双龙方与自体骨髓单个核细胞经心导管移植，对中国小型猪心肌梗死的影响

评价干细胞移植对冠心病的疗效的实验研究．必须有一个可靠的动物模型和合理的移植方法。目前常用的心肌缺血损伤模型为结扎冠状动脉，在一定程度上可以模拟心肌缺血，但毕竟与冠心病的病理状态不同。常用的移植方法是将干细胞直接注射到受损的心肌，或通过心导管利用螺旋注射器经心内膜将干细胞多点注射到缺血心肌，注射移植往。     

自制微导管自体骨髓单个核细胞移植治疗急性心肌梗死

用自制的微导管给予冠脉内骨髓单个核细胞(BM-MNCs)移植(bone marrow stem cells hearttransplantation BMT),观察对急性心肌梗死患者心肌梗死面积及心功能的疗效。将24例首次心梗的患者随机分为2组,经皮冠脉介入治疗(PCI)组(n=12)给急症PCI及常规药物治疗,BMT组(n=12),急症PCI同时经自制的微导管给予自体BM-MNCs冠脉移植,分别于出院前、3月、6月时用Tei指数评价心功能,铊201(201Tl)静息再分布显像观察心梗面积。结果:3月时2组患者Tei指数均降低(3月vs出院前,移植组0.45±0.09 vs0.67±0.12,P<0.05;对照组:0.55±0.08 vs 0.67±0.06,P<0.05),移植组较对照组更明显(0.45±0.09 vs0.55±0.08,P<0.05),至6月时无明显变化;3月时移植组心梗面积较出院前明显减少(15.10±3.34 vs22.95±5.94,P<0.05),至6月时无明显变化。与对照组相比均显著减少(3月:15.10±3.34 vs 19.85±4.09;6月:13.70±3.10 vs 17.66±4.70,P均<0.05)。结论:自制的微导管给予冠脉内BM-MNCs移植治疗AMI能减小心肌梗死的范围,改善心功能。     

骨髓单个核细胞和外周血单个核细胞移植治疗外周动脉病的疗效分析

目的 观察自体骨髓单个核细胞(BMMNCs)移植、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员的自体外周血单个核细胞(PBMNCs)移植治疗外周动脉病的临床疗效.方法 将69例外周动脉病患者随机分成3组:G-CSF动员的自体PBMNC移植组(PBMNC组)30例,给予G-CSF 600mg/d,皮下注射,连用4d,第5d采集PBMNCs移植至患肢;自体BMMNC移植组(BMMNC组)15例,采集骨髓液500～800 ml,分离BMMNCs移植至患肢;常规内科治疗组(对照组)24例,仅给予常规药物治疗.术后3月随访所有患者,观察评价各项指标.结果 PBMNC组CD34 细胞数[(3.31±1.39)×106 /kg]显著多于BMMNC组[(1.42±0.42)×106 /kg,P＜0.01)].移植后3月时复查,PBMNC组和BMMNC组的静息痛改善率分别为76.67%和73.33%均显著高于对照组16.67%(P＜0.01);PBMNC组的溃疡改善率为40.0%,BMMNC组为42.86%,与对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05);两个移植组之间静息痛改善率和溃疡改善率差异均无统计学意义(P＞0.05).两个移植组术后3月时,最大无痛步行距离(MWD)、踝臂压指数(ABI),经皮氧分压(TcO2)均明显高于治疗前(P＜0.01),对照组治疗前后无差异(P＞0.05).△MWD、△ABI、△TcO2分别指治疗前和治疗后3月时MWD、ABI、TcO2的差值,比较两个移植组[(108.75±66.70)m vs(113.75±63.86)m,(0.082±0.05)vs(0.077±0.051),(10.54±5.90)mm Hg vs(9.63±5.26)mm Hg)]差异均无统计学意义(P＞0.05).PBMNC组和BMMNC组的DSA显效率分别为66.67%和62.50%均显著高于对照组0%(P＜0.01,P＜0.05).两个移植组之间无差异(P＞0.05).结论 自体PBMNC移植和自体BMMNC移植均为治疗外周动脉病安全有效的新方法,两者疗效相当.     

自体骨髓单个核细胞移植对扩张型心肌病患者生活质量影响的研究

目的本研究采用组间对照，综合评价自体骨髓单个核细胞移植对扩张型心肌病患者生活质量的影响。方法应用SF-36量表；通过电话随访和当面访谈的方式，随机对45例治疗组患者和47例对照组患者进行了至少半年的生活质量随访问卷调查。结果扩张型心肌病治疗组总体健康状况（GH）、躯体功能角色受限（RP）以及心理健康（MH）等3个方面的评分分别为（63.0 21.5）、（26.7 14.2）、（83.1 15.2），而对照组分别为（47.9 24.8）、（15.6 10.4）、（69.7 20.6），均存在统计学差异（P〈0.05）。结论自体骨髓单个核细胞冠状动脉内移植对扩张型心肌病患者生活质量的改善有一定疗效。     

骨髓间充质干细胞和骨髓单个核干细胞移植治疗大鼠心肌梗死的对比研究

目的观察髓间充质干细胞（MSCs）和骨髓单个核干细胞（BMMNCs）移植对急性心肌梗死后大鼠左心功能的影响及存活情况,比较两种干细胞移植的优劣性。方法雌性Lewis大鼠45只按随机抽签法分3组：对照组、MSCs组、BMMNCs组。结扎前降支制备心肌梗死模型,MSCs组和BMMNCs组均注射等数量（2×10^6）雄性MSCs和BMMNCs,对照组注射等体积的培养基。4周后超声检测左心功能、左心室前壁厚度,免疫原位杂交检测雄性鉴别基因sry片段的表达。结果MSCs组和BMMNCs组与对照组相比：左心室射血分数分别增加22．57％、24．09％（P=0．000）,MSCs组和BMMNCs组之间比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;左心室前壁厚度增加（2．6±0．5）mm和（2．5±0．3）mm对（1．8±0．4）mm（P=0．000）;免疫原位杂交显示MSCs组与BMMNCs组sry表达阳性,对照组阴性。阳性细胞的数量相比较,BMMNCs组高于MSCs组（66．50±6．59比46．67±4．64,P=0．000）。结论MSCs和BMMNCs移植均能改善大鼠急性心肌梗死后左心功能,减轻左心室重构;移植4周后在受体心肌内存活干细胞数量BMMNCs优于MSCs。     

骨髓单个核细胞移植对大鼠脊髓全横断损伤后髓鞘碱性蛋白表达影响

目的:探讨同种异体骨髓单个核细胞(BMMNCs)移植对脊髓全横断损伤区局部微环境中髓鞘碱性蛋白表达的影响。方法:取8周龄Wistar大鼠45只,雌雄不限、每只体重200~220g,随机分为3组:实验组(n=15)、对照组(n=15)、假手术组(n=15)。对实验组和对照组大鼠建立脊髓全横断损伤动物模型。实验组造模后对脊髓横断处上下两端立即注入骨髓单个核细胞;对照组对脊髓横断处上下两端注入磷酸盐缓冲液(PBS);假手术组不损伤脊髓,仅剪除T8~10棘突和椎板后逐层缝合。于细胞移植后的1d,5d,1w,2w,4w和6w分别行BBB大鼠后肢功能评估来判断脊髓神经功能恢复情况,并采用免疫组织化学检测观察大鼠脊髓髓鞘碱性蛋白的表达。结果:(1)BBB评分结果显示各时间点假手术组均为正常范围,实验组和对照组分值随时间均逐渐增加,且实验组较对照组高(P<0.05),但均未达到正常组水平,术后4周实验组BBB评分较对照组增加显著,差异有统计学意义(P<0.05);(2)免疫组织染色结果显示各时间点实验组和对照组大鼠脊髓中髓鞘碱性蛋白的表达量高于假手术组,且实验组高于对照组(P<0.05)。结论:同种异体的骨髓单个核细胞移植可能改变了局部的微环境并上调了脊髓内髓鞘碱性蛋白的表达。     

自体外周血单个核细胞移植治疗下肢缺血性疾病的护理

下肢缺血性疾病(peripheral arterial disease,PAD)尤其是腘动脉远端小动脉闭塞性疾病的治疗一直是世界性的难题.近几年新兴的自体骨髓单个核细胞移植治疗下肢缺血取得了一定的经验[1-3].然而骨髓移植对患者多部位行骨髓穿刺,采集量大,创伤大,患者痛苦,其应用受到一定限制.我院于2005年3月至2006年6月为5例晚期下肢缺血患者经血管腔内途径移植自体外周血单个核细胞(PBMNCs),并取得了良好的效果,现将护理体会报告如下.     

骨髓单核细胞移植对溃疡性结肠炎修复过程的影响

目的:观察移植骨髓单个核细胞(BM-MNCs)对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠病变修复的作用.方法:取SD大鼠45只,其中15只用于提取BM-MNCs,移植组及PBS组各15只,均制作UC模型,移植组及PBS组经尾静脉分别注射BM-MNCs细胞悬液及PBS液1mL.正常饲养,观察大鼠的精神、进食、活动及大便情况.并于注射后3d、7d、14d每组各处死大鼠5只,光镜下观察结肠组织病变改变.结果:移植后第14天,移植组结肠黏膜病变修复程度明显优于PBS组.结论:BM-MNCs移植可以促进UC大鼠损伤结肠组织的修复.     

骨髓单个核细胞对大鼠脊髓损伤后行为功能影响的研究

目的:通过建立大鼠脊髓半横断模型,观察骨髓单个核细胞(BMMNCs)对大鼠后肢功能及受损脊髓组织中神经营养因子3(NT-3)表达的影响。方法:无菌条件下取大鼠双侧股骨和胫骨骨髓细胞,用Ficoll密度梯度离心法分离出单个核细胞备用。将104只Wistar大鼠随机分为A组(假手术组),8只;B组(PBS对照组),48只;C组(BMMNCs实验组),48只。大鼠术后1d、3d、5d、7d、14d和21d行BBB评分后,用免疫组织化学技术观察各组大鼠受损脊髓组织中NT-3的表达。结果:各个时间点BBB评分测试表明A组较B、C组分值高(P<0.05);B组分值较C组低(P<0.05)。免疫组织化学技术检测显示各个时间点C组大鼠受损脊髓中NT-3的表达量高于B组(P<0.05),A组与B、C组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:BMMNCs能够促进损伤脊髓组织中NT-3的表达,可能是其修复损伤脊髓,促进脊髓功能恢复的机制之一。     

Autologous transplantation of bone marrow mononuclear cells improved heart function after myocardial infarction

AIM: To investigate whether autologous transplantation of adult stem cells could improve post-infarcted heart function. METHODS: Bone marrow mononuclear cells (MNCs) were isolated from adult rabbits‘ tibias after coronary ligation. These cells were exposed to 5-azacytidine 10 μmol/L for 24 h on the third day of culture. After being labeled with bromodeoxyuridine (BrdU), the cells were auto-transplanted into bordering zone of the infarcted area at 2 weeks after injury. The animals were killed at 3 days, 2 weeks, 1 month, and 2 months after transplantation,respectively. The left ventricular functions, capillary density, and cardiac nerve density were measured and the differentiation of the engrafted cells was determined by immunostaining. RESULTS: BrdU-labeled MNCs were well aligned with the host cardiomyocytes. Parts of them were incorporated into capillary and arteriolar vessel wails. In addition to inducing angiogenic ligands (basic fibroblast growth factor, vascular endothelial growth factor) and imflammation cytokines (interleukin 1-β) during the early period of MNCs implantation, MNCs induced 2.0-fold increase in capillary density as well. Moreover, GAP43-positive and TH-positive nerve density were markedly higher in the MNCs-treated groups than that in the non-treated hearts. Left ventricular ejection fraction,LV dp/dtmax, and LV-dp/dtmax were 47 %, 67 %, and 55 % in MNCs-treated heart respectively, which was higher than that of the control heart, whereas left ventricular end-diastolic volume, left ventricular end-diastolic diameter,and left ventricular end-diastolic pressure were 45 %, 22 %, and 50 % respectively in MNCs-treated heart, which was lower than that of the control heart at 2 months after cell transplantation. CONCLUSION: Autologous transplantation of MNCs induced angiogenesis and nerve sprouting and improved left ventricular diastolic function.     

骨髓间充质干细胞移植对急性心肌梗死中血管内皮功能及心功能的影响

目的：探讨骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的安全性和有效性,为临床应用提供些理论依据。方法收集40例急性心肌梗死的患者的临床资料,分为BMMSC移植组（ n ＝20）和PCI组（ n ＝20）,同时于本院健康体检者中选取20例为正常组（ n ＝20）。分别于干细胞移植术前、干细胞移植术后24 h、1月、3月、6月测定血管内皮功能激活的标志物ISCAM-1、SVCAM-1、SE-selection来评价内皮功能,用彩色多普勒超声仪器及6 min步行实验评定心功能。结果移植组和PCI组SICAM-1、SVCAM-1、SE-selection水平显著高于正常组（ P ＜0．05）,6个月后移植组SICAM-1、SVCAM-1、SE-selection水平显著低于PCI组（ P ＜0．05）,且2组均显著低于术前（ P ＜0．05）,高于正常组（ P ＜0．05）。6个月后移植组EF和6 min行走试验显著高于PCI组（ P ＜0．05）,且均低于正常组（ P＜0．05）。结论骨髓间充质干细胞移植对于患者心功能的恢复效果较为理想,表明骨髓间充质干细胞移植能够对心肌梗死患者的心室重构有促进作用,且显著优于冠状动脉介入方式。     

超声观察骨髓间充质干细胞移植对兔心肌梗死心功能的影响

目的应用超声评价体外不同处理方式兔骨髓间充质干细胞（MSCs）移植于缺血心肌后对心脏功能的影响。方法采用结扎冠状动脉左前降支的方法建立心肌梗死模型,2周后分别将自体MSCs、经5-aza诱导的MSCs、骨髓单个核细胞（BMMNCs）,Dil标记后用微量注射器注射于兔缺血心肌内,并以无血清培养基注射动物为对照组。分别在术前、细胞移植前、细胞移植后2、4周之后行M型超声心动测量：左室收缩末内径（LVESD）、左室舒张末内径（LVEDD）,计算左室射血分数（LVEF）、左室短轴缩短率（LVFS）等指标。结果细胞移植后2、4周,超声心动检查发现MSCs组和5-aza诱导的MSCs组的兔心功能（LVEF、LVFS值）比对照组显著升高（P〈0.05）,而BMMNCs组仅在移植后4周明显改善（P〈0.05）;LVESD、LVEDD细胞移植组与对照组相比无显著差异（P〉0.05）。结论 MSCs、经5-aza诱导的MSCs、BMMNCs均能存活于梗死心肌中,从而改善缺血心肌后左室收缩功能。     

露蜂房纯化蛋白对急性髓系白血病患者骨髓细胞的影响

目的研究中药露蜂房纯化蛋白(nidus vespae protein-Ⅱ,NVP-Ⅱ)对急性髓系白血病(AML)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)的作用并探讨其机制。方法采用NVP-Ⅱ在体外作用于AML患者BMMNC,经光镜、电镜、Hochest33258染色法、TdT缺口末端标记(TUNEL)技术等方法检测NVP-Ⅱ对AML患者BMMNC的影响。结果不同浓度NVP-Ⅱ对AML患者BMMNC有不同程度的生长抑制和诱导凋亡作用。①光镜下观察到,与生理盐水对照组比较,NVP-Ⅱ处理组AML患者BMMNC数量明显减少,胞质内颗粒增多,并有较多的细胞碎片。②透射电镜下发现,NVP-Ⅱ处理组AML患者BMMNC细胞核染色质浓缩、碎裂,靠核膜边集呈块状,并形成凋亡小体;线粒体基质深染,呈现空泡样变及髓样变。③Hochest33258染色法显示,NVP-Ⅱ处理组AML患者BMMNC核染色质高度凝聚,致密浓染,或裂解呈碎块状,边缘光滑清晰。④TUNEL检测见阳性细胞核深染,NVP-Ⅱ处理组与生理盐水处理组比较,凋亡细胞明显增多(P<0.05)。结论NVP-Ⅱ可抑制AML患者BMMNC生长并诱导其凋亡。     

超声微泡增效骨髓干细胞移植效率的实验研究

目的在动物水平研究超声联合微泡增效骨髓干细胞(BMSCs)心肌移植的作用,为临床上提高心肌梗死后BMSCs移植效率提供一种新的思路。方法12只中国家猪分别体外分离纯化BMSCs,超顺磁性氧化铁颗粒标记;介入法建立急性心肌梗死模型,成功后14d经冠状动脉注入自体BMSCs;实验组先注入微泡后再注入BMSCs,同时行超声辐射。术后行磁共振检查;心肌做病理切光镜、透射电镜观察。结果①两组在心肌梗死区和梗死周边区磁共振上均见SPIO标记的BMSCs形成的低密度区;②实验组较对照组普鲁士蓝染色阳性细胞明显增多(P<0.01);③两组心肌超微结构无差异,但B1组见血管内皮间隙增宽。结论超声辐射微泡可增加自体BMSCs心脏的移植效率。     

骨髓间充质干细胞治疗小型猪急性心肌梗死的实验研究

目的：研究自体骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cell，MSC）经冠脉内注射治疗急性心肌梗死的效果。方法：先以球囊阻塞法制成小型猪急性心肌梗死模型。取骨髓体外培养并扩增MSC，标记后经冠脉注入，1个月后核素心肌显像检测相对心肌梗死面积、心肌灌注评分和射血分数、经导管检测左室收缩压（LVSP）、左室舒张末期压（LVEDP）、压力升高最大速率（LV＋dp／dtmax）和压力下降最大速率（LV—dp／dtmin）。并以NOGA电机械标测细胞移植前和移植后心肌缺血面积，免疫荧光法分析MSC的植入和分化情况。结果：和对照组相比，细胞治疗组射血分数[（44．1±4．3）％ vs （39．0±5．2）％，P〈0．05]、心肌灌注评分[（30．0±5．3）vs（41.8±8．8），P〈0．01]、相对心肌梗死面积[（28．6±4．7）％ vs （33．5±3．4）％，P〈0．05]、LV＋dp／dtmax[（1818±117）mm Hg／s vs （1611±115）mm Hg／s，P〈0．01，mmHg=0．133kPa]、LV—dp／dtmin[（1801±89）mmHg／s vs （1618±66）mmHg／s，P〈0．01]均显著增加，LVEDP[（9．4±1．7）mmHg vs（12．6±2．8）mmHg，P〈0．05]显著降低。病理检查发现细胞移植术后1月，原梗死心肌相关区域即可见带MSC标记物的新生心肌和血管，且该部分心肌表达阳性的肌凝蛋白重链、连接蛋白43、平滑肌肌动蛋白和Ⅷ因子相关抗原。结论：MSC体外培养扩增后经冠脉植入可在心肌梗死小型猪心肌梗死相关区域分化为具有生理功能的新生心肌和血管组织，可改善急性心肌梗死猪的心功能。     

聚乙二醇重组人粒细胞集落刺激因子对大鼠心肌梗死的影响

目的：研究聚乙二醇重组人粒细胞集落刺激因子(PEG-rhG-CSF，商品名津优力)对大鼠实验性心肌梗死的影响。方法：应用冠状动脉结扎心肌梗死模型，通过心肌梗死面积的定量组织学测定、心肌酶学检查、心肌小血管密度及心肌免疫组化染色等观测指标，评价给予津优力24h和2周后的治疗作用。结果：津优力给药1次及给药2周后，心肌梗死范围减小，心肌CK和LDH降低，心肌梗死治疗2周后，在心肌梗死区及交界区有CD34^ 细胞的存在，心肌小血管的密度增加。结论：津优力对大鼠心肌梗死模型有明确的治疗作用。     

雌激素对心肌梗死大鼠外周血干细胞及血管生成的影响

目的探讨雌激素对急性心肌梗死大鼠外周血干细胞和心肌血管生成的影响。方法结扎去卵巢SD大鼠左冠状动脉制作急性心肌梗死模型,给予苯甲酸雌二醇干预治疗,分别于急性心肌梗死24h后免疫组化法检测归巢心肌的CD34+细胞数量;于d1、3、7流式细胞术测定外周血CD34+细胞数,免疫组化法测定心肌中基质细胞衍生因子(stromalcell-derivedfactor,SDF-1)的表达,分析心梗4wk后心肌组织中毛细血管密度判断血管新生情况。结果与卵巢完整大鼠相比,去卵巢大鼠心梗后外周血和心肌组织中CD34+细胞数、SDF-1的表达和4wk后毛细血管密度明显降低,雌激素干预各组上述指标明显升高,其中,雌激素替代组最高。结论雌激素可促进大鼠心肌梗死后外周血骨髓干细胞的动员和归巢,增加毛细血管密度,改善预后,其机制可能与提高心肌SDF-1表达有关。且采用心肌梗死前雌激素替代疗效优于心肌梗死后雌激素治疗     

阿托伐他汀钙片联合骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的临床研究

目的观察阿托伐他汀钙片联合骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的临床疗效及安全性。方法将80例心肌梗死患者随机分为对照组40例和试验组40例。对照组予以阿托伐他汀钙每次20 mg,qd,口服,治疗1个月;试验组在对照组治疗的基础上,予以骨髓间充质干细胞移植。观察2组患者的临床疗效、炎症因子水平、心功能及药物不良反应的发生情况。结果治疗后,试验组和对照组的总有效率分别为92.50%(37例/40例)和82.50%(33例/40例),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,试验组和对照组的肿瘤坏死因子-α分别为(1.36±0.85)和(2.54±0.77)μg·L^-1,白细胞介素-6分别为(5.28±0.76)和(9.86±1.22)ng·L^-1,白细胞介素-8分别为(16.38±4.69)和(21.54±5.47)ng·L^-1,高敏C反应蛋白分别为(3.64±1.08)和(5.74±1.29)mg·L^-1,左心室舒张末期内径分别为(40.26±5.29)和(45.34±5.20)mm,左心室收缩末期内径分别为(53.36±5.41)和(60.42±5.37)mm,差异均有统计学意义(均P<0.05)。2组患者的药物不良反应均以轻度转氨酶升高为主,试验组和对照组的总药物不良反应发生率分别为7.50%和5.00%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论阿托伐他汀钙片联合骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的临床疗效显著,其可显著降低患者的炎症因子水平,改善心功能,且不增加药物不良反应的发生率。