C57黑鼠骨关节炎模型的关节病理积分与血清及滑膜中基质金属蛋白酶-3白细胞介素-1水平的相关性研究

目的 探讨基质金属蛋白酶(MMP)-3与白细胞介素(IL)-1在骨关节炎(OA)发病中所起的作用及其用于临床判断OA早期病理变化的可能性.方法 采用C57黑鼠OA模型.在自然增龄基础上,又对小鼠进行运动负荷训练.应用形态学方法对模型关节的病理切片观察,进行OA积分评分.研究采用酶联免疫吸附试验(ELISA)的方法.检测血清及滑膜中MMP-3、IL-1的水平.采用相关性分析来检验血清和滑膜中MMP-3、IL-1水平之间的关系,以及与OA积分评分之间的相关性.结果 ①形态学观察:C57黑鼠具有自发OA特征,其OA严重程度与周龄相关,且运动负荷可加快有自发OA倾向的小鼠关节软骨病理改变.②ELISA检测:运动负荷组滑膜中MMP-3[(84±6)ng/ml]、IL-1[(48±3)ng/ml]及血清中IL-1[(38.3±5.0 mg/ml]含量高于自然增龄组[滑膜MMP-3(71±5)ng,ml;IL-1(42±3)ng/ml;血清IL-1(8.1±2.4)ng/ml],差异有统计学意义(P<0.01);血清与滑膜中MMP-3、IL-1水平、OA评分存在线性相关[r均>0.67,P均<0.01].结论 联合检测MMP-3及IL-1在OA血清中的含量,有助于疾病的诊断与病情的判断.特别是MMP-3对于OA的早期诊断具有更为重要的意义.     

氨基葡萄糖对体外培养人软骨和滑膜细胞软骨寡聚基质蛋白分泌影响的比较

目的 比较氨基葡萄糖对体外培养软骨和滑膜细胞软骨寡聚基质蛋白(COMP)分泌的影响.方法 软骨细胞和滑膜细胞采自骨关节炎(OA)患者,采用分阶段酶消化法体外培养人软骨细胞和滑膜细胞,给予实验兔以氨基葡萄糖临床等效剂量灌胃后,抽取含药血清培养细胞.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测药物对体外培养的人软骨细胞和滑膜细胞培养上清液中COMP的浓度.结果 体外培养滑膜细胞分泌的COMP浓度[(41.6±0.4)ng/ml]显著高于软骨细胞[(5.5±3.0)ng/ml](19＜0.05).氨基葡萄糖可显著增加体外培养软骨细胞的COMP分泌[(20.3±3.6)与(5.5±3.0)ng/ml,P＜0.05];而对体外培养滑膜细胞的作用较弱,可轻度减少COMP分泌[(36.6±1.3)与(41.6±0.4)ng/ml].结论 氨基葡萄糖含药血清可以促进体外培养软骨细胞分泌COMP,而对体外培养滑膜细胞无明显作用.     

原发性高血压不同危险分层患者RDW-CV、MMP-2、MMP-9、TIMP-1的观察研究

目的:观察原发性高血压(EH)不同危险分层患者红细胞分布宽度变异系数(RDW-CV)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、基质金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)-1水平变化情况。方法:选择2015年10月~2016年9月期间我科收治的105例EH患者为观察对象(高血压组),根据高血压危险分层分为低危组(34例)、中危组(38例)和高危及极高危组(33例)。选择同期年龄、性别匹配的105例体检者为健康对照组。测定比较各组RDW-CV、血清MMP-2、MMP-9和TIMP-1水平,多元Logistic回归分析上述指标与高血压的关系。结果:与健康对照组比较,高血压组RDW-CV[(12.57±1.46)比(14.54±1.82)]、血清MMP-2[(121.71±18.86)ng/ml比(155.43±40.81)ng/ml]、MMP-9[(109.72±21.80)ng/ml比(191.23±53.05)ng/ml]和TIMP-1水平[(59.42±9.41)ng/ml比(83.64±15.82)ng/ml]均显著升高,P0.05或0.01。与低危组比较,中危组、高危及极高危组的RDW-CV[(13.35±1.54)比(14.43±1.17)比(15.90±1.81)]、血清MMP-2[(131.21±35.24)ng/ml比(152.16±33.15)ng/ml比(184.16±37.14)ng/ml]、MMP-9[(163.95±38.61)ng/ml比(198.70±43.52)ng/ml比(232.83±54.12)ng/ml]和TIMP-1水平[(73.15±13.12)ng/ml比(83.78±10.22)ng/ml比(94.27±16.77)ng/ml]均显著升高,且高危及极高危组的显著高于中危组,P0.05或0.01。多元Logistic回归分析显示RDW-CV、MMP-2、MMP-9和TIMP-1是高血压的独立危险因素(OR=2.248~2.725,P0.05或0.01)。结论:红细胞宽度变异系数及细胞外基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9、基质金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)-1是高血压的独立危险因素,应给予积极的监测与干预。     

透明质酸对白细胞介素-1 β诱导软骨细胞基质金属蛋白酶及其抑制因子mRNA表达的影响

目的 研究透明质酸对重组大鼠白细胞介素-1β(rrIL-β)诱导体外软骨细胞基质金属蛋酶(MMP)及其抑制因子(TIMP) mRNA表达的影响,并探讨其作用机制.方法 体外分离、培养大鼠软骨细胞成功后,加入不同浓度的透明质酸(10、20、40 μg/m1),1 h后,以10 ng/ml IL-1β刺激,培养24 h后,以反转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测MMP-3,9,13及TIMP-1 mRNA的表达,通过Griess反应测定上清液中一氧化氮(NO)浓度.结果 透明质酸可明显下调IL-1β诱导下软骨细胞MMP-3,9,13 mRNA的表达,但对TIMP-1 mRNA的表达无明显影响.不同浓度透明质酸对IL-1β诱导的软骨细胞高表达NO的抑制作用呈剂量依赖性.结论 透明质酸能抑制IL-1β诱导的软骨细胞MMP-3,9,13 mRNA的表达,上调TIMP-1/MMPs的比值,其保护作用可能与其抑制软骨细胞NO产量有关.     

急性冠状动脉综合征患者MMP-9、MMP-2的临床意义

目的观察不同冠心病患者的血清的基质金属蛋白酶(MMPs)及其演变,探讨MMPs与急性冠状动脉综合征的关系。方法用酶联免疫吸附法(ELISA)检测了32例急性心肌梗死(AMI),30例不稳定型心绞痛,20例稳定型心绞痛和16例健康对照者血清MMP-9,MMP-2和组织型基质金属蛋白酶抑制物-2(TIMP-2)水平,并比较上述指标与不同类型冠心病的关系及其演变。结果AMI患者血清MMP-9水平高于不稳定型心绞痛组、稳定型心绞痛组和对照组,分别为(191.91±150.10)ng/ml,(110.84±96.29)ng/ml,(69.30±55.85)ng/ml和(80.13±34.94)ng/ml。MMP-2、TIMP-2四组间比较差异无显著性。MMP-9在AMI患者中发病早期升高后持续到3~5d。MMPs与心肌损伤标志物无相关关系。结论血清MMP-9是预示斑块破裂中的主要MMPs之一,但它不能预测心肌坏死的程度。     

基质金属蛋白酶和氧化应激在大鼠动脉粥样硬化中的表达

目的探讨基质金属蛋白酶和氧化应激在动脉粥样硬化中的表达。方法利用高脂饮食诱发的大鼠动脉粥样硬化模型(AS组,n=6),与正常饮食大鼠模型(N组,n=6)作对照,用比色法检测外周血清中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平,利用Zymography法检测外周血中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达情况,利用免疫组织化学法观察MMP-2及MMP-9在主动脉弓表达情况。结果动脉粥样硬化模型大鼠外周血中MDA、MMP-2、MMP-9表达均高于正常饮食组大鼠[(863.12±42.16)CNN/mm2和(484.92±7.90)CNN/mm2,(367.80±44.68)CNN/mm2和(259.00±42.29)CNN/mm2,(12.88±2.47)mmol/ml和(4.69±0.69)mmol/ml],但SOD则低于正常饮食组大鼠[(71.34±7.06)μN/ml和(168.90±6.85)μN/ml],免疫组织化学法显示MMP-2、MMP-9在主动脉弓内皮细胞及内皮细胞间质中表达,而且AS组表达强于N组。结论动脉粥样硬化形成可能与基质金属蛋白酶异常表达及氧化应激有关。     

诱导型一氧化氮合酶参与白细胞介素-1β对人心脏成纤维细胞基质金属蛋白酶-2作用的实验研究

目的 观察白细胞介素-1β(IL-1β)对人心脏成纤维细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的作用及相关机制.方法 将3～6代人心脏成纤维细胞接种于6孔培养板内接受各种干预措施.待实验细胞接受刺激12 h后,用RT-PCR法观察MMP-2的mRNA表达量.细胞接受各种刺激24 h后,收集细胞总蛋白和培养上清,通过凝胶酶谱法进行上清MMP-2的活性检测,采用Western blot法测定细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白的表达,采用Griess法衡量细胞上清中一氧化氮(NO)水平.结果 IL-1B作用人心脏成纤维细胞24 h后,促进了细胞MMP-2的活性增加,其中4 ng/ml的IL-1β刺激作用达到高峰,与对照组相比活性增加了(170.24±13.12)%(P＜0.01),并且该浓度IL-1β能时间依赖性地促进心脏成纤维细胞MMP-2的活性增加.IL-1β作用心脏成纤维细胞12 h后,与正常对照组相比4 ng/ml和10 ng/ml IL-β组MMP-2 mRNA表达明显增加(P＜0.01).IL-1β(4 ng/ml)可以明显促进细胞NO水平升高(P＜0.01),而NOS抑制剂NG-甲基-L-精氨酸(10-3 mol/L)显著抑制了IL-1β诱导的MMP-2 mRNA表达(P＜0.01)、MMP-2活性(P＜0.01)以及NO水平的升高(P＜0.01).通过Western blot发现在生理水平的心脏成纤维细胞上未能检测到iNOS蛋白的表达,而不同浓度的IL-1β明显促进了细胞iNOS的蛋白水平的升高.结论 IL-1β能促进人心脏成纤维细胞MMP-2的mRNA表达和活性,并提示其作用与细胞iNOS-NO水平有关.     

内脂素经核因子κB途径诱导人单核细胞基质金属蛋白酶-2和9表达的实验研究

目的 探讨内脂素对核因子κB(NF-κB)通路的激活及其在调节人单核细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的表达中的作用,以期进一步了解内脂素与动脉粥样硬化的关系.方法 以健康人外周血单核细胞为研究对象.抽取健康志愿者静脉血,分离、纯化单核细胞后随机分为空白对照组;内脂素组(100、200、400 ng/ml,24 h);Bay11-7082抑制剂组(Bay11-7082 40μmol/ml预孵育30 min,内脂素400 ng/ml刺激24 h).荧光定量PCR检测各组细胞MMP-2和MMP-9 mRNA的表达;Western blot检测MMP-2和MMP-9蛋白的表达;明胶酶谱法检测细胞培养基质中MMP-2和MMP-9的酶活性.内脂素刺激细胞后的核转位分别用Western blot和ELISA进行检测.结果 人外周血单核细胞经不同浓度的内脂素干预培养后24 h单核细胞MMP-2和MMP-9 mRNA及蛋白的表达均明显高于空白对照组(P均<0.05),且呈浓度依赖性.内脂素还上调细胞分泌到细胞培养基中的MMP-2和MMP-9酶活性,内脂素100 ng/ml组MMP-9、MMP-2的酶活性分别为空白对照组的(1.139 ±0.055)和(1.102±0.011)倍(P均<0.05).加入NF-κB抑制剂Bay11-7082后MMP-2、MMP-9的mRNA、蛋白的表达及酶活性均明显低,与内脂素400ng/ml组比较差异均有统计学意义(P均<0.001).内脂素浓度越高,核蛋白NF-κBp65表达越高,内脂素100 ng/ml组相对灰度值为空白对照组的(1.334±0.148)倍(P均<0.05);内脂素浓度越高,NF-κBp65亚单位核内转移越多,内脂素100ng/ml组为0.763±0.056,内脂素400 ng/ml组为1.290±0.065,均大于对照组的0.467±0.046(P均<0.05).结论 内脂素可通过激活NF-κB途径上调人单核细胞中MMP-2和MMP-9表达及活性.这可能是内脂素致动脉粥样硬化及与急性冠状动脉综合征密切相关的机制之一.     

骨关节炎兔血清中软骨寡聚基质蛋白和基质金属蛋白酶-3水平

目的 探讨血清软骨寡聚基质蛋白(COMP)与基质金属蛋白酶(MMP)-3检测应用于临床评估骨关节炎(OA)软骨病理改变的可能性.方法 伸直位石膏管型制动16只兔右后膝关节制作OA模型.以造模时间不同分为造模2周、造模6周,左后膝关节未造模故为对照组.X线影像学与病理观察模型关节的变化;评估关节软骨降解程度(OA积分);ELISA检测兔血清COMP、MMP-3水平;分析血清COMP、MMP-3水平与OA积分间的相关性.结果 (1)造模2周影像学变化较造模前不明显;造模6周兔胫骨平台边缘不光滑,关节间隙变窄,表面有毛刺样增生,胫骨平台及股骨内髁外侧可见唇样增生.(2)OA关节病变的形态学观察:造模2周兔关节软骨表面粗糙,表层裂隙;软骨细胞弥漫增多,排列紊乱;OA积分为(4.000±2.204)分.造模6周兔关节软骨表层可见较多裂隙延伸向下深达辐射层;裂隙周围可见脱水固缩坏死的软骨细胞且排列紊乱,部分成簇增生,各层结构不易分辨,有血管翳通过;OA积分为(10.620±1.408)分,与造模2周比,P=0.000.(3)造模2周兔血清COMP[(3.64±0.18)μg/L]、MMP-3[(1.99±0.81)μg/L]水平高于造模前[COMP(3.35±0.20)μg/L,MMP-3(1.61±0.71)μg/L];造模6周兔血清COMP[(3.96±0.44)μg/L]、MMP-3[(3.44±0.91)μg/L]水平高于造模前和造模2周,差异有统计学意义(P值均＜0.05).血清COMP、MMP-3水平与OA积分呈线性相关关系(r值均＞0.710,P值均小于0.05).结论 OA血清中COMP和MMP-3水平对评估OA软骨降解程度具有重要意义.

Abstract：

Objectiye To study the levels of cartilage oligomeric matrixprotein (COMP) and matrix metalloproteinase-3 (MMP-3) in the serum fluid of osteoarthritic rabbit models and their relationships with the severity of pathological changes, so as to investigate their correlation with osteoarthritis(OA). Methods The osteoarthritic animal models were get from immobilizing the right knees of 18 rabbits in full extension using plaster cast. Knee joint pathological changes of 2,6 weeks were examined for pathological severity of OA; ELISA sandwich method was used to measure the levels of COMP and MMP-3 in serum before and after modeling( at 2, 6 weeks respectively); X ray of model keens was also obtained in different period.Correlation analysis was performed to demonstrate the relationship between the levels of COMP, MMP-3 in the serum and the pathological severity of OA. Results ( 1 ) Morphological observations: immobilizing the right knees of rabbits in full extension using plaster cast was a reliable methed for osteoarthritic animal models and the typical histopathologic character was seen; the severity of osteoarthritisgradually increased with time extended. (2) The levels of COMP[(3.64 ±0. 18)μg/L], MMP-3 [(1.99 ±0. 81 ) μg/L]in the serum of 2 weeks osteoarthritic animal models were higher than those before immobilizing with plaster cast [COMP(3.35 ±0. 20) μg/L,MMP-3( 1.61 ±0. 71 ) μg/L]. The levels of COMP[(3.96 ±0. 44) μg/L],MMP-3[(3.44 ±0. 91) μg/L] of 6 weeks were much higher,with a significant difference(P ＜0.05). The levels of COMP, MMP-3 in serum had a linear correlation with the pathological severity of OA (r ＞0. 710,and P ＜ 0. 05 ). Conclusion The levels of COMP and MMP-3 in serum can help to predict and evaluate the progression of OA.     

白藜芦醇对兔动脉粥样硬化血脂及反映斑块稳定性的MMP-9/TIMP-1比值的影响

目的:观察白藜芦醇对动脉粥样硬化兔血脂代谢、主动脉过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、组织基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)表达的影响。方法:将70只雄性新西兰白兔随机分为5组:A组喂普通饲料,B组喂高脂饲料,C、D、E组喂高脂饲料的同时分别给予白藜芦醇4mg/kg.d、8mg/kg.d、16mg/kg.d进行干预。于12周末取血测定血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定血清MMP-9、TIMP-1水平。取完整胸主动脉,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察主动脉PPARγ、MMP-9、TIMP-1mRNA的表达。结果:病理对照组(B组)TG[(2.46±0.32)mmol/L∶(0.42±0.23)mmol/L]、TC[(30.19±3.98)mmol/L∶(1.07±0.22)mmol/L]、HDL-C[(1.74±0.50)mmol/L∶(0.63±0.30)mmol/L]、LDL-C[(16.82±1.95)mmol/L∶(0.53±0.15)mmol/L]、PPARγ[(0.78±0.07)∶(0.59±0.05)]、TIMP-1[(91.80±9.23)ng/ml∶(68.49±9.04)ng/ml]、MMP-9[(341.96±9.94)ng/ml∶(164.04±7.08)ng/ml]水平均明显高于正常对照组(A组)(P均0.01);随着白藜芦醇剂量的增大,血清TG、TC、LDL-C水平,MMP-9及其mRNA表达,和MMP-9/TIMP-1比值显著降低,HDL-C、TIMP-1及其mRNA表达显著升高,在中、高剂量组(D、E组)更为明显(P0.05～0.01),呈一定的剂量依赖性。结论:白藜芦醇可改善兔动脉粥样硬化血脂代谢紊乱,通过降低MMP-9/TIMP-1比值稳定粥样硬化斑块。     

瘦素对支气管哮喘大鼠气道炎症及Th1/Th2细胞因子表达作用的影响

目的 探讨瘦素对支气管哮喘(简称哮喘)大鼠气道炎症和Th1/Th2细胞因子表达的影响.方法 应用随机数字表法将40只雌性SD大鼠随机分为正常体重对照组(A组)、正常体重哮喘组(B组)、正常体重瘦素干预组(C组)、肥胖对照组(D组)和肥胖哮喘组(E组),建立大鼠肥胖和哮喘模型.测定气道反应性,计数BALF中白细胞总数、嗜酸粒细胞及中性粒细胞数目,ELISA法测定血清和BALF中白细胞介素(IL)-4、γ-干扰素(IFN-γ)及瘦素浓度,Western blot及逆转录PCR法测定肺组织瘦素蛋白及mRNA的表达.结果 C、E组大鼠以10、100、300 ug/kg浓度乙酰胆碱尾静脉注射后气道阻力[分别为(0.89±0.11)、(1.02±0.10)、(1.13±0.11)cm H2O·ml-1·s-1(1 cm H2O=0.098 kPa)和(0.95±0.10)、(1.12±0.10)、(1.14±0.10)cm H2O·ml-1·s-1],明显高于B组[分别为(0.64±0.13)、(0.74±0.07)、(0.77±0.09)cm H2O·ml-1·s-1],均P<0.05.C、E组BALF中白细胞总数[分别为(91±9)×104/ml和(108±21)×104/ml],中性粒细胞计数[分别为(12.4±4.0)×104/ml和(14.2±5.9)×104/ml]均高于B组[分别为(79±7)×104/ml和(2.4±1.1)×104/ml],均P<0.05.C、E组血清及BALF中IFN-γ浓度[分别为(42.3±3.5)、(45.1±4.8)、(19.2±1.8)和(20.3±1.5)ng/L]明显高于B组[分别为(16.5±1.4)和(9.3±1.0)ng/L],均P<0.05.C、E组肺组织瘦素蛋白及mRNA表达[分别为(0.40±0.07)、(0.44±0.05)ng/L和(0.34±0.06)、(0.38±0.04)ng/L]均明显高于B组[(0.31±0.03)ng/L和(0.21±0.04)ng/L],均P<0.05.结论 瘦素可促进哮喘气道炎症,并以中性粒细胞浸润和Th1型炎症反应增强为特点.     

The in situ up-regulation of chondrocyte interleukin-1-converting enzyme and interleukin-18 levels in experimental osteoarthritis is mediated by nitric oxide

OBJECTIVE: To investigate in situ the relationship between 2 key mediators implicated in osteoarthritic (OA) cartilage: nitric oxide (NO) and interleukin-1-converting enzyme (ICE). Interleukin-18 (IL-18) was also studied and served as reference for the effects of ICE. METHODS: An OA model was created in dogs by sectioning (stab wound) the anterior cruciate ligament of the right stifle joint. Three experimental groups were studied: unoperated untreated dogs, operated untreated dogs (OA), and OA dogs treated with oral N-iminoethyl-L-lysine (L-NIL), a specific inhibitor of inducible nitric oxide synthase (iNOS) (10 mg/kg twice a day starting immediately after surgery). At 12 weeks after surgery, cartilage from the femoral condyles and tibial plateaus were processed for immunohistochemistry for ICE, IL-18, and protease inhibitor 9 (PI-9), a natural inhibitor of ICE, followed by morphometric analysis. Cartilage specimens from the femoral condyles of untreated OA dogs were dissected and incubated with specific inhibitors of different signaling pathways likely to be involved in the OA process: SB 202190 (10 microM; a p38 mitogen-activated protein kinase [MAPK] inhibitor), PD 98059 (100 microM; a MAPK kinase 1/2 [MEK-1/2] inhibitor), NS-398 (10 ng/ml; a specific cyclooxygenase 2 [COX-2] inhibitor), and L-NIL (50 microM). RESULTS: Both ICE and IL-18 were present in situ in the canine cartilage, with a significant increase in the level of these 2 proteins in OA cartilage. In contrast, the level of PI-9 was lower in OA than in normal cartilage (difference not statistically significant). Compared with untreated OA cartilage, oral treatment with L-NIL significantly decreased ICE and IL-18 levels in cartilage from the femoral condyles and tibial plateaus, to values similar to those in normal dogs. L-NIL also increased the PI-9 level in normal dogs compared with OA dogs, reaching statistical significance for femoral condyle cartilage. Interestingly, in vitro experiments demonstrated significant inhibition of ICE levels by p38, MEK-1/2, and COX-2 inhibitors, but not by the iNOS inhibitor. CONCLUSION: This study demonstrated that in situ in OA cartilage, the stimulation of chondrocytes by NO is at least partly responsible for the up-regulation of ICE and IL-18 synthesis while decreasing the level of the ICE inhibitor PI-9. The ICE level is controlled by the activation of at least 2 MAPK pathways, p38 and MEK-1/2. Interestingly, it appears that ICE synthesis is not regulated by the endogenous production of NO. These data highlight the role played by iNOS in regulating the synthesis of major catabolic factors involved in OA cartilage degradation.     

阿是止泻胶囊对甲状腺功能亢进性腹泻大鼠血浆胃肠激素的影响

目的 探讨阿是止泻胶囊对甲状腺功能亢进(简称甲亢)性腹泻大鼠血浆胃肠激素的影响.方法 8周龄雄性SD大鼠120只,按体质量随机分为对照组(10只)和甲亢性腹泻组(110只).对照组按每只大鼠1 ml/d生理盐水灌胃;甲亢性腹泻组给予生理盐水配制成40g/L的甲状腺片混悬液,每只大鼠1 mL/d,灌胃给药.3周后尾静脉取血,测血清FT3、FT4,根据大鼠血清FT3、FT4水平、体质量和湿粪的数量筛选出42只甲亢性腹泻大鼠.取40只甲亢性腹泻大鼠按体质量随机分为5组,每组各8只.空白组:按1 ml/d生理盐水给药;阳性对照组:黄连素片按1.94 g·kg-1·d-1'给药;低、中、高剂量组:阿是止泻胶囊分别按0.63、1.26、2.52 g.kg-1·d-1给药.各组连续灌胃7 d,在给药前和给药后,静脉采血,分离血浆,采用放射免疫分析方法,观察阿是止泻胶囊对甲亢性腹泻大鼠血浆胃动索(MTL)、胃泌素(GAS)、血管活性肠肽(VIP)、生长抑素(SS)的影响.结果 ①甲亢性腹泻大鼠体质量[(344.0±12.9)g]降低,FT3[(4.58±0.70)mol/L]、FT4[(23.44±4.40)mol/L]升高,湿粪质量[(17.4±3.2)g]增加,与对照组[(386.0-1-1.8)g、(2.08±0.10)mol/L、(10.18±2.00)mol/L、(9.1 4-0.6)g]比较,差异有统计学意义(t值分别为6.85、9.80、7.66、7.18,P<0.01).②治疗后MTL高剂量组[(80.54±3.80)ng/L]和阳性对照组[(90.63±9.99)ng/l]较治疗前[(204.27±17.69)、(187.79±13_32)ng/L]降低,二者比较差异有统计学意义(t值分别为8.60、4.57,P<0.01).③除空白组外,治疗后GAS阳性对照组[(56.06±6.36)ng/L]、低剂量组[(90.88±4.18)ng/L]、中剂量组[(75.64±7.09)ng/L]、高剂量组[(44.32±3.72)ng/L]均较治疗前[(192.75± 11.80)、(193.09±3.81)、(190.60±9.31)、(196.33±18.13)ng/L降低,二者比较差异有统计学意义(t值分别为15.27、7.62、13.43、13.22,P<0.01);治疗后大鼠MTL、GAS、VIP各组间比较,差异均有统计学意义(F值分别为166.68、1503.53、216.68,P<0.01).结论 阿是止泻胶囊能显著降低血浆中MTL、GAS水平、并提高VIP水平.     

极低频率电磁场下Fe3O4纳米磁流体对小鼠种植性肝癌杀伤作用研究

目的 探讨在极低频率电磁场(ELF-EMF)下Fe₃O₄纳米磁流体对小鼠种植性肝癌的杀伤作用。方法 建立Bel-7402肝癌细胞裸鼠种植肿瘤模型,然后将荷瘤裸鼠随机分成对照组、磁场组和纳米磁流体组,每组20只。在对照组不行任何处理,在磁场组仅接受磁场作用下处理,在纳米磁流体组,给予裸鼠瘤内直接注射PEG-PEI/Fe₃O₄纳米磁流体0.1 ml,并接受0.7 mT的磁场下干预1 h,2次/d,作用15 d。采用放射免疫法检测血清血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、白细胞介素 2受体(sIL-2R)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)水平。结果 在处理后7 d和15 d,纳米磁流体处理组裸鼠肿瘤体积分别为(113.5±12.2)mm³和(97.6±9.7)mm³],显著小于对照组 [(204.6±13.5)mm³和(452.8±16.5)mm³或磁场组(146.7±13.4)mm³和(118.8±13.6)mm³,P<0.05];对照组、磁场组和纳米磁流体处理组裸鼠肿瘤质量分别为[(2.0±0.2) g、(1.4±0.1)g和(0.8±0.1) g ,P＜0.05],差异显著,磁场组和纳米磁流体组抑瘤率分别为26.2%和56.9%(P<0.05);纳米磁流体组血清VEGF、HIF-1α、sIL-2R和MMP-2水平分别为[(127.4±14.2)pg/ml、(32.4±5.2)ng/L、(227.5±23.7)ng/L和(132.4±15.7)pg/ml,显著低于对照组[分别为(294.6±18.6)pg/ml、(107.5±12.7)ng/L、(823.6±38.7)ng/L和(453.6±25.4)pg/ml,P<0.05]或者磁场组[分别为(215.7±14.3)pg/ml、(72.4±7.5)ng/L、(426.3±24.4)ng/L和(214.3.±18.4)pg/ml,P<0.05];对照组肿瘤细胞生长旺盛,细胞密度极大,排列紊乱,磁场组细胞生长受限,细胞排列稀疏,纳米磁流体干预组肿瘤组织呈大片坏死,肿瘤细胞显著减少。结论 在ELF-EMF下Fe₃O₄纳米磁流体对裸鼠种植性肝癌细胞血管生成有着显著的抑制作用,可显著抑制肿瘤生长,促进肝癌细胞凋亡。     

黄花倒水莲皂苷C抑制非对称二甲基精氨酸诱导的细胞间黏附因子表达及其机制

目的 研究黄化倒水莲皂苷C对非埘称_二甲基精氨酸(ADMA)诱导的细胞间黏附因子(sICAM-1)表达的抑制作用及其机制. 方法应用酶联免疫吸附法测定内皮细胞培养液中的slCAM-1;应用凝胶迁移率实验法检测细胞内核因子кB(NF-кB)活性;采用荧光法检测细胞内活性氧水平. 结果 ADMA(30 μmol/L)孵育内皮细胞(12、24、48 h)呈时间依赖性地增加细胞上清液中sICAM-1[(138.02±16.40)、(194.52±11.14)、(274.28±13.11)ng/L]和活性氧含量[(75.64±5.22)、(100.18±11.15)、(107.23±13.45)U];ADMA(3～30μmol/L)孵育内皮细胞24 h呈浓度依赖性地增加细胞上清液中sICAM-1含量[(136.14±10.77)、(189.21±21.25)、(221.24μ23.45)ng/L];预先给予L-精氨酸0.5 mmol/L和吡咯烷二硫基甲酸盐10μmol/L可显著抑制上述效心;皂苷C(1、3、10 μmol/L)可呈浓度依赖性地抑制ADMA诱导的细胞内活性氧含量增加[(85.33±8.68)、(70.69±7.65)、(59.12±4.15)U]、NF-κB激活及sICAM-1[(336.58±23.32)、(203.27±25.18)、(174.13±14.53)ng/L]表达,预先给予L-精氨酸(0.5 mmol/L)和PDTC(10μmol/L)可抑制ADMA诱导的细胞内活性氧含量增加[(58.44±9.52)U和(54.12±4.47)U]、NF-κB激活及sICAM-1表达((132.56±12.96)ng/L和(136.17±11.18)ng/L]. 结论黄花倒水莲皂苷C可抑制ADMA所诱导的slCAM-1水平升高,该作用与抑制内皮细胞内活性氧/NF-κB途径有关.     

恩替卡韦联合苦参素治疗慢性乙型肝炎患者疗效及其对外周血辅助性T淋巴细胞的影响*

目的 探讨恩替卡韦联合苦参素治疗慢性乙型肝炎(CHB)患者疗效及其对外周血淋巴细胞百分比的影响。方法 随机将180例CHB 患者分为对照组90例和观察组90例。两组患者均接受恩替卡韦治疗,观察组患者在此基础上加用苦参素口服,观察6个月。采用ELISA 法检测血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和转化生长因子-β1(TGF-β1),采用RIA 法测定血清血管紧张素II(Ang-II)水平,使用流式细胞仪检测外周血辅助性T细胞及CD80 和CD86 阳性细胞百分比。结果 在治疗6个月末,观察组血清ALT 复常、HBeAg 和HBV DNA 阴转率分别为34.4%、91.1% 和86.7%,显著高于对照组的18.9%、78.9%和63.3%(P<0.05);血清MMP-9、TGF-β1 和Ang-II 水平分别为(30.5±3.6)ng/ml 、(19.5±2.2) ng/ml 和(33.7±4.1)ng/dL,与对照组【(22.4±2.7)ng/ml 、(22.6±2.8) ng/ml 和(46.3±4.9)ng/dL,P<0.05】比,差异显著;Th2和Th1细胞及CD80和CD86阳性细胞百分比分别为(6.6±1.5)%、(9.8±2.3)%、(2.5±0.7)%和(1.6±0.5)%,与对照组【(9.0±2.7)%、(7.9±1.4)%、(1.9±0.3)%和(1.1±0.2)%,P<0.05】比,差异显著。结论 应用恩替卡韦联合苦参素治疗CHB患者可能通过改善机体的免疫功能而提高近期疗效。     

脓毒症大鼠血清假性血友病因子、血栓调节蛋白、血小板活化因子、抗凝血酶-Ⅲ变化及辛伐他汀的干预作用

目的探讨脓毒症大鼠血清假性血友病因子(vWF)、血栓调节蛋白(TM)、血小板活化因子(PAF)、抗凝血酶-Ⅲ(AT-Ⅲ)的变化及辛伐他汀对腹主动脉内皮的保护作用。方法雄性SD大鼠54只,分为3组,(1)健康对照组:6只,大鼠腹腔注射生理盐水5 ml,3 h后再次注射生理盐水5 ml。(2)脓毒症模型组:24只,大鼠腹腔注射生理盐水5 ml,3 h后腹腔注射脂多糖2.5 mg制作脓毒症模型。(3)辛伐他汀干预组:24只,大鼠腹腔注射辛伐他汀5 ml,3 h后腹腔注射脂多糖2.5 mg制作脓毒症模型。3组大鼠于1 h、3 h、6 h、12 h时取血测vWF、TM、PAF、AT-Ⅲ。采用扫描电镜和透射电镜分别观察大鼠腹主动脉内皮细胞的形态及凋亡情况。结果与健康对照组比,脓毒症模型组1 h、3 h、6 h、12 h大鼠血清vWF[1 h:(68.3±4.8)ng/ml;3 h:(59.2±5.1)ng/ml;6 h:(74.2±20.1)ng/ml;12 h:(53.5±4.0)ng/ml]、TM[1 h:(1.4±0.3)ng/ml;3 h:(1.6±0.4)ng/ml;6 h:(2.8±0.9)ng/ml;12 h:(1.4±0.5)ng/ml]、PAF[(29.1±6.5)pg/ml;3 h:(28.6±1.5)pg/ml;6 h:(28.7±2.7)pg/ml;12 h:(18.2±4.1)pg/ml]、AT-Ⅲ[(262.2±38.1)mg/L;3 h:(233.0±70.4)μg/ml;6 h:(218.7±54.7)μg/ml;12 h:(162.2±37.2)μg/ml]水平明显升高(P<0.05)。与同时间点的脓毒症模型组比,辛伐他汀干预组1 h、3 h、6 h、12 h的PAF水平[1 h:(15.6±2.5)pg/ml;3 h:(10.4±5.3)pg/ml;6 h:(9.3±1.4)pg/ml;12 h:(11.0±2.7)pg/ml],6 h的TM水平[(1.6±0.9)ng/ml],1 h、6 h、12 h的AT-III水平[1 h:(190.3±29.2)μg/ml;6 h:(104.4±33.6)μg/ml;12 h:(73.6±39.0)μg/ml]均明显降低(P<0.05)。电镜下可见脓毒症模型组大鼠腹主动脉内皮细胞损伤,细胞内空泡化,细胞膜模糊甚至破裂、微绒毛化,核染色质边聚。辛伐他汀干预组大鼠腹主动脉内皮细胞损伤明显减轻,细胞膜清晰,细胞器空泡化减少,少量细胞器。结论脓毒症时毒素及过度激活的炎性因子损伤血管内皮,大量vWF、TM、PAF、AT-Ⅲ释放入血进而引起早期的高凝状态;辛伐他汀对脓毒症大鼠血管内皮具有保护作用,明显降低脓毒症时血vWF、TM、PAF、AT-Ⅲ水平,可改善脓毒症的血管内皮损伤及凝血功能紊乱。     

抵抗素在大鼠急性胰腺炎中的表达

目的 检测抵抗素在大鼠急性胰腺炎(AP)中的表达,探讨其与胰腺病理改变的关系.方法 40只SD大鼠按数字表法随机分为正常组、假手术组、急性水肿性胰腺炎(AEP)组和急性坏死性胰腺炎(ANP)组.AEP组腹腔注射雨蛙素,ANP组腹腔注射精氨酸,正常组未做任何处理,假手术组腹腔注射等容量生理盐水.测定大鼠血清淀粉酶、抵抗素、TNF-α、IL-1β、C反应蛋白(CRP)水平,记录胰腺/体重比值,观察胰腺组织病理变化,免疫组化法检测胰腺组织抵抗素蛋白表达,实时定量PCR法检测胰腺组织抵抗素mRNA表达.结果 抵抗素主要定位于胰腺腺泡细胞的胞质内.AEP组血清淀粉酶水平、胰腺/体重(g/kg)比值、胰腺组织病理评分、抵抗素mRNA表达量及血清抵抗素、IL.1β、TNF-α 和CRP水平分别为(4377 ±343)U/L、(8.67 ±1.43)、(5.39 ±0.26)、(2.04 ±0.19)、(10.21 ±1.34)ng/ml、(184.18 ±45.24)pg/ml、(194.24 ±44.81)pg/ml、(3586 ±63)ng/ml;ANP组分别为(6750 ±322)U/L、(9.33 ±1.76)、(7.81 ±0.28)、(3.29 ±0.30)、(15.14 ±0.84)ng/ml、(349.31 ±94.54)pg/ml、(315.59 ±37.04)pg/ml、(4345 ±244)ng/ml.两组均显著高于假手术组的(1442 ±183)U/L、(4.34±0.42)、(1.10 ±0.21)、(0.88 ±0.08)、(5.13 ±0.74)ng/ml、(108.74 ±31.03)pg/ml、(106.44 ±21.31)pg/ml和(2895 ±165)ng/ml(P<0.01),且该两组间差异也有统计学意义(P<0.01或P<0.05).血清抵抗素水平与CRP、TNF-±、IL-1β水平及胰腺组织病理评分均呈正相关,相关系数r分别为0.711、0.871、0.794和0.812(P<0.01).结论 抵抗素与AP的发生、发展有关,其检测结果可能是评估AP严重程度的有价值的指标之一.     

Effects of glucosamine hydrochloride on the production of prostaglandin E2, nitric oxide and metalloproteases by chondrocytes and synoviocytes in osteoarthritis

OBJECTIVES: To determine the response of glucosamine hydrochloride on chondrocytes and synoviocytes in terms of prostaglandin E2 (PGE2), nitric oxide (NO) and matrix metalloproteases (MMPs). METHODS: Chondrocytes and synoviocytes were prepared from joint specimens of patients who underwent total knee arthroplasty for osteoarthritis (OA). Chondrocytes from patients with femoral neck fracture were served as a normal control. Culture cells were stimulated by 5 ng/ml of IL-1beta and treated with various concentration of glucosamine hydrochloride (from 1 microg/ml to 500 microg/ml). PGE2, NO, MMP-1, MMP-3, and MMP-13 levels were evaluated in the culture supernatant. Further, the expression of COX-2 mRNA was studied by semiquantitative PCR. RESULTS: With IL-1beta stimulation, the levels of these mediators increased dramatically, except for NO from synoviocytes. After stimulation, levels of these mediators in OA chondrocytes were higher than synoviocytes and normal chondrocytes, and the level of MMP-3 was higher than those of MMP-1 and MMP-13. Glucosamine hydrochloride at a concentration of 100 microg/ml suppressed PGE2 production, and partly suppressed NO production. It also suppressed the production of MMPs from normal chondrocytes and synoviocytes but not from OA chondrocytes. CONCLUSION: Glucosamine modulates the metabolism of chondrocytes and synoviocytes and its mode of action differs between cells and conditions.     

老年阻塞性睡眠呼吸暂停综合征并存脑卒中患者氧化应激指标观察及发病机制探讨

目的 观察老年阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAS)合并脑卒中患者血浆中血管内皮生长因子、一氧化氮、内皮素等指标的变化情况并初步探讨其发病机制.方法 经手握式脉搏血氧监测仪监测后,将患者分为OSAS并存脑卒中患者32例;单纯OSAS患者36例;单纯脑卒中患者31例;无脑卒中和OSAS患者33例为对照组.检测血浆中血管内皮生长因子(VEGF)、内皮素(ET)和一氧化氮(NO)浓度.结果 (1)血浆VEGF浓度从高到低分别为:OSAS并存脑卒中患者(195.3±56.7)ng/L、单纯OSAS患者(162.3±48.7)ng/L、单纯脑卒中患者(156.4±51.8)ng/L及正常对照组(114.1±54.Z)ng/L,差异有统计学意义(F=21.02,P<0.05);(2)血浆NO浓度从低到高分别为:OSAS并存脑卒中患者(62.3±4.9)mmol/L、单纯脑卒中患者(64.7±5.1)mmol/L、单纯OSAS患者(66.2±4.2)mmol/L及正常对照组(77.5±6.8)mmol/L,差异有统计学意义(F=17.35,P<0.05);(3)血浆ET浓度从高到低分别为:OSAS并存脑卒中患者(59.8±9.6)ng/L、单纯脑卒中患者(56.5±4.3)ng/L,单纯OSAS患者(54.7±7.9)ng/L、及正常对照组(37.2±8.5)ng/L,差异有统计学意义(F=4.27.P<0.05).结论 (1)OSAS患者血浆VEGF、ET浓度升高,血浆NO水平下降;(2)并存脑卒中的OSAS患者比无脑卒中的单纯OSAS患者血浆VEGF、ET浓度升高更显著,血浆NO水平下降更明显.提示:OSAS老年脑卒中患者存在明显血管内皮功能障碍,伴脑卒中者为甚,血管内皮功能损伤可能是OSAS患者并发脑卒中的原因之一.