薯蓣皂苷元对大鼠肝癌细胞CBRH7919的抑制及凋亡诱导作用

目的 探讨薯蓣皂苷元对大鼠肝癌细胞CBRH7919的生长抑制、诱导凋亡及其对细胞周期的影响.方法 体外MTT法测生长抑制率.Hochest染色观察药物作用后的细胞核形态,流式细胞术、彗星电泳技术分析药物对细胞周期、凋亡率和细胞DNA的影响.结果 薯蓣皂苷元能抑制大鼠肝癌细胞CBRH7919的生长.药物浓度为6.25、12.5、25和50μmol/L作用72 h的抑制率分别为:5.3%、5.5%、18.6%和77.8%,IC50为37.4μmol/L;薯蓣皂苷元50μmol/L作用24、48、72和96 h的抑制率分剔为:23.2%、66.1%、80.5%和89.3%.Hochest染色后,加药组细胞有明显的凋亡形态特征.流式细胞仪检测显示,薯蓣皂苷元25、50μmol/L组细胞凋亡率分别为19.06%和29.67%,细胞周期S期和G2-M期阻滞增加,彗星电泳显示,12.5、25和50μmol/L加药组形成拖尾,平均光密度值较阴性对照组降低,彗星尾距较阴性对照组增加,且二者改变有剂量依赖关系.结论 薯蓣皂苷元能抑制大鼠肝癌细胞CBRH7919的生长和诱导其凋亡.     

eIF4E基因下调对人乳腺癌Bcap37细胞凋亡的影响

目的应用化学合成的siRNA干扰乳腺癌Bcap37细胞真核细胞翻译起始因子4E(eukaryotic translation initiationfactor 4E,eIF4E)的表达,探讨其对乳腺癌细胞凋亡和生长周期的影响。方法化学合成eIF4E基因的siRNA,转染人乳腺癌Bcap37细胞,采用Western blotting法及RT-PCR法检测转染前后Bcap37细胞中eIF4E蛋白和mRNA表达;应用流式细胞技术检测转染前后细胞周期的变化;AO/EB双染色法检测细胞凋亡;酶标仪检测caspase-3活性。结果 RT-PCR与Western blot-ting法检测结果显示,转染eIF4E-siRNA-3#组细胞eIF4E基因的mRNA和蛋白表达均明显下降(P<0.01);eIF4E-siRNA转染组G1期细胞比例显著增加,S期细胞比例相对减少,差异显著(P<0.05);转染eIF4E-siRNA可诱导细胞凋亡,caspase-3活性亦增强。结论 eIF4E-siRNA可下调eIF4E基因在乳腺癌Bcap37细胞中的表达水平,诱导细胞凋亡。     

薯蓣皂苷元体外抗肿瘤作用

探讨薯蓣皂苷元抗肿瘤作用，采用四氮唑盐还原法观察薯蓣皂苷元对U-20S、SGC-7901、ACCM3株肿瘤细胞、HUCB和hRPE2株正常细胞体外生长的作用。结果：薯蓣皂苷元对U-20S、SGC-7901、ACCM、HUCB和hRPE等5种细胞的生长均有不同程度的抑制作用，1C250（24h）分别为45μmol／L、21．7μmol／L、15μmol／L、108．1μmol／L和78．5μmol／L。结论：薯蓣皂苷配基明显抑制肿瘤细胞生长的同时，对正常细胞也有毒性作用。     

薯蓣皂苷元诱导人骨肉瘤U-2OS细胞凋亡的发生机制

目的探讨薯蓣皂苷元诱导人骨肉瘤U-2OS细胞凋亡的发生机制。方法用透射电镜、AO/EB染色法观察U-2OS细胞的形态学变化,用蛋白印迹法检测Caspase-8表达水平。结果经薯蓣皂苷元处理的U-2OS细胞呈典型的凋亡形态学改变,其Caspase-8蛋白表达增强。结论薯蓣皂苷元通过Caspase-8途径诱导U-2OS细胞凋亡而抑制其增殖。     

薯蓣皂苷元衍生物的合成及其抗血栓形成活性

摘 要：目的 设计合成薯蓣皂苷元衍生物,并评价其体内抗血栓形成活性。方法 以薯蓣皂苷元为先导物,经过酯化等反应得到薯蓣皂苷元酯类衍生物,选择动静脉旁路血栓形成模型,评价体内抗血栓形成活性。结果 合成了6个目标化合物,结构经过1H-NMR、13C-NMR、MS确证。抗血栓形成活性筛选结果显示,目标化合物3β-薯蓣皂苷元丁二酸单酯具有较好的抗血栓形成活性。结论 C-3位适当亲水性基团的引入,有助于增强薯蓣皂苷元的抗血栓形成活性。     

薯蓣皂苷元抗肿瘤作用机制研究进展

薯蓣皂苷元(diosgenin,Dio)是从薯蓣属植物的根茎中提取出来的一种植物甾体化合物,是薯蓣皂苷的水解产物,在薯蓣属植物中有着丰富的含量.传统中医学认为,薯蓣属植物具有利水消食、活血通络、截疟、祛痰、解毒消肿等功效[1].现代药理学研究证明,Dio具有免疫调节、抗肿瘤、降血脂等功能,并且毒副作用较低,因此,应用较为广泛[2-4].近几年来,Dio的抗肿瘤活性备受关注,研究证实,Dio对多种肿瘤细胞均有一定的抑制作用.本文就Dio抗肿瘤作用机制的研究现状进行综述.     

薯蓣皂苷对人结肠癌细胞凋亡的作用及机制研究

目的:探究薯蓣皂苷（Dioscin）诱导人结肠癌HCT-116细胞、RKO细胞凋亡的作用及机制。方法:通过将体外培养的HCT-116细胞和RKO细胞分为对照组和不同浓度的药物组,采用CCK-8实验分析Dioscin对细胞增殖的抑制作用,可见分光光度法检测细胞LDH活性的变化;借助DNA含量检测法、Annexin V-FITC/PI双染法和流式细胞术检测细胞凋亡情况;DCFH-DA荧光探针法检测细胞活性氧簇（ROS）含量的变化;采用荧光探针法和可见分光光度法分别检测细胞超氧化物含量及细胞超氧化物歧化酶（SOD）活性的变化,Western 印迹法检测凋亡相关蛋白的表达情况。结果: 在24 h、48 h处理时间下,与对照组相比,HCT-116细胞Dioscin组（2、4、6、8、10 μmol/L）、RKO细胞Dioscin组（5、10、15、20、25 μmol/L）都明显抑制了结肠癌细胞的增殖活性（均P＜0.05）,且HCT-116、RKO细胞经Dioscin处理后,细胞膜破坏,细胞LDH释放量较对照组增多（P<0.05,P<0.01）;与对照组相比,Dioscin作用HCT-116、RKO细胞后,DNA含量暴露增多（P＜0.05,P＜0.001）,细胞凋亡率上调（P＜0.001,P＜0.01）,ROS水平升高（P<0.05,P<0.001）,超氧化物含量增多（均P<0.001）,SOD表达降低（P＜0.05,P＜0.001）;Western 印迹结果表明,与对照组相比,Dioscin可以抑制HCT-116、RKO细胞蛋白p-Akt（P<0.01,P<0.001）、Nrf2（均P<0.001）、Bcl-2（均P<0.001）的表达,促进蛋白cleaved Caspase-9（P<0.001,P<0.01）的表达。结论:薯蓣皂苷可能通过PI3K/Akt/Nrf2信号通路激活氧化应激反应,从而抑制结肠癌细胞生长,促进其凋亡。     

薯蓣皂苷元对人胃低分化粘液腺癌细胞作用的研究

目的观察薯蓣皂苷元（Diosgenin,Dio）对人胃低分化粘液腺癌（MGC-803）细胞的作用,并初步探讨其作用机制。方法MTT法测Dio对MGC-803细胞的抑制作用;考察Dio对MGC-803细胞分裂和集落形成能力的影响;采用3H-TdR掺入法检测Dio对MGC-803细胞DNA合成的影响。结果一定浓度范围内Dio对MGC-803细胞的增殖有剂量、时间依赖性抑制作用;Dio明显抑制MGC-803细胞分裂和集落形成,半数抑制浓度（IC50）为13.17mg/L,Dio能显著抑制MGC-803细胞DNA合成。结论Dio对MGC-803细胞的抑制作用与抑制该细胞DNA合成有关。     

盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元含量测定方法的研究

目的 建立盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元的含量测定方法,为制订药材标准提供参考.方法 采用Dikma4.6×250mmC18 柱,甲醇-水(95∶5)为流动相,流速为1.0ml·min-1,PDA-100检测器,检测波长203nm,以外标法测定.结果 薯蓣皂苷元分离度好,在浓度为0.101～2.011mg·ml-1 范围内呈良好的线性关系,样品溶液在12小时内稳定,平均回收率为97.9%,RSD=2.0%.结论 本法操作方便、准确,重复性好,可作为其质量控制指标.     

薯蓣皂苷元对人宫颈癌细胞增殖的影响

目的研究薯蓣皂苷元对人宫颈癌细胞增殖的影响。方法培养人宫颈癌细胞株Hela,不同浓度的薯蓣皂苷元干预24、48、72h,采用MTF、EdU检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,WesternBlot检测细胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin B1。结果薯蓣皂苷元在20μmol／L浓度时抑制Hela细胞活力（P〈0．01）,呈现量效和时效特征;薯蓣皂苷元作用后EdU阳性细胞明显减少,薯蓣皂苷元引起G0／G1期细胞阻滞,减少S期细胞,降低Cyclin D1蛋白表达,而对Cyclin B1蛋白表达没有明显影响。结论薯蓣皂苷元通过阻滞细胞G0／G1期来抑制人宫颈癌Hela细胞株的增殖。     

冬凌草甲素对人乳腺癌Bcap-37细胞的增殖抑制作用及其机制

目的观察冬凌草甲素对人乳腺癌细胞株Bcap-37细胞的生长抑制作用,初步探讨冬凌草甲素调控乳腺癌细胞增殖的分子机制。方法 MTT比色法检测冬凌草甲素对Bcap-37细胞的增殖抑制作用,相差显微镜观察细胞形态变化,流式细胞仪分析细胞周期分布,RT-PCR检测p21、cdc2和cyclin B1 mRNA表达。结果冬凌草甲素对Bcap-37细胞有显著的增殖抑制作用,呈时间剂量依赖趋势（P〈0.01）;处理后的Bcap-37细胞发生明显的形态改变;作用24h后,Bcap-37细胞在G2/M期阻滞;冬凌草甲素作用Bcap-37细胞后,p21 mRNA水平的表达增加,而cdc2、cyclin B1 mRNA的表达降低（均P〈0.05）。结论冬凌草甲素可抑制乳腺癌细胞的增殖,该作用可能与p21 mRNA表达上调及cdc2、cyclin B1 mRNA表达下调有关。     

多西紫杉醇对乳腺癌干细胞的作用研究

目的 通过研究多西紫杉醇对乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231及原代乳腺癌干细胞在体外的影响,观察多西紫杉醇对乳腺癌干细胞的作用,从而为选择针对乳腺癌干细胞治疗的药物提供理论依据.方法 利用流式细胞仪,分别从原代乳腺癌细胞、乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231中,分选出细胞表型为CD+44、CD-/low24、ESA+的乳腺癌干细胞.将分选出来的3种乳腺癌干细胞及未分类细胞分别置于含有不同浓度多西紫杉醇的培养液中,测得多西紫杉醇对不同干细胞的生长抑制曲线,并利用流式细胞仪进行细胞周期及细胞凋亡的分析.结果 原代乳腺癌、MCF-7、MDA-MB-231细胞系干细胞比例分别为(0.50±0.26)%、(1.40±0.26)%和(1.63±0.32)%.四甲基偶氮唑盐(MTT)试验显示各系乳腺癌干细胞均对多西紫杉醇有一定的耐药性:其中MDA-MB-231未分类细胞、干细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为34 nmol/L和12.422 μmol/L(P＜0.01);MCF-7 两类细胞的IC50分别为31 nmol/L和8.357 μmol/L(P＜0.01);原代乳腺癌两类细胞的IC50分别为51 nmol/L 和17.688 μmol/L(P＜0.01).且多西紫杉醇对乳腺癌干细胞的抑制作用呈浓度依赖性.多西紫杉醇对乳腺癌干细胞表现出了一定的G2/M期周期阻滞作用,且干细胞早期凋亡率随药物作用时间的增加而升高,呈时间依赖性.结论 多西紫杉醇对乳腺癌干细胞增殖生长有一定的抑制作用,降低了乳腺癌干细胞的成瘤性,且该作用呈浓度依赖性和时间依赖性.     

新藤黄酸对人乳腺癌耐药细胞体外作用的研究

目的 观察新藤黄酸（gambogenic acid,GNA）对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR的作用.方法 采用MTT法观察GNA、阿霉素（adriamycin,ADR）及两者联用对MCF-7/ADR细胞增殖的抑制作用,采用流式细胞仪观察MCF-7/ADR细胞内ADR浓度.结果 GNA能剂量依赖地抑制MCF-7/ADR细胞的生长,作用48 h时,GNA对MCF-7/ADR细胞的IC50为12.88 μmol/L;4 μmol/L GNA可增加MCF-7/ADR细胞对ADR的敏感性,使ADR对MCF-7/ADR细胞的IC50由80.22 μmol/L降至12.54 μmol/L;GNA显著增强MCF-7/ADR细胞内ADR的积累,呈剂量依赖关系.结论 低剂量GNA能显著增加MCF-7/ADR细胞对ADR的敏感性.     

异博定对乳腺癌细胞多药耐药性逆转作用的研究

目的：检测异博定逆转乳腺癌耐药细胞株对阿霉素的耐药性。方法：ＭＴＴ法检测细胞的抑制率变化,流式细胞仪检查异博定对ＭＣＦ－７／Ａｄｒ细胞的药物浓度变化。结果：异博定可提高肿瘤细胞的药物浓度（Ｐ＜０．０１）,并且使ＭＣＦ－７／Ａｄｒ细胞对阿霉素的敏感性增加２０倍。结论：本实验证实异博定可增加细胞内抗肿瘤药物浓度,逆转细胞的耐药性,为临床应用异博定逆转肿瘤的耐药性提供了理论基础。     

转基因溶瘤性单纯疱疹病毒对人类乳腺癌细胞及其干细胞的溶瘤作用

 【目的】 通过体外实验观察溶瘤性单纯疱疹病毒(HSV)载体G47Δ对人类原代乳腺癌细胞及乳腺癌干细胞毒效应,探讨其对人乳腺癌的治疗作用。【方法】 选取6例浸润性导管癌组织,体外培养人原代乳腺癌细胞及人原代乳腺癌干细胞,将G47Δ按不同感染复数(MOI),即MOI=0.01和MOI=0.1加入各实验组中,观察每天细胞的生长情况。G47Δ含有LacZ基因,其表达产物可被X-gal染色检测。 【结果】 G47Δ病毒在乳腺癌细胞中可复制和传播通过X-gal染色法得以证实。 G47Δ对人原代乳腺癌细胞及乳腺癌干细胞都具有杀伤作用,对乳腺癌细胞更加敏感。在MOI=0.01组及0.1组中,感染病毒后第4 d,人原代乳腺癌细胞被杀灭的比例分别是91%及96%,乳腺癌干细胞被杀灭的比例分别是43%及78%;感染病毒后第6天,两组中人原代乳腺癌细胞接近全部被杀灭,乳腺癌干细胞被杀灭的比例分别是92%、98%。 【结论】 G47Δ可有效杀灭人乳腺癌细胞及其干细胞;乳腺癌细胞比乳腺癌干细胞对G47Δ更具有敏感性。     

绿茶对体外培养的人乳腺癌细胞和血管内皮细胞bFGF表达的抑制作用

目的 研究绿茶对人乳腺癌细胞及人脐静脉内皮细胞碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响及机制。方法 ELISA法检测bFGF的蛋白表达水平;mRNA的水平用：Northern印迹杂交法研究。结果 40μg/mL的绿茶提取物(green tea extract,GTE)或绿茶主要有效成分表没食子儿茶素-3没食子酸（epigallocatechin-3gallste,egcg）①能够抑制人脐静脉内皮细胞及人乳腺癌细胞株细胞内及细胞分泌入条件培养基中bFGF多肽水平,这种抑制作用呈剂量依赖性;②能明显抑制MDA-MB231细胞内的bFGFmRAN表达水平。结论 GTE或EGCG能够在mRNA和蛋白水平抑制乳腺癌细胞及脐静脉内皮细胞的bFGF表达,绿茶可能通过该机制抑制肿瘤新4血管形成。     

钾通道阻断剂抑制乳腺癌细胞增殖作用的实验研究

目的探讨选择性钾离子通道阻断剂4-氨基吡啶(4-AP)对多西紫杉醇(DOC)抗人乳腺癌细胞MDA-MB-435S增殖、凋亡、周期的影响。方法通过MTT比色法分析DOC、4-AP以及两药联合应用对人乳腺癌细胞MDA-MB-435S增殖的影响;流式细胞术AnnexinV-FITC/PI双染法和PI单染法检测2种药物对MDA-MB-435S凋亡和周期的影响。结果0.04～50μmol/LDOC可剂量依赖性抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S的增殖;4-AP(5mmol/L)本身具有抑制MDA-MB-435S细胞的增殖作用,并可使DOC(25μmol/L)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S达最大抑制率的时间明显提前,DOC和4-AP对MDA-MB-435S细胞的增殖抑制有相加或协同作用,并呈剂量和时间依赖性。DOC(2μmol/L)单用24h时促进MDA-MB-435S细胞凋亡的作用并不明显,当与4-AP(5mmol/L)联合应用后能明显增加细胞早期凋亡的发生率;单用DOC可使MDA-MB-435S细胞阻断在G2/M期,单用4-AP可使MDA-MB-435S细胞阻断在G0/G1期,两药联合应用可使细胞阻断在G2/M期。结论DOC和4-AP分别在G2/M期和G0/G1期抑制MDA-MB-435S细胞增殖,4-AP通过促进DOC诱导MDA-MB-435S细胞凋亡从而抑制其增殖作用。     

阿司匹林对乳腺癌细胞株的抑制作用

目的 :观察阿司匹林体外抗癌作用并初步探讨其作用机理。方法 :将人乳腺癌细胞株 (MCF - 7)及小鼠乳腺癌细胞株 (HC - 11)与不同剂量阿司匹林共同培养 ,于培养 2 4h、48h、72h观察阿司匹林对两细胞株数目的影响 ,并以流式细胞术分析培养细胞不同时期细胞比例。结果 :阿司匹林对MCF - 7及HC - 11均有不同程度的生长抑制作用 ,且此作用与阿司匹林用量有明显量效关系 (72hIC50 分别为 10 1 6 2 μmol/L、5 3,2 0 μmol/L) ,共同培养 72h ,阿司匹林可引起MCF - 7细胞株G0 -G1期停滞 ,S期细胞明显减少 [(11 8± 2 3) % ,(6 3±1 9) % ,P <0 0 5 ]。结论 :阿司匹林对人及小鼠乳腺癌细胞株有明确的抑制作用 ,其抑制作用是通过影响细胞周期进程 ,抑制细胞增殖 ,诱导分化而产生。本研究结果提示阿司匹林在乳腺癌的化学预防方面有相当的应用前景。     

川陈皮素对肺癌的增殖抑制作用及其机制

目的 观察川陈皮素对肺癌的体内外抑瘤作用并初步探讨其机制.方法 应用MTT法检测不同浓度川陈皮素作用对人肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用.Western blot检测川陈皮素处理后A549细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达情况.彗星电泳检测川陈皮素作用后A549细胞DNA损伤情况.通过C57BL/6小鼠Lewis肺癌模型进行体内抗瘤实验,TUNEL法观察药物作用后的肿瘤细胞凋亡情况,并用免疫组化法检测瘤组织中Bax、Bcl-2和Caspase-9蛋白表达情况.结果 体外实验显示,川陈皮素作用对A549细胞有明显的增殖抑制作用,并且抑制效应随浓度增加而增强;川陈皮素作用A549细胞24 h后,随着作用剂量的加大,Bcl-2蛋白表达下调,而Bax蛋白则表达上调;对细胞DNA具有损伤作用,当达到一定作用剂量和作用时间时可以使A549细胞发生凋亡.体内抑瘤实验表明,川陈皮素高(300 mg/kg)、中(200 mg/kg)、低(100 mg/kg)浓度组对小鼠Lewis肺癌的抑瘤率分别为43.70%、27.59%和20.14%,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.01);川陈皮素能使Lewis肺癌细胞发生凋亡;使Lewis肺癌组织内Bax和Caspase-9表达上调,Bcl-2表达下调.结论 川陈皮素在体内外均有明显的抑制肿瘤细胞增殖的作用,其作用机制可能与改变Bcl-2/Bax的比值,启动Caspase级联反应相关.