反式二羟环氧苯并(a)芘所致人支气管上皮细胞POLK基因高表达

目的观察不同剂量反式二羟环氧苯并(a)芘(anti-BPDE)处理对人支气管上皮细胞(16HBE)POLK基因表达的影响。方法分别以0.25、0.50、1.00、2.00μmol/L的反式-BPDE1次或3次处理16HBE细胞,采用TaqmanMGB探针实时定量聚合酶链反应方法相对定量POLK和POLZ基因表达,同时对反式-BPDE转化的16HBE及肺癌H1299细胞POLK基因表达进行了分析。结果反式-BPDE1次处理及3次处理可诱导正常16HBEPOLK基因高表达。反式-BPDE转化16HBE和肺癌H1299细胞POLK基因表达明显增高,分别是正常16HBE的2.25和5.49倍。结论反式-BPDE处理可致16HBEPOLK基因高表达。     

苯并(a)芘代谢物反式二羟环氧苯并芘诱发人支气管上皮细胞恶性转化

以不同浓度的苯并 (a)芘代谢物反式二羟环氧苯并芘 (BPDE)多次处理人支气管上皮细胞 16HBE ,并观察转化细胞的恶性特征。发现BPDE可诱导 16HBE细胞恶性转化 ,形成转化灶。转化灶细胞失去接触抑制 ,排列紊乱 ,无方向性 ,交叉重叠生长。转化的细胞可在软琼脂上生长 ,各浓度处理组细胞集落形成率均显著高于对照组 ,有良好的剂量—反应关系。经BPDE处理的细胞在裸鼠体内成瘤 ,病理学诊断为鳞状细胞癌。本实验以反式BPDE成功地诱发了人支气管上皮细胞恶性转化 ,为后期进一步研究其致癌的分子机制、寻找致癌相关基因提供了理想的生物学材料。     

母婴苯并(a)芘负荷水平与脐带血DNA加合物的关系

目的了解B市母婴多环芳烃负荷水平与胎儿脐带血DNA加合物之间的关系。方法于2012年7月至12月收集B市某医院产前孕妇外周静脉血(n=216)及新生儿脐带血(n=193),并选取185对匹配的产妇与新生儿样本进行分析。利用高效液相色谱—荧光检测法测定母血和脐带血清中的苯并(a)芘(BaP)浓度,采用毛细管电泳—激光诱导荧光检测部分脐血中的BPDE-DNA加合物的浓度。结果母血和脐带血血清BaP的检出率分别是47.3%和49.7%。脐带血中血清BaP浓度高于母亲血清(P=0.002);胎儿脐带血中的BPDE-DNA加合物的检出率是86.1%,但脐带血中的BPDE-DNA加合物与脐带血血清BaP水平无明显相关性。结论该市母婴血清中均能检测到致癌性多环芳烃,证实了多环芳烃的跨胎盘暴露已造成发育中的胎儿DNA的早期损伤。     

Ras基因家族在二羟环氧苯并(a)芘恶性转化细胞中的表达研究

目的检测环境致癌物苯并(a)芘代谢物二羟环氧苯并芘(BPDE)对人支气管上皮细胞Ras基因家族表达的影响。方法以正常人支气管上皮细胞为对照组,经BPDE恶性转化人支气管上皮细胞为实验组,分别利用RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学方法,检测Ras基因家族在mRNA和蛋白水平表达变化。结果RT-PCR实验表明,BPDE恶性转化细胞H-Ras、K-Ras和N-Ras mRNA表达水平分别是正常细胞的2.237、1.254和3.616;Western blot实验显示,H-Ras、K-Ras和N-Ras蛋白表达量分别是正常细胞的1.273倍、1.547和1.600倍;免疫细胞化学实验表明,恶性转化细胞H、K和N-Ras蛋白表达明显强于正常细胞。结论BPDE诱发人支气管上皮细胞恶性转化存在H-Ras、K-Ras和N-Ras基因过表达。     

ERCC1反义RNA降低肺癌细胞对苯并(a)芘所致DNA损伤的修复能力

目的 探讨核苷酸切除修复基因ERCCl在肺癌细胞修复苯并(a)芘所致DNA损伤中的作用。方法 构建表达ERCCl反义RNA的重组质粒,Lipofectin转染肺癌A549细胞,潮霉素筛选出稳定转染的细胞克隆;噻唑蓝法检测24h细胞生存力;Northern Blot分析细胞ERCCl基因mRNA表达水平;单细胞凝胶电泳技术检测DNA损伤程度,每组计算50个细胞损伤情况。结果 筛选出表达ERCCl反义RNA的7个阳性克隆,其生长特性与亲本细胞差别无显著性;内源性mRNA表达水平不同程度降低,为亲本细胞的12％-86％;DNA损伤修复速度减慢,10μmol/L苯并(a)芘作用24h后再孵育24h,修复程度为亲本细胞的29％-71％;相关分析表明DNA损伤修复程度与ERCClmRNA水平显著相关。结论 ERCCl反义RNA降低肺癌细胞对苯并(a)芘所致DNA损伤的修复能力。     

HSP70在苯并(a)芘致细胞DNA损伤中的保护作用

[目的]研究热休克蛋白70(HSP70)对苯并(a)芘[B(a)P]所致肺腺癌细胞A549的DNA损伤的保护作用。[方法]用含HSPTO基因cDNA的pcDNA3．0／HSP70重组质粒转染A549细胞,提高A549细胞HSP70表达水平,以空载体质粒pcDNA3．0转染作载体对照。对肺腺癌A549细胞(A549)、空载体质粒pcDNA3．0转染A549细胞(A549／pcDNA)和HSP70过表达A549细胞(A549／HSP70),用不同浓度的B(a)P(1、5、10、50、100μmol／L)染毒24h,MTT法测定细胞存活率、单细胞琼脂糖凝胶电泳检测细胞DNA损伤。用溶剂二甲基亚砜处理细胞组作为未染毒细胞组。[结果]B(a)P染毒作用时,A549/HSP70细胞在50、100μmol／L浓度组存活率明显高于A549细胞。A549、A549／pcDNA和A549/HSP70细胞的DNA损伤程度都伴随B(a)P染毒浓度增加而增加。与各自未染毒细胞相比,染毒A549和A549／pcDNA细胞的Olive尾矩值均有明显增加(P<0．05),A549／HSP70细胞在5、10、50、100μmol／L浓度时,Olive尾矩值明显升高(P<0．05)。与A549细胞组相比,在各染毒浓度下,A549/HSP70细胞Olive尾矩值均有降低(P<0．05)。A549／pcDNA细胞Olive尾矩值均无明显改变。[结论]HSP70对苯并(a)芘所致肺腺癌细胞A549的DNA损伤具有保护作用。     

孕期妇女体内苯并(a)芘负荷水平调查

目的了解孕期妇女体内苯并(a)芘暴露水平,探讨苯并(a)芘暴露的影响因素。方法 2012年7至12月,选择我国北方某妇幼保健院住院分娩孕妇205名,收集孕妇产前外周静脉血,利用高效液相色谱-荧光检测法测定血清苯并(a)芘(BaP)水平,并对可能影响因素进行问卷调查。结果孕妇血清BaP检出率为47.3%(97/205),中位数为0.035ng/ml。截取回归分析显示家庭住宅离交通主干道比较近的孕妇血清BaP含量较高(P0.05)。结论本次调查的孕期妇女体内有一定的BaP负荷,血清BaP水平较高可能与居住地室外空气污染有关。     

茂名市苯并（a）芘污染特征分析

环境中苯并(a)芘的污染是环境质量评价中的重要指标之一。为了了解茂名市环境中的苯并(a)芘的含量水平,我们对茂名市环境中苯并(a)芘进行了调查,包括大气环境和所属地区的土壤、食物及水体等     

苯并（a）芘对小鼠腹腔巨噬细胞功能影响的研究

以２０、１０、５ｍｇ／ｋｇ Ｂ（ａ）ｐ连续灌胃１０天染毒小鼠，观察Ｂ（ａ）ｐ对小鼠腹腔巨噬细胞（ＰＥＣ）吞噬功能及Ｆｃ受体功能的影响。结果表明，总剂量为２００ｍｇ／ｋｇ的Ｂ（ａ）ｐ染毒组，小鼠ＰＥＣ吞噬率为２５．９％，对照组为４３．９％，吞噬率下降近５０％；剂量为１００、５０ｍｇ／ｋｇ的Ｂ（ａ）ｐ染毒组，未见ＰＥＣ吞噬率有明显变化。在三个染毒剂量组，均未见小鼠ＰＥＣ Ｆｃ受体功能有明显的变化。     

雌二醇对苯并(a)芘致雄性小鼠肺癌抑制作用

目的 建立苯并(a)芘[B(a)P]诱发雄性昆明小鼠肺癌的动物模型,探讨雌二醇(E2)在该模型中对B(a)P致肺癌作用的影响.方法 将不同组的雄性昆明小鼠分别给予B(a)P、E2干预,每周1次,持续8周,恢复8周后处死,进行形态学观察和病理学诊断,并检测血清超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平.结果 B(a)P组小鼠的肺癌发病率和肿瘤数分别为36.0%和1.154±0.54,明显高于对照组和E2组(P<0.05);B(a)P+E2组小鼠的肺癌发病率和肿瘤数分别为32.0%和0.88±0.33,明显高于对照组和E2组(P<0.05);B(a)P组小鼠的肺癌发病率和肿瘤数高于B(a)P+E2组,肿瘤数差异有统计学意义(P<0.05),而发病率差异无统计学意义(P>0.05).血清MDA水平以B(a)P组最高,B(a)P+E2组及E2组次之,对照组最低;SOD与MDA的趋势相反.结论 建立了灌胃B(a)P诱发雄性昆明小鼠肺癌的动物模型,E2可能通过抗氧化作用减少B(a)P诱发的肺癌肿瘤数.     

吸烟与肺组织DNA加合物形成关系的研究

目的探讨吸烟与人肺组织ＤＮＡ加合物含量的关系以及在肺癌患者与非肺癌患者之间、男女性之间有无差别。方法提取同期住院原发肺癌患者与非肺癌患者（男各１９例，女各１８例）手术切除正常肺组织ＤＮＡ，采用３２Ｐ后标记方法测定ＤＮＡ加合物含量。结果吸烟可明显地引起肺组织ＤＮＡ加合物含量增高。如果控制吸烟因素，男女之间，非肺癌患者与肺癌患者之间的肺组织ＤＮＡ加合物水平差异无统计学意义。结论人体中ＤＮＡ加合物水平与生物学效应之间的关系尚需积累更多的资料加以阐明     

肺癌组织中DNA修复酶MGMT、DNA-PKcs和Ku的表达变化

[目的]检测肺癌组织中DNA损伤修复酶MGMT、DNA-PKcs和Ku的表达变化，探讨其表达和肺癌发生发展及临床病理特征之间的关系。[方法]采用免疫组织化学方法(LSAB法)检测10例肺部良性病变和44例肺癌标本中上述修复酶的表达情况(每一标本同时检测正常及肿块两个部位)。同时还检测了肺癌组织中突变型P53蛋白的表达。[结果]随着肿瘤的进展MGMT的表达可被诱导增强，DNA-PKcs和Ku的表达则降低，三种修复酶在肺肿瘤组织的表达均较良性肺组织低，差异有显著性。DNA-PKcs和Ku的表达具有明显相关性。突变型P53蛋白阳性标本中MGMT蛋白的平均表达得分较P53蛋白阴性标本显著降低。DNA损伤修复酶的表达和病人的年龄、性别、组织学分型、分级无关。[结论]DNA损伤修复酶表达的改变在细胞的恶性转变过程中至少起到了一定的作用，DNA损伤修复酶作为肺肿瘤易感性标志物有一定可行性。     

苯并(a)芘代谢产物作用下人胚肺细胞热应激蛋白70表达与DNA损伤

目的 探讨苯并（ａ）芘（ＢａＰ）代谢产物作用下,人胚肺细胞ＨＳＰ７０表达与ＤＮＡ损伤的关系。方法 选用正常人胚肺（ＨＥＬ）二倍体细胞,进行如下处理：一般处理组,以０、１０、５０、１００、２００ｕｍｏｌ／Ｌ ＢａＰ染毒３ｈ（体外经大 地Ｓ９－ｍｉｘ活化诱导）,单细胞凝胶电泳技术检测ＤＮＡ损伤情况;热应激组,细胞预热应激（４１℃１ｈ,３７℃２ｈ）,再以同样浓度的ＢａＰ染毒３ｈ,采用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ和单细胞凝胶电泳技术检测ＨＳＰ７０表达与ＤＮＡ损伤情况。结果 一般处理组ＢａＰ在５０ｕｍｏｌ／Ｌ时可引起ＨＥＬ细胞ＤＮＡ的明显损伤,且随ＢａＰ染毒剂量增加,ＤＮＡ损伤级别加重;接受预热应激的细胞经不同浓度ＢａＰ染毒３ｈ后,与对照组比,ＨＳＰ７０表达水平降低,ＢａＰ在１０ｕｍｏｌ／Ｌ时可见明显的ＤＮＡ损伤,随染毒剂量     

接触室内煤烟的肺癌患者多环芳烃DNA加合物的研究

本实验是为了探索宣威肺癌病因和肺癌早期危险性评价方法做一点尝试，应用３２Ｐ后标记法检测了宣威３０例（实验组）、昆明１０例（对照组）肺癌病人的纤维支气管镜（纤支镜）刷落细胞的多环芳烃（ＰＡＨ）－ＤＮＡ加合物。结果表明宣威肺癌病人的ＰＡＨ－ＤＮＡ加合物水平远远高于对照组。该结果从分子水平上证明宣威室内煤烟污染与肺癌有直接联系，ＤＮＡ加合物的检测可以作为人群危险性评价的指标。     

CD44v6在非小细胞肺癌中表达及其临床意义

目的探讨CD44v6蛋白在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学SABC法检测65例原发性NSCLC和20例正常肺组织中CD44v6蛋白的表达水平。结果正常肺组织未见阳性表达，NSCLE组阳性表达率为69．2％，两组比较差异有显著性（P＜0．05）。其中鳞癌和腺癌的阳性表达率分别为78．1％和60．6％，差异无显著性（P＞0．05）。在NSCLC中，CD44v6在病理分级Ⅰ＋Ⅱ级和Ⅲ级的阳性表达率分别为63．6％和75．0％，两组间无显著差异（P＞0．05）。在TNM分期Ⅰ＋Ⅱ期和Ⅲ＋Ⅳ期阳性表达率分别为57．1％和83，3％；有无淋巴结转移组的阳性表达率分别为78．9％和55．6％。以上两组间比较差异均有显著性（P＜0．05）。结论CD44v6阳性表达与NSCLC的发生，临床进展及淋巴结转移密切相关，高表达者提示伴有淋巴结转移，临床已进入晚期。     

甲基丙烯酸环氧丙酯对人支气管上皮细胞周期及凋亡影响的研究

目的探讨甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)对人支气管上皮细胞周期及凋亡的影响。方法人支气管上皮细胞(16HBE)经1~16μg/ml剂量的GMA染毒不同次数后,应用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期及凋亡率的改变,同时测定细胞分裂指数(MI)。结果经1次染毒处理后,随着染毒剂量的增加,G0/G1期细胞显著减少(P<0.01),S期和G2/M期细胞显著增加,凋亡细胞数增多,细胞分裂指数下降;随着染毒次数的增加,各剂量组细胞周期均明显阻滞于G0/G1期,但高剂量组细胞仍表现出S期和G2/M期增多现象;经3次染毒后,高剂量组细胞出现凋亡率下降、分裂指数升高现象。结论经GMA染毒处理后,16HBE细胞周期由G0/G1期向S期和G2/M期移动而呈现增殖性改变。     

沈阳市31家工厂职工肺癌的流行病学调查研究

目的：对沈阳市1979－1994年31家工厂职工肺癌的流行病学调查研究，结果：肺癌的发病率在19．4／10万＝52．9／10万之间，1990年最高（52．9／10万）；男性高于女性；肺癌死亡率，男性在22．9／10万－58．9／10万之间，1990年最高（58．9／10万）；女性在7．6／10万－28．7／10万之间，1987年最高（28．7／10万）；男性高于女性。肺癌，35，8，10年的存活率分别为8．3％，5．3％，3．2％，1．3％，中心型肺癌居3种部位之首位（67．0％），男性鳞癌居4种组织类型的首位（50．9％），女性腺癌居4种组织类型的首位（67．9％），55－64岁为鳞癌（44．5％），腺癌（47．2％），小细胞癌（50．0％）和大细胞癌（35．7％）的高发病年龄组。     

灰霾天气细颗粒物对人支气管上皮细胞凋亡的影响

[目的]探讨灰霾天气细颗粒物（PM2.5）对人支气管上皮细胞（human bronchial epithelial cells,16-HBE）凋亡的影响。[方法]分别以8、16、32、64、128μg/mL浓度的PM2.5作用于16-HBE 24、48、72h,检测PM2.5对16-HBE细胞存活率及凋亡率的影响。[结果]染毒24、48、72h后,64、128μg/mL组细胞存活率均明显低于对照组（P〈0.05）,细胞凋亡率均明显高于对照组（P〈0.05）;72h各浓度组细胞存活率均低于24h相应处理组（P〈0.05）,当染毒浓度大于8μg/mL时,72h各浓度组细胞总凋亡率与24h相比均明显增加（P〈0.05）。[结论]灰霾天气细颗粒物PM2.5对16-HBE具有细胞毒性,能诱导其凋亡,且具有剂量和时间反应关系。     

某油田人群白细胞DNA加合物水平及其影响因素研究

为研究油田人群白细胞ＤＮＡ加合物水平及其影响因素,选取了２１５名居住在某油田的在职职工进行调查并采用＾３２Ｐ－后标记法检测每位调查对象外周血白细胞ＤＮＡ加合物水平,其平均值为个／１０＾８核苷酸。     

膀胱癌患者尿脱落细胞中人巨细胞病毒的定量分析

目的：初步探讨人巨细胞病毒感染与膀胱癌的关系。方法：采用一种新的PCR产物定量测定技术，对12例膀胱癌病人，24例健康人的尿脱落细胞病理标本进行人巨细胞病毒（HCMV）的定量检测，并结合临床资料，探讨膀胱癌与HCMV感染的关系。结果：12例膀胱癌病人中有8例阳性，24例对照人群中无阳性发现，表明膀胱癌细胞内存在有HCMV基因的DNA。结论：膀胱癌病人中有较高的HCMV感染，并可能在膀胱癌的发生和发展中起着重要作用。