养阴益气方对肺纤维化大鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 基于Wnt/β-catenin通路探讨养阴益气方对肺纤维化的治疗作用,观察其对肺间质纤维化大鼠模型肺组织中Wnt/β-catenin通路相关指标表达影响。方法 选取36只SPF级雄性Wistar大鼠,按随机数字表法分为假手术组、模型组、阳性对照组、养阴益气方低、中、高剂量组,采用一次性气管内插管滴注博来霉素(Bleomycin, BLM)的方法造模;造模后第2天开始通过灌胃方式给予各组大鼠相应药物进行干预治疗。于第28天腹主动脉取血法处死全部大鼠,留取肺组织,行相关检测;通过HE和Masson染色方法进行病理检测,分别采用RT-PCR法和Western-blot法检测大鼠肺组织中Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)、低密度脂蛋白受体相关蛋白(Lowdensitylipoprotein receptor-related protein, LRP)、Wnt抑制因子1(Wnt inhibitory factor 1,WIF1)、糖原合成酶激酶-3β(Glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)、I型胶原(Collagen I)的mRNA和蛋白表达情况...     

补肾解毒散结方通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抗大肠癌侵袭转移

目的:探讨补肾解毒散结方抑制Wnt/β-catenin信号通路抗人结肠癌HCT-116细胞侵袭转移的作用和机制。方法:采用CCK-8法检测以不同浓度补肾解毒散结方(10、20、40、60、80、100、120μg/ml)对人结肠癌HCT-116细胞增殖的影响;采用划痕实验检测HCT-116细胞转移能力;Transwell实验检测HCT-116细胞侵袭能力;Western blot检测HCT-116细胞的β-catenin、Cyclin D1蛋白表达水平。结果:补肾解毒散结方能够以剂量-时间依赖性方式抑制HCT-116细胞的增殖;补肾解毒散结方能够呈剂量依赖性方式抑制HCT-116细胞的侵袭和转移能力(P0.05);补肾解毒散结方能够下调HCT-116细胞核内β-catenin蛋白表达水平,抑制其下游靶基因Cyclin D1的蛋白表达水平(P0.01)。结论:补肾解毒散结方具有抑制人结肠癌HCT-116细胞增殖、侵袭和转移能力,其机制可能与其通过Wnt/β-catenin信号通路下调β-catenin蛋白表达水平相关。     

黄芩苷通过TGF-β1/ERK1/2信号通路抑制鼻咽癌细胞增殖

目的 探讨黄芩苷(baicalin)对鼻咽癌CNE2细胞增殖及TGF-β1/ERK1/2信号通路的作用.方法 采用CCK8法检测不同浓度黄芩苷(2.5、5、10、20、40、80μmol·L-1)、顺铂(4μg·mL-1)在24、36、48 h对CNE2细胞增殖的作用;细胞成像多功能检测系统(CytationTM 5)...     

益气解毒方中苯丙素类化合物对鼻咽癌细胞增殖效应的影响

目的 探讨益气解毒方中苯丙素类化合物异欧前胡素、阿魏酸、绿原酸对人鼻咽癌CNE2细胞增殖效应的抑制作用及机制研究.方法 使用实时无标记细胞功能分析技术(RTCA)动态监测不同浓度的3种苯丙素类化合物对离体人鼻咽癌CNE2细胞生长曲线的影响;CytationTM 5高通量活细胞成像分析检测系统分别监测3种不同浓度苯丙素类...     

姜黄素通过调节Wnt/β-catenin信号通路促进软骨细胞增殖的研究

【目的】探讨姜黄素通过Wnt/β-catenin信号通路对软骨细胞增殖的影响。【方法】取4周龄雌雄新西兰大白兔各1只,采用酶消化法构建体外软骨细胞培养体系;应用形态学观察、甲苯胺蓝染色方法进行细胞形态学鉴定;采用细胞计数试剂盒法(CCK-8法)检测不同浓度姜黄素给药24 h后对软骨细胞增殖的影响;将终浓度为5μmol/L、10μmol/L的姜黄素分别作用于软骨细胞12 h、24 h后,采用Western blot法检测Wnt/β-catenin信号通路中Wnt 2、GSK-3β、β-catenin蛋白表达情况。【结果】当姜黄素的浓度为10μmol/L时,姜黄素对软骨细胞的促增殖作用最为明显。姜黄素能够促进Wnt/β-catenin信号通路中Wnt 2及β-catenin蛋白表达量,且10μmol/L组较5μmol/L组、24 h组较12 h组的表达量更高,24 h两浓度组与对照组比较,差异均有统计学意义(P0.05),但12 h的两浓度组与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05),而GSK-3β结果则正好与上述2种蛋白表达结果相反。【结论】姜黄素对软骨细胞具有一定的保护作用,是中药姜黄发挥抗骨关节炎作用的有效成分之一。     

LncRNA GASL1通过Wnt/β-catenin信号通路促进血管平滑肌细胞增殖

目的 探讨lncRNA GASL1能否通过激活Wnt/β-catenin信号通路,促进血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖.方法 构建lncRNA GASL1 相关的mRNAs共表达网络,并对其进行信号通路分析.将lncRNA GASL1(lncRNA GASL1组...     

Fas通过抑制Wnt/β-catenin信号通路激活调控肝癌细胞增殖

目的 探究肿瘤坏死因子受体超族成员6(Fas)调控肝癌细胞株增殖的潜在分子机制。方法 收集正常肝细胞LO2和肝癌细胞株Hep3B、Huh7、PLC/PRF/5、Bel-7402、SMMC-7721、HepG2和SK-hep1,实时荧光定量PCR法检测Fas基因表达,运用癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析Fas基因表达与肝癌的关系,设计特异性靶向Fas的siRNA,敲低肝癌细胞中Fas基因的表达,通过噻唑蓝(MTT)实验和克隆形成实验检测细胞增殖能力,用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布,双荧光素酶实验检测β-连环蛋白(β-catenin)介导的T细胞因子(TCF)/淋巴增强子(LEF)转录活性,蛋白质印迹法检测β-catenin蛋白表达水平,实时荧光定量PCR法检测无翅型MMTV整合位点家族成员(Wnt)/β-catenin信号通路下游靶基因八聚体结合转录因子3/4(Oct3/4);G1/S-特异性周期蛋白-D1(CCND1);血管内皮生长因子(VEGF);B细胞特异性莫洛氏鼠白血病病毒插入位点-1(Bmi)的表达。结果 TCGA肝癌样品中Fas基因表达谱结果显示,肝癌组织Fas ...     

TRIB3通过激活β-catenin信号通路促进鼻咽癌细胞增殖和侵袭迁移

目的 探讨TRIB3对鼻咽癌细胞增殖和侵袭迁移的影响,并研究其作用机制。方法 使用荧光定量PCR检测鼻咽癌组织和正常癌旁组织中TRIB3的相对表达量,并检测正常鼻咽上皮细胞(N69)和鼻咽癌细胞(HNE-1、CNE-2Z、5-8F)中TRIB3的相对表达量。体外培养人鼻咽癌细胞HNE-1、CNE-2Z,每株细胞分2组：即阴性对照组(NC组)和敲低TRIB3组(sh-TRIB3组)。荧光定量PCR和Western blot法检测转染后各组细胞TRIB3的表达水平。敲低TRIB3后,CCK-8实验和集落克隆实验检测鼻咽癌细胞增殖能力,Transwell实验和划痕实验检测鼻咽癌细胞迁移和侵袭能力,Western blot法检测EMT相关蛋白Snail、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin和β-catenin信号通路相关蛋白GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin和p-β-catenin的相对表达水平。结果 荧光定量PCR结果显示,与癌旁组织相比,鼻咽癌组织中TRIB3表达高度上调(P<0.001);与正常鼻咽上皮细胞(N69)相比,鼻咽癌细胞(HNE-...     

姜黄素通过Wnt/β-catenin信号通路抑制晶状体上皮细胞增殖的实验研究

[目的] 探讨姜黄素通过Wnt/β-catenin信号通路对人晶状体上皮细胞（LECs）增殖的影响及其可能的作用机制,为晶状体后囊膜混浊（PCO）的临床治疗提供新的靶点。[方法] 人LECs系SRA 01/04细胞为研究对象,实验分为3组：Wnt3a组,姜黄素组和对照组。Wnt3a组采用脂质体介导转染技术将Wnt3a cDNA表达载体瞬时转染入人SRA 01/04细胞中,构建PCO的细胞模型。姜黄素组在转染Wnt3a cDNA表达载体48 h后加入20 μmol/L姜黄素,对照组转染pcDNA3-HA表达载体。采用Western blot技术验证载体在转染细胞中的表达,CKK-8实验检测姜黄素对SRA 01/04细胞增殖能力的影响,采用免疫细胞化学法检测Wnt3a过表达后增生细胞核抗原（PCNA）蛋白表达的变化;Western blot法检测Wnt3a过表达对Wnt/β-catenin下游信号分子cyclin D1和c-Myc蛋白表达的影响;应用免疫荧光法检测Wnt3a过表达后β-catenin表达的定位变化。[结果] Western blot检测证实,转染pcDNA3-HA表达载体后,SRA 01/04细胞内Wnt3a蛋白表达明显升高。CKK-8检测表明,姜黄素组SRA 01/04细胞的增殖率明显低于Wnt3a组（t=2.782,P=0.049）。姜黄组SRA 01/04细胞PCNA蛋白表达阳性率为23.6%±4.0%,明显低于Wnt3a组的43.4%±5.4%,差异有统计学意义（t=2.951,P=0.018）。转染后48 h,β-catenin蛋白密集分布于Wnt3a组细胞核和细胞质中,而在对照组仅出现于细胞之中,姜黄素组β-catenin蛋白主要分布于细胞核中,少量分布于细胞质中。Western blot检测姜黄素组Wnt/β-catenin信号通路靶蛋白Cyclin D1和c-Myc蛋白表达明显低于Wnt3a组。[结论] 在SRA 01/04细胞中,姜黄素抑制Wnt3a过表达诱导的Wnt/β-catenin信号通路活化,下游靶蛋白Cyclin D1和c-Myc表达下调,抑制人LECs的增生。     

circRNA-ITCH通过TET1基因抑制Wnt/β-catenin 信号通路对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 观察环状RNA(circRNA)-ITCH在鼻咽癌组织和细胞系中的表达,探讨circRNA-ITCH对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响及其分子机制。方法 qPCR分别检测circRNA-ITCH在49例鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞系中的表达。选取circRNA-ITCH表达最低的细胞系,分别转染阴性质粒或过表达circRNA-ITCH的质粒,定义为对照组和实验组。CCK-8法和Transwell侵袭实验分别检测过表达circRNA-ITCH对细胞增殖和侵袭能力的影响。qPCR和Western blot法分别检测过表达circRNA-ITCH对10-11转位酶1(ten-eleven translocation1,TET1)基因和Wnt/β-catenin信号通路表达的影响。结果 circRNA-ITCH在鼻咽癌组织中表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01)。circRNA-ITCH在鼻咽癌细胞系中表达水平明显低于人永生化鼻咽上皮细胞(P<0.05),在CNE-2Z细胞中的表达水平最低(P<0.01)。与对照组比较,实验组CNE-2Z细胞的增殖能力明显降低(P<0.05),细胞侵袭能力明显降低(P<0.01)。与对照组比较,实验组CNE-2Z细胞中TET1在mRNA和蛋白水平的表达明显增加(P<0.01),Wnt1、PLC、PKC和β-catenin蛋白表达明显降低,Wnt/β-catenin信号通路被抑制。结论 circRNA-ITCH在鼻咽癌组织及细胞系中表达降低,过表达circRNA-ITCH可明显抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞的增殖和侵袭能力,其分子机制可能是促进TET1基因的表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路。     

二氢杨梅素通过Wnt/β-catenin通路抑制肺癌干细胞的研究

目的探讨二氢杨梅素(DMY)体外对肺癌干细胞(LCSCs)的影响及其作用机制。方法体外肺癌细胞株PC9和H1299以及人正常支气管上皮细胞株16HBE经DMY作用后,应用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术测定细胞凋亡;无血清培养基培养亲代PC9和H1299细胞建立LCSCs,单细胞成球实验测定DMY对PC9/LCSCs和H1299/LCSCs悬浮细胞球形态和自我更新能力的影响;应用蛋白质印迹法测定Nanog、OCT4、SOX2和Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达量。结果5~100μmol/L的DMY对16HBE细胞活力无明显抑制效应,该浓度范围的DMY呈浓度依赖性地抑制体外PC9和H1299细胞活力,25μmol/L的DMY可显著诱导体外肺癌细胞凋亡;DMY可显著抑制LCSCs体外单细胞成球体积和数量,并抑制Wnt/β-catenin通路活性,同时降低LCSCs中Nanog、OCT4、SOX2表达量。结论DMY在体外可抑制肺LCSCs生长,其抗癌作用至少部分是通过抑制Wnt/β-catenin通路活性实现。     

Wnt/β-catenin信号通路拮抗剂与骨质疏松

Wnt/β-catenin信号通路是重要的细胞信号转导途径,在细胞的增殖、分化中发挥重要作用。目前的研究表明Wnt/β-catenin信号通路在骨代谢中发挥重要作用,该通路的异常与骨质疏松的发生有关。Wnt/β-catenin拮抗剂可以抑制Wnt/β-catenin信号通路,导致通路表达异常,进一步研究Wnt/β-catenin信号通路拮抗剂,设计出阻断该通路拮抗剂的物质,可为骨质疏松的治疗提供一种新的途径。     

Wnt/β-catenin与BMP-2/Smads信号通路及其相互作用对骨质疏松疾病的影响

[目的]对Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)和骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP-2)/Smads信号通路在骨代谢中的作用及其在骨质疏松症(osteoporosis,OP)预防和治疗中的作用进行综述,以期为OP相关疾病的预防和治疗提供新思路。[方法]通过中国知网、万方、Pubmed等数据库检索近年来国内外关于Wnt/β-catenin与BMP-2/Smads信号通路与OP疾病关系的实验研究文献,总结Wnt/β-catenin与BMP-2/Smads信号通路与OP疾病关系的研究概况。[结果] ①Wnt/β-catenin信号传导对于骨骼谱系分化至关重要,可防止成骨细胞转分化为软骨细胞。其中的负调控信号分子可能是治疗骨质疏松症的药物靶点,并成为药物治疗骨质疏松症的手段之一。②BMP-2/Smads信号通路中的信号分子可用于骨质疏松靶标的治疗,但其应用时间、浓度也应再继续深入研究,以期达到更好的治疗骨质疏松的效果。③Wnt/β-catenin和BMP-2/Smads信号通路在许多生物学行为中相互重叠、互补或抑制,提示两种信号途径之间存在着复杂的交联关系。[结论] Wnt/β-catenin和BMP-2/Smads信号通路是调节成骨细胞生长、发育和分化的两个重要信号通路,在成骨细胞分化和骨形成过程中发挥重要作用。Wnt/β-catenin和BMP-2/Smads信号通路在OP的预防、治疗及新药的研制和开发中具有广泛应用前景。     

益气解毒方对大鼠鼻咽癌变过程中细胞凋亡和增殖的干预

目的探讨益气解毒方对大鼠鼻咽癌变过程中细胞凋亡和增殖的干预作用。方法用二亚硝基哌嗪（DNP）诱导大鼠诱发鼻咽癌变模型,益气解毒方进行干预治疗。定期分批处死大鼠,取鼻咽组织做病理检测,TUNEL法检测细胞凋亡活性,免疫组织化学SABC法检测PCNA蛋白活性表达。结果益气解毒方组大鼠鼻咽上皮组织的癌变率为0％,明显低于生理盐水模型组（86．3％）;维甲酸阳性对照组大鼠的癌变率为0％,但该组所有动物均于实验周期的第250-,310天间逐渐死亡。在诱发性鼻咽上皮细胞癌变进程中的单纯性增生阶段,大鼠鼻咽上皮细胞凋亡活性和PCNA蛋白表达活性组问差异均无统计学意义（P〉0．05）;在异型增生阶段,益气解毒方组鼻咽上皮细胞凋亡活性明显高于模型组,差异具有统计学意义（P〈0．05）,PCNA蛋白表达活性则显著低于模型组,差异具有硫计学意义（P〈0．05）。结论益气解毒方能有效阻逆大鼠鼻咽上皮细胞癌变进程,其作用与其有效诱导细胞凋亡、抑制细胞增殖活性有关。     

Wnt/β-catenin信号通路与肾脏疾病

wnt信号通路的异常调节已经在许多疾病中被研究,包括肾脏疾病。wnt信号通路传导主要分为两类：经典wnt信号通路、非经典wnt信号通路。其中对经典wnt信号通路,即wnt/β-catenin的研究最为深入。wnt/β-catenin信号通路在肾脏的产生、损伤修复及其他肾脏疾病中有着重要的作用。但是wnt/β-catenin如何影响相关肾脏疾病的机制仍不是非常明确。本文简单总结了近来wnt/β-catenin信号通路与肾脏疾病的相关进展。     

紫朱软膏对糖尿病足溃疡Wnt/β-catenin信号通路表达的影响

目的:观察糖尿病足溃疡患者中Wnt/β-catenin信号通路基因表达的变化及紫朱软膏外用对此信号通路的影响。方法:观察糖尿病足溃疡患者60例外用紫朱软膏后创面愈合情况,治疗前后肝肾功能等安全性评价及创面组织中Wnt/β-catenin信号通路相关指标基因的表达变化。结果:紫朱软膏能促进糖尿病足溃疡的愈合,且未对患者肝、肾功能造成影响;与治疗前比较,紫朱软膏能上调糖尿病足溃疡患者创面组织中β-catenin、c-Myc、Rspo-3等基因表达,下调GSK-3β表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:紫朱软膏可能通过激活表达低下的Wnt/β-catenin信号通路促进糖尿病足溃疡愈合。     

紫朱软膏对糖尿病足溃疡Wnt/β-catenin信号通路表达的影响

目的:观察糖尿病足溃疡患者中Wnt/β-catenin信号通路基因表达的变化及紫朱软膏外用对此信号通路的影响。方法:观察糖尿病足溃疡患者60例外用紫朱软膏后创面愈合情况,治疗前后肝肾功能等安全性评价及创面组织中Wnt/β-catenin信号通路相关指标基因的表达变化。结果:紫朱软膏能促进糖尿病足溃疡的愈合,且未对患者肝、肾功能造成影响;与治疗前比较,紫朱软膏能上调糖尿病足溃疡患者创面组织中β-catenin、c-Myc、Rspo-3等基因表达,下调GSK-3β表达,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:紫朱软膏可能通过激活表达低下的Wnt/β-catenin信号通路促进糖尿病足溃疡愈合。