HLA-G蛋白在滋养层细胞的表达及意义

目的 探讨人类白细胞抗原G（HLA-G）蛋白在妊娠不同阶段和不同种类滋养细胞的表达差异及生物学意义。方法 应用免疫组化法（SP）检测30例早孕绒毛、30例中孕胎盘、36例晚孕胎盘中HLA-G蛋白的表达情况。结果 在表达的时间上，HLA-G蛋白强表达于早期绒毛和中期妊娠胎盘中，而在晚期胎盘为弱表达，差异显著（P〈0．01）；在表达的部位上，HLA-G蛋白仅表达于绒毛外滋养层细胞。结论 HLA-G蛋白在不同孕期及不同种类滋养层细胞表达的差异．提示其可能参与了滋养细胞的有节制侵袭。     

人类白细胞抗原G、E在人胎盘组织中的表达及其意义

用原位杂交法分别检测人类白细胞抗原G、E（HLA—G、E）mRNA及蛋白质在人正常早孕绒毛组织、晚孕胎盘组织中的表达。结果：在人正常早孕绒毛组织中的绒毛细胞滋养细胞、合体滋养细胞和绒毛外滋养细胞（EVCT）内均有HLA—G、EmRNA及HLA-E蛋白质表达，而HLA-G蛋白质仅在EVCT内表达：晚孕胎盘组织中HLA-G、EmRNA及蛋白质表达于蜕膜板内的EVCT及羊膜上皮细胞。结论：HLA-E表达于人正常早孕绒毛组织中所有类型的滋养细胞及晚孕胎盘组织中的EVCT和羊膜上皮细胞。抗人HLA-G单克隆抗体4H84仅能检出人胎盘组织中EVCT及羊膜上皮细胞内的HLA-G蛋白。图12参10     

纤溶酶原激活物抑制剂-1在胎盘源性疾病中的作用及其调控因素

纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor 1,PAI-1)在胎盘组织、蜕膜等妊娠组织中高表达，与胎盘源性疾病发生发展密切相关。胎盘滋养细胞的PAI-1水平受到各种激素、细胞因子、免疫细胞、遗传性基因多态性等因素的共同调控。PAI-1除了抑制纤维溶解、促进止血、预防母胎界面出血的作用外，还可能发挥着阻止细胞外基质降解、降低滋养细胞迁移或侵袭能力、调控细胞衰老的作用。本文就PAI-1的调控因素及其在胎盘源性疾病中的可能作用进行探讨。     

HLA-G蛋白在滋养层细胞的表达及意义

目的 探讨人类白细胞抗原G(HLA-G)蛋白在妊娠不同阶段和不同种类滋养细胞的表达差异及生物学意义。方法 应用免疫组化法(SP)检测30例早孕绒毛、30例中孕胎盘、36例晚孕胎盘中HLA-G蛋白的表达情况。结果 在表达的时间上,HLA-G蛋白强表达于早期绒毛和中期妊娠胎盘中,而在晚期胎盘为弱表达,差异显著(P<0.01);在表达的部位上,HLA-G蛋白仅表达于绒毛外滋养层细胞。结论 HLA-G蛋白在不同孕期及不同种类滋养层细胞表达的差异,提示其可能参与了滋养细胞的有节制侵袭。     

20-羟二十烷四烯酸对人胎盘绒毛膜滋养细胞生物学行为的影响

目的探讨20-羟二十烷四烯酸（20-HETE）对人胎盘绒毛膜滋养细胞生物学行为的影响。方法体外培养人胎盘绒毛膜滋养细胞,分成正常对照组、药物介质组、20-HETE组、HET0016组,分别加入细胞培养基、二甲基亚砜、20-HETE及20-HETE抑制剂HET0016作用48h;采用ELISA法检测人胎盘绒毛膜滋养细胞基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）浓度,RT-PCR法检测人胎盘绒毛膜滋养细胞MMP-9、NGALmRNA表达。结果与正常对照组比较,药物介质组人胎盘绒毛膜滋养细胞MMP-9、NGAL浓度及mRNA相对表达量差异均无统计学意义（均P＞0.05）,20-HETE组人胎盘绒毛膜滋养细胞MMP-9、NGAL浓度及mRNA相对表达量均明显降低（均P＜0.05）,HET0016组人胎盘绒毛膜滋养细胞MMP-9、NGAL浓度及mRNA相对表达量均明显升高（均P＜0.05）。结论20-HETE可抑制人胎盘绒毛膜滋养细胞MMP-9、NGAL浓度及mRNA表达,而其抑制剂HET0016起促进作用。     

Ki-67的表达在胎盘绒毛滋养细胞生存活性评价中的作用

目的：探讨Ki-67的表达在胎盘绒毛滋养细胞生存活性评价中的作用.方法：应用免疫组化MaxVision法检测Ki-67在48例自然流产、48例葡萄胎和25例早期正常妊娠（作为对照组）妇女的胎盘绒毛滋养细胞中的表达情况.结果：葡萄胎组中Ki-67强阳性表达显著高于对照组和自然流产组（P＜0.01）.结论：在胎盘绒毛滋养细胞中,Ki-67表达降低可能导致自然流产,过表达则可导致肿瘤的发生.     

KAI1和P53在滋养细胞疾病组织中的表达

目的：研究KAI1和P53在滋养细胞疾病组织中的表达,探讨其在滋养细胞疾病中的表达及意义。方法：应用免疫组织化学技术检测滋养细胞疾病与正常绒毛组织中KAI1和P53蛋白的表达,并用原位分子杂交技术检测KAI1mRNA的表达和KAI1基因扩增情况。结果：①KAI1和KAI1mRNA在滋养细胞肿瘤组织中的表达低于正常绒毛,二者与患者年龄及浸润程度相关（P〈0.05）。②滋养细胞肿瘤组织中KAI1基因扩增阳性率与正常绒毛比较差异无统计学意义（P〉0.05）。③P53蛋白在滋养细胞肿瘤组织中的表达高于正常绒毛。④P53蛋白和KAI1蛋白表达之间无明显相关（P〉0.05,rs=-0.8）。结论：KAI1和P53与滋养细胞肿瘤的发生、发展有关,可望作为早期诊断、评估肿瘤细胞侵袭转移潜能的指标之一。     

KLF8在人早孕绒毛组织中的表达及其意义

目的：通过检测正常孕妇早孕期绒毛组织中双向转录因子Krüppel-like factor 8（KLF8）的定位及表达,探讨其在早孕期滋养细胞侵袭中的作用。方法：选择2012年3月至2012年6月在重庆医科大学附属第一医院门诊孕6～11周进行选择性流产的22例正常孕妇为研究对象,取绒毛组织标本,采用免疫组化SP法检测各组孕妇绒毛组织中KLF8蛋白的定位,实时荧光定量PCR技术检测各组孕妇绒毛组织中KLF8 mRNA表达水平,采用蛋白印迹法检测各组孕妇绒毛组织中KLF8、基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）蛋白的表达水平。结果：（1）正常孕6～11周绒毛组织中均有KLF8蛋白表达,主要定位于绒毛组织滋养层中的细胞滋养细胞和合体滋养细胞。（2）KLF8 mRNA 随妊娠周数增加而逐渐升高,并在孕8～10周达到高峰（孕8周最高）,而后急剧降低。（3）正常早孕绒毛组织中KLF8、MMP-9蛋白表达水平同样随妊娠周数增加而逐渐升高,并在孕8～10周达到最高峰（孕9周最高）,而后逐渐降低。（4）正常早孕绒毛组织中KLF8蛋白及MMP-9蛋白表达呈正相关关系,相关系数r为0.66（P<0.001）。结论：KLF8在正常早孕组织中定位于滋养层细胞尤其是与侵袭密切相关的细胞滋养细胞中,且表达变化与MMP-9蛋白水平以及滋养细胞浸润能力相吻合,提示KLF8可能参与胚胎植入及胎盘形成过程中滋养细胞浸润活性调控。     

关于子痫前期患者血清及胎盘组织中胎盘生长因子表达变化的研究

目的研究正常妊娠母体和子痫前期（PE）母体胎盘生长因子（PLGF）在外周血和胎盘组织中表达差异。探讨子痫前期（PE）的发病机制与PLFG的相关性。方法随机选择,研究组：足月子痫前期孕妇50例;对照组：同期正常足月分娩孕妇50例。两组孕妇年龄、体重、孕周无统计学差异,均无其他妊娠合并症及并发症。孕妇住院后,于次日清晨,检测静脉血清中PLFG。产后立即采集胎盘标本（母体面中央处）。用高清晰彩色病理图像免疫组化自动测量系统进行分析,测定视野内胎盘合体滋养细胞阳性染色的灰度。结果对照组血清PLGF：（147.55±86.66）ng/L,PE组血清中PLGF：（50.41±8.86）ng/L,两组数据显著差异（P〈0.05）。两组平均灰度值,对照组（20098.4±5.7）,研究组（15111.8±6.1）,两组数据存在显著差异（P〈0.05）。对照组足月胎盘组织中,绒毛发育良好,绒毛干血管扩张明显,间质细胞少,可见较多的合体细胞结节及合体细胞桥。研究组胎盘绒毛发育欠佳,绒毛血管扩张不良,间质细胞增生,滋养细胞层的合体细胞结节及合体细胞桥较少。结论 PLGF在PE组孕妇的外周血和胎盘组织中表达降低,可能与PE的病因及病理生理相关,子痫前期患者胎盘合体滋养细胞存在超微结构破坏,导致物质交换障碍。     

绒毛外滋养细胞侵袭异常与相关妊娠早期疾病的研究进展

在人类妊娠中,早期胎盘的形成和发育通过绒毛外滋养细胞(EVTs)对蜕膜和母体子宫肌层的侵袭实现。EVTs对母体子宫的侵袭是非特异性的,不仅可侵入母体子宫的结缔组织重塑子宫螺旋动脉,还可侵入母体子宫内的其他结构,包括子宫壁内的腺体、静脉和淋巴管等。EVTs对母体子宫侵袭不足与一系列妊娠早期并发症的发生均密切相关,但具体机制目前尚未明确。因此,充分了解EVTs的侵袭功能和途径可以为理解正常胎盘发育过程中EVTs的侵袭提供理论基础,也可为因EVTs侵袭异常导致的相关妊娠疾病(如复发性流产、先兆子痫和输卵管妊娠)研究提供新思路。     

重度子痫前期患者胎盘绒毛外滋养细胞VCAM-1、E-selectin的表达及意义

目的探讨子宫胎盘界面绒毛外滋养细胞（EVCT）上血管细胞粘附分子（VCAM-1）及E-选择素（E—selectin）的表达特点以及与妊娠期高血压疾病的关系。方法采用免疫组织化学法观察20例重度子瘸前期胎盘（妊高征组）以及孕周相配的20例正常妊娠胎盘（对照组）子宫胎盘界面蜕膜中绒毛外滋养细胞VCAM-1、E-selectin的表达;光镜下计算EVCT阳性染色强度,并用医学图象分析软件测定EVCT阳性染色的平均光密度值（MOD）。结果与正常对照比较,子瘸前期患者子宫胎盘界面EVCT上VCAM-1、E-selectin的染色强度及MOD值均降低。差异有统计学意义（P〈0．05、P〈0．01）。结论子痫前期子宫胎盘界面EVCT上血管内皮细胞特性的粘附分子VCAM-1、E-selectin的表达减少。可能引起滋养细胞对子宫壁和血管的浸润性降低,导致子宫胎盘血管形成障碍。     

缺氧共培养血管内皮细胞对绒毛外滋养细胞侵袭力的影响

目的 探讨在缺氧共培养条件下血管内皮细胞对绒毛外滋养细胞侵袭力的影响.方法 绒毛外滋养细胞在缺氧下单独培养作为对照组,绒毛外滋养细胞与血管内皮细胞用Transwell小室建立缺氧共培养作为观察组.应用荧光定量PCR、Western blot方法分别检测绒毛外滋养细胞基质金属蛋白酶9(MMP9)/基质蛋白酶抑制剂1(TIMP1)mRNA及蛋白的表达;应用Transwell侵袭模型检测缺氧共培养下绒毛外滋养细胞侵袭力的变化.结果 与对照组比较,观察组的绒毛外滋养细胞MMP9 mRNA及蛋白的表达均明显降低(均P＜0.01),TIMP1 mRNA及蛋白的表达无明显变化(均P＞0.05);观察组的绒毛外滋养细胞侵袭力较对照组明显降低(P＜0.01).结论 缺氧共培养条件下,血管内皮细胞可下调绒毛外滋养细胞MMP9基因的表达并降低绒毛外滋养细胞侵袭力.     

HLA-G与原因不明复发性流产

HLA-G诱导的母胎免疫耐受是保证胎儿免遭母体排斥、妊娠得以顺利进行的关键。HLA-G属非经典HLA-Ⅰ类抗原,可在胎盘绒毛外滋养细胞选择性高表达,主要通过与NK、T细胞表面的杀伤抑制性受体结合,激活胞内免疫受体酪氨酸抑制基序,抑制杀伤及细胞毒活性。滋养细胞HLA-G表达降低或异常表达,影响其与NK、T细胞的结合而阻碍抑制性信号转导,母胎界面出现NK细胞表型以及NK、T细胞功能异常、功能性细胞因子分泌改变等妊娠期免疫紊乱现象,造成母体对胚胎抗原的免疫攻击,导致引发原因不明复发性流产。     

cAMP-PKA信号转导通路在调节胎盘滋养细胞分化中的作用

人类胚胎的着床、胚胎和胎盘的发育与胎盘滋养细胞的生物学紧密相关.绒毛外和绒毛中的滋养细胞是胎盘解剖学界面的胚胎/胎儿组织,在所有胎盘成分中,滋养细胞在结构、功能和进展上最具多变性.正常妊娠时滋养细胞分化等生物学行为受到严格调控;当遗传或外界因素致调控因素或机制失衡,导致滋养细胞分化异常,可能参与病理妊娠如流产、子痫前期、妊娠期高血压疾病等的发病[1,2].     

妊娠高血压综合征患者胎盘滋养层细胞中血红素氧合酶-1的表达

目的 观察正常晚孕妇女（NTP）及妊娠高血压综合征（PIH）患者胎盘滋养层细胞中血红素氧合酶-1（HO-1）的表达.方法 取15例NTP和PIH患者剖宫产术的胎盘绒毛小叶进行培养,应用免疫印迹法（Western Blot）检测胎盘组织中HO-1的蛋白含量.取正常早孕妇女胎盘绒毛小叶进行细胞培养,然后分别加入NTP血清（NTP组）及中重度PIH患者血清（PIH组）,进行分组培养.应用Western Blot检测HO-1的蛋白含量.结果 PIH组胎盘组织中HO-1的蛋白含量与NTP组比较差异有统计学意义（P＜0.01）;PIH患者血清培养的滋养细胞中HO-1的蛋白含量低于正常组.结论 PIH患者胎盘滋养细胞中HO-1的蛋白表达明显减少.     

妊娠滋养细胞疾病中EMT相关蛋白CK-18、波形蛋白的表达及意义

目的 检测上皮细胞间质细胞转化（EMT）相关蛋白--细胞角蛋白18（CK-18）和波形蛋白（vimentin）在正常早孕绒毛、葡萄胎及妊娠滋养细胞肿瘤中的表达及与临床病理特征的关系。方法 采用免疫组化法（SP法）检测39例正常早孕绒毛组织、33例葡萄胎组织和32例妊娠滋养细胞肿瘤组织（侵袭性葡萄胎27例、绒毛膜癌5例）中CK-18、vimentin的定位及表达情况。结果 CK-18在各种类型滋养细胞中呈强阳性表达,正常绒毛组的CK-18表达水平高于葡萄胎组及妊娠滋养细胞肿瘤组,差异有统计学意义（P<0.01）,葡萄胎组CK-18表达高于滋养细胞肿瘤组,差异有统计学意义（P<0.01）;vimentin于各组滋养细胞中呈弱阳性表达,各组间的表达差异无统计学意义（P>0.05）。在葡萄胎滋养细胞轻度增生组,CK-18蛋白的相对表达量高于滋养细胞中或重度增生组（P<0.01）。在滋养细胞肿瘤解剖学Ⅰ期组CK-18蛋白的相对表达量高于解剖学Ⅱ期及以上组（P<0.001）。结论 伴随着滋养细胞恶性度的升高CK-18的表达逐渐降低,提示EMT可能与滋养细胞的恶性转化有相关性。     

人类白细胞抗原G和E在人早孕胎盘组织中的表达及其与反复自然流产的关系

目的 探讨人类白细胞抗原(HLA)-G、E在人早孕胎盘组织中的表达分布及其与反复自然流产(RSA)发生的关系.方法 选择15例正常早孕妇女及15例RSA患者为研究对象.分别采用原位杂交方法及免疫组织化学法检测HLA-G、E的mRNA和蛋白质在早孕胎盘组织中的表达.结果 在人早孕胎盘组织所有的滋养细胞,包括合体滋养细胞、绒毛细胞滋养细胞、绒毛外滋养细胞中均有HLA-G、E mRNA的表达.特异性针对HLA-G的单克隆抗体4H84仅在绒毛外滋养细胞中检测出HLA-G蛋白表达.HLA-E蛋白表达与其mRNA表达部位一致.RSA组-眦A-G、EmRNA的表达强度明显低于正常对照组.HLA-G、E蛋白的表达水平在RSA组也明显降低.结论 HLA-G mRNA与蛋白表达部位的不一致可能与单克隆抗体4H84有关.母胎界面的滋养细胞表面HLA-G、E mRNA及蛋白表达水平的下降与RSA的发生密切相关.     

胰岛素样生长因子-Ⅱ在妊振高血压综合征胎盘滋养细胞浅浸润中的影响

目的检测胎盘滋养细胞中胰岛素样生长因子-Ⅱ(insulin-like growthfactor-Ⅱ,IGF-Ⅱ)及其mRNA的表达,研究IGF-Ⅱ对细胞滋养细胞浸润能力的影响,评估IGF-Ⅱ在妊娠高血压综合征(妊高征)中的作用.方法①用免疫组化法检测正常及妊高征孕妇的胎盘组织中IGF-Ⅱ的表达,并用计算机图像分析系统进行定量分析比较.②用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测正常妊娠及妊高征胎盘滋养细胞中IGF-ⅡmRNA表达水平,并通过紫外凝胶图像分析进行定量分析比较.③用滋养细胞体外侵袭试验研究IGF-Ⅱ对正常及妊高征胎盘细胞滋养细胞浸润能力的影响.结果①IGF-Ⅱ主要位于绒毛小叶的合体滋养细胞及细胞滋养细胞.此外,也存在于羊膜绒毛层,但染色较以上两种细胞明显减弱.经图像分析检测证实妊高征组胎盘IGF-Ⅱ的平均光密度显著低于正常妊娠组(P＜0.05).②妊高征胎盘滋养细胞IGF-ⅡmRNA的表达亦显著低于正常妊娠者(P＜0.05).③妊高征滋养细胞较正常滋养细胞的浸润能力显著降低.④IGF-Ⅱ能明显促进正常妊娠滋养细胞的侵袭能力;但对妊高征滋养细胞侵袭能力的影响不显著.结论IGF-Ⅱ可能在妊高征胎盘滋养细胞浅浸润过程中起重要作用.     

SHP-2对人绒毛膜滋养层细胞增殖、侵袭、迁移和PI3K/AKT信号通路蛋白表达的影响

目的 探讨Src同源物2磷酸酶2（SHP-2）对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo增殖、侵袭、迁移和PI3K/AKT信号通路蛋白表达的影响。方法 用定量实时聚合酶链反应（qRT-PCR）检测SHP-2在子痫前期（PE）组胎盘组织中的表达水平。采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）、克隆形成实验、划痕闭合和Transwell分析检测敲低或过表达SHP-2对人绒毛膜滋养细胞（HTR-8/SVneo）增殖、集落形成、迁移和侵袭能力的影响。Western blot检测侵袭相关蛋白的表达和磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）的磷酸化水平。结果 HP-2在PE组胚胎组织中低表达。敲低SHP-2显著抑制HTR-8/SVneo细胞的增殖、集落形成、侵袭和迁移,此外,基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin)的表达显著下调,E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达显著上调,PI3K和AKT的磷酸化水平显著降低,然而,过表达SHP-2具有相反的效果。结论 SHP-2在PE胎盘组织中低表达,SHP-2过表达可促进滋养层细胞的增殖、侵袭和迁移能力,提示SHP-2可能是临床治疗PE的潜在靶点     

妊娠高血压综合征胎盘组织结构分析

为探讨妊高征胎盘功能不良的形态学因素。应用体视学技术测定轻度（14例）、中度（10例）和重度（9例）妊高征胎盘，与14倒无妊娠并发症胎盘进行比较，结果显示：各组胎盘绒毛间腔、绒毛滋养细胞、绒毛毛细血管、绒毛间质体积百分含量无显著差异（P＞0．05）；胎盘梗死绒毛体积百分含量妊高征各组均高于对照组，差异有显著意义（P＜0．01）；重度妊高征组胎盘绒毛表面密度低于对照组，差异显著（P＜0.01）；中度和重度妊高征组胎盘绒毛毛细血管表面密度明显低于对照组（P＜0．01）。提示妊高征胎盘梗死绒毛增多、绒毛和绒毛毛细血管表面密度减少可导致胎盘功能不良。