Increased hsp70 of glucocorticoid receptor complex induced by scald and heat stress and its possible effect on the affinity of glucocorticoid receptor

Background Glucocorticoid (GC) insensitivity/GC resistance is an important etiological and prognostic factor in multiple diseases and pathophysiological processes such as scald, shock and asthma. The function of GC was mediated by glucocorticoid receptor (GR). Scald not only decreased the expression of GR but also reduced the affinity of GR, which played an important role in GC resistance in scalded rats. Whereas the molecular mechanism responsible for the decrease of GR affinity resulted from scald remains unclear. Recent studies showed that the changes of heat shock proteins (hsp) especially hsp90 and hsp70 of GR heterocomplex were associated with GR low affinity in vitro. Methods The affinity of GR in hepatic cytosols and in the cytosols of SMMC-7721 cells were determined by radioligand binding assay and scatchard plot. GR heterocomplex in cytosols were captured by coimmunoprecipation and the levels of hsp90 and hsp70 of GR complex were detected by quantitative Western blotting.Results Similar with that of hepatic cytosol of scalded rats, a remarkable decrease of GR affinity was also found in the cytosol of heat stressed SMMC-7721 cells. The level of hsp70 of GR complex in hepatic cytosol of scalded rats (30% total body surface area immersion scald) and in cytosol of heat stressed human hepatocarcinoma cell line SMMC-7721 were both increased by 1.5 fold, whereas no change of hsp90 in GR heterocomplex was found. According to the correlation analysis, there may be a positive relationship between increased hsp70 of GR complex and decreased GR affinity in the cytosols.Conclusions The primary results indicated that the level of hsp70 of GR heterocomplex was increased in the hepatic cytosol of scalded rats and the cytosol of heat stressed SMMC-7721 cells. The increase of hsp70 of GR complex might be associated with the decrease of GR affinity.     

Increased hsp70 of glucocorticoid receptor complex induced by scald and heat stress and its possible effect on the affinity of glucocorticoid receptor

Background Glucocorticoid （GC） insensitivity/GC resistance is an important etiological and prognostic factor in multiple diseases and pathophysiological processes such as scald, shock and asthma. The function of GC was mediated by glucocorticoid receptor （GR）. Scald not only decreased the expression of GR but also reduced the affinity of GR, which played an important role in GC resistance in scalded rats. Whereas the molecular mechanism responsible for the decrease of GR affinity resulted from scald remains unclear. Recent studies showed that the changes of heat shock proteins （hsp） especially hsp90 and hsp70 of GR heterocomplex were associated with GR low affinity in vitro. Methods The affinity of GR in hepatic cytosols and in the cytosols of SMMC-7721 cells were determined by radioligand binding assay and scatchard plot. GR heterocomplex in cytosols were captured by coimmunoprecipation and the levels of hsp90 and hsp70 of GR complex were detected by quantitative Western blotting. Results Similar with that of hepatic cytosol of scalded rats, a remarkable decrease of GR affinity was also found in the cytosol of heat stressed SMMC-7721 cells. The level of hsp70 of GR complex in hepatic cytosol of scalded rats （30% total body surface area immersion scald） and in cytosol of heat stressed human hepatocarcinoma cell line SMMC-7721 were both increased by 1.5 fold, whereas no change of hsp90 in GR heterocomplex was found. According to the correlation analysis, there may be a positive relationship between increased hsp70 of GR complex and decreased GR affinity in the cytosols. Conclusions The primary results indicated that the level of hsp70 of GR heterocomplex was increased in the hepatic cytosol of scalded rats and the cytosol of heat stressed SMMC-7721 cells. The increase of hsp70 of GR complex might be associated with the decrease of GR affinity.     

NMDA受体对烫伤应激大鼠海马糖皮质激素受体基因表达的影响

目的：观察烫伤应激后海马糖皮质激素受体（GR）基因表达的变化，探讨N－甲基－D－天冬氨酸（N－methyl-D-aspartate,NMDA）受体在这种变化中的作用。方法：利用RT－PCR技术，检测烫伤前腹腔注射NMDA受体拮抗剂MK－801及激动剂NMDA对烫伤应激后2h GR mRNA水平的影响。结果：烫伤应激后2h海马GR mRNA水平明显降低（P＜0．01）；应激前腹腔注射MK－801使烫伤后降低的GR mRNA水平明显恢复（P＜0．01），注射NMDA使其进一步降低（P＜0．05），注射生理盐水无明显变化。结论：NMDA受体介导了烫伤应激导致的海马GR转录水平基因表达的下降。     

大鼠弥散性脑损伤hsp70 mRNA表达的研究

目的寻找脑损伤早期诊断指标。方法复制大鼠弥漫性脑损伤模型，用原位杂交和图象分析技术检测不同损伤时间的大鼠恼干、丘脑、大脑皮层等部位神经元和神经胶质细胞中hsp70 mRNA表达情况。结果发现不同损伤时间，hsp70 mRNA表达的强弱不同；在损伤5min后即可在脑干、丘脑、皮质等部位检测到hsp70 mRNA，6h达高峰，12h后减弱。结论hsp70 mRNA可以作为早期脑弥散性损伤的指标，并可用于生前伤与死后伤的判定。     

热休克蛋白70在心理应激诱发的C3H／HeJ雌鼠乳腺癌中的表达

目的探讨热休克蛋白 70 (Heatshockprotein70 ,Hsp70 )在心理应激诱发的乳腺癌中的表达、作用及可能的机制。方法动物随机分为实验组 ( 2 1只 )和对照组 ( 14只 ) ,对实验组小鼠给予饮水冲突和限制应激 ,以建立心理应激的动物模型 ,然后比较实验组和对照组的乳腺癌发病率、皮质酮水平和Hsp70的表达水平。 结果 ( 1)实验组的乳腺癌发病率 ( 71.4% )明显高于对照组的发病率 ( 2 1.4% ) (P <0 .0 5 ) ;( 2 )实验组血浆皮质酮水平 ( 161.5 1± 162 .82 ) μg/ml明显高于对照组 ( 10 .63± 8.3 7) μg/ml( P <0 .0 1) ;( 3 )实验组Hsp70的阳性细胞数目 ( 12 .47± 11.63 )显著高于对照组 ( 3 .16± 1.77) ( P <0 .0 1)。结论心理应激促进了Hsp70在C3H/HeJ雌鼠乳腺组织中的表达 ,Hsp70的过度表达和乳腺癌的发生密切相关。     

慢性阻塞性肺病患者氧化应激状态及其与糖皮质激素受体水平的相关性

目的 观察不同时期慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者全身及气道局部氧化应激水平的变化及其与糖皮质激素受体的卡H关性.方法 检测33例COPD急性加重期患者(A组)、27例COPD稳定期患者(B组)、14例健康吸烟者(C组)、14例健康不吸烟者(D组)诱导痰及血浆中MDA、GSH水平和SOD、GSH-PX活性.及外周血有核细胞糖皮质激素受体(GR)水平、血皮质醇、ACTH水平.结果 A、B、C、D组诱导痰和血浆MDA含量呈下降趋势,GSH、SOD、GSH-PX水平呈上升趋势各组间差别有统计学意义(P<0.05):C组血浆和诱导痰的SOD水平低于D组(P<0.05),其他指标C、D组间差异统计学无意义(P>0.05).A、B、C、D 4组间血皮质醇及ACTH水平差别无意义(P>0.05),而GR水甲依次呈上升趋势,分别为(1565±719)、(2069±488)、(2739±926)、(4793±1415)结合单位,各组间差别有统计学意义(P<0.05).控制吸烟指数后,COPD患者外周血有核细胞GR水平与血浆及诱导痰SOD的相关系数分别为0.512、0.564,P<0.001,有统计学意义.结论 COPD患者全身和气道局部均存在氧化/抗氧化失衡,尤以急性加重期患者更为明显;SOD活力下降可能是COPD患者糖皮质激素受体水平下降的原因之一.     

脂多糖作用大鼠肺泡巨噬细胞糖皮质激素受体表达及活性变化

目的探讨脂多糖作用大鼠肺泡巨噬细胞24 h内,糖皮质激素受体表达及活性变化特点.方法将原代培养的大鼠肺泡巨噬细胞分为脂多糖致伤组和地塞米松治疗组,采用RT-PCR和Western Blot在mRNA水平和蛋白质水平测定肺泡巨噬细胞糖皮质激素受体;EMSA测定肺泡巨噬细胞核蛋白中糖皮质激素受体活性.结果脂多糖作用后,糖皮质激素受体mRNA表达下调,24 h恢复正常水平;糖皮质激素受体蛋白质表达降低,4 h降至最低,24 h维持在低水平表达;糖皮质激素受体活性在1 h降到最低,24 h未恢复至正常水平.地塞米松治疗组在治疗后期不能有效维持糖皮质激素受体活性.结论脂多糖(100 ng/ml)作用大鼠肺泡巨噬细胞后,糖皮质激素受体蛋白表达降低,可能与mRNA表达降低及蛋白降解加速有关;糖皮质激素受体活性被显著抑制,出现糖皮质激素抵抗.     

慢性应激对大鼠主动脉超微结构与热休克蛋白70表达的影响

目的:研究慢性应激对大鼠主动脉超微结构与热休克蛋白70(NSP70)表达的影响。方法:将雄性Wistar大鼠随机分为对照组11只和实验组12只。实验1￣21d,实验组接受各种不同的应激,单笼喂养。对照组群养,不给任何刺激。实验第22d取主动脉组织,透射电镜观察超微结构,免疫组化法检测热休克蛋白70(HSP70)表达。结果:实验组体质量明显下降,水平穿越格数、直立次数、修饰次数减少,粪便粒数、中央格停留时间增加。实验组大鼠主动脉组织出现明显的超微结构改变:部分内皮脱落,平滑肌细胞由收缩表型向合成表型转化,向内膜迁移,线粒体变性。对照组主动脉超微结构基本正常。实验组主动脉HSP70表达高于对照组(P<0.05)。结论:慢性应激可引起主动脉细胞超微结构改变。引起主动脉HSP70表达增强。HSP70既是一种保护因素,也是机体正在经历应激损伤的标志。     

热休克蛋白70在心理应激诱发的C3H/HeJ雌鼠乳腺癌中的表达

目的探讨热休克蛋白70(Heat shock protein70,Hsp70)在心理应激诱发的乳腺癌中的表达、作用及可能的机制.方法动物随机分为实验组(21只)和对照组(14只),对实验组小鼠给予饮水冲突和限制应激,以建立心理应激的动物模型,然后比较实验组和对照组的乳腺癌发病率、皮质酮水平和Hsp70的表达水平.结果 (1)实验组的乳腺癌发病率(71.4%)明显高于对照组的发病率(21.4%)(P<0.05);(2)实验组血浆皮质酮水平(161.51±162.82)μg/ml明显高于对照组(10.63±8.37) μg/ml(P<0.01);(3)实验组Hsp70的阳性细胞数目(12.47±11.63)显著高于对照组(3.16±1.77)(P<0.01).结论心理应激促进了Hsp70在C3H/HeJ雌鼠乳腺组织中的表达, Hsp70的过度表达和乳腺癌的发生密切相关.     

慢性应激对大鼠心肌超微结构与热休克蛋白70表达的影响

目的研究慢性应激对大鼠心肌细胞的损害和动员的保护因素。方法将青年雄性Wistar大鼠随机分为对照组11只和实验组12只。实验组大鼠每笼1只喂养。实验第1～21天,接受各种不同的应激。对照组大鼠群养不给任何刺激。实验第22天杀死所有大鼠,速取心左室心尖部心肌各4块,制成电镜切片用透射电镜观察,制成免疫组化切片免疫组化法检测蛋白HSP70表达,进行图像分析。结果与对照组相比,实验组体质量明显下降[(239.17±32.18)粒,P<0.01],水平穿越格数减少[(19.12±9.76)次,P<0.01]、直立次数减少[(9.47±3.93)次,P<0.05]、修饰次数减少[(3.98±2.19)次,P<0.05],粪便粒数增多[(4.83±2.13)粒,P<0.01]、中央格停留时间增加[(5.10±2.11)s,P<0.01]。结论慢性应激可引起大鼠体质量下降及行为学改变。慢性应激可引起心肌细胞超微结构改变,慢性应激可引起心肌HSP70表达增强。     

长期慢性温和应激对大鼠抑郁样行为及热休克蛋白70的影响

目的 探讨不同时间长度慢性温和应激对大鼠抑郁样行为的影响,及其对热休克蛋白70的影响.方法 将标准鼠龄SD雄性大鼠分为两组,一组接受3周的慢性温和应激,为短期组(n=6).另一组接受6周的慢性温和应激,为长期组(n=5).慢性温和应激前后分别进行糖水偏好实验与敞箱实验,检测大鼠的抑郁样行为.慢性温和应激结束后分别利用Western-Blot、RT-PCR、免疫组化的方法检测大鼠海马与额叶的热休克蛋白70(HSP70)水平.结果 长期组慢性温和应激后糖水偏好程度、水平运动指数、中央格停留时间均高于短期组(P＜ 0.05);Western-Blot检测显示长期组海马与额叶的HSP70(相对光密度值分别为0.81±0.08,0.85 ±0.08)均高于短期组(0.60±0.06,0.85±0.07)(P＜0.05);RT-PCR检测显示长期组海马的HSP70 (0.90±0.05,1.37±0.38)高于短期组(0.78±0.04,1.08±0.14)(P＜0.05);免疫组化显示长期组的HSP70在海马与额叶也高于短期组(P＜0.05).结论 长期慢性温和应激较短期慢性温和应激,大鼠的抑郁症状明显减少,同时伴随的是长期应激大鼠脑的HSP70增加.     

严重烧伤早期小鼠腹腔巨噬细胞糖皮质激素受体变化及安定-氯胺酮对其影响

目的观察严重创伤早期小鼠腹腔巨噬细胞糖皮质激素受体(GR)蛋白表达的变化,并探讨安定-氯胺酮对其变化的影响,为安定-氯胺酮在创伤应激中的作用提供可靠实验依据.方法 95只成年健康昆明小鼠,随机分为正常对照组、烧伤组、安定-氯胺酮处理组、烧伤后安定-氯胺酮处理组,应用Western blot技术检测各组小鼠处理后早期24h内不同时期腹腔巨噬细胞GR的蛋白表达水平.结果小鼠严重烧伤后30min,腹腔巨噬细胞中GR的表达就已经开始降低,在6h达到最低,显著低于正常对照组,12h时逐渐回升,但在24h时仍低于正常.而安定-氯胺酮组GR的表达水平无显著差异,在严重烧伤后应用安定-氯胺酮能明显地抑制GR蛋白表达水平的降低,烧伤后安定-氯胺酮处理组各时相点与正常对照组相比无显著差异.结论严重烧伤可引起小鼠腹腔巨噬细胞GR表达水平的下降,而单纯应用安定-氯胺酮对小鼠腹腔巨噬细胞GR的表达水平无明显影响,在严重烧伤后应用安定-氯胺酮能显著抑制GR水平的下调,故安定-氯胺酮可能部分改善小鼠严重烧伤诱发的应激状态.     

去甲肾上腺素诱导热休克蛋白70保护心肌细胞的机制

目的探讨去甲肾上腺素预处理心肌细胞后诱导心肌热休克蛋白70(HSP70)的表达及其对心肌细胞保护作用机制。方法 Wistar大鼠乳鼠心肌细胞培养,分为3组:对照组:心肌培养3～5天未施加任何因素;缺氧/复氧组:心肌细胞培养3～5天后,模拟缺氧(加入饱和氮气pH 6.8 D-Hank’s液培养细胞)3 h,复氧(用含20%新生牛血清的DMEM液培养细胞)孵育6 h;去甲肾+缺氧/复氧组:模拟缺氧前30 min加入100 nmol/L去甲肾,其它同缺氧/复氧组。测定心肌HSP70和bcl-2以及相关的细胞凋亡指标。结果 HSP70和bcl-2的表达在去甲肾+缺氧/复氧组明显高于缺氧/复氧组,去甲肾+缺氧/复氧组的细胞凋亡率明显低于缺氧/复氧组。结论去甲肾上腺素预处理可能通过诱导心肌组织HSP70和bcl-2高表达,发挥其对供心的保护作用。     

Experimental study on protective effect of chinese herbal medicine on glucocorticoid receptor

Objective: To probe the relationship of glucocorticoid receptor and some Chinese medicinal herbs.Methods: The model of Qi-Yang exhaustion and Qi-Yin exhaustion were made with hemorrhagic rats and heat-stressed rats respectively. The effect of Shenfu decoction (SFD) and Shengmai powder (SMP) on plasma glucocorticoid (GC) and its receptor (GcR) in hepatic cytosol of the models were measured respectively.Results: The activity of GcR decreased in both models, while their blood level of GC increased markedly. SFD and SMP showed no regulating effect on blood GC, but displayed obvious up-regulation on GcR level in both models.Conclusion: SFD and SMP could up-regulate the activity of GcR in Qi-Yang and Qi-Ying exhaustion models. This study was supported by National Natural Science Foundation (No. 30670882)     

胃饲乙醇预处理对缺血再灌注大鼠肝脏HSP70表达和缺血再灌注损伤的影响

目的　探讨胃饲乙醇预处理对缺血再灌注大鼠肝脏HSP70表达的影响。方法　雄性Wistar大鼠随机分组 ,动物乙醇预处理后制作缺血再灌注模型 ,于术后 0～ 72h内不同时相活杀大鼠 ,留取血及肝脏标本保存待检。结果　实验组和对照组较正常组ALT值明显升高 ,72h后基本恢复 ,实验组恢复较快 ,但实验组和对照组间统计学差异不明显 ;病理观察见实验组较对照组表现为较轻的病理损害 ;免疫组化结果 :正常肝脏仅见弱阳性 ,散在分布于胞浆 ;术后随再灌注时相的延长 ,HSP70表达逐渐增强 ,实验组表达明显强于对照组和正常组 (P <0 0 5 ) ;WesternBlotting显示HSP70阳性条带于再灌注 3h开始增强 ,6h明显增强 ,持续至 72h达到最强 ,实验组和对照组相差显著。结论　胃饲乙醇预处理能够明显增强缺血再灌注大鼠肝脏HSP70的表达 ,从而提示与较好肝脏保护相关。     

加味生脉散对热损伤大鼠糖皮质激素及其受体的影响

目的；探讨加味生脉散增强机体热耐力的作用机理。方法；以ＳＤ大鼠制备损伤模型，观察加味生脉散夺热损伤大鼠血浆糖皮质激素（ＧＣ）、促肾上腺皮质激素（ＡＣＴＨ）以及脑、肝胞洽谈以质激素受体（ＧＣＲ）的影响。结果；中味生脉散组大鼠脑、肝胞液ＧＣＲ的结合活性（Ｒｓ）（５３．１７±１４．０６，３３２．２３±５３．８３）炕于单纯员伤组（２８．２７±１０．２７，２１６．９０±５８．９７），同时并不降低血浆ＧＣ和Ａ     

不同慢性应激方式对大鼠血清HSP70的影响

目的：比较不同慢性应激方式对生理状态大鼠血清HSP70水平的影响。方法：采用连续4周的适宜游泳、慢性束缚以及二者复合的3种应激方式后,应用ELISA试剂盒定量测定大鼠血清HSP70水平,分析不同慢性应激方式对大鼠血清HSP70的影响。结果：游泳组、束缚组、复合组大鼠血清HSP70与对照组比较均升高且有统计学意义,复合组升高介于游泳组与束缚组之间,游泳与束缚两个实验条件有交互。结论：适宜游泳作为保护性因素可以减轻慢性束缚损伤性因素对于机体造成的不利影响。     

HSP-70与细胞保护的研究进展

热休克蛋白70（HSP-70）是生物体产生的一种有高度保守性的应激蛋白,可以增强细胞对损害的耐受程度,维持细胞的正常代谢功能,提高细胞的生存率。在中枢神经系统、心肌、肝脏、肺等组织器官损伤中具有保护作用。     

重组人γ干扰素对人骨肉瘤细胞糖皮质激素受体的下调作用及其生物学意义

以人骨肉瘤细胞系（ＨＯＳ－８６０３）为模型，研究重组人γ干扰素（ｒｈＩＦＮ－γ）对糖皮质激素受体（ＧＲ）的调节作用及其生物学意义。方法：ＧＲ结合活性的测定采用放射配体结合分析法；ＧＲｍＲＮＡ的测定用分子杂交法。结果：极低浓度的ｒｈＩＦＮ－γ对ＧＲ具有下调作用，但对受体亲和力无明显影响；量效关系研究表明，当ｒｈＩＦＮ－γ浓度为１０ＩＵ／ｍｌ时，ＧＲ浓度已降至最低水平；时效关系研究表明，ｒｈＩＦＮ－γ作用３６ｈ后对ＧＲ的下调作用达到最大效应。用分子杂交方法研究表明，ｒｈＩＦＮγ下调ＧＲ的同时，伴有ＧＲｍＲＮＡ水平的相应降低；ｒｈＩＦＮ－γ本身虽然对ＨＯＳ－８６０３细胞的增殖分化过程无明显影响，但却可明显削弱糖皮质激素对该细胞系的增殖抑制作用和对碱性磷酸酶活性的诱导作用。结论：ｒｈＩＦＮ－γ对ＨＯＳ－８６０３细胞ＧＲ有非常明显的下调作用，且主要由ＧＲｍＲＮＡ表达减弱引起；ｒｈＩＦＮ－γ对ＧＲ的调节作用伴有受体功能活性的相应降低，表现为细胞对糖皮质激素的反应性明显减弱。