microRNA-22对调控软骨细胞自噬的影响及其在骨关节炎发病中的作用机制

目的 探讨microRNA-22对软骨细胞自噬的影响及其在骨关节炎(OA)发病中作用机制。方法 原代培养人健康、OA软骨细胞,荧光定量PCR检测microRNA-22在健康、OA软骨细胞中的表达水平;Western blot检测健康、OA软骨细胞中自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ、Ⅰ的表达水平;软骨细胞转染microRNA-22模拟物、抑制物,平板克隆形成实验检测microRNA-22对软骨细胞活性的影响,Western blot检测软骨细胞自噬相关蛋白LC3B-Ⅰ、LC3B-Ⅱ及Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)的表达水平。结果 荧光定量PCR检测结果显示,OA软骨细胞(14例)中microRNA-22表达含量(2.50±0.39)显著增高(P<0.01),约为健康软骨细胞(12例)(0.98±0.25)的2.5倍。Western blot检测结果显示,与健康软骨细胞相比,OA软骨细胞自噬相关蛋白LC3B的Ⅱ类亚型含量降低;OA软骨细胞(4例)LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值为1.25±0.13,健康软骨细胞(4例)LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值为1.85±0.21,差异具有统计学意义(P&...     

P16对正常及骨关节炎软骨细胞的调控作用研究

Ｐ１６是一种ＣＤＫ４及ＣＤＫ６激酶的抑制蛋白，可以抑制细胞的增殖，促进细胞的分化。为了研究Ｐ１６在正常及骨关节炎软骨组织中对软骨细胞的调控作用，本文用免疫组化的方法，观察了Ｐ１６在正常及骨关节炎软骨组织中的表达及分布状况。结果显示：Ｐ１６在正常软骨组织的移行层及柱状层上层表达，而在骨关节炎组织中，Ｐ１６表达紊乱。结论：Ｐ１６与软骨细胞的生长调控有关。骨关节炎软骨组织中Ｐ１６的表达紊乱说明了软骨细胞增殖与分化的紊乱，造成了软骨组织中各结构成份的分布不一致，导致软骨组织的破坏。     

SIRT1对肌卫星细胞和骨骼肌再生的影响

肌卫星细胞及其子代成肌前体细胞在骨骼肌再生中起关键作用。衰老引起肌卫星细胞数量减少,骨骼肌的再生修复能力受损,肌细胞凋亡速度加快,最终导致肌肉萎缩、肌肉力量下降。SIRT1是一种NAD+依赖的组蛋白去乙酰化酶,介导能量代谢调节、细胞增殖分化、氧自由基代谢、基因表达等多种生理过程。SIRT1可通过调节肌卫星细胞的活化、增殖、分化,对骨骼肌的再生能力产生影响。运动训练上调SIRT1的活性和表达水平,促进SC的活化增殖,改善骨骼肌再生。     

SIRT6与衰老的关系及其在运动促进健康中的作用机制研究进展

SIRT6是Sirtuins蛋白家族成员之一,近期研究发现SIRT6可调节多条增龄相关细胞信号通路,具有延缓衰老进程和延长健康寿命的作用。运动作为延缓衰老和延长健康寿命的有效干预措施,可改善身体机能和健康状况,但机制尚不完全清楚。研究显示,运动可提高机体组织SIRT6表达水平,并且已有研究对SIRT6介导运动有益效应的可能机制进行了探讨。本文从SIRT6与衰老的关系入手,梳理SIRT6介导运动延缓衰老进程及预防衰老相关疾病的潜在机制,并探讨运动对SIRT6表达和功能的影响,以期完善对运动延缓衰老、延长健康寿命机制的认识。     

雌激素对软骨细胞胶原表型表达的影响

目的 :观察雌激素对体外培养兔关节软骨细胞胶原表型表达的影响。方法 :体外培养雌兔关节软骨细胞 ,随机分为A、B两组 ,A组中加入 1 7β -雌二醇 0mol/L、1 0 - 6 mol/L、1 0 - 7mol/L、1 0 - 8mol/L、1 0 - 9mol/L、1 0 - 10 mol/L、1 0 - 11mol/L、1 0 - 12 mol/L干预 72小时 ;B组先用 1 0ng/mlIL - 1 β干预 2 4小时 ,随后分别加入 0mol/L、1 0 - 6 mol/L～ 1 0 - 12 mol/L 1 7β -雌二醇作用 72小时。采用RT-PCR方法观察软骨细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原表达。结果 :1 0 - 6 mol/L雌二醇或单用IL - 1 β均抑制正常软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA表达 ,低浓度雌二醇 (1 0 - 11、1 0 - 12 mol/L)能够对抗IL - 1 β的抑制作用 ;所有软骨细胞均未表达Ⅲ型胶原mRNA ;几乎所有浓度雌二醇 (1 0 - 12 mol/L除外 )均诱导软骨细胞表达Ⅰ型胶原。结论 :雌激素对关节软骨细胞胶原表型表达的调控作用随其浓度变化而不同。对变性软骨细胞而言 ,低于生理浓度的雌激素 (1 0 - 12 mol/L)对维持其胶原表型最适宜。     

雌激素对软骨细胞蛋白多糖表型表达的影响

目的 :观察雌激素对体外培养兔关节软骨细胞蛋白多糖表型表达的影响。方法 :体外培养雌兔关节软骨细胞 ,随机分为A、B两组 ,A组中加入 1 7β-雌二醇 0mol/L、1 0 -6mol/L、1 0 -7mol/L、1 0 -8mol/L、1 0 -9mol/L、1 0 -10 mol/L、1 0 -11mol/L、1 0 -12 mol/L干预 72小时 ;B组先用 1 0ng/mlIL-1 β干预 2 4小时 ,随后分别加入 0mol/L、1 0 -6mol/L～ 1 0 -12 mol/L 1 7β-雌二醇作用 72小时。采用RT-PCR方法观察软骨细胞核心蛋白、Decorin、BiglycanmRNA的表达。结果 :A组中 ,1 0 -6mol/L雌二醇组不表达Decorin,1 0 -9～1 0 -11mol/L雌二醇组Decorin表达量较正常对照减少 ;BiglycanmRNA表达量与空白对照无明显差异。B组中 ,IL -1 β +1 0 -7、1 0 -8mol/L雌二醇组核心蛋白mRNA表达量较空白对照明显减少 ;IL -1 β +1 0 -7～ -11mol/L雌二醇组DecorinmRNA表达量较单用IL -1 β组有所增加 ;除IL -1 β +1 0 -12 mol/L组外 ,其余各组表达BiglycanmRNA明显减少。结论 :雌激素对关节软骨细胞蛋白多糖表型表达的调控作用随其浓度变化而不同。高浓度雌激素 (1 0 -6mol/L)抑制正常软骨细胞蛋白多糖合成。对变性软骨细胞而言 ,低于生理浓度的雌激素对维持其蛋白多糖表型较适宜。     

大鼠骺板软骨细胞P物质的表达

研究P物质 (substanceP ,SP)在不同年龄大鼠骺板软骨细胞中的表达。对 2、4、8、12、16、2 4、30周龄大鼠的胫骨骺板进行免疫组化染色并结合计算机图象分析技术对SP基因表达进行定位与半定量分析。结果发现 ,2周龄大鼠骺板软骨细胞各个区域均未见SP表达 ,4、8、12、16、2 4、30周龄大鼠骺板静止及增殖期软骨细胞未见SP免疫阳性染色 ,肥大区及钙化区软骨细胞可见SP阳性表达 ,其表达强度从 4周龄始随年龄的增长而增强 ,到 12周龄时达峰值 ,16周龄始SP阳性表达强度随年龄增长而逐渐下降 ,30周龄则偶见SP表达。本研究证实生长板肥大区软骨细胞可以表达SP ,SP的表达强度与骨龄有关     

人胰岛素样生长因子1基因转染关节软骨细胞及其稳定表达

目的　研究人胰岛素样生长因子 1 (hIGF 1 )基因转染关节软骨细胞获得稳定表达的可行性。方法　用脂质体转染法将含有hIGF 1cDNA的真核表达载体转染兔关节软骨细胞 ,经G4 1 8筛选 ,形成阳性细胞克隆。继续培养 4周 ,原位杂交检测hIGF 1的表达 ,免疫细胞化学检测Ⅱ型胶原的表达。结果　G4 1 8筛选后所获得的阳性细胞克隆 ,原位杂交检测表明hIGF 1基因得到稳定表达 ,免疫细胞化学检测显示转染后的软骨细胞仍表达Ⅱ型胶原。结论　外源性hIGF 1基因能够在软骨细胞内获得稳定表达 ,而转染后的软骨细胞仍能稳定表达Ⅱ型胶原     

药透治疗对兔膝骨关节炎软骨细胞凋亡和相关基因表达的影响

目的 评价中药舒筋止痛液配合离子导入治疗兔膝骨关节炎的效果和机制. 方法 采用兔改良Hulth膝骨关节炎模型(即前交叉韧带切断+内侧半月板切除).24只骨关节炎模型兔随机分为3组:药透组,兔患侧膝关节放置中药舒筋止痛液药垫,应用中频电疗仪进行离子导入治疗;阳性对照组,兔饲服盐酸氨基葡萄糖胶囊;空白对照组,不给予任何治疗.分别于造模前、治疗前(造模4周)、治疗4周和8周时进行血清一氧化氮(NO)含量检测,治疗4周和8周时采用流式细胞术检测软骨细胞凋亡率,RT-PCR检测软骨细胞Ⅱ犁胶原和软骨聚集蛋白聚糖基凶的表达水平. 结果 治疗4周时,药透组和阳性对照组血清NO含量低于空白对照组,8周时药透组血清NO含量低于阳性对照组和空白对照组;治疗4周和8周时,药透组和阳性对照组的软骨细胞凋亡率均明显低于空白对照组;治疗4周时,药透组和阳性对照组软骨细胞Ⅱ型胶原和软骨聚集蛋白聚糖基因表达水平高于空白对照组,8周时,药透组上述两种基因表达水平高于阳性对照组和空白对照组. 结论 中药舒筋止痛液配合离子导入对骨关节炎有一定的治疗作用,其机制与抑制软骨细胞凋亡进程和炎性因子分泌,提高相关基因表达水平以促进软骨修复有关.     

姜黄素对IL-1β体外诱导兔关节软骨细胞分泌IL-8、sICAM-1和NO、PGE_2的影响

目的:研究姜黄素对兔软骨细胞体外诱导分泌白介素8(IL-8)、sICAM-1和一氧化氮(NO)、前列腺素(PGE2)的影响。方法:将10μg/L浓度的白介素1β(IL-1β)分别与低、中、高浓度的姜黄素共育于兔关节软骨细胞,用IL-1β体外诱导兔软骨细胞分泌IL-8、sICAM-1和NO、PGE2,采用ELISA法检测兔软骨细胞分泌IL-8和sICAM-1的量,分别采用硝酸还原酶法和ELISA酶联免疫竞争法测定细胞上清液NO含量和PGE2含量。结果:IL-1β(10μg/L)组兔软骨细胞分泌的IL-8和sICAM-1较空白对照组升高,姜黄素对IL-1β诱导分泌的IL-8和sICAM-1起抑制作用,同时其对IL-1β诱导产生的NO、PGE2也起抑制作用。结论:姜黄素可显著抑制IL-1β刺激兔软骨细胞分泌促炎症因子IL-8和sICAM-1,并可显著抑制NO、PGE2途径,对软骨细胞具有一定的保护功能。     

白介素-1及地塞米松对人髁状突软骨细胞增殖、代谢及前胶原基因表达的影响

观察白介素－１及地塞米松对人下颌骨髁状突软骨细胞增殖、代谢及前胶原基因表达的影响。方法采用体外细胞培养、同位素掺入及狭缝杂交方法。结果ＩＬ－１具有抑制细胞增殖及胶原蛋白合成的作有行塞米松一方面可促进细胞增殖，但同时却抑制了其胶原合成。     

黄芪对过氧化损伤软骨细胞凋亡及Bim蛋白表达的影响

目的：观察黄芪（astragalus）对体外关节软骨细胞过氧化损伤中细胞凋亡及Bim蛋白表达的影响。方法：原代培养兔膝关节软骨细胞,采用Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光法进行鉴定,分为正常组、过氧化氢损伤对照组（损伤组）和过氧化氢损伤＋黄芪干预组（黄芪组）。损伤组采用终浓度为0．2mmol／L的过氧化氢制造体外软骨细胞过氧化损伤模型,黄芪组将终浓度分别为0．02、0．1、0．5g／L的黄芪在过氧化氖损伤前60min加入。测定各组细胞活力（MTT法）、细胞凋亡率（流式细胞术）、Bim蛋白含量（免疫组化染色）、培养上清LDH活性（紫外分光光度法）。结果：与正常组比较,损伤组细胞活力显著降低,细胞凋亡率增加,Bim蛋白表达增加,培养上清LDH活性显著上升。黄芪组与损伤组比较,细胞活力显著升高,细胞凋亡率下降,Bim蛋白表达降低,培养上清LDH活性显著下降。结论：黄芪能降低细胞凋亡率和Bim蛋白的表达,抵抗过氧化氢造成的体外软骨细胞过氧化损伤。     

成纤维细胞生长因子对关节软骨细胞转化生长因子β1作用的免疫组织化学观察

目的观察成纤维细胞生长因子对培养兔关节软骨细胞转化生长因子β１的表达。方法培养１月龄新西兰兔关节软骨细胞，在每次换液时加入成纤维细胞生长因子１００ｎｇ／ｍｌ，铺满后收集细胞，作关节软骨细胞转化生长因子β１常规及电镜免疫组织化学观察。结果光镜下实验组细胞明显呈棕色，电镜下细胞膜表面有明显的胶金颗粒黏附。结论成纤维细胞生长因子能促进关节软骨细胞转化生长因子β１的表达。     

microRNA-196a2单核苷酸多态性对靶基因IL-2表达的影响

目的观察基因单核苷酸多态性（SNP）对成熟microRNA（miRNA）-196a2在人角质形成细胞HaCaT细胞中表达水平的影响,及对预测的靶信使RNA（mRNA）IL-2 3＇非翻译区（UTR）结合能力的影响,探讨miRNA-196a2 SNP是否与皮肤病等自身免疫性疾病关联。方法在HaCaT细胞中转染构建miR-196a2-T（野生型）和miR-196a2-C（突变型）的表达质粒,RT-PCR检测表达效果;将两种基因型的表达质粒与预测的靶mRNA IL-2 3＇UTR的报告基因质粒共转染细胞,双荧光素酶报告基因实验分别检测结合能力,并使用SPSS17.0软件统计分析。结果成功构建miR-196a2-T/C表达质粒和IL-23＇UTR报告基因质粒;miRNA-196a2野生型和突变型的表达质粒在HaCaT细胞中的表达水平无显著差异（P〉0.05）;IL-2是miR-196a2的靶基因,SNP影响miR-196a2与IL-2 3＇UTR的结合（P〈0.05）。结论 MiR-196a2可与IL-2结合调节其转录后水平,从而参与免疫反应,可能影响多种皮肤病等自身免疫性疾病的进程。     

运动对衰老骨骼肌卫星细胞成肌分化中线粒体活性氧生成的影响及调控机制

目的:观察耐力运动训练对衰老骨骼肌卫星细胞成肌分化中线粒体活性氧(ROS)生成的影响,并探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1(PGC-1α)对ROS生成调控的潜在机制。方法:C57BL/6小鼠分为青年对照组(YN组,2月龄,12只)、老年对照组(ON组,12月龄,12只)和老年运动训练组(OT组,12月龄,12只),其中OT组进行中等强度跑台训练(0°,17 m/min,25 min/天,5天/周)。12周后,HE染色鉴定骨骼肌萎缩程度。两步酶消化法分离骨骼肌卫星细胞,原代培养并体外诱导成肌分化24 h。倒置显微镜观察卫星细胞成肌分化程度,测定线粒体呼吸功能、细胞ROS水平、线粒体ROS生成速率、肌球蛋白重链(MyHC)各亚基mRNA表达,及MyHC、PGC-1α、Tfam、COXⅣ、MnSOD蛋白表达量。结果:与YN组比较,ON组肌纤维横截面积、肌管形成数量、My-HC蛋白表达、MyHCⅠ、MyHCⅡa、MyHCⅡx mRNA表达、态3呼吸速率(ST3)、呼吸控制比(RCR)和PGC-1α、Tfam、COXⅣ、MnSOD蛋白表达均显著降低(P<0.05～0.01),ON组态4呼吸速率(ST4)、细胞ROS水平、线粒体ROS生成速率及MyHCⅡb mRNA表达显著升高(P<0.05～0.01)。与ON组比较,OT组湿重/体重比值、肌纤维横截面积、肌管形成数量、MyHC蛋白表达、MyHCⅠ、MyHCⅡa、My-HCⅡx mRNA表达、ST3、RCR和PGC-1α、Tfam、COXⅣ、MnSOD蛋白表达均显著升高(P<0.05～0.01),OT组细胞ROS水平、线粒体ROS生成速率及MyHCⅡb mRNA表达显著降低(P<0.05～0.01)。结论:耐力运动训练提高衰老骨骼肌卫星细胞成肌分化中PGC-1α表达,继而通过上调Tfam和MnSOD提高线粒体能量代谢,减少线粒体ROS产生,以促进成肌分化。     

玻璃酸钠上调miR-92a-3p表达保护IL-1β诱导的软骨细胞损伤

目的:探讨玻璃酸钠(HA)对白细胞介素1β(IL-1β)诱导的软骨细胞损伤的影响及作用机制.方法:取人软骨细胞第3代对数生长期的细胞进行试验.部分软骨细胞分别转染miR-92a-3p抑制剂(inhibitor)、miR-92a-3p模拟物(mimics)和相应对照(inhibitor-NC、mimics-NC)至48 ...     

Cyclin D1、Rb和P16基因在脑星形细胞瘤中表达的研究

 目的通过检测脑星形细胞瘤组织中Cyclin D1、Rb和P16基因蛋白表达,分析其表达变化与不同病理类型肿瘤的相关性.方法选用54例Ⅰ～Ⅳ级星形细胞瘤手术后存档蜡块标本为实验标本,应用流式细胞术(FCM)分别定量检测Ⅰ～Ⅳ级星形细胞瘤组织中Cyclin D1、Rb和P16基因蛋白表达量.结果Cyclin D1蛋白的表达量随肿瘤恶性度的升高而显著增加,与病理组织学分级呈明显相关性(P＜0.01);Rb蛋白和P16蛋白表达量(F1值)在低恶性组升高,高恶性组降低,两组相比差异有显著性意义(P＜0.05或P＜0.01).结论Cyclin D1基因蛋白表达随星形细胞瘤恶性度升高而增强;Rb和P16在高恶性度星形细胞瘤均有不同程度的表达缺失,说明细胞周期调节因子的改变在肿瘤的演化中起重要作用.     

SIRT1基因的rs2273773和rs7895833突变与汉族人群冠状动脉疾病风险相关性分析

目的旨在调查汉族人群冠状动脉疾病患者SIRT1基因rs2273773和rs7895833的单核苷酸多态性。方法共纳入77例冠状动脉疾病患者和80例对照者。所有冠状动脉疾病患者通过血管造影术确诊。通过巢式聚合酶链反应测定SIRT1基因rs2273773和rs7895833多态性的基因分型。结果发现在中国汉族人群中,冠状动脉疾病患者和对照组SIRT1基因rs2273773和rs7895833的基因型频率差异无统计学意义（P>0.05）。本研究人群具有相比于发表的荷兰人群rs7895833的显著不同的等位基因频率。结论SIRT1基因遗传变异体rs2273773和rs7895833与中国汉族人群冠状动脉疾病无关。     

53BP1蛋白对P53转录调控活性的影响

目的：探索含有BRCT结构域的P53分子结合蛋白53BP1调控P53转录活性的机制。方法：通过PCR的方法获得缺失不同结构域的53BP1基因突变体53BP1△1，53BP1△2，53BP1△3与53BP1△4，并采用双荧光素酶报告基因系统分析了它们对P53蛋白转录活性的影响。结果与结论：野生型53BP1蛋白可以明显提高P53的转录活性，其C端的BRCT结构域与核定位信号的存在为必不可少，而N端与P202蛋白相互结合结构域的存在也可以促进P53的转录活性．提示53BP1蛋白不同功能结构域之间的协同作用是保证其行使正常生理功能的前提条件。     

复元胶囊对膝骨关节炎患者血清MMP-3和TIMP-1表达变化的影响

目的观察复元胶囊治疗膝骨关节炎（KOA）患者血清基质金属蛋白酶-3（matrix metalloproteinase-3,MMP-3）和基质金属蛋白酶抑制因子-1（tissue inhibitor of metalloproteinase - 1, TIMP - 1）的表达变化。方法将60例辨证为肝。肾不足、筋脉瘀滞证的KOA患者随机分为两组,治疗组口服复元胶囊,对照组口服仙灵骨葆胶囊,4W为1疗程,共服用3疗程。另将30例健康查体者纳入健康组。治疗前后收集血清,采用酶联免疫吸附试验检测MMP-3和TIMP-1的表达,观察药物不良反应。结果治疗前治疗组、对照组血清MMP-3、TIMP-1水平较健康组明显增高（P〈0．05）;治疗后治疗组和对照组血清MMP-3、TIMP-1水平较治疗前明显降低（P〈0．05）,未见明显的毒副作用。结论复元胶囊通过调节MMP-3和TIMP—1表达变化发挥治疗KOA的作用。