地氟醚、七氟醚和异氟醚预处理对缺氧/复氧心肌细胞损害的保护作用

目的　研究地氟醚、七氟醚和异氟醚预处理对心肌细胞缺氧／复氧损害的保护作用。方法　原代培养乳鼠心肌细胞，随机分为对照、单纯缺氧／复氧及 １．５ＭＡＣ地氟醚、七氟醚和异氟醚预处理５组。实验结束测定乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）和肌酸激酶（ＣＫ）活性、细胞存活和凋亡率。结果　与对照组比，单纯缺氧／复氧使ＬＤＨ、ＣＫ和细胞凋亡率升高及细胞存活率显著下降（Ｐ＜０．０１）；１．５ＭＡＣ地氟醚、七氟醚和异氟醚预处理显著减轻ＬＤＨ、ＣＫ和细胞凋亡率升高及细胞存活率下降，其中七氟醚减轻作用最强。结论　地氟醚、七氟醚和异氟醚预处理对心肌细胞缺氧／复氧损害有一定的保护作用，七氟醚的保护作用可能更强。     

缺氧预适应减轻乳鼠心肌细胞缺氧性损伤

目的 探讨缺氧预适应对缺氧—复氧损伤的乳鼠心肌细胞的保护作用。方法 第2代心肌细胞随机分为对照组(C组)、缺氧—复氧组(A—R组)和缺氧预适应组(AP组)，每组均缺氧2h，复氧48h。取复氧心肌细胞，用电镜观察细胞超微结构变化、MTT法测定细胞生存情况、流式细胞仪测定细胞凋亡率、免疫组化染色检测HSP10表达。结果 (1)AP组细胞超微结构改变不明显，未见凋亡细胞；A—R组可见凋亡细胞。(2)各时点AP组的细胞存活数显著低于C组(P＜0．05)；显著高于A—R组(P＜0．01)；且随复氧时间延长有增加趋势。(3)各时点AP组的细胞凋亡率显著高于C组；显著低于A—R组(P＜0．01)；随复氧时间延长，AP组细胞凋亡率有下降趋势，A—R组则逐渐升高。(4)各时点AP组HSP70表达显著高于其余各组(P＜0．01)；AP组HSP70表达从1h处开始增加，24h处表达最强(P＜0．01)。结论 (1)A-R对心肌细胞确有损伤作用。(2)AP对A—R损伤能产生早期和延迟保护作用。(3)HSP70可能参与了AP的延迟保护作用。     

地氟醚,七氟醚和异氟醚预处理对缺氧／复氧心肌细胞损害的保护作用

目的 研究地氟醚，七氟醚和异氟醚预处理对恼肌细胞缺氧／复氧损害的保护作用。方法 原代培养乳鼠心肌细胞，随机分为对照，单纯缺氧／复氧及１．５ＭＡＣ地氟醚，七氟醚和异氟醚预处理５组，实验结束测定乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）和肌酸激酶（ＣＫ）活性。细胞存活和凋亡率。结果 与对照组比，单纯缺氧／复氧使ＬＤＨ，ＣＫ和细胞凋亡率升高及细胞存活率显著下降（Ｐ〈０．０１），１．５ＭＡＣ地氟醚，七氟醚和异氟醚预处理显著减轻     

血红素加氧酶-1在七氟醚预处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用

目的 探讨血红素加氧酶-1(HO-1)在七氟醚预处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用.方法 新生健康清洁级SD大鼠15只,日龄1～3d,处死后取心室肌组织,原代培养心肌细胞,以1×106个/ml接种于6孔培养板或以2× 105个/ml接种于24孔培养板,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n＝25):对照组(C组)常规培养;缺氧复氧组(H/R组)采用缺氧2h,复氧1h的方法制备心肌细胞缺氧复氧损伤模型;七氟醚预处理组(S+ H/R组)细胞经2.5％七氟醚预处理20min后行药物洗脱10 min,再行缺氧复氧处理;锌原卟啉+七氟醚预处理组(ZnPP+ S+ H/R组)细胞经HO-1抑制剂锌原卟啉3 μmol/L孵育1h后,行七氟醚预处理及缺氧复氧处理.于复氧结束后测定心肌细胞HO-1表达、细胞凋亡率、细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)、线粒体膜通透性转运孔(PTP)开放程度、细胞色素C(Cyto C)表达及培养液LDH和CK活性.结果 与C组比较,H/R组心肌细胞HO-1和胞浆Cyto C表达上调,线粒体Cyto C表达下调,培养液LDH、CK活性、细胞凋亡率、[Ca2+]i和PTP开放度升高(P<0.01).与H/R组比较,S+H/R组心肌细胞HO-1和线粒体Cyto C表达上调,胞浆Cyto C 表达下调,培养液LDH、CK活性、细胞凋亡率、[Ca2+]i和PIP开放度降低(P<0.01).与S+H/R组比较,ZnPP+ S+ H/R组心肌细胞HO-1和线粒体Cyto C表达下调,胞浆CytoC表达上调,培养液LDH、CK活性、细胞凋亡率、[Ca2+]i和PTP开放度升高(P<0.01).结论 HO-1表达上调参与了七氟醚预处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤.     

地氟醚预处理对人脐静脉内皮细胞缺氧/复氧损伤的影响

目的 探讨地氟醚预处理对人脐静脉内皮细胞缺氧/复氧损伤的影响.方法 人脐静脉内皮细胞株接种于培养板或培养皿中,随机分为5组(n=5),正常对照组(C组)不行任何处理;缺氧/复氧组(A/R组)缺氧30 min后,复氧60 min;缺氧/复氧+炎症介质刺激组[A/R+重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)组]在复氧同时加入10 ng/ml rhTNF-α 10 μl;地氟醚预处理+缺氧/复氧组(Des+A/R组)及地氟醚预处理+缺氧/复氧+炎症介质刺激组(Des+A/R+ rhTNF-α组)先给予7.2%地氟醚30 min,洗脱10 min,然后进行缺氧/复氧,复氧同时加入10 ng/ml rhTNF-α 10 μl.采用流式细胞术和原位缺口末端标记法测定细胞凋亡情况,计算细胞凋亡率;应用透射电镜观察细胞凋亡和坏死情况.结果 与C组比较,A/R组和A/R+rhTNF-α组细胞凋亡率升高(P＜0.05);与A/R组比较,Des+A/R组细胞凋亡率降低(P＜0.05);与A/R+rhTNF-α组比较,Des+A/R+rhTNF-α组细胞凋亡率降低(P＜0.05).电镜下,A/R组和A/R+rhTNF-α组可见凋亡和坏死细胞,Des+A/R组和Des+A/R+rhTNF-α组细胞处于增殖和修复状态.结论 7.2%地氟醚预处理30 min可减轻人脐静脉内皮细胞缺氧/复氧损伤.     

吸入麻醉药预处理对兔心肌缺血再灌注中心肌细胞凋亡的影响

目的：探讨异氟醚、七氟醚、地氟醚预处理对心肌缺血再灌注过程中心肌细胞凋亡的影响。方法：48只新西兰白兔随机分成6组（n=8)：假手术对照组（P组）、心肌缺血再灌注对照组（IR组）、缺血预处理组（IP组）、异氟醚预处理组（I组）、七氟醚预处理组（S组）、地氟醚预处理组（D组）。除P组外，每组均接受左冠脉前降支3h阻断和3h再灌注。IP组在缺血前接受连续3次每次缺血5min、再灌注5min的预处理，吸入药预处理组在缺血前分别吸入1MAC的异氟醚、七氟醚或地氟醚30min后洗脱15min。取心肌缺血区边缘组织用琼脂糖电泳检测DNA梯带的形成，用流式细胞仪测凋亡指数（AI）。结果：心肌梗死范围占缺血范围的百分比及AI，IP、I、S及D组较IR组显著减少（P＜0．05）。IR组DNA梯带的形成明显，IP、I、S、D组减弱、变模糊。结论：异氟醚、七氟醚、地氟醚预处理能抑制心肌缺血再灌注所致的心肌细胞凋亡。     

地氟醚、七氟醚和异氟醚预处理对缺氧-复氧心肌细胞内游离Ca2+的影响

目的 观察地氟醚，七氟醚和异氟醚预处理对缺氧-复氧心肌细胞内Ca^2 的影响。方法 将原代培养乳鼠心肌细胞随机分为对照，缺氧-复氧及1.5MAC地氧醚，七氟醚和异氟醚预处理后缺氧-复氧五组，用Fra-2标记细胞内Ca^2 ，荧光光度计进行测定。结果 与对照组比，复氧20分钟时，其余四组细胞内Ca^2 均显著升高；而地氟醚，七氟醚和异氟醚预处理组的升高幅度明显低于缺氧-复氧组；三个吸入麻醉药组间无差异，复氧60分钟，缺氧-复氧组虽有明显下降，但仍显著高于对照组，地氟醚，七氟醚烽异氟醚预处理组则降至对照组水平。结论 地氟醚，七氟醚和异氟醚预处理，可明显减轻缺氧-复氧心肌引起的细胞内游离Ca^2 升高。     

缺氧预适应抑制内皮细胞冷缺氧/温复氧损伤

目的 研究缺氧预适应对内皮细胞冷缺氧／温复氧损伤的作用及可能机制。方法 培养的内皮细胞ECV-304分成4组，A组，对照组；B组，冷缺氧／温复氧（A／R）组95％N2／5％a=）2缺氧装置中用4℃UW液保存24h；C组，缺氧预适应组（APC），内皮细胞在缺氧前遭受4个循环短时间缺氧／复氧；D组，缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）抑制组：缺氧预适应前，细胞培养液中加入5μmol／L的HIF-1α抑制剂NS398，余同C组。缺氧结束后，各组37℃5％CO2 95％空气中复氧6h。分别以逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法、Western blot法检测各组HIF-1α mRNA和蛋白表达，内皮细胞保护作用通过细胞存活率（台盼蓝拒染法）、LDH释出率及ICAM-1的表达判定。结果 缺氧预适应明显上调HIF-1α mRNA和蛋白表达，显著抑制冷保存内皮细胞缺氧／复氧损伤，表现为更高的细胞存活率，更少的LDH释出和ICAM-1的表达。而HIF-1α抑制剂可逆转这种保护作用。结论 缺氧预适应能有效地抑制冷保存内皮细胞缺氧／复氧损伤，这种细胞保护作用可能是通过HIF-1α介导的。     

P物质对高糖孵育心肌细胞缺氧／复氧损伤的影响

目的：探讨P物质预处理对高糖孵育大鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的影响。方法：分离新生SD大乳鼠心脏为细胞悬液接种于细胞培养板,分别用正常糖和高糖培养基进行孵育,72h后将细胞随机分为5组,分别为正常对照组,高糖对照组,另外三组进行缺氧／复氧（A／R）处理：高糖A／R组,高糖SP＋A／R组和高糖SP＋D—SP＋A／R组。复氧后分别测定细胞凋亡率、缺氧液和复氧液中caspase-3活性以及LDH释放量。结果：高糖和缺氧／复氧均可引起细胞凋亡率增高,缺氧液和复氧液中CasPase-3活性以及LDH释放量均显著升高：SP可降低上述各项指标,且该作用可被NK-1受体拮抗剂（D-SP）逆转。结论：高糖孵育可造成心肌细胞损伤,缺氧／复氧可加剧高糖孵育的大鼠心肌细胞损伤．SP预处理可显著减轻该损伤,且该作用可能由NK-1受体介导。     

K_(ATP)通道参与介导地氟醚对缺氧/复氧心肌细胞损害的保护作用

目的　研究 KATP通道在地氟醚对缺氧 /复氧心肌细胞损害保护中的作用。方法　原代培养乳鼠心肌细胞 ,随机分为 4组 :A组正常对照 ;B组单纯缺氧 /复氧 (缺氧 2 h复氧 1h) ;C组 9%地氟醚预处理 2 0 min后 ,进行缺氧 /复氧 ;D组地氟醚预处理前培养液中加入终浓度为 12μg/ m l KATP通道阻断剂优降糖。分别于复氧 2 0 m in和 6 0 min进行测定 :培养液乳酸脱氢酶 (L DH )和肌酸激酶 (CK )活性 ,细胞内 ATP和丙二醛 (MDA)含量 ,细胞存活率和凋亡率 ,细胞内游离 Ca2 浓度。结果　单纯缺氧 /复氧使 L DH、CK和 MDA水平和细胞凋亡率显著升高 (P<0 .0 1) ,细胞存活率和 ATP含量显著下降 (P<0 .0 1)。地氟醚预处理后明显减轻上述变化 (P<0 .0 1或 0 .0 5 ) ,优降糖部分取消地氟醚的减轻作用 ,其中 MDA升高达单纯缺氧 /复氧组水平 ,而对 ATP和 CK水平无明显影响。与正常对照组比 ,复氧 2 0 min其余三组细胞内游离 Ca2 浓度显著升高 (P<0 .0 1或 0 .0 5 ) ,但地氟醚预处理组升高幅度明显低于其它两组 (P<0 .0 5 ) ;复氧后 6 0 min各组均明显下降 ,其中地氟醚预处理组降至近正常组水平。结论　 KATP通道参与介导地氟醚的心肌保护 ,并主要通过降低细胞内 Ca2 超载和增强抗脂质过氧化而起作用     

不同浓度七氟醚预处理对大鼠海马神经元缺氧复氧时细胞凋亡的影响及线粒体ATP敏感型钾通道在其中的作用

目的 探讨不同浓度七氟醚预处理对大鼠海马神经元缺氧复氧时细胞凋亡的影响及线粒体ATP敏感型钾通道(mito-KATP通道)在其中的作用.方法 新生(出生＜24 h)SD大鼠,雌雄不拘,体重5～6 g,原代培养海马神经元,接种于培养孔或培养皿中,采用随机数字表法,将其随机分为7组,每组48孔和12皿,正常对照组(C组):不予任何处理;缺氧复氧组(HR组):缺氧4 h复氧24 h;6%七氟醚预处理组(S1 组)、4%七氟醚预处理组(S2 组)、2%七氟醚预处理组(S3 组):分别经6%、4%、2%七氟醚预处理后行缺氧复氧;5-羟葵酸100 μmol/L预处理组(5-HD组):经mito-KATP通道阻断剂5-羟葵酸(终浓度100 μmol/L)预处理后进行缺氧复氧;5-羟葵酸100 μmol/L+6%七氟醚预处理组(5-HD+S组):同时行5-羟葵酸和6%七氟醚预处理后进行缺氧复氧.各组以上处理结束后,测定神经元活力、凋亡率、Bcl-2和Bax蛋白的表达水平.结果 与C组比较,其余6组海马神经元活力降低,细胞凋亡率升高,Bcl-2和Bax蛋白表达上调(P＜0.01);与HR组比较,S1组～S3组海马神经元活力增强,细胞凋亡率降低,Bcl-2蛋白表达上调,Bax蛋白表达下调(P＜0.01),5-HD组和5-HD+S组上述指标比较差异无统计学意义(P＞0.05);与S1组比较,S2组、S3组和5-HD+S组海马神经元活力降低,细胞凋亡率升高,Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调(P＜0.01);与S2组比较,S3组海马神经元活力降低,细胞凋亡率升高,Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调(P＜0.01).结论 七氟醚预处理可抑制大鼠海马神经元缺氧复氧时细胞凋亡,从而减轻神经元损伤,且呈浓度依赖性,机制可能与开放神经元mito-KATP通道,上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达有关.

Abstract：

Objective To investigate the effect of preconditioning with different concentrations of sevoflurane on hypoxia-reoxygenation(H/R)-induced apoptosis in rat hippocampal neurons and the role of mitochondrial KATP(mito-KATP)channels.Methods Primary cultured hippocampal neurons isolated from newborn SD rats(＜24h)of both sexes,weighing 5-6 g,were randomly divided into 7 groups with 48 wells and 12 dishes in each one:control group(C group),H/R group,preconditioning with 6%,4%and 2% sevoflurane groups(S1-3 groups),5-hydroxydecanoate(5-HD,mito-KATP channel blocker)100 μmol/L preconditioning group(5-HD group)and preconditioning with 5-HD 100 μmol/L+6% sevoflurane group(5-HD+S group).The neurons were exposed to 4 h hypoxia followed by 24 h reoxygenation. In S1-3 groups, preconditioning was performed with 6% , 4% and 2% sevoflurane respectively before H/R. In 5-HD group, preconditioning was performed with 5-HD (final concentration 100 μmol/L) before H/R. In 5-HD + S group, preconditioning was performed with 5-HD 100 μmol/L and 6% sevoflurane before H/R. The neuronal viability, apoptosis rate and expression of Bcl-2 and Bax were determined after 24 h reoxygenation.Results The neuronal viability was significantly lower,while the apoptosis rate and expression of Bcl-2 and Bax were significantly higher in the other 6 groups than in group C(P＜0.01).The neuronal viability and expression of Bcl-2 were significantly higher,while the apoptosis rate and Bax expression were lower in S1-3 groups than in group H/R. There was no significant difference in the parameters mentioned above between 5-HD and 5-HD + S groups(P＞0.05).The neuronal viability and expression of Bcl-2 were significantly lower, while the apoptosis rate and Bax expression were higher in S2, S3 and 5-HD + S groups than in group S1, and in group S3 than in group S2(P＜0.0l) .Conclusion Sevoflurane preconditioning can inhibit H/R-induced apoptosis in rat hippocampal neurons and reduce the injury to neurons in a concentration-dependent manner, and the underlying mechanism may be related to activation of mito-KATP channels, up-regulation of Bcl-2 expression and down-regulation of Bax expression.     

高浓度二氧化碳预处理对人脐静脉内皮细胞缺氧复氧损伤的影响

目的 探讨高浓度二氧化碳(CO2)预处理对人脐静脉内皮细胞缺氧复氧损伤的影响.方法 人脐静脉内皮细胞接种于细胞培养板,随机分为6组,每组16孔,对照组(C组)常规培养;缺氧复氧组(MR组)缺氧4 h、复氧24 h;缺氧预处理组(APC组)缺氧10 min、复氧10 min,重复2次后缺氧4 h、复氧24 h;HCA.组、HCA2组和HCA3组分别于50%N-20%02-30%CO2培养箱中行30%CO2预处理10、30、60 min后常规培养10、20、30 min,缺氧4 h、复氧24 h.于复氧24 h时采用MTY法测定人脐静脉内皮细胞活力,采用免疫细胞化学法测定细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达水平.结果 与C组比较,MR组、APC组、HCA1～3组人脐静脉内皮细胞活力降低,ICAM-1表达上调(P＜0.05);与A/R组比较,APC组和HCA2组人脐静脉内皮细胞活力升高,APC组及HCA1,2组ICAM-1表达下调(P＜0.05).结论 高浓度CO2预处理可减轻人脐静脉内皮细胞缺氧复氧损伤.     

p38MAPK信号转导通路在七氟烷后处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用

目的 评价p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路在七氟烷后处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用.方法 健康新生SD大鼠,日龄1～3 d,处死后取心室肌组织,培养心肌细胞,随机分为7组:对照组(C组)于CO2培养箱中持续培养3 h;缺氧复氧组(AR组)细胞缺氧2 h,复氧1 h;七氟烷后处理组(SP组)细胞缺氧2 h,复氧开始即刻更换为3%七氟烷饱和的DMEM培养液,孵育20 min,再更换为无血清DMEM培养液,继续复氧40 min;七氟烷后处理+SB203580组(SP+SB组)于七氟烷后处理同时加入SB203580(p38MAPK特异性抑制剂)至5 μmol/L,孵育20 min;七氟烷后处理+二甲亚砜组(SP+DMSO组)于七氟烷后处理同时加入0.1%DMSO,孵育20 min;SB203580组(SB组)于复氧开始时加入SB203580至5 μmol/L,孵育20 min;二甲亚砜组(DMSO组)于复氧开始即刻加入0.1%DMSO,孵育20 min.各组细胞分别接种于24孔培养板(1 ml/孔)、35 mm培养皿(5 mlnd/皿)和50 ml培养瓶(8 ml/瓶)中,每组12孔、6皿和6瓶.于复氧结束后,采用比色法测定细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性;采用台盼蓝排斥实验测定细胞存活率;采用流式细胞仪测定细胞凋亡率;采用Western blot法测定磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)表达水平.结果 与C组比较,其余各组LDH活性升高,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,AR组、SP组、SP+SB组、SP+DMSO组和DMSO组p-p38MAPK表达上调(P<0.05);与AR组比较,SP组、SP+SB组和SP+DMSO组LDH活性降低,细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,p-p38MAPK表达上调(P<0.05);与SP组比较,SP+SB组、SB组和DMSO组LDH活性升高,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,p-p38MAPK表达下调(P<0.05).结论 七氟烷后处理可通过激活p38MAPK信号转导通路减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤.     

七氟烷预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠线粒体通透性转换孔的影响

目的 探讨七氟烷预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠线粒体通透性转换孔(mPTP)的影响.方法 成年雄性SD大鼠60只,体重250～300 g,随机分为5组(n=12):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、七氟烷预处理组(Sev组)、线粒体ATP敏感性钾离子通道(mito-KATP通道)阻断剂5-羟癸酸(5-HD)+Sev组和5-HD组.采用大脑中动脉阻断法制备局灶性脑缺血再灌注模型.S组只分离血管不置入线栓;I/R组制备局灶性脑缺血再灌注模型;Sev组吸入2.4%七氟烷60 min行预处理,24 h后制备局灶性脑缺血再灌注模型;5-HD+Sev组腹腔注射5-HD 40mg/kg,30 min后行七氟醚预处理,其余处理同Sev组;5-HD组腹腔注射5-HD 40 mg/kg,30 min后制备局灶性脑缺血再灌注模型.于再灌注24 h时断头取缺血侧顶叶皮层组织,测定mPTP活性,Western blot法测定Bcl-2、Bax表达水平,并计算Bcl-2/Bax比值,采用TUNEL法检测神经元凋亡情况.结果 与S组比较,I/R组、Sev组、5-HD+Sev组和5-HD组凋亡神经元计数升高,Bcl-2和Bax表达上调,Bcl-2/Bax比值升高,mPTP活性升高(P＜0.05);与I/R组比较,Sev组凋亡神经元计数减少,Bcl-2表达上调,Bcl-2/Bax比值升高,mPTP活性降低(P＜0.05);与Sev组比较,5-HD+Sev组和5-HD组Bcl-2表达下凋,Bcl-2/Bax比值降低,mPTP活性升高(P＜0.05);5-HD+Sev组与5-HD组上述指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 七氟烷预处理可能通过激活神经元mito-KATP通道,上调Bcl-2的表达,从而抑制mPTP的大量开放减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注时的神经元凋亡.     

七氟醚延迟预处理对大鼠缺血再灌注心肌ARC表达的影响

目的 评价七氟醚延迟预处理对大鼠缺血再灌注心肌带有Caspase富集功能域的凋亡抑制蛋白(ARC)表达的影响.方法 成年雄性SD大鼠64只,体重270～350 g,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=16):假手术组(S组)、心肌缺血再灌注组(I/R组)、七氟醚+假手术组(S-S组)和七氟醚延迟预处理+心肌缺血再灌注组(S-VR组).S-S组和S-I/R组分别吸入33%氧气和2.5%七氟醚2 h,停止吸入后24 h行假手术或心肌缺血再灌注;I/R组和S-I/R组采用结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注2 h的方法制备心肌缺血再灌注模型.于再灌注2 h时处死8只大鼠,取左心室组织,测定心肌梗死范围及细胞凋亡情况,计算凋亡指数,于缺血前即刻及再灌注2 h时各处死4只大鼠,取左心室组织,测定ARC及Caspase-8的表达水平.结果 与S组比较,I/R组和S-I/R组心肌梗死范围及细胞凋亡指数升高,缺血前即刻S-S组和S-I/R组ARC表达上调,再灌注2 h时I/R组Caspese-8、表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,S-I/R组心肌梗死范围和细胞凋亡指数降低,再灌注2 h时S-S组和S-I/R组ARC表达上调,Caspase-8表达下调(P＜0.05).结论 七氟醚延迟预处理可上调心肌ARC表达,减少细胞凋亡的发生,从而减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤.

Abstract：

Objective To investigate the effects of sevoflurane delayed preconditioning on caspase recruitment domain (ARC) expression during myocardial ischemia-reperfusion (I/R) in rats. Methods Sixty-four adult male SD rats weighing 270-350 g were randomly divided into 4 groups ( n = 16 each): sham operation (group S); myocardial I/R group; sevoflurane + sham operation group (group S-S) and sevoflurane delayed preconditioning + myocardial I/R group (group S-I/R) . Myocardial I/R was induced by occlusion of anterior descending branch of left coronary artery for 30 min followed by 2 h of reperfusion in groups I/R and S-I/R. Group S-S inhaled 33% oxygen for 2 h, and sham operation was performed 24 h later. Group S-I/R inhaled 2.5% sevoflurane for 2 h, and then myocardial I/R was induced 24 h later. Eight animals were sacrificed at the end of 2 h reperfusion in each group and the hearts removed for determination of myocardial infarct size (IS) as a percentage of area at risk (AAR) by triphenyl tetrazolium chloride staining (IS/AAR) . Myocardial apoptosis was detected using TUNEL and apoptosis index was calculated. Another 4 animals were sacrificed immediately before ischemia and at the end of 2 h reperfusion to determine the expression of ARC and Caspase-8 in myocardium by Western blot. Results Compared with group S, the infarct size and apoptosis index were significantly increased in groups I/R and S-I/R, and ARC expression was up-regulated immediately before ischemia in groups S-S and S-I/R, and Caspase-8 expression was up-regulated at 2 h of reperfusion in group I/R ( P ＜ 0.05) . Compared with group I/R, the infarct size and apoptosis index were significantly decreased in group S-I/R, and ARC expression was up-regulated, while Caspase-8 expression was down-regulated at 2 h of reperfusion in groups S-S and S-I/R ( P ＜ 0.05) . Conclusion Sevoflurane delayed preconditioning can attenuate myocardial I/R injury through up-regulating the ARC expression and decreasing the myocardial apoptosis.     

七氟醚或缺血预处理对大鼠肺缺血再灌注时ERK和CaM表达的影响

目的 探讨七氟醚或缺血预处理对大鼠肺缺血再灌注时细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)和钙调素(CaM)表达的影响.方法 健康雄性SD大鼠24只,体重270～320 g,随机分为4组(n=6):假手术组(S组)、肺缺血再灌注组(IR组)、缺血预处理组(IP组)和七氟醚预处理组(SP组).IR组采用夹闭左肺门45 min恢复灌注120 min的方法制备肺缺血再灌注损伤模型,IP组缺血前夹闭左肺门缺血5 min恢复灌注5 min,连续2次,SP组缺血前吸人2.1%七氟醚30 min.于再灌注120 min时取左肺组织,测定TNF-α和IL-6含量、ERK mRNA和CaM mRNA的表达水平.结果 与S组比较,IR组、IP组和SP组肺组织TNF-α和IL-6的含量、ERK mRNA和CaM mRNA的表达水平升高(P＜0.05);与IR组比较,IP组和SP组肺组织TNF-α和IL-6的含量和CaM mRNA的表达水平降低,ERK mRNA表达水平升高(P＜0.05);SP组和IP组各指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论七氟醚预处理和缺血预处理均通过下调CaM表达和上调ERK表达减轻大鼠肺缺血再灌注损伤.