HCMV先天性感染胎鼠脑组织中iNOS基因的表达

目的　研究人巨细胞病毒 (HCMV)先天性感染小鼠及在不同剂量诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)抑制剂和促进剂的干预下脑组织中的iNOS基因表达情况。方法　将 6～ 8周龄BALB/c小鼠分为 6组 ,每组 6只 ,♀♂各半。A组腹腔注射HCMV 1 0ml,B组、C组腹腔注射HCMV 1 0ml后2d ,分别每天腹腔注射氨基胍 (AG) 2 0 0mg/kg、2 0mg/kg ,D组、E组腹腔注射HCMV 1 0ml后 2d ,分别每天腹腔注射左旋精氨酸 (L Arg) 30 0mg/kg、30mg/kg ,F组为DMEM对照组 ,每天每只 0 2ml。持续 17d。以上各组在孕鼠受孕第19天 ,剖腹取胎鼠 ,观察各组胎鼠生长发育及体重 ,有无皮下出血、淤血等情况 ,同时取胎鼠脑组织 ,作以下检测 :①硝酸还原酶法测定脑组织匀浆中NO代谢产物亚硝酸盐的含量。②RT PCR测iNOSmRNA的转录。结果　HCMV感染各组孕鼠在孕 19d ,其体重明显低于对照组 ,有部分胎鼠发育迟缓并可见明显的出血现象。感染各组胎鼠脑组织匀浆NO代谢产物明显高于DMEM对照组 (P <0 0 0 1) ,以B组尤为明显 ,A、C、E组间无差异显著性。RT PCR在感染各组均扩增出iNOSmRNA特异性条带表达 ,B组信号量最高 ,D组信号最弱。DMEM对照组未检测到iNOS特异性条带。结论　HCMV先天性感染可刺激胎鼠脑组织iNOS的表达 ,其表达产物NO可能参与了脑组织病理损伤     

RT-PCR法测定胎鼠大脑皮质内皮素-1 Mrna

目的 建立一种检测先天性人巨细胞病毒感染胎鼠大脑皮质内皮素－１（ＥＴ－１）ｍＲＮＡ的方法。方法 采用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法并对实验条件进行优化。建立稳定的检测体系后,对胎鼠大脑皮质ＥＴ－１ ｍＲＮＡ进行检测,并以ＲＴ－ＰＣＲ后产物的ＯＤ值来反映起初ＥＴ－１ ｍＲＮＡ的模板相对含量。结果 在一定ＴａｐＤＮＡ酶、镁离子浓度、引物浓度等条件下,ＥＴ－１ ｍＲＮＡ经ＲＴ－ＰＣＲ扩增后产     

肺表面活性物质对哮喘大鼠ET-1及ET-1 mRNA表达的影响

目的:观察吸入肺表面活性物质(PS)对哮喘大鼠模型哮喘发作、内皮素-1(ET-1)及支气管肺组织ET-1 mRNA表达的影响,探讨PS 防治哮喘的机制.方法:建立哮喘大鼠模型,氧气驱动雾化吸入PS,观察哮喘发作情况及肺组织病理变化;采用放射免疫法测定其血浆及支气管肺泡灌洗液(BALF)中ET-1含量 ,以分子原位杂交技术检测支气管肺组织内ET-1 mRNA的表达.结果:哮喘组血浆、BALF中ET-1含量及支气管肺组织ET-1 mRNA表达明显增加;治疗组哮喘发作及病理改变减轻,ET-1含量、支气管肺组织内ET-1 mRNA的表达较哮喘组明显减少.结论:ET-1在哮喘发病机制中可能发挥重要作用,外源性PS能减轻哮喘发作,可能与抑制ET-1 合成及释放有关.     

HCMV pp65抗原血症和UL83基因检测对肾移植术后HCMV感染的诊断价值

目的 探讨外周血白细胞人巨细胞病毒(HCMV)pp65抗原血症检测和UL83基因检测对肾移植术后HCMV感染的诊断价值和临床意义.方法 对77例肾移植受者术后定期随访患者外周血进行HCMV感染检测,分别进行外周血白细胞HCMV pp65抗原血症实验和PCR技术检测HCMV UL83基因,比较两种方法的诊断准确性.结果 ...     

半定量RT—PCR方法在基因表达研究中的应用

目的：定量检测Ｂ型内皮素受体（ＥＴＢ－Ｒ）基因在大鼠心、肝、肺、肾等器官及培养的肾小球系膜细胞（ＭＣ）的表达。方法：半定量逆转录－多聚酶链反应技术（ＳｑＲＴ－ＰＣＲ），并以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ＥＰ印迹法作对照。结果：ＥＴＢ－Ｒ基因在上述器官及ＭＣ均有表达，而表达水平依次为肺、心、肾和肝。结论：ＥＴＢ－Ｒ在不同器官有不同水平的基因表达，说明内皮素对不同器官的效应不同；ＭＣ是内皮素在肾内发挥作用的靶细胞     

人巨细胞病毒先天性感染胎鼠大脑皮质钙调素基因mRNA表达的研究

目的 研究先天性人巨细胞病毒（HCMV）感染致脑损害后钙调素（calmodulin,CaM)基因mRNA表达的改变,以探讨先天性HCMV感染所致脑损害的机制。方法 选用10周龄Balb/c小鼠,雌雄小鼠腹腔内分别注射1.0ml、0.5ml、0.25ml HCMV后合笼交配以建立先天性HCMV中枢神经系统（CNS）感染小鼠模型,并以腹腔注射1.0ml 1640液鼠为对照。剖腹取21天胎龄小鼠大脑皮质,以自行设计的CaM cDNA编码区的一对引物与一条CaM特异性探针,分别用逆转录聚合酶链反应（RP－PCR）技术CaM mRNA相对含量,用原位杂交检测大脑皮质细胞内相应mRNA的表达及定位。结果 母鼠腹腔内接种HCMV量为1.0ml与0.5ml的临产胎鼠大脑皮质分离出相应病毒,病理学检查等确诊发现了侵袭性脑膜脑炎性病理改变,证实HCMV可以小鼠宫内传播至CNS。1.0ml组与0.5ml组胎鼠RT－PCR产物浓度明显高于0.25ml组及对照组,而1.0ml组与0.5ml组间亦有明显差异。电泳结果显示对照组与0.25ml组胎鼠未见阳性条带,而1.0ml组胎鼠特异性条带信号强于0.5ml胎鼠,仅略低于同组母鼠。原位杂交显示CaM mRNA不但出现在1.0ml组胎鼠大脑皮质大神经元胞核及胞浆内,在中小神经元及胶质细胞的胞核及胞浆亦有高密度表达,阳性细胞的突起中亦有弱信号存在。结论 本研究结果揭示先天性感染HCMV胎鼠大脑皮质内CaM mRNA表达量明显增加,且神经元及胶质细胞均有表达,并与感染剂量有依赖关系。提示CaM mRNA表达增高可直能直接参与了HCMV先天性感染脑损害的过程。     

乐息平防治肺动脉高压与肺血管平滑肌表达ET_A-R mRNA的关系

目的:观察乐息平(Lacidipine)对SD大鼠缺氧性肺动脉(HPH)的防治效果,以及内皮素A型受体(ETA-R)mRNA在SD大鼠肺血管平滑肌中的表达情况,进而探讨乐息平防治HPH的作用机制与内皮素(ET)由ETA-R介导的生物学效应之间的关系。方法:实验动物分为4组:正常对照组(N)、缺氧组(H)、正常+乐息平组(N+La)、缺氧+乐息平组(H+La);用常压低氧法(氧浓度:10+0.5%)制作HPH动物模型;用插管法测定肺动脉压;用组织切片内原位杂交法检测ETA-RmRNA的表达情况。结果:缺氧组(H)平均肺动脉压(mPAP)及ETA-RmRNA的表达均高于正常组(N)(P<0.01);缺氧加乐息平组(H+La)mPAP及ETA-RmRNA的表达均无明显增高(与H组比较P<0.01;与N组比较,P>0.05)。结论:乐息平可以防止缺氧诱导的SD大鼠肺动脉压升高,同时可以抑制ETA-RmRNA在缺氧性SD大鼠肺血管平滑肌中的表达。     

地高辛标记探针原位杂交在人巨细胞病毒感染鼠脑神经元研究中的应用

目的　建立一种适用于检测人巨细胞病毒（ Ｈ Ｃ Ｍ Ｖ）感染新生乳鼠大脑皮质神经元原代培养物中病毒 Ｄ Ｎ Ａ 的原位杂交法。方法　制备和培养新生乳鼠大脑皮质神经元并进行病毒感染;在感染后的第３ ,５ 天及第１ ～４ 周连续取样用地高辛标记的 Ｈ Ｃ Ｍ Ｖ 即刻早期抗原（ Ｍ Ｉ Ｅ） 和晚期抗原（ Ｌ Ａ） 寡核苷酸特异性探针分别进行核酸原位杂交,检测受染神经元内相应病毒核酸及分布。结果　 Ｍ Ｉ Ｅ 寡核苷酸探针可在 Ｈ Ｃ Ｍ Ｖ 感染后第４ ～７ 天检出神经元核内 Ｈ Ｃ Ｍ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ;而 Ｌ Ａ 寡核苷酸探针则可稳定地检出感染后第７ ～２８天细胞培养物中的相应病毒核酸;并显示： Ｈ Ｃ Ｍ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ 杂交阳性信号在感染的早期主要分布在核内,呈灶性;而在感染的晚期,杂交阳性信号均匀分布于受染神经元的核内及胞浆内。结论　地高辛标记的 Ｈ Ｃ Ｍ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ Ｍ Ｉ Ｅ 和 Ｌ Ａ 寡核苷酸探针在病毒感染机制研究以及临床诊断等方面,具有广泛的应用前景。     

西安地区献血员HCMV和EBV感染情况

0　引言　人巨细胞病毒 (HCMV)感染非常普遍 ,但多显亚临床不显性感染和潜伏感染 .输血是传播 HCMV的主要途径之一 .经输血感染 HCMV可致早产儿和新生儿畸形 ,也可引起器官排斥反应 .EB病毒在人类也普遍存在 ,可导致传染性单核细胞增多症 ,Burkitt淋巴瘤 ,鼻咽癌及移植后淋巴组织增生症等 ,可通过输血感染 .为了解西安地区献血员 HCMV,EBV感染情况 ,我们采用 PCR方法对献血者血清进行了检测 ,报告如下 .1　对象和方法1.1　对象　 2 0 0 0 - 0 7/ 2 0 0 0 - 0 8在西京医院输血科无偿献血员712名 ,年龄 2 0～ 5 0岁 ,平均 37.2岁 ,…     

地塞米松对大鼠肺纤维化及其肺组织ET-1的影响

目的探讨地塞米松对实验性大鼠肺纤维化肺组织内皮素-1（Endothelin-1,ET-1）的影响。方法实验分为博莱霉素组、地塞米松组和正常对照组。博莱霉素组和地塞米松组给以博莱霉素（5mg/kg）气管内注射复制大鼠肺纤维化模型,正常对照组以生理盐水替代。气管内注药,次日地塞米松组给以腹腔注射地塞米松（1mg/kg）隔日1次,博莱霉素组和正常对照组以生理盐水替代。造模后第28d处死大鼠,测定肺组织ET-1和羟脯氨酸（HYP）含量,并进行组织病理学观察。结果博莱霉素组肺组织内羟脯氨酸（790.530±131.930μg/g）高于正常对照组（570.964±62.411μg/g）和地塞米松组（584.447±51.921μg/g）（P〈0.01）,病理为肺纤维化改变。博莱霉素组肺组织中的ET-1水平（61.001±2.722pg/mL）高于正常对照组（57.618±2.731pg/mL）和地塞米松组（56.083±3.379pg/mL）（P〈0.01）。结论ET-1可能参与肺纤维化的形成,地塞米松可能通过降低ET-1水平抑制肺纤维化形成。     

巨细胞病毒先天性感染对ICR鼠胚胎生长及脑组织发育的影响

目的探索人巨细胞病毒（HCMV ）先天性感染对胎鼠胚胎生长及脑组织发育的影响。方法 10周龄的ICR ♀♂鼠按1∶1配对,实验组于交配前及妊娠3天（E3）、7天（E7）、15天（E15）腹腔内接种HCMV悬液,对照组接种HF细胞上清液。于E0、E3、E6、E9、E12、E15、E19称取孕鼠体重。临产时剖腹取胚胎的大脑皮质,用常规组织切片及HE染色,检测组织的病理变化,同时取部分组织进行病毒分离。结果各实验组（除E15组）孕鼠自E15后体重较对照组明显降低。组织病理学检查发现,各实验组ICR胎鼠大脑皮质血管扩张、充血、出血,脑实质有单核细胞浸润,部分神经细胞变性坏死或凋亡及噬神经细胞现象,软化灶形成;受染的神经细胞核内出现HCMV特征性包涵体。E0、E3、E7、E15实验组大脑皮质病毒分离阳性率分别为60%、62%、67%、25%,组间差异显著（χ2=13.475,P＜0.05）,E15组低于其他3组。结论不同孕期ICR胎鼠大脑皮质均可先天性实验感染HCMV且大脑皮质损伤明显,胚胎发育迟缓。     

大鼠脊髓急性损伤后内皮素-1含量的变化

目的：通过检测大鼠脊髓急性损伤后内皮素－1（ET－1）的含量变化,探讨ET－1在脊髓继发性损伤中可能的作用机制。方法：用35g负荷压迫大鼠胸段脊髓（T8－9）5min,造成大鼠胸段脊髓急性损伤,用放射免疫法测定大鼠脊髓急性损伤后早期血浆和伤段脊髓组织中ET－1的含量。结果：脊髓损伤后30min,血浆,伤段脊髓组织中ET－1水平显升高,4h达最高峰,并分别持续至48h和72h。结论：ET－31参与脊髓继发性损伤,可能是伤后4－24h重要的损害因子之一。     

大肠癌ET-1表达及其与肿瘤细胞增殖和微血管形成的关系

目的研究ET-1在大肠腺癌中的表达及其与肿瘤细胞增殖和微血管形成的关系,探讨ET-l在大肠癌发生中的作用机制。方法应用免疫组化SABC法检测41例大肠腺癌及20例大肠腺瘤组织中ET-1表达、PCNA标记指数(PCNALI)及肿瘤微血管密度(MVD),分析ET-1表达与PCNALI以及MVD的关系。结果ET-1主要分布于大肠腺癌细胞胞浆,ET-1阳性表达肿瘤组织基质中血管内皮细胞也有增强表达,而癌旁组织及阴性表达的肿瘤组织基质中血管内皮细胞仅有较弱表达。腺癌的ET-1表达率及强度显著高于腺瘤(P<0.001)。等级相关分析表明,ET-1表达与PCNALI及MVD均密切相关(P<0.001),PCNALI与MvD亦呈正相关(P<0.001)。结论ET-1可能通过促进大肠癌微血管形成来影响肿瘤恶性生长。     

半定量RT－PCR方法在基因表达研究中的应用

目的：定量检测Ｂ型内皮素受体（ＥＴＢ－Ｒ）基因在大鼠心、肝、肺、肾等器官及培养的肾小球系膜细胞（ＭＣ）的表达。方法：半定量逆转录。多聚酶链反应技术（ＳｑＲＴ－ＰＣＲ），并以ＮｏｒｔｈｅｒｎＥＰ印迹法作对照。结果：ＥＴＢ－Ｒ基因在上述器官及ＭＣ均有表达，而表达水平依次为肺、心、肾和肝。结论：ＥＴＢ－Ｒ在不同器官有不同水平的基因表达，说明内皮素对不同器官的效应不同；ＭＣ是内皮素在肾内发挥作用的靶细胞。     

糖尿病鼠局灶脑缺血早期VEGF mRNA的表达

目的研究糖尿病鼠局灶脑缺血早期VEGF mRNA的表达时空特点。方法建立大鼠大脑中动脉栓塞模型（MACO）,选择MACO后不同时间点（1、3、6、12、24h）,采用逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）半定量测定缺血半暗带区VEGF mRNA的表达,比较糖尿病组与非糖尿病组间的差异。结果在各时间点,糖尿病组VEGF mRNA的表达均低于非糖尿病组,在超早期二者存在显著差异（P〈0．01）。结论在局灶脑缺血早期,糖尿病鼠缺血半暗带区VEGF mRNA表达不足,在超早期尤为显著。     

糖尿病鼠局灶脑缺血早期VEGF mRNA的表达

目的研究糖尿病鼠局灶脑缺血早期VEGF mRNA的表达时空特点.方法建立大鼠大脑中动脉栓塞模型(MACO),选择MACO后不同时间点(1、3、6、12、24 h),采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量测定缺血半暗带区VEGF mRNA的表达,比较糖尿病组与非糖尿病组间的差异.结果在各时间点,糖尿病组VEGF mRNA的表达均低于非糖尿病组,在超早期二者存在显著差异(P＜0.01).结论在局灶脑缺血早期,糖尿病鼠缺血半暗带区VEGF mRNA表达不足,在超早期尤为显著.     

ADM和ET-1在冠状动脉内皮损伤中的表达

①目的研究冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)病人急慢性冠状动脉内皮损伤时肾上腺髓质素(ADM)、内皮素-1(ET-1)在不同易患因素累积、不同冠状动脉狭窄程度、不同内皮稳定状态以及急性内皮损伤(PTCA)时的水平变化,探讨血管活性物质与急慢性内皮损伤的关系及临床意义。②方法选择72例CHD病人作为慢性内皮损伤组,按冠心病易患因素分为A(0~1个因素)、B(2个因素)、C(≥3个因素)组;按病人临床表现分为稳定型心绞痛组(SAP)和不稳定型心绞痛(UAP)组;按冠状动脉狭窄程度分为轻度狭窄、中度狭窄和重度狭窄组。急性内皮损伤组为28例PTCA病人。两组均以冠状动脉造影者作为对照。用放射免疫法测定各组ADM、ET-1的含量。③结果除A组ADM值与正常对照组无差异外(t=1.051,P>0.05),研究组血浆ADM、ET-1含量均高于对照组(t=4.287~13.945,P<0.01)。研究组内ADM、ET-1在3组间均有显著意义(t=2.813~11.649,P<0.01)。随着冠状动脉狭窄程度加重,ADM、ET-1有增高趋势,中度狭窄和重度狭窄组与对照组比较有明显增高(t=2.627~10.098,P<0.01);轻、中、重度狭窄3组间比较差异有显著性(t=3.150~11.708,P<0.01)。SAP组ADM、ET-1与对照组比较无显著性差异(t=0.297、1.983,P>0.05),而UAP组显著高于SAP组和对照组(t=2.932~12.175,P<0.01)。PTCA急性损伤冠状动脉内皮后与治疗前比较血浆ADM、ET-1水平显著升高(t=3.48、11.17,P<0.01)。④结论CHD易患因素对内皮细胞慢性损伤有累积作用。血浆ADM、ET-1水平与冠状动脉狭窄程度有关,可以作为判断CHD病情及预后的参考指标。UAP病人血浆ADM、ET-1水平可以作为判定心绞痛稳定性的参考指标。PTCA造成冠状动脉内皮急性损伤,激活ADM、ET-1的内皮源性释放。保护CHD病人内皮功能,干预易患因素及内皮功能的改善治疗是防止介入术后再狭窄及慢性内皮损伤的重要环节及途径。     

HCMV感染小鼠脑组织的蛋白质组学研究

目的建立人类巨细胞病毒(HCMV)感染小鼠脑组织前后的比较蛋白质组学双向电泳技术研究体系。方法昆明系小鼠40只,随机分为两组:实验对照组(20只)和病毒感染组(20只),在接种HCMVAD169株30d后,取小鼠脑组织,研磨、超声裂解、抽提蛋白,采用双向凝胶电泳分离,进行染色,Image Master 2D Platinum软件分析、识别差异表达蛋白质,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱得到相应肽质量指纹图谱,搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点,并对其中部分蛋白质的表达进行免疫印迹的验证。结果从双向电泳图谱上获得蛋白质斑点:实验对照组(1096±82)个,感染HCMV组(1210±101)个,发现显著差异点36个,对其中6个点进行了筛选鉴定;免疫印迹实验结果也较为吻合。结论利用蛋白质组学技术,检测正常小鼠脑组织及HCMV感染的小鼠脑组织的差异蛋白质,为疾病的早期诊断、致病机制及有效药物靶点的发现提供实验和理论依据。     

内皮素-1与肿瘤的血管生成

恶性肿瘤的增殖和转移依赖于血管形成[1 ] ,新生血管不仅为肿瘤组织生长提供营养及气体交换 ,并为肿瘤细胞的播散提供最直接的通道 ,是肿瘤发生、发展中的关键环节之一。其发生机制涉及到血管生成因子与血管生成抑制因子之间的调节失衡 ,还与其他因素如蛋白水解酶、黏附因子、细胞凋亡因子以及组织缺氧有关。近来研究发现内皮素 1 (ＥＴ 1 )参与肿瘤的血管生成 ,本文重点对ＥＴ 1在肿瘤血管生成中作用的研究进展综述如下。1　促进血管生成内皮素 (ＥＴ)是由内皮细胞、血管平滑肌细胞产生的含有2 1个氨基酸残基的短肽 ,它具有 1、2、3、4四…     

硫酸镁对高血压病人血压及血浆内皮素-1水平的影响

目的观察静脉滴注硫酸镁对高血压病人血压和血浆内皮素－１水平的影响。②方法对１０例轻、中度高血压病人用随机、双盲、自身安慰剂交叉对照法观察了静脉滴注２５％硫酸镁１０ｍｌ（含Ｍｇ２＋４．８８ｍｍｏｌ）前后收缩压、舒张压以及血浆内皮素－１水平的变化。③结果静脉滴注硫酸镁组病人收缩压、舒张压、血浆内皮素－１水平均降低，与治疗前和安慰剂治疗组比较，差异均有显著性（ｔ＝２．５３～５．２７，Ｐ＜０．０５，０．０１）。④结论硫酸镁降低血浆内皮素－１水平可能是其降低高血压病人血压的作用机理之一。