基于IL-6/JAK/STAT3信号通路探讨大黄灵仙方缓解胆管细胞炎性反应的作用机制

目的：基于IL-6/JAK/STAT3信号通路探讨大黄灵仙方缓解脂多糖（LPS）诱导肝内胆管炎症模型大鼠的胆管细胞炎性反应的作用机制。方法：将50只SD大鼠随机分为5组,空白组、模型组、胆宁片（0.5 g/kg）、大黄灵仙方低、高浓度组（2.4 g/kg、4.8 g/kg）,每组10只。除空白组以外,其余各组大鼠于胆总管处一次性注射1.25 mg/kg LPS以构建肝内胆管感染动物模型。第8天灌胃结束后取材,取大鼠肝门处肝脏组织,采用HE染色观察肝门和胆管树组织病理变化。生化法测定血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的表达水平。酶联免疫吸附法（ELISA）检测大鼠血清中白介素6(IL-6)、Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)、信号转导和转录活化因子3(STAT3)的表达水平。蛋白免疫印迹法（WB）、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测胆管树组织中的IL-6、JAK2、STAT3蛋白及mRNA的表达水平。结果：（1）与空白组对比,模型组大鼠的肝窦和门管区小叶间胆管等结构均被破坏,周围存在炎性细胞浸润,血清中ALT、AST、M...     

JAK2/STAT3通路在脑缺血再灌注损伤炎性反应中的作用

【摘要】 目的 研究JAK2/STAT3通路在脑缺血再灌注损伤炎性反应中的作用。方法 采用线栓法建立SD大鼠脑缺血再灌注模型,造模成功后将其随机分为模型组、AG490组,每组各24只,根据再灌注时间分为再灌注后6 h、12 h、 24 h、72 h四个亚组,每个亚组动物6只,同时随机挑选24只正常SD大鼠经假手术处理为假手术组。分别于再灌注后6 h、12 h、24 h、72 h四个时间点进行神经功能缺损评分;在相应时间点处死后取脑组织,采用免疫组化测定脑组织中JAK2、STAT3、IL 1β、TNF α蛋白水平。结果〓假手术组各个时间点比较,神经功能缺损评分及JAK2、STAT3、IL 1β、TNF α蛋白表达均无明显差异;模型组神经功能缺损评分及上述蛋白表达在24小时内呈上升趋势,并于24小时达最高峰,72小时降低;AG490组神经功能缺损评分及上述蛋白表达则一直呈下降趋势,并且神经功能缺损评分再灌注后24 h、72 h均低于模型组（P＜005）。AG490组4个时间点JAK2、STAT3、IL 1β、TNF α的蛋白表达均低于模型组（P＜001）,高于假手术组（P＜001）。结论 脑缺血再灌注后激活JAK2/STAT3通路能通过增加IL 1β及TNF α的表达促进炎性反应,加重脑缺血再灌注损伤;AG490能通过降低脑缺血再灌注损伤后JAK2、STAT3、IL 1β、TNF α蛋白水平,保护神经功能。     

IL-17及其受体调控JAK/STAT3信号通路促进喉癌血管生成的作用

目的 探讨白细胞介素17(IL-17)及其受体调控酪氨酸激酶(JAK)/转录激活因子-3(STAT3)信号通路促进喉癌血管生成的作用. 方法 收集喉癌手术切除标本70 例,癌组织通过不同病理分级,采取70 例喉癌患者的外周血. 采用ELISA 法检测外周血中 IL-17、血管内皮生长因子 A ( VEGF-A)的浓度,分析其与临床病理特征的关系. Western blot 法检测喉癌组织中IL-17、IL-17受体( IL-17R)、JAK1/2、p-JAK1/2、STAT3、p-STAT3、VEGF-A、环氧合酶-2 ( COX-2 )、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)等信号分子水平的变化. 结果喉癌患者血清中IL-17、VEGF-A的含量与喉癌的分化程度、淋巴结有无转移和TNM分期有关( P<0. 05 ) , Western blot结果显示在喉癌发展的不同时期,随着喉癌的恶化, IL-17、IL-17R的表达逐渐增强,相关信号通路分子JAK1/2、p-JAK1/2、STAT3、p-STAT3、VEGF-A、COX-2、MMP-9 表达也显著增加. 结论 IL-17可能调控JAK/STAT3信号通路,在喉癌的血管生成中起到重要的作用.     

IL-17调控IL-6/IL-6R/JAK1/STAT3信号通路影响喉癌细胞的侵袭和转移

目的 研究白介素(IL)-17通过IL-6/1L-6R/JAK1/STAT3信号通路调控人源性高分化喉癌细胞(Hep-2)侵袭、转移.方法 以Hep-2细胞为研究对象,设IL-17刺激剂0、1、50、100 ng/ml浓度组,Westem blot法检测不同分组在IL-17的刺激下,Hep-2细胞中IL-6、IL-6R、JAK1、p-JAK1、STAT3、p-STAT3的表达变化.迁移、侵袭实验观察IL-17的刺激对Hep-2细胞侵袭、迁移的影响.结果 Western blot实验中,在IL-17刺激下,1、50、100 ng/ml浓度组较0 ng/ml浓度组Hep-2细胞的IL-6、IL-6R、p-JAK1、p-STAT3的表达明显增加(p＜0.01),50、100 ng/ml浓度组较1 ng/ml浓度组Hep-2细胞的IL-6、1L-6R、p-JAK1、p-STAT3的表达明显增加(P＜0.01),100 ng/ml浓度组较50 ng/ml浓度组Hep-2细胞的IL-6R、p-JAK1、p-STAT3的表达明显增加(P＜0.01);各组间JAK1、STAT3的表达无明显变化.侵袭与迁移实验显示IL-17可以促进Hep-2细胞的侵袭和迁移.结论 IL-17可能通过IL-6/IL-6R/JAK1/STAT3信号通路促进Hep-2细胞的侵袭和转移.     

当归补血微囊促血管新生中JAK2/STAT3通路的作用研究

目的 探讨JAK2/STAT3信号传导通路在当归补血微囊促血管新生中的作用。方法 建立人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）模型,分别采用CCK-8和流式细胞术检测HUVEC细胞活力和细胞凋亡情况;采用Western blot检测各组中p-STAT3、VEGF的表达情况;采用荧光定量PCR,检测各组中VEGF基因和miRNA-21的表达情况。结果 20μg/mL当归补血微囊作用于HUVEC 24h,可有效促进HUVEC的增殖,并上调p-STAT3、VEGF及miRNA-21的表达;AG490能有效抑制当归补血微囊对HUVEC的促增殖作用,并减少p-STAT3、VEGF及miRNA-21的表达。结论 当归补血微囊促进血管生成的作用确实与JAK2/STAT3信号途径有关。      

山竹醇介导JAK2/STAT3信号通路发挥抗骨肉瘤作用

目的 探究山竹醇对骨肉瘤细胞活力、细胞周期分布和凋亡的影响及对裸鼠皮下骨肉瘤生长的影响并探究其作用机制。方法 采用CCK-8实验检测山竹醇对骨肉瘤细胞活力的影响;流式细胞术分析山竹醇对骨肉瘤细胞凋亡率及细胞周期分布的影响;构建裸鼠皮下骨肉瘤模型,检测山竹醇腹腔注射对裸鼠皮下骨肉瘤生长的影响;RNA测序分析检测山竹醇处理骨肉瘤细胞后改变的基因;Western blot法检测山竹醇对骨肉瘤细胞及肿瘤组织中JAK2/STAT3信号通路的影响。结果 CCK-8法检测结果表明,山竹醇能时间、浓度依耐性的抑制骨肉瘤U2OS细胞活力;流式细胞术检测结果表明,山竹醇能诱导U2OS细胞凋亡,并导致细胞周期阻滞于S期。并且,山竹醇能抑制裸鼠皮下骨肉瘤的生长。基因富集分析结果表明,山竹醇处理的骨肉瘤细胞中JAK/STAT信号通路显著富集。Western blot法检测结果表明,山竹醇处理骨肉瘤细胞及骨肉瘤组织中p-JAK2、p-STAT3、Bcl-xl水平明显降低,而Bax表达水平显著升高。结论 山竹醇能可在体内体外发挥抗骨肉瘤作用,可能与其抑制骨肉瘤中JAK2/STAT3信号通路活性有关。     

促炎因子在实验性重症急性胰腺炎早期对JAK2/STAT3信号通路的影响

目的探讨重症急性胰腺炎( SAP)早期炎症因子的分泌与JAK2/STAT3信号通路之间的关系。方法以4%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射诱导大鼠 SAP模型。32只雄性SD大鼠随机分为4组：对照组和SAP造模组(6、12、18 h),每组8只。动态测定各组血清淀粉酶( AMY )和胰脂肪酶( LPS)、血钙( Ca2+)水平;光镜下观察胰腺病理变化;ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α( TNF-α)、白介素-1β( IL-1β)及白介素-18(IL-18)表达情况;RT-PCR和Western blot法分别检测胰腺组织中JAK2和STAT3在胰腺中的表达水平变化。结果各SAP造模组血清学指标水平、TNF-α、IL-1β及IL-18均明显高于对照组;病理学显示胰腺组织随病情进展逐步加重;SAP造模组胰腺JAK2和STAT3基因和蛋白的表达均明显增高,且JAK2和STAT3表达变化与胰腺组织的严重程度相一致。结论 SAP早期促炎因子过度表达是病情进展的损伤因子,可能通过诱导 JAK2/STAT3信号通路的活化,加重SAP早期器官损伤程度。     

JAK2/STAT3途径在IL-6抑制LPS诱导的树突状细胞分化成熟中的作用

目的 观察JAK2/STAT3信号途径在IL-6抑制LPS诱导的小鼠髓源性树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs)分化成熟中的作用.方法 分离小鼠骨髓细胞,采用黏附法结合GM-CSF和IL-4刺激法在体外培养BMDCs;用相差倒置显微镜观察BMDCs的形态特点;用LPS诱导DCs成熟;采用流式细胞术观察IL-6处理与否,LPS诱导的BMDCs在表型上的变化;Western blot检测BMDCs细胞质p-JAK2、总STAT3和P-STAT3的表达水平.结果 形态观察和FCM分析的结果表明:体外成功培养了纯度较高的高表达CD11c的BMDCs,LPS能明显诱导BMDCs表面MHC-Ⅱ类分子和共刺激分子CD80、CD86、CD40的表达上调;而经过IL-6处理后,LPS诱导BMDCs表面MHC-Ⅱ类分子、CD80、CD86、CD40表达上调的能力被显著削弱(P＜0.01).Western blot结果显示,与单独用LPS处理的BMDCs相比,经IL-6处理后的BMDC中p-JAK2、P-STAT3表达随作用时间增加而明显上调,提示IL-6促进JAK2/STAT3信号途径活化.结论 JAK2/STAT3信号途径参与了IL-6抑制LPS诱导的BMDCs成熟过程.     

足细胞损伤中JAK2/STAT3通路与TRPC6相互作用的机制探讨

目的 研究在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的足细胞损伤中,JAK2/STAT3通路与瞬时受体电位非选择性阳离子通道蛋白6(TRPC6)相互作用的机制.方法 将小鼠足细胞分为对照、AngⅡ损伤、AngⅡ+氯沙坦、AngⅡ+AG490、AngⅡ+SKF96365组等,通过Western blot、qRT-PCR检测各分组的T...     

JAK2/STAT3信号通路在白藜芦醇抗肝脏缺血再灌注损伤中的作用及机制研究

目的：：探讨JAK2/STAT3信号通路在白藜芦醇抗肝脏缺血再灌注损伤中的作用及机制。方法：健康雄性SD大鼠40只随机分为4组,假手术对照(SC)组、肝脏缺血再灌注(HIR)组、白藜芦醇处理(Res+HIR)组、JAK2/STAT3通路阻断剂AG490(Res+AG490+HIR)组。建立急性肝脏缺血再灌注损伤模型,于再灌注6h后收集动物血液和肝脏标本。检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(AKP)及炎症因子IL-6、TNF-α、IL-10、TGF-β的变化。肝脏组织HE染色,光镜下观察肝组织形态学变化。结果：与HIR组相比,Res+HIR组大鼠肝组织病理学变化明显改善,血清中反映肝脏功能学的指标ALT、AST及AKP的浓度明显降低,同时血清中抗炎因子IL-10和TGF-β含量升高,而促炎因子IL-6和TNF-α含量降低;使用JAK2/STAT3通路阻断剂AG490后,肝组织病理学改变明显,ALT、AST及AKP的浓度明显升高,IL-10和TGF-β含量降低,而IL-6和TNF-α含量明显升高。结论：白藜芦醇对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用可能是通过激活JAK2/STAT3信号通路,改变再灌注过程中炎性反应实现的。     

JAK2/STAT3信号传导通路在瘦素促进子宫内膜癌细胞增殖中的作用

目的 探讨JAK2/STAT3信号传导通路在瘦素促进子宫内膜癌细胞(Ishikawa细胞)增殖中的作用.方法 免疫荧光染色法检测瘦素受体(OB-Rb)在Ishikawa细胞的表达.Ishikawa细胞分别用不同浓度的瘦素(0、10、50、100、150 ng/ml)作用不同的时间(6、12、24 h)后,MTT法检测各组细胞的增殖情况;另应用不同浓度(0、25、50、100 μmol/L)JAK2激酶特异性抑制剂AG490阻断STAT3磷酸化后,采用MTT法检测瘦素对Ishikawa细胞增殖的影响;瘦素(100 ng/ml)作用Ishikawa细胞不同时间(0、20、40、60 min)后,采用免疫印迹法(Western blot)检测细胞STAT3磷酸化水平.结果 免疫荧光染色证实Ishikawa细胞膜存在OB-Rb的表达;瘦素能明显促进Ishikawa细胞的增殖,在0 ～100 ng/ml范围内呈剂量依赖性,于150 ng/ml瘦素作用24 h时细胞增殖效应最大;AG490可明显抑制瘦素对Ishikawa细胞的促增殖作用,呈剂量依赖性;Ishikawa细胞经100 ng/ml瘦素处理后,随时间的延长,STAT3活化程度逐渐增高,至少可持续60 min.结论 瘦素可能通过激活JAK2/STAT3信号传导通路促进子宫内膜癌细胞的增殖.     

基于EPO介导的JAK2/STAT5信号通路研究百会、大椎刺络促缺血性脑卒中后血管新生的调控机制

目的 基于促红细胞生成素（erythropoietin,EPO）介导的JAK2/STAT5信号通路探讨百会、大椎刺络促缺血性脑卒中后血管新生的调控机制。方法 选取健康SD雄性大鼠150只,随机分为正常对照组、假手术组、模型对照组、刺络治疗组、刺络+EPO拮抗组,每组30只;正常对照组不进行手术,假手术组仅分离血管而不插线栓,模型对照组、刺络治疗组、刺络+EPO拮抗组采用改良的Zea-Longa法制备大脑中动脉局灶性脑缺血再灌注模型（middle cerebral artery occlusion/reperfusion model,MCAO/R）大鼠。模型制备后刺络治疗组、刺络+EPO拮抗组采用“百会”“大椎”穴刺络进行干预,刺络+EPO拮抗组在针刺前将脂质体-siEPO2复合物按5 mg/kg剂量对大鼠进行腹腔注射,使之进入合成EPO的靶细胞,在细胞内引起针对EPO的RNA干扰效应。采用苏木精-伊红染色观察各组大鼠脑皮质病理形态,RT-PCR法检测各组大鼠脑皮质中EPO、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF） mRNA表达水平,Western Blot法检测各组大鼠脑皮质中P-JAK2、P-STAT5、VEGF蛋白表达水平。结果 与正常对照组比较,模型对照组及刺络+EPO拮抗组大鼠脑皮质病理损伤严重;与模型对照组比较,刺络治疗组大鼠脑皮质病理损伤明显改善。与正常对照组比较,模型对照组大鼠脑皮质中EPO、VEGF mRNA表达水平显著升高（P＜0.05）,P-JAK2、P-STAT5、VEGF蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,刺络治疗会进一步增强这种趋势;与刺络治疗组比较,刺络+EPO拮抗组大鼠脑皮质中EPO、VEGF mRNA表达水平降低（P＜0.05）,P-JAK2、P-STAT5、VEGF蛋白表达水平降低（P＜0.05）。结论 通过百会、大椎刺络能上调MCAO/R模型大鼠EPO的表达水平,激活JAK2/STAT5信号通路,促进下游VEGF的表达而促进缺血性脑卒中后血管的新生。     

安子合剂对ACA阳性流产小鼠母胎界面JAK/STAT3信号通路的影响

目的 观察安子合剂对抗心磷脂抗体(ACA)阳性小鼠母胎界面JAK/STAT3信号通路的影响。方法 以人β2-GPⅠ为诱导剂建立ACA阳性小鼠模型,空白组给予生理盐水,模型组给予人β2-GPⅠ;各治疗组分别给予阿司匹林和高、低两种不同剂量安子合剂,于妊娠第15天处死,计算胚胎吸收率,采用ELISA方法检测外周血ACA;采用免疫组化方法检测胎盘、蜕膜组织JAK、GP130、p-STAT3,以Western blot方法检测STAT3、p-STAT3。结果 安子合剂低、高剂量组、阿司匹林组小鼠的胚胎吸收率明显降低,小鼠血清ACA的滴度也显著降低（P<0.05),母胎界面的JAK、GP130、p-STAT3的表达均增高,其中胎盘的JAK、p-STAT3的表达与模型组比较具有显著差异（P<0.05),蜕膜GP130、p-STAT3的表达与模型组比较具有显著差异（P<0.05)。结论 ACA导致妊娠丢失的病理机制与母胎界面JAK/STAT3信号通路有关,安子合剂发挥治疗作用的机制可能是通过提高胎盘JAK的表达、增强蜕膜GP130的表达,促进胎盘及蜕膜STAT3的活化。      

JAK/STAT信号转导通路在大鼠急性脊髓损伤中的异常激活及意义

目的研究JAK（Janus激酶）/STAT（信号转导和转录激活子）信号转导通路相关基因JAK2、STAT3在大鼠急性脊髓损伤中激活后的表达变化,并探讨其被异常激活的意义。方法采用健康雄性SD大鼠60只,分为假手术组和脊髓损伤组,随机分到4、12、24、72h和168h各个亚组（n=6）。脊髓损伤组应用Allen’s重物坠落法并加改良制作大鼠急性脊髓损伤模型,假手术组只切除椎板不损伤脊髓。术后在相应时间处死取脊髓,HE染色观察脊髓组织形态结构,免疫组织化学检测脊髓组织中P-JAK2（磷酸化JAK2）、P-STAT3（磷酸化STAT3）表达的动态变化。结果免疫组织化学检测显示假手术组大鼠脊髓组织中P-JAK2、P-STAT3阳性细胞较少,在脊髓损伤组各个时间点P-JAK2、P-STAT3的表达量明显高于假手术组（P〈0.01）。损伤后4h迅速上升,12h达峰值（P〈0.01）,而后逐渐下降,168h仍有表达。结论大鼠急性脊髓损伤可异常激活JAK/STAT信号转导通路,它可能在继发性脊髓损伤中起着重要作用。     

宫颈癌中JAK2／STAT3信号通道介导bax、bcl-2的表达

目的探讨JAK2/STAT3信号通道的激活及其介导bax/bcl-2在宫颈癌中的表达作用。方法选取本院2011-2014年宫颈癌患者40例,CINⅠ级组28例,CINⅡ/Ⅲ级组12例;选择正常宫颈15例为对照组。病理切片采用免疫组织化学方法测定P-JAK2、P-STAT3、bax、bcl-2的表达。结果1）对照组未见P-JAK2、PSTAT3蛋白表达;与对照组比较,CINⅠ级组及CINⅡ/Ⅲ级组表达增多（P〈0.05）;与CINⅠ级组比较,CINⅡ/Ⅲ级组表达增多（P〈0.05）。2）对照组可见少量bax、bcl-2蛋白表达;与对照组比较,CINⅠ级组及CINⅡ/Ⅲ级组表达增多（P〈0.05）;与CINⅠ级组比较,CINⅡ/Ⅲ级组的bax/bcl-2比率降低（P〈0.05）。3）CINⅠ级组和CINⅡ/Ⅲ级组通道蛋白P-JAK2、P-STAT3与bax/bcl-2比率呈正相关（P〈0.05）。结论宫颈癌患者JAK2/STAT3信号通道激活,可能与上调bax/bcl-2的表达和调节细胞凋亡有关。     

IL-11调控 gp130/JAK2/STAT3信号通路促进Wistar大鼠雪旺细胞中PMP22的表达

目的:探索白介素-11对大鼠雪旺细胞分泌髓鞘蛋白的调节作用及相关机制。方法:取成年Wistar大鼠坐骨神经,分离纯化培养雪旺细胞。加入重组大鼠白介素-11,分别采用realtime RT-qPCR和Western boltting检测雪旺细胞髓鞘蛋白的表达情况,进一步检测IL-11调控髓鞘蛋白表达的相关通路的激活情况。结果:Realtime RT-qPCR和Western boltting结果均提示白介素-11可以显著提高雪旺细胞中周围神经髓鞘蛋白22的表达水平,而对雪旺细胞中髓鞘碱性蛋白和髓鞘蛋白零的表达水平则没无明显影响,该生理作用可被JAK特异性抑制剂AG490所抑制。在经过IL-11处理的SCs 细胞中可以观察到pJAK2（Y1007＋Y1008）和pSTAT3（Y705）含量明显高于对照组且伴随着SCs中gp130表达的上调。结论:白介素-11可通过调剂gp30/JAK2/STAT3信号通路以促进雪旺细胞中周围神经髓鞘蛋白22的表达。     

抵当汤对糖尿病大鼠心肌组织JAK2/STAT3信号通路的影响

目的 探讨抵当汤及其拆方对糖尿病大鼠肥大心肌细胞JAK2/STAT3信号通路的影响。〖JP〗方法 单次注射链脲佐菌素复制糖尿病大鼠模型,将糖尿病大鼠随机分为模型组、抵当汤组、桃仁大黄组、水蛭虻虫组和缬沙坦组,以正常雄性SD大鼠作为正常对照组。正常对照组和模型组给予蒸馏水灌胃,其余各组大鼠接受相应药物灌胃,连续8周。采用Western blot法检测心钠素（atrial natriuretic peptide,ANP）、心肌组织JAK2和STAT3蛋白表达,采用实时荧光定量PCR法检测JAK2、STAT3 mRNA表达。结果 与正常对照组比较,模型组ANP、JAK2、STAT3蛋白以及JAK2、STAT3 mRNA表达水平均显著上调（P<0.05）。水蛭虻虫拆方和桃仁大黄拆方对糖尿病大鼠心肌组织ANP、JAK2和STAT3蛋白表达的主效应均具有统计学意义（P<0.05）,两者的交互作用均无统计学意义（P>0.05）。水蛭虻虫拆方和桃仁大黄拆方对糖尿病大鼠心肌组织JAK2、STAT3 mRNA表达的交互作用具有统计学意义（P<0.05）。缬沙坦组、抵当汤组及两个抵当汤拆方组ANP、JAK2蛋白及JAK2 mRNA表达水平比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 抵当汤延缓糖尿病大鼠心肌细胞肥大的机制与抑制JAK2/STAT3信号通路有关,其拆方对JAK2、STAT3 mRNA表达的效应存在相互影响。