AP1反应元件的确定及在细胞角蛋白13基因表达调控中的作用

目的 确定细胞角蛋白13（cytokeratin 13,CK13)基因5'旁侧－nt，199－－nt.192碱基CTGAATCA反应元件的类型及其在CK13基因表达调控中的作用。方法 采用报告基因分析的,构建CK13基因5'旁侧513bp全片段，－nt.207- nt.63与氯霉素乙酰转移酶报告基因增强子载体的重组体，并采用PCR定点诱变技术，构建与－nt.207 nt.63同样长短，但-nt.197和T、G分别定点诱变为A，T的氯霉素乙酰转移酶报告基因增强子载体的重组体，通过脂质体介导的转染技术导入HeLa细胞，检测各重组体报告基因的瞬间表达，确定CK13基因5'旁侧－nt.199--nt.192碱基CTGAATCA在CK13基因表达调控中的作用；并采用凝胶滞留试验及竞争性凝胶滞留试验验证CK13基因5'旁侧中CTGAATCA反应元件的类型。结果 凝胶滞留试验及竞争性凝胶滞留试验证实CK13基因5'旁侧中CTGAATCA反应元件的类型。结果 凝胶滞留试验及竞争性凝胶滞留试验证实CK13基因5'旁侧－nt.199--nt.192碱基CTGAATCA反应元件是AP1反应元件，它促进CK13基因的表达。结论 CK13基因5'旁侧起始密码上游－nt.199--nt.192的碱基CTGAATCA是AP1反应元件，而不是cAMP反应元件，它可增强CK13基因5'旁侧的转录活性。     

干扰素刺激基因及临床意义研究进展

干扰素(Interferon,IFN)作用于靶细胞表面受体后,通过一系列信号传导激活干扰素刺激基因(Interferon stimulated genes,ISGs)的表达。干扰素刺激基因及其表达产物具有抗病毒、免疫调控等多种生物学功能,是干扰素发挥功能的重要效应分子,同时具有潜在的临床意义。众多国内外研究发现ISGs 对玉型干扰素临床抗病毒效果具有预测意义,同时可能成为某些自身免疫疾病临床诊断的新靶标以及作为一些肿瘤治疗药物新靶点等潜在应用价值。本文将从干扰素刺激基因的诱导产生、抗病毒等生物学功能以及潜在临床意义方面展开综述。     

干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因-19在小鼠围着床期子宫内膜中的表达及其作用

目的 探讨干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因-19（GRIM-19）在小鼠围着床期子宫内膜中的表达及其与胚胎着床的关系。方法 收集早期妊娠第1~6天小鼠子宫组织,采用免疫组织化学法检测GRIM-19蛋白在子宫内膜上皮细胞中的表达及定位情况;收集早期妊娠、假孕和雌孕激素处理小鼠子宫组织,采用Western blotting 和Real-time PCR检测GRIM-19蛋白和mRNA水平;TUNEL方法检测早期妊娠第1~6天小鼠子宫组织细胞凋亡情况;采用pEGFP GRIM-19质粒GRIM-19-siRNA 转染技术使RL95-2细胞系过表达或低表达GRIM-19,检测其对RL95-2-BeWo 共培养体外着床模型球状体黏附率的影响,AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡,线粒膜电位检测试剂盒（JC-1）检测线粒体跨膜电位;采用Western blotting 和Real-time PCR检测转染后信号转导子和转录激活因子3（STAT3）、肿瘤坏死因子（TNF)-α及白细胞介素（IL)-11蛋白和mRNA水平。结果 GRIM-19在早期妊娠第1~6天小鼠子宫腔上皮和腺上皮均有表达,妊娠第4天GRIM-19蛋白和mRNA水平减低,细胞凋亡减少;假孕第1~6天小鼠子宫内膜GRIM-19表达无明显差异;雌激素处理组小鼠子宫内膜GRIM-19表达减弱;过表达GRIM-19后,RL95-2-BeWo 共培养球状体黏附率降低,细胞凋亡增加,线粒体膜电位减低,RL95-2细胞系中STAT3及IL-11蛋白和mRNA水平减低,TNF-α蛋白和mRNA水平升高。 结论 GRIM-19在胚胎着床中发挥重要作用,可能是通过调节细胞凋亡和免疫耐受为胚胎着床提供保障。     

E3泛素酶对维甲酸诱导基因蛋白Ⅰ分子活性的调控

维甲酸诱导基因蛋白Ⅰ(retinoic acid-inducible gene Ⅰ,RIG-Ⅰ)是细胞内重要的固有免疫受体,能够识别病毒双链RNA,启动抗病毒免疫应答,从而在病毒感染早期发挥作用。RIG-Ⅰ活性受泛素系统,包括各种泛素酶、泛素链及其他因子的严格调控。近年来,不断有研究报道新的E3泛素酶成员参与抗病毒调控,其作用机制和效应各不相同。围绕不同E3泛素酶如何对RIG-Ⅰ进行精确调控以及泛素链活化RIG-Ⅰ的机制进行深入研究,推进了对RIG-Ⅰ泛素化调控的认识,本文对此综述。     

干扰素及其诱导蛋白在系统性红斑狼疮患者中的表达

应用寡核苷酸表达基因芯片技术检测了10例系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血白细胞的基因表达谱,与正常对照外周血的基因表达谱作了比较分析。研究中所取血液标本来自符合1982年美国风湿病协会修订的SLE诊断标准的患者共10例(其中包括1个SLE家系中2个SLE患者姐妹) ,男1例,女9例。另选取与患者性别、年龄相匹配的健康人,男5例,女5例,做正常对照。为验证基因芯片结果的可靠性,我们采用TaqMan荧光定量RT PCR方法进行复核分析。我们使用的是MERGEN公司的hu manH0 4包含336 0个点的寡核苷酸基因芯片。在确保基因芯片技术可靠性和重复性的…     

人干扰素基因刺激因子(STING)基因沉默子的克隆鉴定及功能初探

目的:构建人干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon genes, STING)沉默子的荧光素酶报告质粒,在人胚肾细胞(HEK293T)和人类宫颈癌细胞(HeLa)中检测荧光素酶活性,生物信息学预测其可能结合的转录因子并通过实验验证。方法:通过PCR扩增人STING-5-1a(-124～+2...     

炎症反应相关基因诱导表达的信号转导与新药研发的展望

炎症本质上是机体细胞对有害刺激(包括生物、化学和物理性刺激)做出的保护性反应，但是炎症也应该被视为一柄“双刃剑”，一方面对机体起到保护作用，另一方面也可能造成组织器官损伤。因此几乎在机体产生炎症反应的同时，就要启动抑制炎症的机制以控制炎症反应的强度。避免或减弱自身的损伤。炎症反应相关基因属于快速反应基因类型。可通过参加炎症信号转导通路被诱导表达，且是一个可调控的反应过程。近年来我们课题组对炎症反应相关基因表达的正相与负相调节进行了研究。现综述如下。并展望在新药研发中的应用。     

Ⅰ型胶原基因转录调控的研究进展

调控Ⅰ型胶原(COL1)基因转录的顺式作用元件位于启动子和第一个内含子中。顺式作用元件及其结合的转录因子有生物种类特异性。一些转录因子以不同的亲和力与其部分潜在结合位点结合,它们间的相互作用稳定了DNA的环状结构,并引发转录。转化生长因子-β(TGF-β)、胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等细胞因子在转录水平参与COL1基因的调控,在COL1基因启动子上有它们的反应元件。     

人成纤维细胞干扰素基因侧翼序列在表达中的调控作用

本文从转录水平和翻译水平两个方面回顾了近年来人成纤维细脃干扰素(IFN-β)基因表达的研究进展。主要论述了IFN-β基因转录区5'侧翼序列在基因转录时的调控作用以及IFN-βmRNA编码区侧翼的非翻译区对翻译效率的影响。介绍了以上研究对于蛋白质表达传统理论提出的新见解。提示了新的进展对IFN-β基因在真核细胞中有效表达的现实意义。     

缺氧反应基因及调控机制研究进展

细胞在缺氧情况下,可诱导缺氧反应基因转录增加,维持血氧稳定。缺氧诱导因子-1和包含有启动子、增强子序列的顺序作用元件为转录调控的关键环节,缺氧诱导因子-1可通过顺式作用元件内的缺氧诱导因子-1结合位点与之相结合,二者通过复杂的相互作用来实现转录调控。     

γ干扰素诱导蛋白-10的硫氧还基因融合表达、纯化及生物活性检测

γ干扰素诱导蛋白-10是由γ干扰素刺激单核细胞、内皮细胞等所诱导产生趋化T淋巴细胞的一类分泌性糖蛋白。本研究PCR扩增人与鼠γ干扰素诱导蛋白-10的成熟蛋白编码区,克隆到硫氧还载体pET-32(a)进行诱导表达。SDS-PAGE分析显示:在IPTG诱导下,人与鼠的γ干扰素诱导蛋白-10表达量约占目标总蛋白的25.3%,主要以包含体的形式存在,可溶性成分约占目标总蛋白的20%。将可溶性蛋白以S-Tag亲和层析柱进行纯化,纯化的蛋白质纯度约为90%的γ干扰素诱导蛋白-10。通过趋化性分析,证实重组表达的人与鼠γ干扰素诱导蛋白-10在100ng/ml浓度下对激活的T淋巴细胞具有趋化活性。     

鸭α干扰素成熟蛋白基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

鸭Ⅰ型干扰素基因是在1995年由Schults等成功克隆的。基因总长度为1．2kb，其蛋白质由191个氨基酸组成，其中N末端的30个疏水氨基酸为信号肽，成熟多肽为161个氨基酸。本实验利用PCR技术从pMD-18-duIFN-α重组体上克隆出鸭α干扰素成熟蛋白基因(mDuIFN-α)，并用pET30a表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中进行了高效表达。     

大鼠SCN5A基因内含子1+204 bp～+757 bp转录调控功能分析

目的克隆大鼠心肌SCN5A基因5′端调控区,检测目的片段在HEK293细胞中的转录活性。方法扩增大鼠心肌SCN5A基因 204 bp~ 757 bp、 204 bp~ 385 bp和 204 bp~ 329 bp片段,构建含目的片段的荧光素酶报告基因——pGL3-P0、pGL3-P1和pGL3-P2,比较HEK293细胞中荧光素酶活性,评价不同长度DNA片段的转录调控活性。结果成功构建大鼠心肌SCN5A基因5′端3个片断的荧光素酶报告基因,HEK293细胞中pGL3-P1相对荧光素酶活性分别为pGL3-P0、pGL3-P2的4.3倍和2.8倍。结论SCN5A基因内含子1目的片段在HEK293细胞中具有较强的转录调控活性;SCN5A基因 329 bp~ 385 bp为正调控区,软件分析MZF1、USF、C-ETs-1等因子能与这些正调控区域结合并可能参与SCN5A基因的表达调控。     

细胞周期调控基因在精子发生中的作用

精子发生是一个特殊的雄性生殖细胞的分化过程,也是一个特殊的细胞周期运行过程。其 中,细胞周期相关基因的缺失或过度表达主要影响生殖细胞使其不能发育为成熟精子。本文从细胞周 期正、负调控基因和细胞周期的调控途径这三个方面综述了细胞周期调控基因在精子发生过程中的表 达和蛋白定位,为深入了解生精过程的分子机制奠定基础。     

TFPI-2基因的表达调控及其在疾病中的作用

组织因子途径抑制物-2（TFPI-2）是一种Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂,在动脉粥样硬化、肿瘤浸润转移和血管新生等病理生理过程中发挥重要作用。细胞外信号可通过调节启动子或信号传导通路等多种因素调节TFPI-2基因的表达,其调控机制成为近几年的研究热点之一。     

超声刺激参数在超声神经调控中的作用

超声神经调控作为一种新型的非侵入型刺激脑神经的技术,受到越来越多的关注。为了能将这项技术更精准地用于临床,科学家们做了大量的离体和在体动物实验研究,相关研究结果表明:超声波的强度、频率、持续时间、声脉冲群重复频率及照射靶点的区域尺寸是超声刺激效应的影响因素,调节这些超声刺激参数可使得被刺激部位的中枢神经产生兴奋或抑制效应,可进行可逆的神经调控。为了进一步揭示超声刺激参数和神经调控效应之间的关系,本文首先简单阐述了超声神经调控的发展历程、可能的神经作用机制,着重总结了超声刺激参数对神经调控的影响,并对未来超声神经调控研究方向进行了初步展望。     

胶质纤维酸性蛋白基因调控及其在胶质瘤诱导分化中的作用

胶质纤维酸性蛋白（ｇｌｉａｌｆｉｂｒｉｌａｒｙａｃｉｄｉｃｐｒｏｔｅｉｎ，ＧＦＡＰ）是星形细胞胞质内特异性蛋白，它在星形细胞源性胶质瘤的诊断上已发挥出重要作用。不仅如此，人们对ＧＦＡＰ表达与胶质细胞分化和瘤细胞生物学特性的关系、ＧＦＡＰ基因的结构和功...     

人轮状病毒G2和G3型主要中和抗原VP7基因在重组腺病毒中的表达

目的 研究我国G2和G3型轮状病毒主要中和抗原VP7基因在重组腺病毒中的表达。方法 在前期成功表达Gl型VP7的基础上，选用我国G2和G3型主要流行株97S43和97S48 VP7基因，用非复制型腺病毒载体对上述基因进行表达。结果 获得了表达我国G2型和G3型人轮状病毒流行株VP7基因的非复制型重组腺病毒rvAdG2VP7和rvAdG3VP7，应用PCR及Southem blot技术证实在重组腺病毒中整合有轮状病毒G2型VP7和G3型VP7基因，RT-PCR证明重组腺病毒在感染的293细胞内均能有效地转录插入基因，Western blot检测到轮状病毒VP7基因的表达。结论 这一工作为进一步进行动物实验，发展多价轮状病毒疫苗打下了基础。     

血清γ干扰素诱导蛋白-10、IL-8在初诊DM2中的表达及意义

目的：探讨炎症细胞因子γ干扰素诱导蛋白-10（IP-10）、白介素-8（IL-8）在2型糖尿病（DM2）患者中的表达及意义。方法：检测37例初诊DM2患者及健康人33例血清IP-10、IL-8浓度并予对照分析。结果：DM2组IP-10、IL-8浓度均显著高于健康人。结论：IP-10、IL-8在DM2发病中可能起一定作用。