HLA-G5在健康人和肝肾移植受者体内的表达分析

目的了解国内健康人和器官移植受者体内人类白细胞抗原-G5(HLA-G5)的表达情况,并探索其表达的时间规律。方法分别采集30例健康人(健康查体正常)、50例肝移植受者(肝移植术后3个月且肝功能稳定)、50例肾移植受者(肾移植术后3个月且肾功能稳定)的外周血各3ml,并采集33例肝肾移植受者术前及术后1周、4周、12周、1年的外周血各3ml。提取血清,采用酶联免疫法(ELISA)检测HLA-G5水平。结果30例健康人中,28例HLA-G5的A值低于0.5,根据标准曲线含量为0.0ng/ml,2例分别为8、9ng/ml。50例肝移植受者HLA-G5表达阳性者16例,阳性率为32%,其中4例含量高于30ng/ml。50例肾移植受者HLA-G5表达阳性者10例,阳性率为20%,有1例含量为25ng/ml。健康人、肝移植、肾移植3组血清中HLA-G5平均含量分别为0.56±0.20、8.34±1.50和3.26±0.25ng/ml。对33例肝肾移植受者进行动态检测显示,有1例患者术前和术后1周HLA-G5呈阳性,4例术后4周阳性,12例术后12周阳性,追踪至术后1年有11例阳性。结论HLA-G5在健康人体内低表达,与器官移植免疫耐受有一定相关性。在移植后移植物接受良好的情况下,HLA-G5有不同水平的表达,肝移植受者的HLA-G5表达量高于肾移植受者。33例肝肾移植受者的动态结果证实了HLA-G5的表达从mRNA转录到蛋白表达的时间为15~60d的观点,HLA-G5的表达在第60天到达高峰,并具有稳定性。     

Sysmex CA-7000全自动血凝分析系统检测项目PT、APTT、FIB性能验证实验分析

目的验证Sysmex CA-7000全自动血凝分析系统对血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)的分析性能。方法按照临床和实验室标准化研究院(CLSI)的标准和指南文件对Sysmex CA-7000全自动血凝分析仪检测PT、APTT、FIB的精密度、正确度、分析测量范围、生物参考区间及携带污染率进行了验证,并与质量目标要求和厂商声明的分析性能进行比较。结果批内精密度<1/4允许总误差(Tea)(CLIA,88),批间精密度<1/3Tea(CLIA’88),正确度试验结果满足1/2Tea(CLIA’88);分析测量范围项目FIB结果相关性好(r>0.975),线性理想(斜率接近于1);生物参考区间及携带污染率与厂商提供的相符合。结论 Sysmex CA-7000全自动血凝分析仪检测项目PT、APTT、FIB在精密度、正确度、生物参考区间、分析测量范围、携带污染率等5个方面满足质量目标要求和厂家声明的分析性能。     

ABI Quantistudio Dx实时定量PCR仪HBV-DNA检测的性能验证

 目的 验证ABI Quantistudio Dx实时荧光定量 PCR 仪 HBV-DNA 检测系统的性能。方法 参考 GB/T 22576-2008和CNAS-CL36相关文件,ABI Quantistudio Dx实时荧光定量 PCR 仪检测患者标本、质控品及卫生部临检中心室间参考物质。从以下几个方面进行性能验证:精密度、正确度、线性范围、检出限等。结果 ABI Quantistudio Dx 实时荧光定量 PCR仪 HBV-DNA 检测系统的批内精密度(批内 CV)分别为 2.09%(低浓度)、1.3%(高浓度);批间精密度(批间 CV)分别为3.92%(低浓度)、2.88%(高浓度);准确度评估以参加能力验证/室间质评的项目来判断,项目 PT 成绩为 100%,通过;系统最低检出限为50 U/ml;线性范围验证结果显示,线性回归方程为Y=1.0001X,R²=0.9976。线性范围为 1.00×10²~1.00×10⁸ U/ml。结论 ABI Quantistudio Dx 实时荧光定量 PCR 系统检测 HBV-DNA性能良好,满足临床检测需要。     

血液分析仪免疫比浊法检测C反应蛋白临床应用

目的探讨BC-5390血液分析仪免疫比浊法检测全血C反应蛋白(CRP)的临床应用。方法收集2015年3—6月德阳市人民医院就诊的患者和健康体检人员各20例EDTA抗凝全血标本,根据美国临床和实验室标准化协会(CLSI)的要求,结合实际工作对仪器的分析性能进行评价。结果 BC-5390全自动血细胞分析仪(简称BC-5390血液分析仪)检测CRP批内精密度变异系数(CV)值为2.01%,批间精密度两个浓度CV值分别为2.76%和2.70%。仪器检测线性验证回归方程:Y=0.983X+4.814,r~2=0.995。20例健康体检人员的CRP检测结果均在参考范围0~4 mg/L。BC-5390血液分析仪和QuikRead go分析仪检测全血CRP结果进行对比分析,回归方程:Y=0.833X-3.271,r~2=0.991。室温或冷藏条件保存的抗凝血标本24 h内,结果稳定性良好,相对偏差<3%。BC-5390血液分析仪检测CRP携带污染符合相应要求。结论 BC-5390血液分析仪测定全血标本的CRP性能验证指标合格,能够满足临床需求。     

朗迈UriSed型全自动尿沉渣分析仪的应用评价

目的 对朗迈UriSed型全自动尿沉渣分析仪的临床应用进行初步评价.方法 随机收集北京地区1073例住院患者和1200例健康成人的中段尿液标本.使用朗迈UriSed型全自动尿沉渣分析仪对尿液的有形成分进行分析.评价分析仪的批内、批间精密度,线性和互染率.将手工镜检的检测结果作为金标准,评价分析仪的特异度、敏感度、阳性预测值、阴性预测值和符合率.随机选取阳性标本50份,在每份标本中随机选取2个图像,将分析仪与人工识别的结果进行对比,计算符合率.采用分析仪检测健康成人的尿沉渣有形成分,制定不同性别正常人尿沉渣中红、白细胞的正常值范围.结果 分析仪检测低、中、高浓度尿液中红细胞的批内变异系数(CV)值和批间 CV值分别为13.73%、8.30%、6.20%和10.37%、8.23%、4.24%,检测白细胞的批内CV值和批间CV值分别为14.39%、8.11%、6.34%和9.44%、7.58%、4.51%.分析仪检测值与理论值具有良好的线性关系(y=0.49x-3.07,r=0.999).分析仪检测尿红细胞的特异度、敏感度、阳性预测值和阴性预测值分别为97.28%、86.42%、92.55%、94.81%,检测白细胞的特异度、敏感度、阳性预测值和阴性预测值分别为97.20%、89.50%、93.88%、95.08%;分析仪法与显微镜检法对红细胞和白细胞的检出符合率分别为94.23%和93.48%.分析仪法检测小同浓度标本间的红、白细胞的互染率分别为0.5%和0.2%.统计学分析显示,北京地区健康成人的尿红细胞、白细胞在不同性别间的差异有统计学意义(P<0.01),但在不同年龄段间的差异无统计学意义(P>0.05);健康成人尿液有形成分的参考范围为:红细胞,男性0～4.0/μl、女性0～6.0/μl;白细胞,男性0～5.0/μl、女性0～12.0/μl.结论 朗迈UriSed型全自动尿沉渣分析仪性能优良,主要指标的检测结果符合临床应用要求,并且具有快速准确、操作简便的优点.     

LC-AFS分析汞化合物形态测定条件的研究

目的 优化液相色谱与原子荧光联用测定汞化合物形态的条件.方法 实验对介质、还原剂、氧化剂等条件进行优化,确定最优测试条件为:介质10%盐酸-2%乙醇,还原剂0.5%氢氧化钾-0.5%硼氢化钾,氧化剂2%过硫酸钾,并对相关结果进行分析.结果 在优化的测定条件下,无机汞(MC)、甲基汞(MMC)、乙基汞(EMC)的检出限为0.05 ng/mL,三种汞化合物的线性范围为1~10 ng/mL,平行7次进样分析的色谱峰高相对标准偏差(RSD)分别为3.6%、3.6%和3.4%.结论 LC-AFS联用检测汞形态化合物时,介质中添加乙醇具有检出限低,精密度好等优点,对检测汞形态化合物具有实际应用价值.     

病毒性肝炎联合诊断cDNA芯片的研制与临床应用性研究

目的 制备病毒性肝炎联合诊断cDNA芯片,并进行系列优化及临床应用性研究.方法 对于基因组较小的HBV、HDV病毒,采用Primer Premier 5.0软件针对其保守区域设计特异引物,普通PCR技术制备探针;利用限制性显示PCR(RD-PCR)技术制备基因组较大且复杂的HCV芯片探针.为了便于摸索实验条件和更好地进行探针优化,先后制备3种芯片,包括HBV与HDV诊断芯片、HCV诊断芯片及HBV、HDV、HCV联合诊断芯片.结果 杂交结果显示HBV与HDV诊断芯片、HCV诊断芯片的诊断效果较为满意.从以上2种芯片中选取探针制备HBV、HDV、HCV联合诊断芯片,并对该芯片的检测质量进行初步评估:①检测线性:病毒质粒拷贝数在104～1011copies/ml之间时,芯片检测法显示了较好的线性(r分别为0.990 2、0.992 1、0.981 9,P＜0.01);②特异性:检测黄热病病毒(YFV)、乙型脑炎病毒(JEV)、登革热病毒(DV)等其他病毒样品结果均为阴性,说明该芯片特异性较好;③重复性:检测HBV、HDV、HCV的批内精密度变异系数(Cv)值为7.1%、7.2%、6.6%,批间精密度Cv值为7.9%、8.2%、7.6%;④准确性:将HBV、HDV PCR片段(共14条)、HCV限制性片段(24条)和部分临床阳性血清(PCR产物)全部进行序列测定,在GenBank中进行Blast比较,结果表明克隆基因均属于相应基因,与理论一致.为了适应临床诊断的要求,对实验条件进行优化,包括减少杂交时间、取消预杂交、将杂交温度提高到52℃等措施.在实验室对芯片进行初步评估后,对临床血清标本进行小规模批量检测实验: 用芯片法和实时定量PCR法检测HBV阳性血清(98例)、HCV阳性血清(42例)和阴性血清(130例),对两种方法进行对比,结果显示芯片法检测与实时定量PCR法有良好的相关性(HBV、HCV的r值分别为0.985 4和0.958 2),检测HBV、HCV、HDV的敏感性和特异性分别为85.7%、76.2%、80.0%和96.7%、95.0%、100%.结论 本研究研制的联合诊断芯片敏感性、特异性均较佳,临床应用前景较好.     

抗HIV融合多肽CP32M的质量分析

目的建立一种适用于分析抗HIV融合多肽CP32M含量及有关物质的方法,以及测定其水分和三氟乙酸（TFA）含量的方法。方法采用高效液相色谱法（HPLC）测定CP32M原料药中CP32M的含量。色谱条件：Zor-bax XDB-C18色谱柱,含0.1%TFA的水为流动相A,含0.1%TFA的乙腈为流动相B,梯度洗脱,流速1 ml/min,检测波长214 nm,柱温25℃。采用卡尔菲休库仑滴定法测定水分含量,采用高效液相色谱法测定样品中TFA含量。结果 3批CP32M原料药中,CP32M含量分别为（98.72±0.32）%,（99.48±0.52）%和（99.51±0.31）%（按无水物计算）,总有关物质含量为1.07%～1.18%,样品中水分含量为2.99%～3.14%,TFA含量为3.89%～4.23%。结论该方法快速简便,结果准确可靠,可用于CP32M的质量分析。