激活PPAR-γ上调PTEN抑制人肾母细胞瘤G401细胞增殖及侵袭转移的实验研究

目的:研究罗格列酮对人肾母细胞瘤细胞G401增殖、迁移和侵袭能力的影响,并探讨其相关机制。方法:体外培养G401,不同浓度的罗格列酮干预G401细胞,MTT法测定细胞增殖的抑制率。选择最合适的罗格列酮浓度(10μmol/L)干预细胞,用划痕愈合实验检测细胞迁移能力的变化,Transwell侵袭小室实验检测细胞侵袭能力的变化,Western blot检测PPAR-γ、PTEN、TAKT、P-AKT、MMP-2、MMP-9蛋白水平变化;RT-PCR检测PTEN、MMP-2、MMP-9的mRNA表达变化。结果:罗格列酮可以显著抑制G401细胞增值,并呈浓度和时间依赖性(P<0.05);罗格列酮可以显著抑制G401细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05)。Western blot结果显示罗格列酮可以上调PPAR-γ、PTEN的蛋白水平,下调P-AKT、MMP-2、MMP-9水平;RT-PCR结果显示罗格列酮可以上调PTEN的mRNA水平,下调MMP-2、MMP-9的mRNA水平。结论:罗格列酮可抑制肾母细胞瘤细胞G401的增殖,其分子机制可能与激活PPAR-γ,上调PTEN、抑制PI3K/AKT信号通路有关;罗格列酮抑制G401细胞迁移和侵袭能力主要是通过激活PPAR-γ,抑制MMP-2和MMP-9的表达实现。     

NLRP3炎症小体在高糖诱导小鼠肾小管上皮细胞EMT中的作用

目的:观察NLRP3炎症小体在高糖诱导小鼠肾小管上皮细胞上皮间质转化(EMT)中的作用.方法:以小鼠肾小管上皮细胞为研究对象,高糖处理24 h后,采用real-time PCR法检测细胞表型标志分子(E钙粘素和α-SMA)和NLRP3炎症小体mRNA的表达,ELISA法检测细胞上清液中IL-1β含量.采用NLRP3炎症小体特异性抑制剂MCC950探讨NLRP3炎症小体在高糖诱导小鼠肾小管上皮细胞ETM中的作用.结果:高糖处理24 h可降低小鼠肾小管上皮细胞E钙粘素mRNA表达,上调α-SMA mRNA表达;同时上调NLRP3、pro-IL-1β和pro-caspase-1 mRNA表达,以及IL-1β分泌;抑制NLRP3炎症小体可部分逆转高糖诱导的小鼠肾小管上皮细胞EMT.结论:高糖应激可能通过激活NLRP3炎症小体促进IL-1β分泌诱导肾小管上皮细胞发生EMT.     

脂多糖通过诱导NLRP3表达促进膀胱癌细胞侵袭迁移的机制研究

目的采用脂多糖（LPS）处理膀胱癌（BC）5637细胞以模拟炎症微环境，研究炎症对BC细胞侵袭迁移的影响及由NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）介导的调控机制。方法将5637细胞分为LPS组、MCC950组、LPS/MCC950组和空白对照组4组，采用CCK-8实验检测细胞增殖活力，Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力，细胞划痕实验检测细胞迁移能力，qRT-PCR检测基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、钙黏蛋白E（E-cadhjerin）、波形蛋白（Vimentin）、NLRP3mRNA表达水平，Westernblot检测MMP-2、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、E-cadherin、Vimentin、NLRP3蛋白表达水平。结果LPS可显著增强5637细胞的增殖活力，促进其侵袭迁移及上皮间充质转化，并上调NLRP3mRNA和蛋白的表达；MCC950可显著下调NLRP3蛋白的表达，并抑制LPS促进5637细胞侵袭迁移的效应。结论LPS可通过诱导NLRP3表达来促进BC细胞侵袭迁移，NLRP3炎症小体可能是炎症状态下促进BC进展的重要因子。     

抑制线粒体活性氧自由基可减轻高糖诱导的心肌细胞焦亡和铁死亡

目的 探讨抑制线粒体氧化应激和炎症小体减轻高糖诱导的H9C2心肌细胞焦亡和铁死亡的作用,分析线粒体活性氧自由基（ROS）和炎症小体之间可能的上下游关系。方法 将H9C2心肌细胞按照随机数字表法随机分为5组。正常对照组（CON）：含25 mmol/L浓度葡萄糖的DMEM完全培养基;高糖损伤组（HG）：含35 mmol/L浓度的高糖完全培养基;高糖+线粒体抗氧化剂Mitoquinone（MitoQ）组（HG+MitoQ）：35 mmol/L高糖完全培养基中加入终浓度为0.5 μmol/mL的MitoQ;高糖+ NLRP3抑制剂MCC950组（HG+MCC950）：35 mmol/L高糖完全培养基中加入终浓度为1 μmol/mL的MCC950;高糖组+MCC950+线粒体电子传递抑制剂Rotenone（ROT）组（HG+MCC950+ROT）：35 mmol/L高糖完全培养基中加入终浓度为1 μmol/mL的MCC950和0.5 μmol/mL的ROT。各组心肌细胞干预24 h后,CCK-8法测定细胞活性;CellRox和MitoSox荧光探针分别测定心肌细胞内和线粒体氧化应激水平变化;免疫荧光法检测细胞内NLRP3炎症小体水平;Western blot检测心肌细胞中NLRP3、GSDMD和Cleaved-GSDMD（GSDMD-NT）等焦亡相关重要因子的蛋白表达和铁死亡相关因子GPX4蛋白表达。结果 与CON组相比,HG组细胞活性明显下降（P<0.01）,心肌细胞和线粒体内ROS荧光强度（P<0.01）、NLRP3免疫荧光强度（P<0.01）以及焦亡相关因子NLRP3,GSDMD和GSDMD-NT的蛋白表达（P<0.01）均明显升高,铁死亡相关因子GPX4蛋白表达下降（P<0.01）。与HG组相比,HG+MitoQ和HG+MCC950组细胞活性明显升高（P<0.01）,细胞和线粒体内ROS荧光强度（P<0.01）、NLRP3免疫荧光强度（P<0.01）以及 NLRP3、GSDMD 和 GSDMD-NT 的蛋白表达明显降低（P<0.05）,GPX4 蛋白表达增高（P<0.01）。与HG组相比,HG+MCC950+ROT组细胞活性和NLRP3、GSDMD-NT的蛋白表达无明显差异（P>0.05）;但与HG+MCC950组相比,HG+MCC950+ROT组细胞活性明显降低（P<0.01）,ROS荧光强度、NLRP3炎症小体免疫荧光以及NLRP3、GSDMD-NT的蛋白表达均明显升高,GPX4蛋白表达降低（P<0.05）。结论 MitoQ直接抑制线粒体ROS的产生减轻了高糖诱导的心肌细胞NLRP3炎症小体的生成,减少焦亡和铁死亡的发生;抑制NLRP3炎症小体减少线粒体ROS的产生;线粒体ROS和NLRP3之间可能存在着相互影响。     

罗格列酮对高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的研究罗格列酮对高糖诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）生长的影响，从而探讨其对糖尿病血管并发症的作用及机制。方法利用组织贴块法体外培养SD大鼠主动脉血管平滑肌细胞并分组给药，采用MTT比色法检测细胞生长活性；用Western blotting检测细胞增殖核抗原的表达；以流式细胞仪检测细胞周期的进程；RT—PCR检测MMP-2mRNA的水平。结果罗格列酮呈浓度依赖性抑制高糖诱导的大鼠VSMC的增殖；降低PCNA的表达（P〈0．05），明显降低细胞的S期数目百分比（P〈0．01），增加G0／G1期数目百分比（P〈0．01）；明显降低MMP-2mRNA（P〈0．01）的表达。结论从细胞分子水平说明罗格列酮可能通过降低PCNA的表达，阻止细胞进入S期，减少有丝分裂来发挥对高糖诱导的VSMC增殖的抑制作用，MMP-2在罗格列酮改善血管重构的过程中可能发挥了重要的作用。     

大黄酚通过激活NLRP3炎症小体诱导胃癌细胞焦亡的机制研究

目的探索大黄酚诱导人胃癌细胞焦亡的作用及其可能的作用机制。方法不同浓度大黄酚（0、5、10 μmol/L）和NLRP3抑制剂、caspase-1抑制剂先后处理人胃癌MKN28细胞,CCK-8法、克隆形成实验、流式细胞术检测细胞焦亡;实时荧光定量PCR检测焦亡、NLRP3炎症小体相关蛋白的mRNA水平;Western blotting检测焦亡、NLRP3炎症小体的蛋白表达水平。结果不同浓度的大黄酚（0、5、10 μmol/L）作用于MKN28细胞后,均降低了细胞存活率（P < 0.01）,并促进了细胞焦亡的发生（P < 0.01）。大黄酚呈剂量依赖性地上调胃癌MKN28细胞中NLRP3、caspase-1和白细胞介素-1β的mRNA以及蛋白表达水平（P < 0.01）。采用caspase-1抑制剂VX-765、NLPR3抑制剂MCC950抑制NLPR3炎症小体表达,可削弱大黄酚对细胞焦亡的诱导作用（P < 0.01）。结论大黄酚抑制人胃癌MKN28细胞增殖、促进LDH释放和caspase-1活性升高,诱导胃癌细胞焦亡,其作用机制与NLRP3/caspase-1通路密切相关。     

PPAR-γ激动剂抑制子宫内膜基质细胞RANTES转录和翻译

目的:探索过氧化酶增殖剂激活受体(PPAR)激动剂在人子宫内膜基质细胞中对于RANTES转录与翻译的作用。方法:Western blot测定PPAR-γ在人子宫内膜基质细胞中的表达;酶联免疫法测定PPAR-γ激动剂对于RANTES蛋白合成的作用;报告基因测定PPAR-γ激动剂对于RANTES转录的作用。结果:①PPAR-γ在子宫内膜基质细胞中表达;②PPAR-γ激动剂罗格列酮显著抑制RANTES的转录65%(P<0.01);③罗格列酮使子宫内膜基质细胞RANTES分泌减少48%(P<0.01)。结论:①子宫内膜基质细胞表达PPAR-γ;②PPAR-γ激动剂抑制子宫内膜基质细胞ANTES的转录和翻译。     

PPAR-γ在高血压血管平滑肌细胞表型转化中的作用

目的 观察过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferator activated reeeptors-γ,PPAR-γ)在高血压血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化中的作用.方法 应用基因重组技术使PPAR-γ过表达和表达抑制,Western blot方法 检测分化型VSMC标志物α-SMA和末分化型VSMC标志物OPN的蛋白表达,应用DNA合成率检测和细胞计数的方法 测定细胞增殖率,常规病理切片和HE染色观察血管形态学改变.结果 ①PPAR-γ激动剂罗格列酮可降低SHR大鼠血压,并改善丰动脉血管重构.②SHR大鼠主动脉中OPN表达增多而α-SMA表达减少,应用罗格列酮可抑制上述改变.③SHR大鼠来源的VSMC中OPN表达增多而α-SMA表达减少,细胞增殖率升高,PPAR-γ过表达使细胞增殖率降低,并抑制OPN和α-SMA的表达改变.结论 PPAR-γ可抑制高血压VSMC向未分化表型的转化,可能是其改善高血压血管重构的重要机制.     

Cyclopamine对人肺癌细胞系NCI-H460生长和增殖的影响

目的研究Hedgehog信号通路特异性抑制剂Cyclopamine对人肺癌细胞NCI-H460生长和增殖的影响。方法培养NCI-H460细胞,加入不同浓度Cyclopamine,作用不同时间,倒置显微镜下观察细胞形态变化,CCK-8法检测Cyclopamine对肺癌细胞生长和增殖的影响,同时用流式细胞仪检测Cyclopamine对NCI-H460细胞周期的影响。结果与空白对照组和Tomatidine对照组相比,2-40μmol/L的Cyclopamine作用于NCI-H460细胞后,倒置显微镜下观察,细胞立体感消失,皱缩成圆形,细胞间隙增大。CCK-8比色法显示,Cyclopamine对NCI-H460细胞增殖的抑制作用呈剂量依赖性,20μmol/L的Cyclopamine使NCI-H460细胞生长曲线下移,并可将NCI-H460细胞阻滞在G1期,明显减少其S期细胞数量,引起细胞凋亡。结论Cyclopamine对人肺癌细胞系NCI-H460生长和增殖有比较明显的抑制作用,提示大细胞肺癌的发生和发展与Shh信号转导通路的异常激活有关。     

PPAR-γ激动剂对香烟诱导大鼠慢阻肺模型肺血管炎症的作用

目的观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)对香烟诱导大鼠慢阻肺模型肺血管炎症的作用,初步探讨其可能机制。方法 40只雄性Wistar大鼠随机分为4组,正常对照组、慢阻肺模型组、罗格列酮组(ROSI组)和罗格列酮+BADGE(RB组),测量血管内径及外膜炎症细胞总数,免疫组化分析肺血管上皮细胞PPAR-γ和Toll样受体-4(TLR4)蛋白表达。结果慢阻肺模型组可见肺血管炎性细胞浸润及肺血管壁的厚度,其血管上皮细胞中PPAR-γ表达明显下降,而TLR4的表达增多,差异有统计学意义(P<0.05);与慢阻肺模型组比较,ROSI组在诱导PPAR-γ表达增多的基础上,其肺血管炎症浸润及肺血管壁增厚程度有所减轻,伴随着TLR4表达的减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论罗格列酮可能通过活化PPAR-γ,从而减轻慢阻肺模型大鼠肺血管炎症及血管重塑程度,其机制可能是通过抑制炎症通路-TLR4途径实现的。     

NLRP3炎症小体介导的巨噬细胞极化在ITP中的作用

目的 探讨在免疫性血小板减少症(ITP)中NLRP3炎症小体的活化水平及抑制NLRP3介导的炎症小体活化对M1型巨噬细胞极化与免疫功能的影响。方法 RT-qPCR法检测ITP患者(ITP组)和健康对照组(Control组)外周血单个核细胞(PBMC)与CD14⁺单核细胞中NLRP3 mRNA的表达；ELISA法检测两组血清中IL-1β与IL-18的含量；Pearson相关系数分析NLRP3、IL-1β与IL-18表达水平与血小板计数的相关性；将ITP患者来源的M0型巨噬细胞(MDMs)分为4组：IgG对照组(IgG组),MCC950处理组(MCC950组),LPS、IFN-γ与IgG处理组(LPS+IFN-γ+IgG组)和LPS、IFN-γ与MCC950处理组(LPS+IFN-γ+MCC950组);RT-qPCR与Western blot检测4组MDMs中M1型巨噬细胞标志物CD86、iNOS、MCP-1 mRNA与蛋白水平；Western blot检测各组MDMs中NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3、ASC、cleaved caspase-1与IL-β的表达；...     

激活PPAR-γ对ET-1诱导心肌肥厚及calcineurin信号通路的影响

目的：观察PPAR-γ激动剂罗格列酮对内皮素-1（ET-1）诱导心肌肥大的作用,并探讨PPAR-γ激活后抑制心肌肥厚的机制。方法：采用[3H]亮氨酸掺入法、逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）、蛋白免疫印迹（Western blot）等实验方法,观察罗格列酮对ET-1诱导培养新生SD大鼠心肌细胞肥大的作用,罗格列酮对ET-1诱导的心肌细胞钙调神经磷酸酶（calcineurin ）活性、mRNA及蛋白表达增加的影响。结果：罗格列酮可显著抑制ET-1所致心肌细胞蛋白合成增加、肥大基因表达、Calcineurin酶活性增高、mRNA及蛋白表达增加（P＜0.01）,该作用可被PPAR-γ受体拮抗剂GW9662逆转（P＜0.01）。结论：ET-1可通过激活calcineurin信号通路诱导心肌肥厚,罗格列酮以PPAR-γ依赖的方式抑制calcineurin信号通路,防止心肌肥大发生。     

游离脂肪酸激活肾系膜细胞NLRP3炎症小体信号及氧化应激机制的探讨

目的:探讨NLRP3炎症小体在游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)诱导下的肾小球系膜细胞(HBZY-1)中的表达及氧化应激在其中的影响。方法:将HBZY-1细胞分为正常对照组、不同浓度棕榈酸组、高棕榈酸+N-乙酰半胱氨酸(N-acetylL-cysteine,NAC)组。各组细胞培养6、9、12 h后采用Western blotting和RT-PCR检测各组NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白及m RNA表达,并同时观察NAC对各组蛋白及m RNA表达的影响。结果:棕榈酸刺激肾系膜细胞NLRP3炎症小体信号分子的表达变化:与对照组相比,不同作用浓度和时间的棕榈酸均可上调NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白及m RNA表达(P<0.05),且呈浓度和时间依赖性。与单纯棕榈酸组相比,NAC预处理可阻止棕榈酸诱导的NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白及m RNA表达上调(P<0.05)。结论:棕榈酸可通过氧化应激机制诱导系膜细胞NLRP3炎症小体信号的活化,参与糖尿病肾病炎症的发生。     

活化PPAR-γ对特发性血小板减少性紫癜小鼠NOS的影响

目的探讨在特发性血小板减少性紫癜（ITP）模型小鼠体内,过氧化物酶体增生物激活受体γ（PPAR-γ）对一氧化氮合酶（NOS）生成的影响。方法 ITP模型小鼠分成罗格列酮试验组、GW9662对照组和磷酸盐缓冲液（PBS）对照组,罗格列酮试验组用相同浓度（20umol/L）的PPAR-γ激活剂噻唑烷二酮（thiazolidinediones,TZD）类药物罗格列酮进行灌肠,同时设立的GW9662对照组使用PPAR-γ特异性拮抗剂GW9662的终浓度为10μmol/L,PBS对照组使用相同体积的磷酸盐缓冲液进行灌肠,用药6、12、18、24和30h后,检测小鼠血清中NOS活性和血液淋巴细胞PPAR-γmRNA表达情况。结果血清中NOS在第6,12,18,24和30h的活性,罗格列酮试验组高于GW9662对照组及PBS对照组（P均〈0.05）。在罗格列酮试验组中,NOS活性随着用药时间的延长而升高,各测量时间点NOS活性具有统计学差异（P〈0.05）,PPAR-γmRNA的表达随着时间的延长而增加（P〈0.05）,PPAR-γ的表达与NOS活性呈正相关（r=0.82,P〈0.05）。结论在ITP小鼠模型内,PPAR-γ活化剂能够以时间依赖的形式增加NOS的活性,PPAR-γ可能通过NOS途径来发挥相应的生理功能。     

芹菜素对人肺癌NCI-H460细胞增殖及凋亡的影响

目的研究芹菜素对人肺癌NCI-H460 细胞增殖及凋亡的影响。方法应用10~80 μmol/L 芹菜素处理NCI-H460 细胞,
MTT法检测细胞增殖抑制率;Hoechst 33258细胞核染色法观察细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪AnnexinV-FITC/PI双染色
法检测细胞凋亡率;Western blotting检测凋亡相关信号分子Bax、Bcl-2和caspase-3的蛋白表达水平。结果芹菜素对NCI-H460
细胞的增殖抑制作用呈浓度和时间依赖性;芹菜素处理组细胞出现核固缩、染色质凝集和核碎片化等典型的细胞凋亡特征;
NCI-H460细胞凋亡率随着芹菜素浓度增加逐渐增高;芹菜素处理组细胞Bax和caspase-3蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低。
结论芹菜素能够抑制人肺癌NCI-H460细胞的增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与上调Bax和下调Bcl-2的表达,导致Bcl-2/Bax
比值下降,caspase-3活化有关。
     

pGL3/EGR1-Bax重组载体的构建及对非小细胞肺癌细胞的转染

目的 构建早期生长反应基因1(EGR1)启动子与Bax基因共表达载体pGL3/EGR1-Bax并转染非小细胞肺癌细胞.方法 以小鼠脑组织基因组DNA为模板,采用PCR法分别扩增EGR1和Bax基因全长编码序列,分别克隆入载体pTA2,构建重组质粒pTA2/EGR1和pTA2/Bax,测序鉴定；再将EGR1与Bax基因亚克隆至pGL3-Basic载体中,构建双基因共表达载体pGL3/EGR1-Bax,测序鉴定.采用基因转染技术将基因导入非小细胞肺癌NCI-H460细胞,分别以未转染及空pGL3-Basic载体转染的NCI-H460细胞株作为空白对照组和阴性对照组,采用RT-PCR技术和Western blotting方法检测NCI-H460细胞EGR1和BaxmRNA和蛋白的表达.结果 测序鉴定证实,构建的双基因共表达载体pGL3/EGR1-Bax的EGR1、Bax序列与GenBank发布基因序列完全一致.与对照组和空载体转染组NCI-H460细胞比较,pGL3/EGR1-Bax转染组NCI-H460细胞中EGR1和Bax的mRNA表达以及Bax的蛋白表达明显增强.结论 成功构建双基因共表达载体pGL3/EGR1-Bax,并实现了EGR1和Bax基因在NCI-H460细胞中的有效表达.     

罗格列酮对大鼠血管平滑肌细胞凋亡和转化生长因子分泌的影响

目的观察罗格列酮对大鼠胸主动脉平滑肌细胞（SMC）凋亡和转化生长因子-β1（TGF-β1）水平的影响。方法采用罗格列酮处理体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞（SMC），用ELISA法检测培养基中转化生长因子-β1（TGF-β1）的水平，同时用流式细胞学和TUNEL法检测细胞凋亡。结果罗格列酮诱导SMC快速分泌TGF-β1，在0．5h内达到高峰，并且这种快速分泌可被GW9662逆转；罗格列酮诱导SMC凋亡存在浓度依赖，随着罗格列酮浓度的增加SMC凋亡率越来越高，100μmol／L时SMC凋亡率达到最高，而超过100μmol／L时，凋亡率并没有随着罗格列酮浓度的增加而增加，甚至有所下降，并且GW9662和anti—TGF-β1抗体均可逆转罗格列酮对SMC凋亡的诱导。结论罗格列酮通过诱导的激活及转化生长因子B1（PPAR-γ）的快速分泌促进血管平滑肌细胞凋亡。     

NLRP3炎性小体在胃癌细胞中的表达及对其焦亡、增殖、侵袭、迁移的影响

目的 研究胃癌细胞中NLRP3炎性小体的表达及其对增殖、侵袭和迁移的影响。并初步探讨NLRP3介导caspase-1依赖的焦亡信号通路在胃癌发展中的作用。 方法qRT-PCR和Western blotting法分别检测人胃黏膜上皮细胞(GES-1)和人胃癌细胞(MKN45及MGC803)中NLRP3、caspase-1表达;随后下调NLRP3,检测胃癌细胞NLRP3、caspase-1 mRNA和蛋白的表达;Western blotting检测GSDMD、白细胞介素(IL)-18、IL-1β蛋白表达;ELISA法检测细胞培养液上清液中IL-1β、IL-18含量;乳酸脱氢酶(LDH)实验、流式细胞术检测细胞焦亡;CCK-8法及细胞周期试剂盒检测细胞增殖情况;Transwell和划痕实验检测胃癌细胞侵袭和迁移能力。 结果NLRP3、caspase-1在胃癌细胞中较GES-1表达增高(P < 0.01)。下调NLRP3后,胃癌细胞LDH释放率及焦亡率显著降低(P < 0.01);GSDMD、IL-1β、IL-18表达降低(P < 0.01);细胞增殖阻滞在G₁期(P < 0.01);细胞增殖以及侵袭迁移能力显著减弱。 结论NLRP3在胃癌中高表达,其表达影响胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移以及其介导的caspase-1依赖焦亡信号通路关键蛋白的表达。     

CXC趋化因子配体14对高糖环境中脂肪细胞焦亡的影响

目的探讨CXC趋化因子配体14(CXCL14)对高糖暴露环境中脂肪细胞焦亡的影响。方法利用“鸡尾酒法”诱导3T3-L1细胞分化为成熟脂肪细胞,用5.5 mmol/L低糖(NG)或25 mmol/L高糖(HG)葡萄糖培养基培养脂肪细胞24 h;HG环境下用不同浓度CXCL14处理3T3-L1细胞不同时间。Western blot检测消化道皮肤素(GSDMD)、核苷酸结合寡聚化结构样受体蛋白3(NLRP3)、天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)蛋白、白细胞介素-6(IL-6)蛋白表达水平。实时荧光定量PCR检测GSDMD、NLRP3、白细胞介素-1β(IL-1β) mRNA转录水平。LDH测定试剂盒检测脂肪细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活力;Annexin V-FITC荧光检测细胞死亡情况;CCK-8法检测各组细胞增殖活力。结果高糖环境下脂肪细胞焦亡发生率升高,CXCL14处理可提高脂肪细胞增殖活力,但脂肪细胞焦亡相关指标却受到CXCL14浓度梯度的不同影响。50 nmol/L CXCL14处理可降低高糖环境下脂肪细胞GSDMD、NLRP3、IL-1β mRNA以及NLRP3蛋白的表达,下调脂肪细胞LDH活力,减少Annexin V-FITC荧光染色细胞死亡率,但25、100、200 nmol/L CXCL14对其焦亡的指标却呈反向趋势。并且50 nmol/L CXCL14干预后脂肪细胞NLRP3、Caspase-1蛋白随干预时间的延长呈先下降再上升趋势。结论CXCL14对高糖环境中脂肪细胞焦亡的影响与其浓度存在相关性。     

三七皂苷Fc对高糖损伤血管内皮细胞保护作用

目的 探讨三七皂苷Fc对体外高糖诱导大鼠血管内皮细胞损伤的保护作用。方法 体外培养大鼠血管内皮细胞（RAOEC）,加入30mmol/L D-葡萄糖造成细胞损伤。加入不同浓度三七皂苷Fc进行干预,采用CCK-8法测定细胞活性,筛选出最适用药浓度。将细胞均匀接种于6孔板内,分为4组,即正常对照组、高糖组、正常对照+Fc组、高糖+Fc组,用Hochest33342荧光染色法对各实验组进行细胞凋亡的检测;采用细胞划痕实验检测各组细胞的伤口修复情况;采用Western blot法观察各组过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPAR-γ）的蛋白表达。结果 高糖+Fc组内皮细胞凋亡率明显低于高糖组,而修复率却明显高于高糖组,差异均有统计学意义（P<0.05）;高糖+Fc组PPAR-γ蛋白表达量明显高于高糖组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 三七皂苷Fc可抑制高糖引起的血管内皮细胞凋亡,并促进高糖状态下血管内皮细胞的增殖修复。其作用机制可能与三七皂苷Fc促进高糖状态下血管内皮细胞的PPAR-γ蛋白表达有关。