ＣＤ３ＡＫ组,联合治疗组,对照组。治疗于接种移植瘤后１０天开始,历时８０天。结果观察到ＣＤ３ＡＫ组１只裸鼠移植瘤消退,２／７只出现转移灶,与对照组８／１０只裸鼠出现转移灶比较差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。ＣＤ３ＡＫ组肿瘤体积（０．５７８８±０．２５４９）与对照组（１．５６８５±０．２８３０）比较差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。ＣＤ３ＡＫ组抑瘤率达６３．１％。ＣＤ３ＡＫ组裸鼠的血清孕酮含量（３．３８４３±０．５３１４）明显低于对照组（６．３４８０±０．７６１５）,两组比较差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。ＣＤ３ＡＫ组淋巴结窦性组织细胞增生（５９／６９枚）明显多于对照组（５５／９４枚）,两组比较差异有非常显著性（Ｐ＜０．０１）。结论ＣＤ３ＡＫ细胞在裸鼠体内具有抗肿瘤生长和抗转移作用,同时有提高宿主免疫功能的作用。     

The dual-functional capability of cytokine-induced killer cells and application in tumor immunology

Cytokine-induced killer (CIK) cells represent a heterogeneous cell population, including a large majority of CD3+CD56+ cells, a relatively minor fractions of typical T cells (CD3+CD56−), and natural killer (NK) cells (CD3−CD56+). In order to elucidate the tumor killing mechanism of these three subpopulations of CIK cells, this review summarized the concordances and differences among CD3+CD56+ CIK cells, CD3−CD56+ NK cells and CD3+CD56− T cells to the following aspects: the effects of cell surface molecules, mechanisms of tumor killing, and clinical applications of these cells in immunotherapy. NK cells can be classified into CD56brightCD16− NK cells, which produce cytokines in response to monokine co-stimulation, and the CD56dimCD16+ NK cells, which contribute to lysing susceptible target. Also, the immunity of NK cells is mainly regulated by several immune-receptors, such as ACR, ICR, NCR and KIRs. T cells require TCR and co-stimulatory molecules for initiation of T cell activation. The CD3+CD56+ CIK cells co-express with T-cell marker CD3 and NK cell marker CD56 to appear the most potent cytotoxicity and high impact on adoptive cellular immunotherapy. These CIK subpopulations share some similar tumor killing mechanisms. LFA-1 not only mediates the binding of NK cells to target cells through its ligand ICAM-1 to localize actin accumulation but also acts as a co-stimulatory receptor on NK cells. LFA-1 also functions as co-stimulatory receptor for T cells to transmit intracellular signals from the TCR to LFA-1. Furthermore, cytotoxic effect of CD3+CD56+ CIK cells is blocked by antibodies directly against LFA-1 and its counter receptor, ICAM-1. Clinically, antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) is shown in both NK cells and T cells for tumor killing while dendritic cells are another main regulator for the activation of three subpopulations. In summary, CD3+CD56+ CIK cells have dual-functional capability as T-cell subsets which acquire NK cells function and reserve TCR-mediated specific cytotoxicity. Meanwhile, CIK cells play important roles in tumor immunology. It paves the way to more effective immunotherapies for various tumors.     

Antitumor activity of expanded human tumor-infiltrating gammadelta T lymphocytes

BACKGROUND: The objective of this study was to investigate the antitumor activity of selectively expanded gammadelta T cells in tumor-infiltrating lymphocytes (gammadeltaTILs) or tumor ascites lymphocytes (gammadeltaTALs) from patients with colorectal and ovarian epithelial carcinoma (OEC) in vitro and in vivo. METHODS: gammadeltaTILs/TALs were expanded by the solid-phase antibody method; their cytolytic and proliferative activities in vitro were detected by the MTT method and 3H-TdR incorporation and their effect in vivo was evaluated by the nude mice model. RESULTS: Expanded gammadeltaTILs from colorectal tumors demonstrated marked cytotoxicities to allogeneic human colon adenocarcinoma HR8348 and lymphoma Daudi cells, as well as xenogeneic murine thymoma EL-4 cell lines. Cytokines, including IL-2, IL-4, IL-12, IL-15, TNF-alpha and INF-gamma, could promote the cytotoxicities of gammadeltaTILs to tumor cells, whereas IL-10, GM-CSF and TFG-beta had no effect on such killing activities. Rested gammadeltaTILs could proliferate strongly in response to mitomycin C-treated Daudi and EL-4 tumor cells, but not to HR8348 tumor cells, suggesting that the latter might possess only cytotoxicity-related antigen recognized by gammadeltaTILs. Either alphabetaTILs or gammadeltaTILs from patients with OEC displayed cytotoxicities to allogeneic or autologous OEC cell lines at a similar strength in vitro. Transferring gammadeltaTILs into Daudi cell-bearing BALB/c nude mice with an injection of IL-2 was able to maintain a high survival rate of the mice for 30 days, when compared with mice treated with alphabetaTILs or without any treatment (p < 0.05). Without coinjection of IL-2, after 3 months of Daudi tumor inoculation, a high survival rate was observed in gammadeltaTIL-treated mice. Similarly, adoptive gammadeltaTALs from the ascites of patients with OEC transferred into nude mice displayed a stronger antitumor response to OEC SKOV3 cells than alphabetaTALs in vivo. Tumor volumes in gammadeltaTAL-treated mice were smaller than in alphabetaTAL-treated or non-TAL-treated mice within the period from day 23 to day 50 after tumor inoculation (p < 0.05). Fifty days after SKOV3 tumor inoculation, a decreasing trend of carcinogenic rate was observed in gammadeltaTAL-treated nude mice. CONCLUSION: Taken together, our results suggest that gammadeltaT cells could be a new candidate for adoptive immunotherapy in the future treatment of patients with cancer.     

TLR7 激动剂替代IFN鄄酌诱导CIK 细胞杀伤肿瘤的研究

目的:探讨TLR7 激动剂(Toll like receptor 7 agonist,Tlr7a)替代IFN体外培养细胞因子诱导杀伤性细胞(Cytokine-induced killer cell,CIK)抗肿瘤的免疫效应。方法:分离健康人外周血单个核细胞,在体外诱导CIK。分两组:CIK 组和Tlr7a-CIK 组。对各组分别进行免疫杀伤性研究,检测细胞免疫表型并分析对K562 肿瘤细胞的杀伤活性。结果:CD56+ 细胞在Tlr7a-CIK 组显著增加(P<0.05),Tlr7a-CIK 组杀伤活性较CIK 组显著增强(P<0.05)。结论:Tlr7a 可以替代IFN促进CIK 细胞杀伤肿瘤。     

CDR3δ -grafted γ9δ2T cells mediate effective antitumor reactivity

Adoptive cell-transfer therapy (ACT) has been reported to suppress growing tumors and to overcome tumor escape in animal models. As a candidate ACT effector, γ9δ2T cells can be activated and expanded in vitro and in vivo and display strong antitumor activity against colorectal, lung, prostate, ovarian and renal cell carcinomas. However, it is difficult to obtain a large enough number of γδT cells to meet the need for immunotherapy that can overcome the cancer patients' immune suppressive tumor microenvironment. In previous studies, our lab confirmed that γ9δ2T cells recognized tumor cells via the CDR3δ region of the γδ-T-cell receptor (TCR). We constructed full-length human peripheral blood mononuclear cell (PBMC)-derived γ9 and δ2 chains in which the CDR3 region was replaced by an ovarian epithelial carcinoma (OEC)-derived CDR3. We transferred the CDR3δ-grafted γ9δ2TCR into peripheral blood lymphocytes (PBLs) to develop genetically modified γ9δ2T cells. In vitro studies have shown that these CDR3δ-grafted γ9δ2T cells can produce cytokines after stimulation with tumor cell extracts and exhibit cytotoxicity towards tumor cells, including human OEC and cervical adenocarcinoma. CDR3δ-grafted γ9δ2T cells adoptively transferred into nude mice bearing a human OEC cell line demonstrated significant antitumor effects. These results indicate that CDR3δ-grafted γ9δ2T cells might be candidates for clinical tumor immunotherapy.     

抗原致敏的DC-CIK对前列腺癌细胞DU145杀伤的作用

目的探讨抗原致敏的DC与CIK细胞共同培养后获得的DC-CIK细胞(Ag-DC-CIK)对前列腺癌细胞株DU145的杀伤作用。方法分离健康志愿者外周血单个核细胞,贴壁细胞以GM-CSF、IL-4及TNF-α诱导并加入DU145全细胞冻融抗原培养抗原致敏的DC,非贴壁细胞以IL-2、IL-1α、IFN-γ和mAb诱导培养CIK细胞,并将两种细胞共同培养6d获得Ag-DC-CIK;每隔2天计数细胞;流式细胞术检测细胞免疫表型;以共培养6d的Ag-DC-CIK作为效应细胞,以相同天数未致敏的DC-CIK和CIK细胞为对照组,DU145细胞作为靶细胞,采用MTT法分析各组杀瘤率。结果外周血单核细胞成功诱导DC,Ag-DC-CIK细胞培养6d的扩增倍数为CIK的1.69-2.56倍(P<0.05)。CIK组、DC-CIK组及Ag-DC-CIK组中CD3+CD56+细胞所占百分比分别为(19.15±1.55)%,(28.43±1.51)%和(39.12±2.29)%,依次升高(P<0.01),对前列腺癌DU-145细胞24h杀瘤率分别为(26.39±4.47)%,(46.82±5.68)%,(62.80±2.01)%,依次升高(P<0.01)。结论 Ag-DC-CIK细胞增殖活性强,对前列腺癌DU-145细胞有明显杀伤作用,强于未致敏DC-CIK细胞和CIK细胞。