辛醇对红藻氨酸诱导癫痫大鼠海马Caspase-3表达的影响

癫痫可引起急性和持久性中枢神经系统损害,易致海马神经元损伤.细胞凋亡是癫痫发作后神经元死亡的主要形式之一.研究表明,癫痫发作后导致持续长时间的神经元凋亡可能是癫痫发作脑损害的重要机制[1].     

红藻氨酸诱导癫痫发作大鼠海马NOS的表达

目的：研究ＫＡ诱导癫痫发作对大鼠海马ＮＯＳ表达的影响;方法：采用ＮＡＤＰＨ－ｄ组织化学方法显示ＮＯＳ的变化。Ｎｉｓｓｌ染色显示神经元的变性坏死;结果：ＫＡ３０ｍｉｎ海马各区ＮＯＳ阳性细胞明显增加,以ＣＡ１、ＣＡ２区为著,ＫＡ１ｈ、２ｈ与对照无差异（Ｐ〉０．０５）,以后逐渐增加,至ＫＡ６ｈＮＯＳ阳性细胞最多,然后逐渐减少。Ｎｉｓｓｌ染色神经元缺失ＣＡ３＝齿状回〉ＣＡ１区;结论：ＫＡ诱导癫痫发作引起海     

红藻氨酸诱导大鼠癫痫发作时海马mGluR1mRNA表达的动态变化

目的：探讨红藻氨酸（ＫＡ）诱导大鼠癫痫发作时海马ｍＧｌｕＲ１ ｍＲＮＡ表达变化的时空特征．方法：采用地高辛标记的ｃＤＮＡ探针原位杂交法检测海马ｍＧｌｕＲ１ ｍＲＮＡ表达,通过图像分析系统进行定量处理．同时观察大鼠行为学及脑电变化．结果：ＫＡ注射后大鼠均出现严重边缘性惊厥,脑电图表现为持续性癫痫样放电．海马ｍＧｌｕＲ１ ｍＲＮＡ表达在注射ＫＡ后１ｈ开始增高,４ｈ￣８ｈ达高峰,之后逐渐回落,７２ｈ降至     

蝎毒耐热蛋白对红藻氨酸诱导癫痫大鼠海马内前脑啡肽原表达的影响

[目的]观察蝎毒耐热蛋白对红藻氨酸(kainic acid,KA)癫痫大鼠癫痫敏感性形成的影响,并探讨前脑啡肽原(proenkephalin,PENK)在其机制中的作用。[方法]大鼠颈部皮下注射红藻氨酸,制备癫痫敏感性动物模型后,给予蝎毒耐热蛋白(scorpion venom heat resistant protein,SVHRP)进行干预。通过观察癫痫行为学表现检测SVHRP对癫痫敏感性形成的影响,同时应用RT-PCR技术检测不同处理组大鼠海马内前脑啡肽原表达的变化。[结果]蝎毒耐热蛋白干预组的大鼠较单独给予红藻氨酸组的大鼠癫痫敏感性形成率明显降低(P<0.05),而且前脑啡肽原的表达也明显下降(P<0.05)。[结论]蝎毒耐热蛋白能够抑制红藻氨酸诱导大鼠癫痫敏感性的形成,前脑啡肽原可能参与其作用机制。     

红藻氨酸诱导大鼠癫痫发作时海马mGluR5 mRNA表达变化的动态观察

目的 探讨红藻氨酸（KA,10mg.kg^-1)诱导大鼠癫痫发作时海马代谢型谷氨酸受体5亚型（mGluR5)mRNA表达变化的病理特征。方法 采用同位素S^35 dATP标记寡核苷酸探针原位杂交法检测大鼠癫痫发作前后海马mGluR5mRNA的表达变化。通过图像分析系统进行定量处理。同时观察大鼠行为学及脑电变化。结果 KA注射后大鼠均出现严重边缘性惊厥,脑电图表现为阵发性癫痫样放电,正常大鼠海马中有丰富的mGluR5 mRNA表达,以齿状回和CA1区表达较高,KA注射后海马各区mGLuR5 mRNA表达呈时间依赖性下调,CA1,CA3,CA4区表达在2h呈现出显著性差异（P＜0．05）,齿状回区表达在1h即有显著性差异（P＜0．01）,至72h各区表达均至最低。结论 mGluR5在癫痫发作后表达下降可能有助于限制神经元网络的异常兴奋性,使细胞发挥自身保护性作用。     

刺激迷走神经抑制红藻氨酸致癫痫大鼠海马c—fos的表达

目的；观察刺激迷走神经对红藻氨酸诱发癫痫大鼠海马内ｃ－ｆｏｓ表达的变化，探讨此方法抑制癫痫的机制及可能途径。     

碱性成纤维细胞生长因子对癫痫大鼠海马神经元Caspase-3表达的影响

目的研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对癫痫大鼠海马神经元的神经保护作用及可能的机制。方法戊四氮诱发大鼠癫痫发作后,腹腔分别注射生理盐水(B组)和bFGF(C组),与空白对照组(A组)按一定时段断头取脑,进行HE染色和Caspase-3免疫组织化学染色。观察各组大鼠海马神经元的损伤以及Caspase-3的表达。结果HE染色:B组神经元形态散乱,大量神经元凋亡、坏死;C组可见散在的神经元凋亡,变性坏死少见。Caspase-3免疫组化染色:B组6 h可见海马CA1、CA3和齿状回门区部分细胞的胞浆和核内有棕黄色沉淀物,24 h阳性细胞数及着色深度达到高峰,持续至72 h,120h后表达减弱。C组阳性细胞数及染色度与B组有相似的时间依赖性,但总体表达较B组弱,组间各时间点中12～72 h的差异均有统计学意义(P<0.01),6 h及120 h的差异则无统计学意义(P>0.05)。结论bFGF能显著减轻癫痫所致的大鼠海马神经元损伤。     

托吡酯对红藻氨酸致癫痫状态大鼠海马神经元凋亡的影响

目的 观察托吡酯(topiramate,TPM)对红藻氨酸(kainic acid,KA)致癫痫持续状态(status epilepticus,SE)大鼠海马神经元凋亡的影响.方法 取大鼠120只,随机分为TPM组、KA组及生理盐水(NS)对照组,每组再分为四个小组,分别用于SE后3 、12 、24 和48 h四个时点.每小组10只大鼠.TPM组用TPM预处理.采用KA诱导大鼠SE.进行行为学评估、HE染色及TUNEL染色,并用免疫组化方法检测海马caspase-3的表达变化.结果 TPM组大鼠的癫痫发作迟于KA组.HE及TUNEL染色显示,TPM组大鼠海马的病理损伤轻于KA组.免疫组化结果显示,TPM组caspase-3的表达明显低于KA组.结论 TPM对KA诱导的SE发作具有抑制作用,并能显著降低海马caspase-3的表达,从而减轻癫痫所致的海马神经元损伤.     

红藻氨酸诱导癫痫发作大鼠海马结构中EAAC-1变化

目的 研究谷氨酸转运蛋白亚型（ＥＡＡＣ－１）在红藻氨酸（ＫＡ）诱导癫痫发作大鼠海马结构中的变化。方法 用红藻氨酸诱导的复杂部分性癫痫模型,将２０只ＳＤ大鼠随机分为３,６,１２,４８ｈ及对照５组,用免疫蛋白印记法（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ）观察ＥＡＡＣ－１在海马结构上的变化。结果 ＫＡ注射后３ｈ海马ＥＡＡＣ－１开始减少,６ｈ显著减少,１２ｈ后ＥＡＡＣ－１逐渐恢复。结论 ＥＡＡＣ－１表达的调控可能与Ｋ     

红藻氨酸快速点燃大鼠癫痫模型的建立及其海马神经发生

目的 建立红藻氨酸(kainite acid, KA)快速点燃癫痫模型,观察行为学、脑电图(electroencephalogrom, EEG)、海马病理改变及其神经发生.方法 立体定向连续注射KA于侧脑室致痫. 视频监测、深部EEG、Nissl染色、BrdU免疫组化染色.结果 大鼠行为学及深部EEG呈急性期、静止期和慢性期3个阶段性变化.根据Racine行为学分级法,Ⅴ级8只,Ⅳ级12只,Ⅲ级2只,Ⅱ级2只;深部电极描记出起始于海马并向杏仁核、额叶皮质等传导癫痫样波;病理变化提示长期癫痫发作会导致海马锥体细胞逐渐变性、坏死、丢失.BrdU标记细胞主要分布于海马齿状回,并在癫痫发作后显著增多(P＜0.01).结论 KA快速点燃大鼠模型为模拟颞叶癫痫的理想动模型,癫痫发作后神经发生显著增高.     

红藻氨酸诱导大鼠癫痫模型不脑区CRF含量的变化

目的：探讨内源性神经肽促皮质素释放因子（ＣＲＦ）在癫痫发病中的作用。方法：用放射免疫法检测正常大鼠及红藻氨酸（ＫＡ）诱导的大鼠癫痫模型下丘脑外四脑区脑匀浆上清液中的ＣＲＦ含量,结果：大鼠癫痫发作期额区、颞区及海马区脑匀浆上清液中ＣＲＦ明显低于正常对照组（１．３４±０．４１ｖｓ３．８６±０．７８,Ｐ〈０．０１;１．４５±０．４２ｖｓ３．３１±０．８４,Ｐ〈０．０１;０．７６±０．１８ｖｓ１．１４±１     

红藻氨酸诱导大鼠癫痫模型不同脑区CRF含量的变化

目的： 探讨内源性神经肽促皮质素释放因子（ＣＲＦ）在癫痫发病中的作用． 方法： 用放射免疫法检测正常大鼠及红藻氨酸（ＫＡ）诱导的大鼠癫痫模型下丘脑外四脑区脑匀浆上清液中的ＣＲＦ含量． 结果： 大鼠癫痫发作期额区、颞区及海马区脑匀浆上清液中ＣＲＦ含量（μｇ／Ｌ）明显低于正常对照组（１．３４±０．４１ ｖｓ ３．８６±０．７８, Ｐ＜ ０．０１; １．４５±０．４２ ｖｓ３．３１±０．８４, Ｐ＜ ０．０１; ０．７６±０．１８ ｖｓ １．１４±０．１５, Ｐ＜０．０１）,表明内源性ＣＲＦ参与了癫痫发作． 癫痫发作间期海马区ＣＲＦ含量（μｇ／Ｌ）增加（１．９６±０．３６ ｖｓ１．１４±０．１５, Ｐ＜０．０１）,可能与癫痫发作后的迟发性ＣＲＦ神经元表达增加有关． 结论： 内源性ＣＲＦ消耗提示ＣＲＦ参与了癫痫发作, 而且其神经元兴奋作用与继发性神经元损伤有关．     

妥泰对红藻氨酸致痫大鼠模型海马和颞叶皮层神经细胞caspase-3表达的影响

目的观察红藻氨酸(KA)的致痫作用并探讨妥泰(TPM)对KA致痫大鼠模型海马和颞叶皮层caspase-3表达的影响。方法取21～30日龄SD大鼠60只,随机分为3组:对照组、模型组和观察组,每组20只。对照组给予生理盐水;模型组仪用KA制作癫痫模型;观察组用KA制作癫痫模型后,加用TPM治疗。观察癫痫大鼠的行为表现、脑电图表现和病理学表现。用免疫组织化学法显示各组大鼠脑切片海马和颞叶皮层caspase-3表达的变化,并用HPIAS-2000显微图像定量分析系统进行图像分析。结果致痫大鼠的行为、脑电图和病理学改变符合癫痫的典型表现。对照组海马和颞叶皮层内存在少量caspase-3基础表达,模型组和观察组注射TPM 6 h后可见海马和颞叶皮层有少量棕褐色caspase-3阳性神经元,3 d时明显增多并达到高峰。与对照组比较,模型组和观察组相同时间点海马和颞叶皮层caspase-3阳性细胞计数均增多(P<0.05),观察组海马和颞叶皮层caspase-3阳性神经元计数与模型组相同时间点比较均减少,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和观察组海马和颞叶皮层caspase-3阳性神经元平均光密度值测定结果显示各相同时间点与对照组相比较所得数值显著增高,且有统计学意义(P<0.05),观察组海马和颞叶皮层caspase-3阳性神经无平均光密度值低于模型组(P<0.05)。结论KA的致痫作用很强,妥泰能抑制癫痫大鼠海马和颢叶皮层caspase-3表达,对癫痫发作大鼠具有神经细胞保护作用。     

伽玛刀对红藻氨酸模型大鼠海马形态学及苔藓纤维变化的影响

目的 通过红藻氨酸(kainic acid, KA)癫痫大鼠模型的伽玛刀(gamma knife, GK)照射,探讨伽玛刀治疗癫痫的机制,以及伽玛刀与海马苔藓纤维发芽(mossy fiber sprouting, MFS)的关系.方法 74只Wistar大鼠分为3组:正常对照组(A组),红藻氨酸致痫模型大鼠组(B组),40 Gy伽玛刀照射红藻氨酸致痫大鼠组(C组).应用常规病理、电镜观察海马结构形态学改变,Timm's银染色组织化学方法观察伽玛刀对海马区苔藓纤维发芽的影响.结果 B组可见以CA1、CA3区及齿状回内分子层(inner molecular layer, IML)为主的神经元变性、坏死.C组与B组相比,神经元损伤减轻.对Timm's染色脑片海马CA3区透明层进行测定,B、C组大鼠海马苔藓纤维均出现明显的发芽现象,CA3区异常Timm's阳性颗粒光密度值显著高于A组(P＜0.01);C组与B组相比,1～14 d 苔藓纤维发芽未见明显减少(P＞0.05),28～42 d显著减少(P＜0.05).结论 海马细胞形态的改变--苔藓纤维发芽,可能是KA大鼠癫痫形成的重要机制.40 Gy的伽玛刀照射对减轻神经元的损伤有重要作用,抑制苔藓纤维发芽是主要机制之一.     

亚低温通过上调海马HSP27表达抑制红藻氨酸的致癫痫作用

目的:观察亚低温治疗对癫痫持续状态(SE)大鼠海马HSP27表达的影响,以探讨亚低温治疗的神经保护机制。方法:采用侧脑室内注射红藻氨酸(KA)建立SE模型,108只雄性SD大鼠随机均分为正常对照组(N组)、假手术组(F组)、SE模型组(SE组)、亚低温治疗组(MT组),根据大鼠处死时间再分为6,12和24h共3个亚组。采用HE染色观察海马组织神经细胞变化,用免疫组化法检测海马组织中HSP27的表达。结果:MT组大鼠癫痫发作级别及神经元损害较SE组降低;SE组3个亚组HSP27表达较F组相对应的各亚组明显增多(P<0.05);MT组中3个亚组HSP27的表达较SE组相对应的各亚组明显增多(P<0.05);F组与N组比较,观察指标无统计学意义。同一观察组内6,12和24h,3个亚组HSP27表达呈上升趋势。结论:亚低温治疗对大鼠癫痫持续状态有神经保护作用,其神经保护的机制与上调HSP27表达有关。     

注射YVAD-CHO后癫痫大鼠海马组织细胞形态及Caspase-3表达的改变

目的:探讨癫痫大鼠单侧海马注射Caspase-3抑制剂YVAD-CHO后海马组织形态及Caspase-3表达的改变.方法:将YVAD-CHO注射入癫痫大鼠模型单侧海马,HE染色观察组织形态学变化,免疫组化法观察Caspase-3蛋白的表达及相应的改变.结果:HE染色显示,干预组1大鼠海马安蒙角(Cornu ammonis,CA)1-CA3区神经细胞胞质浓染,核固缩等改变,与模型组比较明显减少;免疫组化显示干预组1海马区Caspase-3蛋白的表达较模型组明显减少.结论:YVAD-CHO可在体内抑制大鼠海马神经元凋亡.     

拉莫三嗪对癫痫大鼠海马组织中Caspase-3和热休克蛋白70表达的影响

目的探讨不同剂量拉莫三嗪对戊四氮所致癫痫大鼠的行为学、海马组织形态学及Caspase-3和热休克蛋白70(HSP70)表达的影响。方法选取清洁级健康6周龄雄性Sprague-Dawley大鼠100只,随机分为正常对照组、模型组和拉莫三嗪低、中、高剂量组,每组20只。正常对照组大鼠腹腔注射生理盐水(3.5 m L·kg-1),其余各组大鼠均腹腔注射戊四氮(35 mg·kg-1)并观察其行为学变化。以连续出现3次Ⅳ级及其以上发作作为点燃标准。全部点燃后,模型组和拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠给予戊四氮35 mg·kg-1每日1次腹腔注射维持点燃,拉莫三嗪低、中、高剂量大鼠组分别给予拉莫三嗪20、30、60 mg·kg-1·d-1灌胃,连续2周。在末次灌胃24 h内,对各组大鼠进行心脏灌注固定取海马组织,采用免疫组织化学法检测海马CA3区Caspase-3和HSP70蛋白表达。结果除正常对照组外,其余各组大鼠均有痫性发作。正常对照组大鼠海马结构完整,其他组大鼠海马神经元体积缩小,与周围组织有脱离,细胞核深染,有核分裂及核溶解,具有凋亡特征,多数细胞质呈空泡状,海马区神经元细胞排列散乱,无层次感,尼氏体减少,部分神经元丢失,细胞密度小。与正常对照组比较,模型组大鼠海马CA3区Caspase-3和HSP70阳性细胞数增多(P<0.01);拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠海马CA3区Caspase-3阳性细胞数均少于模型组,HSP70阳性细胞数均多于模型组(P<0.05);拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠海马CA3区Caspase-3阳性细胞数随着剂量的增加而减少,HSP70阳性细胞数随着剂量的增加而增加,拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠海马CA3区Caspase-3、HSP70阳性细胞数两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。与正常对照组比较,模型组大鼠海马CA3区Caspase-3及HSP70蛋白表达均增加(P<0.05)。拉莫三嗪低、中、高剂量组Caspase-3蛋白表达低于模型组(P<0.05),HSP70蛋白表达高于模型组(P<0.05)。拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠海马CA3区Caspase-3蛋白表达随着剂量的增加而降低,HSP70蛋白表达随着剂量的增加而增加,拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠海马CA3区Caspase-3、HSP70蛋白表达两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论拉莫三嗪对戊四氮所致癫痫大鼠的癫痫发作有保护作用,可以减轻大鼠癫痫发作的严重程度,其机制可能是通过降低海马组织中Caspase-3表达、增加HSP70表达来抑制癫痫过程中的神经元凋亡。