聚合酶链反应及其在乙型肝炎研究中的应用

<正> 聚合酶链反立(Polymerase Chain Reaction,PCR),又称体外基因扩增技术或无细胞分子克隆体系。是在体外摸拟天然DNA复制过程的核酸扩增技术。1985年美国Cetus公司的Mullis等设计并研究成功了PCR。同年Saiki等首次报导应用PCR技术扩增3-球蛋白。现PCR方法已广泛应用于分子生物学研究、遗传性疾病诊断、传染病源检测、法医、考古等方面。并且有     

基因诊断正常宫颈乙肝病毒的应用体会

自1964年澳大利亚学者Blumberg研究发现乙型肝炎病毒（HaplitisBVirus，HBV）以来．由于分子生物学的进展．尤其是病毒分子生物学的进展，促使其基因诊断技术逐渐成熟，1988年起，DNA体外扩增技术，又称聚合酶链式反应（PCR）技术开始用于HBV－DNA的检测，使HBV的检测灵敏度较传统的血清学方法大为提高，而目前流行的“套叠式”PCR的扩增效力和检测敏感性更高。为了探讨正常子宜颈分泌物中HBV一DNA的分布情况，对于HBV的预防具有重要价值，有关这一研究迄今尚未见报道。我们应用Net－PCR技术对子宫颈分泌物进行了HBV－DNA…     

PCR法检测HBV DNA对乙肝病程的分析

随着现代生命科学技术的发展,聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction PCR)技术在近几年得到了很大发展.目前PCR方法已成为分子生物学核心技术.PCR技术是模拟天然DNA复制的体外扩增技术,其原理实际是在模板DNA、引物和四种单核苷酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶的经高温变性、低温退火、中温延伸等3个过程,进行多次循环(一般25～35次)的酶促合成反应.自1985年美国Saiki等首次报道以来,这一突破性的分子生物技术被广泛用于医学、分子生物学、遗传工程、考古学及农业等许多领域.利用这一技术可在极短的时间内对目的DNA进行复制,一般2～3小时之内可将其扩增     

PCR技术在肿瘤研究与检测诊断方面的意义

自1985年美国PE-Cetus公司的K.BMullis等人首创了PCR技术之后,它以相当惊人的速度被广泛地应用于医学及分子生物学等各个领域。现今,PCR技术已成为一种对标本中特定的DNA片段进行分析研究和检测鉴定的重要方法。近20多年来PCR技术在生物医学等各个研究领域和临床应用中发挥了重大的作用,在病原体鉴定、遗传病诊断、免疫学研究、癌基因探索及治疗等方面都得到了很大的发展,而且在肿瘤的早期诊断及预测等方面也已广泛的应用,它也是当今最为有效的检测手段之一。1PCR的基本原理PCR技术的基本原理是模仿DNA体内复制的机制,在体外进行…     

PCR技术与基因诊断

PCR技术即多聚酶链式反应(Polymerase Chain Reaction),是近年发展起来的一种体外扩增特异DNA片段的技术。被誉为是当代分子生物学技术最重要的发展之一。自1985年Mullis建立PCR技术以来,短短几年间已广泛用于分子生物学、微生物学、遗传学、法医学以及肿瘤研究等生命科学领域,Mullis也因这一发明而获得1993年诺贝尔化学奖。     

试论医院PCR实验室质量控制的若干问题

目的聚合酶链反应技术(PCR),自20世纪80年代中期以来已引起医学界的极大兴趣,经过许多学者多年的努力,将极微量的DNA片段特异地扩增至几十万倍,大大提高了对DNA分子样品的检测能力,其特异性好,灵敏度高,可靠性强,现已被广泛用于分子生物学及临床医学等领域.本文介绍了PCR技术的基本原理、特点及在临床医学检验工作中的应用情况与质量控制对策.     

PCR技术在传染病病原诊断中的应用

PCR系PolymeraseChainReaction的缩写,中文译名为聚合酶链反应,最初由Mullis等于1985年首先建立[1],是一种在体外模拟自然DNA复制过程,用聚合酶催化物扩增核酸分子的新技术,以其快速、简便、敏感度高、特异性强等优点,而广泛应用于分子生物学、医学、农业和法医等领域。在传染病研究中,首先被用于病毒性感染的诊断,特别是对于难以培养的病原体,PCR成为其检测的重要手段。本文拟对PCR技术在传染病病原诊断中的应用作一介绍。1　PCR技术的基本原理[1～4]PCR是由引物介导将特异性DNA序列在酶促作用下进行扩增的方法。整个反应过程包…     

突变阻滞的扩增系统

聚合酶链反应(PCR)是80年代中期发展起来的一项体外扩增 DNA 技术,由于它具有灵敏度高、特异性强等优点,其应用已给整个核酸研究领域带来了一场革命.结合 PCR 技术所进行的限制性片段长度多态性(RFLP)分析法已成为检测 DNA 分子上碱基变化的常用方法。但是,能检测点突变的方法仍主要依赖于 RNase 错配切割分析、特异性等     

DNA体外扩增新技术—PCR法及其在疾病诊断上的应用(综述)

自1985年由美国 Cetus 公司人类遗传部的 Mulllis 小组研究发展起来的 DNA 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,简称 PCR)问世,到1987年耐高温 DNA 聚合酶的应用,使 DNA 扩增技术有了突破性进展。PCR 技术被逐渐应用于分子生物学的研究和临床医学的疾病诊断。1 PCR 技术的原理及方法以往进行基因扩增,多借助于微生物即体内扩增系统。特别是用 E.Coli 的质粒的     

纳米技术—DNA操作

PCR的发现为生物学的研究开辟了一个崭新的领域 ,在分子生物学及其相关的领域取得了巨大进步。分子的生物学技术已成功应用于生物学、生物科技、医学、诊断学等 ,利用PCR扩增技术设计新的实验方法和分析扩增的DNA片段 ,根据DNA分子的性质、结构和潜在性的可计算方法 ,研究模拟活生物 ,构造人工纳米装置 ,如生物分子感应器和人造细胞     

低变性温度下复合PCR在CHB患者核苷(酸)类似物耐药突变监测中的应用研究

低变性温度下的复合PCR(COLD-PCR)技术是一种新开发的PCR方法,能够从大量野生型DNA中选择性扩增低水平未知突变。该技术显著地提高了低浓度突变的检测灵敏度,已经被应用于医药的很多领域。同时COLD-PCR可以与很多分子生物学检测方法结合使用,在临床诊断上具有较好的应用前景。低变性温度下复合PCR(COLD-PCR)术在CHB患者核苷(酸)类似物耐药突变监测中的应用进行研究。     

PCR技术及其在生物医学中的应用

PCR技术是1985年建立的一种核酸片段体外酶扩增技术,它经变性、退火、延伸的循环,使核酸片段指数式增加。PCR技术可应用于分子生物学的许多领域,如基因缺失测定、复杂基因的分析、核酸片断的定量测定、DNA诱变、基因克隆以及核酸序列分析等。在临床医学中,PCR也有越来越广泛的应用,如遗传病、传染病及肿瘤的诊断和基因治疗等。与传统的DNA杂交及克隆方法相比,PCR技术具有快速、简便、灵敏度高和稳定性好等优点。本文简介PCR技术的原理及其在分子生物学和临床医学中的主要应用。     

泌尿外科的DNA和RNA扩增:多聚酶链反应

分子生物学的重要进展彻底改变了我们检测特异性基因序列的能力。新的技术已用于临床。扩增DNA和RNA:多聚酶链反应多聚酶链反应(PCR)技术的发展是分子学方法快速应用于临床的关键。现概述PCR的优点、局限性、设计、方法,并举例说明此技术在泌尿外科的应用。     

PCR技术在DNA片段扩增的应用与意义

1985年,Mullis等人发明了PCR技术,短短十余年间,这一技术得到迅速发展和应用,由扩增已知基因发展到扩增未知基因。本文旨在介绍利用PCR技术扩增未知序列DNA片段的最新进展及这些技术在基因克隆研究中的应用。1985年,美国PE2cetus公司人类遗传研究室的Mullis等人发明了体外无限扩增核酸片段的聚合酶链式反应,即PCR技术。目前,PCR技术已在众多的研究领域得到广泛应用,如在基因克隆、基因定点突变、c DNA文库构建、基因测序、载体构建以及人类基因组计划等方面发挥着重要作用。在今天的"基因大战"中,新基因的发现与克隆已成为研究的热点。而扩增未知序列的PCR技术格外引人注目,许多新方法应运而生,本文旨在介绍这方面的研究进展。     

分子生物学技术在肝癌研究中应用

肝癌的发生是有其分子生物学基础的。自80年代以来许多技术相继开发应用到肿瘤的分子生物学研究,并取得了显著的成效。一类主要用于基因组DNA的检测,如肝癌基因和抑癌基因的定位克隆,比较基因组杂交,代表性差异分析;用于cD-NA或mRNA或mRNA水平的技术包括消减杂交、差异显示PCR、cDNA代表性差异分析、DNA芯片及探针微列阵等。这些技术的应用为肝癌的分子生物学研究开拓了一个崭新的领域。一、DNA水平的研究 1.定位克隆癌基因和抑癌基因:利用各种DNA多态性标记对癌基因或抑癌基因进行染色体定     

N-ras基因DNA损伤检测方法的建立

目的 建立应用依赖随机化末端连接物PCR（RDPCR）技术检测N—ras基因DNA损伤的试验方法。方法 采用单引物PCR技术制备N—ras基因外显子1单链探针,酶切构建DNA损伤模型,再经RDPCR扩增后与探针杂交显色。结果 单引物PCR技术制备单链探针获得成功,目的基因在相应位置出现了清晰的杂交条带。结论 RDPCR技术可定位检测到该酶切DNA损伤位点,表明该方法已成功建立,将有利于其在化学致癌作用机制研究及肿瘤预防领域的应用。     

应用聚合酶链反应检测血清HBVDNA

聚合酶链反应(Polymerase ChainReaction,简称PCR)是一种体外特异性扩增DNA的技术。它能将极微量的DNA样品特异地放大儿十万倍。目前国外已广泛应用PCR技术研究HBV感染。本次试验,我们应用北京医科大学肝病研究所提供的PCR扩增HBV基因试剂盒,对91例HBsAg慢性携带者血清进行PCR检测,探讨HBV感染者的传染性。     

TAIL-PCR技术及其在医学上的应用

PCR技术是分子生物学中一种必不可少的关键技术，但是以DNA为基础的传统PCR技术只能扩增两引物之间的DNA区段，难以对已知DNA序列侧翼的未知序列进行扩增；以RNA为基础的RT-PCR、RACE技术，操作繁琐，而且费用昂贵。而由Liu和Whitter首先研究并报道的热不对称交错PCR（thermal asymmetric interlaced PCR，TAIL-PCR）技术能够较好的解决上述难题。利用该技术能够在较短的时间内分离到目的片段，而且分离出的DNA序列可以用于图位克隆、遗传图谱绘制的探针和直接测序等。该技术从报道以来得到了广泛应用，近年来医学上也开始运用该技术。     

贝母的分子生物学鉴定方法的研究

DNA的提取和PCR扩增是分子生物学最基本的操作步骤之一。本文以贝母为研究对象,探讨不同DNA提取方法、不同扩增条件对PCR产物的影响,为生药的分子生物学鉴定提供参考贝母的分子生物学鉴定方法的研究@蔡朝晖@李萍@董婷霞@詹华强     

石蜡组织DNA提取方法的比较

目的 :选择一种高效、简便、稳定的从蜡块中提取基因组DNA进行聚合酶链反应 (PCR)扩增的方法。　方法 :分别采用四种不同的方法从石蜡组织中提取DNA ,比较所提取的DNA质量 ,PCR扩增cyclinD1基因的效率。对其中的一种方法进行了改良。　结果 :四种方法提取的DNA质量都能达到相关分子生物学实验的要求 ,但在操作程序、扩增效率等方面存在差异。　结论 :微波脱蜡法操作简单、快速、扩增成功率高 ,适合于应用PCR技术对病理标本进行相关研究。