首发精神分裂症患者血清miR- 146a-5p、TRAF6的表达及意义

摘要:目的探究首发 精神分裂症(SZ)患者血清微小RNA-146a-5p( miR-146a-5p)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)的表达水平变化并分析其临床意义。方法选取2019 年2月至2021年4月于杭州师范大学附属萧山医院收治的95例首发SZ 患者作为SZ组,同期体检健康者98例作为健康人对照组;qRT-PCR检测各受试者血清miR- 146a-5p TRAF6 mRNA的表达水平;Pearson相关系数法分析miR-146a-5p与TRAF6 mRNA表达水平的相关性;以及二者分别与阳性和阴性症状量表( PANSS) 评分和威斯康星卡片分类测验(WCST)评分的相关性;ROC曲线评估miR-146a-5p与TRAF6在首发SZ中的诊断价值;Logistic回归分析影响首发sZ发生的因素。结果与健康人对照组相比,SZ组患者血清miR-146a-5p的表达水平显著降低，TRAF6 mRNA的表达水平显著增加( P<0.01),且二者呈显著负相关(r=-0.444,P= 0.000);与治疗前相比,治疗后SZ组患者血清miR-146a-5p的表达显著增加(P<0.01) , TRAF6 mRNA的表达显著降低(P<0.01),且二者呈显著负相关(r=-0.428,P= 0.000);PANSS总评分、PANSS阳性、-般精神病理症状非持续性错误数、错误应答数与miR-146a-5p 水平均呈负相关,而与TRAF6 mRNA水平均呈正相关( P<0.05) ;相较于miR-146a-5p. TRAF6 mRNA单独诊断首发SZ发生,二者联合检测诊断首发 SZ发生时的ROC曲线下面积显著增加(Z =2.037,P= 0.042;Z= 2.162,P=0.031) ;Logistic回归分析结果表明，miR-146a-5p低表达及TRAF6 高表达是影响首发SZ发生的危险因素。结论首发 SZ患者血清miR-146a-5p的表达显著降低, TRAF6 mRNA 的表达显著增加,且二者与疾病严重程度存在密切相关性,有望成为首发SZ的早期诊断指标。     

乳腺癌细胞ret基因转录水平的表达及其与PI3KAktmTOR信号通路相关因子的关系

目的探讨乳腺癌细胞ret基因转录水平的表达及其与PI3KAktmTOR信号通路相关因子的关系。方法以乳腺癌细胞为研究对象,采用荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞中RET、PI3K、mTOR和AKT mRNA表达量,构建合成ret shRNA慢病毒载体,转染乳腺癌细胞,再次采用RT-PCR检测细胞中RET、PI3K、mTOR和AKT mRNA表达量。比较转染前后细胞中RET、PI3K、mTOR和AKT mRNA表达量,并采用Pearson线性相关分析法分析其细胞中RET mRNA表达量与其PI3K、mTOR和AKT mRNA表达量的关系。结果转染前细胞中RET、PI3K、mTOR和AKT mRNA表达量分别为0.851±0.126、0.872±0.126、0.845±0.087和0.769±0.355,均分别高于转染后的0.108±0.023、0.113±0.022、0.098±0.022和0.072±0.013(P<0.05)。Pearson线性相关分析结果显示,细胞中RET mRNA表达量与其PI3K、mTOR和AKT mRNA表达量均呈正相关(r=0.877、0.852、0.863,P<0.05)。结论乳腺癌细胞ret基因转录水平较高且与PI3KAktmTOR信号通路相关因子密切相关,可能通过调控PI3KAktmTOR信号通路而影响乳腺癌的发生发展,可能作为乳腺癌治疗的靶基因之一。     

miR-9对人脑胶质瘤LN229细胞增殖的影响

目的探讨miR-9对人脑胶质瘤LN229细胞增殖的影响及可能机制。方法对数生长期人脑胶质瘤LN229细胞,随机分为miR-9抑制剂组(转染30 mg/L miR-9小干扰RNA质粒5μL)、空白对照组(转染空载质粒)、乳酸脱氢酶A(labeling recombinant lactate dehydrogenase A,LDHA)激动剂组(转染30 mg/L miR-9小干扰RNA质粒5μL及4 mg/L LDHA激动剂5μL)。转染后培养48 h,3组采用CCK-8法检测细胞增殖率;实时荧光定量PCR法检测miR-9 mRNA、LDHA mRNA相对表达量;氧化酶法测定葡萄糖消耗量;比色测定法测定乳糖产量。结果转染后培养48 h,miR-9抑制剂组、空白对照组、LDHA激动剂组细胞增殖率吸光度值(0.60±0.01、0.90±0.02、1.15±0.05)依次增高(P<0.05);miR-9 mRNA相对表达量在miR-9抑制剂组(0.52±0.01)、LDHA激动剂组(0.53±0.01)低于空白对照组(1.67±0.01)(P<0.05),miR-9抑制剂组与LDHA激动剂组比较差异无统计学意义(P>0.05);miR-9抑制剂组、空白对照组、LDHA激动剂组LDHA mRNA相对表达量(0.64±0.01、0.87±0.01、2.77±0.01)、葡萄糖消耗量[(0.02±0.01)、(0.36±0.01)、(0.77±0.01)nmol/L]、乳糖产量[(43.02±4.01)、(73.02±3.11)、(1562.00±5.44)nmol/L]均依次增高(P<0.05)。结论miR-9通过促进LDHA表达,增强肿瘤细胞有氧糖酵解,促进人脑胶质瘤LN229细胞增殖。     

miR-326靶向MAPK/MEK信号通路抑制食管鳞状细胞癌恶性生物学行为

目的探讨miR-326靶向MAPK/MEK信号通路对食管鳞状细胞癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法 20例食管鳞状细胞癌患者,取手术切除食管癌组织和癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR法检测miR-326mRNA和MAPK mRNA相对表达量,采用免疫组织化学法检测MAPK蛋白表达。3种食管癌细胞系(KYSE150、EC9706、TE-9)和人正常食管上皮细胞系Het-1A,采用实时荧光定量PCR法检测细胞miR-326 mRNA和MAPK mRNA相对表达量,Western blot法检测细胞MAPK蛋白相对表达量。将对数生长期EC9706细胞随机分为miR-326组、转染对照组和空白对照组,miR-326组和转染对照组分别转染miR-326 mimic和mimic NC,空白对照组细胞不作任何处理,采用Western blot法检测细胞MAPK、p-MEK、p-ERK1、p-ERK2和p-C-Jun蛋白相对表达量,克隆形成试验检测细胞克隆形成率,划痕试验检测细胞划痕闭合率,Transwell小室试验检测细胞侵袭,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,荧光素酶活性检测试剂盒检测细胞荧光素酶活性。结果食管癌组织miR-326 mRNA相对表达量低于癌旁正常组织(P0.05),MAPK mRNA相对表达量高于癌旁正常组织(P0.05)。KYSE150、EC9706和TE-9细胞miR-326 mRNA相对表达量均低于Het-1A细胞(P0.05),MAPK mRNA和MAPK蛋白相对表达量高于Het-1A细胞(P0.05),且EC9706细胞MAPK蛋白相对表达量最高。miR-326组细胞MAPK 3'UTR WT荧光素酶活性(0.53±0.05)明显低于转染对照组(1.22±0.14)(P0.05),MAPK 3'UTR MUT荧光素酶活性(0.86±0.06)与转染对照组(0.91±0.11)比较差异无统计学意义(P0.05)。miR-326组细胞MAPK蛋白相对表达量(0.32±0.15)低于转染对照组(0.88±0.07)和空白对照组(0.91±0.06)(P0.05),细胞克隆形成率[(21.30±0.55)%]、划痕闭合率[(29.47±4.12)%]和侵袭细胞数[(113.86±3.15)个]低于转染对照组[(75.43±0.81)%、(80.52±2.51)%、(427.27±4.25)个]和空白对照组[(79.13±0.65)%、(83.44±1.87)%、(468.10±3.38)个](P0.05),G_0/G_1期细胞比率[(63.15±1.20)%]和细胞凋亡率[(18.54±0.60)%]高于转染对照组[(41.18±0.60)%、(5.28±1.30)%]和空白对照组[(45.11±0.80)%、(4.13±0.90)%],S期和G_2/M期细胞比率及p-MEK、p-ERK1、p-ERK2和p-C-Jun蛋白相对表达量低于转染对照组和空白对照组(P0.05),转染对照组与空白对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论 miR-326靶向抑制MAPK/MEK信号通路的激活,影响食管鳞状细胞癌细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡。     

MMP-9抑制剂通过PI3K/Akt信号通路对人口腔鳞癌SCC15细胞株生物学行为的影响

目的探讨基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)抑制剂(SB-3CT)通过磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol-3 kinase, PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B, Akt)信号通路对人口腔鳞癌SCC15细胞株增殖、侵袭、迁移的调控作用。方法对数生长期SCC15细胞分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,分别采用0、2.5、5、10μmol/L SB-3CT进行处理。采用MTT法检测处理24、48、72 h时细胞增殖率;处理24 h时,采用Transwell小室试验检测侵袭细胞数,采用划痕试验检测细胞融合距离,采用实时荧光定量PCR法检测细胞MMP-9、PI3K、Akt mRNA相对表达量,采用Western blot法检测细胞MMP-9、PI3K、Akt、p-Akt蛋白相对表达量。结果处理24、48、72 h时,低、中、高剂量组细胞增殖率低于对照组(P0.05),低、中、高剂量组细胞增殖率依次降低(P0.05),低、中、高剂量组细胞增殖率均随处理时间延长而降低(P0.05)。处理24 h时,低、中、高剂量组侵袭细胞数[(96.26±21.11)、(52.00±13.13)、(21.20±6.15)个]和细胞融合距离[(91.80±25.00)、(65.10±19.00)、(27.20±11.00)μm]小于对照组[(125.00±31.15)个、(127.90±27.00)μm](P0.05),低、中、高剂量组依次减小(P0.05)。低、中、高剂量组细胞MMP-9、PI3K mRNA和MMP-9、PI3K、p-Akt蛋白相对表达量及p-Akt/Akt明显低于对照组(P0.05),低、中、高剂量组依次降低(P0.05)。4组细胞Akt mRNA和蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 MMP-9抑制剂可抑制人口腔鳞癌SCC15细胞的增殖、侵袭和迁移能力,可能通过PI3K/Akt信号通路发挥调控作用。     

miR-103a-3p通过调控FEZF1/CDC25A途径影响肝癌细胞的增殖和凋亡

目的探究miR-103a-3p在肝癌细胞的表达及其与锌指蛋白1(FEZF1)/细胞分裂周期25A蛋白(CDC25A)途径的关系。方法体外培养人肝癌Hep G2、BEL-7402细胞,将转染试剂、miR-103a-3p阴性对照质粒、miR-103a-3p mimis质粒分别转染细胞,命名为空白对照组、miR-103a-3p阴性转染组、miR-103a-3p过表达组。实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-103a-3p mRNMA表达;MTT法检测细胞增殖情况;平板细胞克隆形成试验检测菌落形成情况;流式细胞仪检测细胞凋亡以及周期分布情况;蛋白免疫印迹法(WB)检测细胞中FEZF1、CDC25A蛋白表达情况;荧光素酶活性检测miR-103a-3p与FEZF1靶向调控关系。结果在Hep G2细胞、BEL-7402细胞中,与空白对照组、阴性转染组相比,miR-103a-3p过表达组miR-103a-3p mRNA表达显著升高(P0.05)。随着细胞培养时间延长,miR-103a-3p过表达组细胞抑制率逐渐升高,在同一时间点,与空白对照组、阴性转染组相比,miR-103a-3p过表达组细胞抑制率均升高(P0.05)。与空白对照组、阴性转染组相比,细胞菌落数量显著降低,细胞凋亡率显著升高,G0/G1期DNA含量升高,S期细胞DNA含量下降,FEZF1、CDC25A蛋白表达均降低(P0.05)。荧光素酶活性测定显示,在3'UTR-Wt的细胞中,与阴性转染组相比,miR-103a-3p过表达组荧光素酶活性显著降低(P0.05);而3'UTR-Mut的细胞中,阴性转染组与miR-103a-3p过表达组荧光素酶活性无显著差异(P0.05)。结论 miR-103a-3p过表达后能够抑制肝癌细胞的增殖,引起细胞周期G0/G1期阻滞,促进其凋亡,其机制可能与靶向调控FEZF1/CDC25A表达有关。     

miR-34a在人H9C2心肌细胞缺氧复氧损伤中的保护作用及机制

目的探讨miR-34a对缺氧复氧损伤人H9C2心肌细胞凋亡的影响及可能机制。方法对数生长期人H9C2心肌细胞,随机分为正常对照组、缺氧复氧组、miR-34a激动剂组、PI3K通道阻滞组。缺氧复氧组、miR-34a激动剂组、PI3K通道阻滞组缺氧培养3 h、复氧培养4 h制备缺氧复氧模型;在缺氧培养前48 h,miR-34a激动剂组于培养基中加入摩尔浓度为50 nmol/L的miR-34a激动剂agomir,PI3K通道阻滞组在培养基中加入摩尔浓度为50 nmol/L的agomir和摩尔浓度为10μmol/L的PI3K特异性阻断剂LY294002,缺氧复氧组不作处理。正常对照组不制备模型,不进行药物干预。复氧培养4 h,4组采用TUNEL法检测细胞凋亡率;实时荧光定量PCR法检测miR-34a mRNA、p-PI3K mRNA相对表达量;Western blot法检测心肌细胞caspase-3、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2, Bcl-2)蛋白、p-PI3K、p-Akt相对表达量。结果复氧培养4 h,正常对照组、miR-34a激动剂组、PI3K通道阻滞组、缺氧复氧组人H9C2心肌细胞凋亡率[(20.00±2.14)%、(34.26±3.82)%、(58.58±5.69)%、(80.25±7.76)%]依次升高(P0.05);miR-34a激动剂组、PI3K通道阻滞组、正常对照组、缺氧复氧组人H9C2心肌细胞miR-34a mRNA(3.214±0.321、2.165±0.224、1.000±0.002、0.496±0.051)、p-PI3K mRNA(2.161±0.232、1.446±0.153、1.000±0.006、0.501±0.052)、p-PI3K(0.316±0.031、0.204±0.021、0.189±0.024、0.095±0.086)、p-Akt(0.586±0.062、0.306±0.032、0.182±0.021、0.071±0.008)蛋白相对表达量依次降低(P0.05);miR-34a激动剂组、PI3K通道阻滞组、缺氧复氧组人H9C2心肌细胞Bcl-2蛋白相对表达量(0.385±0.042、0.381±0.045、0.179±0.018)均低于正常对照组(0.832±0.062),caspase-3蛋白相对表达量(0.526±0.061、0.544±0.059、0.854±0.094)均高于正常对照组(0.518±0.021)(P0.05);缺氧复氧组人H9C2心肌细胞Bcl-2蛋白相对表达量低于miR-34a激动剂组、PI3K通道阻滞组,caspase-3蛋白相对表达量高于miR-34a激动剂组、PI3K通道阻滞组(P0.05);miR-34a激动剂组与PI3K通道阻滞组人H9C2心肌细胞Bcl-2、caspase-3蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 miR-34a可抑制缺氧复氧损伤的人H9C2心肌细胞凋亡,其机制可能与促进PI3K磷酸化,活化PI3K/Akt信号通路,抑制细胞凋亡蛋白表达有关。     

miR-451a/KIF2A轴对食管鳞状细胞癌顺铂耐药的影响

目的探讨miR-451a通过调控PI3K/Akt通路对食管鳞状细胞癌顺铂(cisplatin, DDP)耐药的作用及其可能机制。方法人正常食管鳞状上皮细胞系Het-1A、人食管鳞状细胞癌细胞系Eca109、人食管鳞状细胞癌顺铂耐药细胞系Eca109/DDP,采用实时荧光定量PCR法检测3种细胞miR-451a相对表达量,采用Western blot法检测3种细胞KIF2A蛋白相对表达量。对数生长期Eca109/DDP细胞分为空白对照组(不进行转染操作)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-451a模拟物组(转染miR-451a模拟物),采用实时荧光定量PCR法检测3组细胞miR-451a相对表达量,采用Western blot法检测3组细胞KIF2A蛋白相对表达量。采用荧光素酶报告实验检测miR-451a和KIF2A的靶向关系。对数生长期Eca109/DDP细胞再分为对照组(不进行转染操作)、miR-NC+oe-NC组(转染miR-NC+oe-NC)、miR-451a模拟物+oe-NC组(转染miR-451a模拟物+oe-NC)、miR-451a模拟物+oe-KIF2A组(转染...     

重症肌无力患者外周血单个核细胞中miR-146a表达分析

目的探讨miR-146a在重症肌无力(myasthenia gravis, MG)患者外周血单个核细胞中的表达及其临床意义。方法 MG患者35例为观察组,同期体检健康者30例为对照组,采用Ficoll分层液法分离外周血单个核细胞,实时荧光定量PCR法检测2组外周血单个核细胞miR-146a mRNA相对表达量;Pearson法分析MG患者单个核细胞miR-146a mRNA相对表达量与定量MG评分的相关性。结果观察组外周血单个核细胞miR-146a mRNA相对表达量(3.41±0.25)明显高于对照组(0.95±0.12)(P0.05);全身型MG患者外周血单个核细胞miR-146a mRNA相对表达量(4.18±0.21)高于眼肌型者(3.01±0.15)(P0.05);MG患者单个核细胞miR-146a mRNA相对表达量与定量MG评分呈正相关(r=0.584,P0.001)。结论 MG患者外周血单个核细胞miR-146a表达明显上调,且与病情严重程度有关。     

HL-60 细胞 Nucleostemin 表达下调对 PI3K / AKT / mTOR 通路相关分子的影响简

本研究旨在探讨白血病细胞中nucleostemin （NS）基因下调对其非依赖p53通路的候选途径PI3 K/A KT/mTOR的相关分子表达的影响.通过重组慢病毒表达载体NS-RNAi-GV248转染至p53缺失型HL-60细胞以干扰NS基因的表达.用Real-time PCR技术评价转染后HL-60细胞NS基因的表达情况并检测干扰前后PI3 K/AKT/mTOR信号通路中相关分子水平表达的变化.结果表明：重组慢病毒载体NS-RNAi-GV248成功感染了HL-60细胞,在荧光显微镜下可见GFP荧光水平较高,大于80％.Real-time PCR结果显示,NS基因mRNA的抑制率在HL-60细胞中为56.5％;干扰NS的表达后PI3K、AKT和GβL基因mRNA表达量分别为0.491±0.084、0.398±0.164、0.472±0.097,下调明显,与空白对照组（分别为1.002±0.171、1.000±0.411、1.001 ±0.206）比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论：在HL-60细胞中PI3K/AKT/mTOR通路相关分子的变化与NS基因的下调呈正相关,两者的关联性为证明PI3 K/AKT/mTOR信号通路可能是NS的一种非依赖p53作用途径提供了依据.     

非小细胞肺癌患者血浆miR-451表达及对HCC827细胞生物学性质和放疗敏感性的影响

目的探讨miR-451在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)患者血浆中的表达及其对NSCLC细胞生物学性质及放疗敏感性的影响。方法 NSCLC患者69例为观察组,同期体检健康者53例为对照组,采用实时荧光定量PCR法检测2组血浆miR-451 mRNA相对表达量。将人NSCLC细胞株HCC827随机分为空白对照组、miR-451组和慢病毒组,空白对照组不作处理,miR-451组和慢病毒组分别转染包含miR-451、无意义核苷酸序列慢病毒;转染24、48、72 h,采用MTT法检测细胞增殖;转染72 h,采用Transwell小室试验检测细胞侵袭,采用划痕试验检测细胞迁移距离。再将3组细胞分为0、3、6、9 Gy 4个亚组,分别接受相应剂量的X线照射,采用MTT法检测细胞增殖和细胞存活。结果观察组血浆miR-451相对表达量(1.72±0.39)低于对照组(2.16±0.31)(P0.05)。miR-451组细胞miR-451相对表达量(4.17±0.82)高于空白对照组(1.32±0.37)和慢病毒组(1.26±0.33)(P0.05),空白对照组与慢病毒组比较差异无统计学意义(P0.05);转染24、48、72 h,miR-451组细胞增殖率均低于空白对照组和慢病毒组(P0.05);转染72 h,miR-451组侵袭细胞数[(123.7±26.4)个]较空白对照组[(247.6±39.7)个]和慢病毒组[(254.5±38.2)个]少,细胞迁移距离[(45.2±8.8)μm]较空白对照组[(73.2±11.7)μm]和慢病毒组[(68.9±10.4)μm]近(P0.05),空白对照组与慢病毒组比较差异无统计学意义(P0.05);miR-451组细胞在0、3、6、9 Gy剂量X线照射后的细胞增殖率和细胞存活率均低于空白对照组和慢病毒组(P0.05),空白对照组与慢病毒组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 miR-451在NSCLC患者血浆呈低表达;miR-451可抑制HCC827细胞增殖、侵袭与迁移,上调HCC927细胞对放疗的敏感性。     

miR-203过表达对结肠癌HT-29细胞紫杉醇化疗敏感性的影响及可能机制

目的采用脂质体转染法制备miR-203过表达结肠癌HT-29细胞,探讨miR-203过表达对结肠癌HT-29细胞紫杉醇化疗敏感性的影响及可能机制。方法取对数生长期结肠成纤维细胞CCD-18Co和结肠癌HT-29细胞,采用实时荧光定量PCR法检测miR-203相对表达量。取对数生长期结肠癌HT-29细胞,分为过表达组(转染miR-203-pcDNA 3.1质粒)、空载组(转染NC-pcDNA3.1质粒)和对照组(不作任何干预),采用实时荧光定量PCR法检测3组转染48h时miR-203相对表达量。取转染48h时过表达组、空载组、对照组细胞,用1、5、10、50、100μmol/L紫杉醇处理细胞48h,采用MTT法测定细胞增殖抑制率,并计算3组紫杉醇对细胞的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC₅₀)。转染48h,取对照组细胞分为对照1组和紫杉醇组,取过表达组细胞分为过表达1组和过表达+紫杉醇组,紫杉醇组和过表达+紫杉醇组应用对照组IC₅₀值(28.20μmol/L)浓度的紫杉醇处理,对照1组和过表达1组不进行处理,48h后采用流式细胞术检测4组细胞凋亡,采用Western blot法检测4组细胞磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol-3 kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、磷酸化Akt、caspase-3蛋白相对表达量。结果结肠癌HT-29细胞miR-203相对表达量(0.38±0.05)低于CCD-18Co细胞(1.01±0.09)(P<0.05)。转染48h,过表达组miR-203相对表达量(1.87±0.11)高于空载组(0.39±0.04)和对照组(0.40±0.05)(P<0.05),空载组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。1、5、10、50、100μmol/L紫杉醇处理48h,过表达组细胞增殖抑制率高于空载组和对照组(P<0.05),IC₅₀值低于空载组和对照组(P<0.05),空载组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。紫杉醇处理48h,过表达1组、紫杉醇组、过表达+紫杉醇组细胞凋亡率[(18.25±1.70)%、(19.11±1.83)%、(57.59±4.31)%]高于对照1组[(8.10±1.14)%](P<0.05),过表达+紫杉醇组高于过表达1组和紫杉醇组(P<0.05),过表达1组与紫杉醇组比较差异无统计学意义(P>0.05)。紫杉醇处理48h,过表达1组、紫杉醇组、过表达+紫杉醇组PI3K(0.81±0.05、0.83±0.05、0.32±0.04)、磷酸化Akt(0.57±0.04、0.55±0.04、0.18±0.03)、caspase-3(0.67±0.13、0.65±0.10、0.19±0.10)蛋白相对表达量低于对照1组(1.12±0.09、0.80±0.06、1.25±0.12)(P<0.05),过表达+紫杉醇组低于过表达1组和紫杉醇组(P<0.05),过表达1组与紫杉醇组比较差异均无统计学意义(P>0.05);4组Akt蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论结肠癌HT-29细胞miR-203呈低表达,过表达miR-203可提高结肠癌HT-29细胞对紫杉醇的敏感性,促进HT-29细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K、caspase-3激活及Akt磷酸化有关。     

miR-577对胶质瘤细胞上皮-间质转化的调控作用及机制

目的探讨miR-577调控胶质瘤细胞上皮-间质转化活性的机制。方法将人源性胶质瘤细胞U87细胞分为miR-577类似物组、miR-577抑制物组和空白对照组,分别转染miR-577 mimic、miR-577 inhibitor和miR577-NC。转染24 h后,采用划痕实验检测各组细胞迁移距离,采用Transwell小室实验检测各组细胞侵袭细胞数,采用反转录PCR法检测各组细胞β-catenin mRNA表达水平,采用Western blot法检测各组细胞vimentin、E-cadherin蛋白相对表达量。结果 miR-577抑制物组、空白对照组、miR-577类似物组细胞迁移距离[(3.44±0.55)、(2.13±0.21)、(1.04±0.14)mm]、侵袭细胞数[(128.50±8.11)、(84.60±4.20)、(39.80±6.01)个]、细胞β-catenin mRNA相对表达量(0.80±0.06、0.61±0.04、0.45±0.06)和vimentin蛋白相对表达量(0.82±0.06、0.67±0.08、0.31±0.02)均依次降低(P0.05),E-cadherin蛋白相对表达量(0.44±0.04、0.76±0.05、0.89±0.08)依次增高(P0.05)。结论 miR-577可能作为抑癌基因,通过阻断Wnt/β-catenin信号通路的活性,降低人源性胶质瘤U87细胞上皮-间质转化活性,从而抑制肿瘤发展。     

miR-373对人胃癌SGC7901细胞生物学行为的影响

目的探讨miR-373在人胃癌SGC7901细胞中表达情况及其对胃癌细胞增殖、迁移的影响。方法人胃癌SGC7901细胞和正常胃黏膜上皮GES-1细胞采用反转录PCR法检测miR-373相对表达量。人胃癌SGC7901细胞分为miR-373类似物组、miR-373抑制物组和空白对照组,分别转染miR-373 mimic、miR-373 inhibitor和miR-373 NC。转染后24、36、48、72 h,采用MTT法检测3组细胞增殖率,转染后48 h,采用Transwell小室迁移实验检测迁移细胞数。结果胃癌SGC7901细胞miR-373相对表达量(0.39±0.05)明显高于正常胃黏膜上皮GES-1细胞(0.23±0.04)(P0.05);miR-373类似物组细胞miR-373相对表达量(0.78±0.11)明显高于miR-373抑制物组(0.17±0.02)和空白对照组(0.36±0.06)(P0.05),空白对照组高于miR-373抑制物组(P0.05);转染后24 h,3组细胞增殖率比较差异无统计学意义(P0.05),转染后36、48、72 h,miR-373类似物组细胞增殖率明显高于miR-373抑制物组和空白对照组(P0.05),空白对照组高于miR-373抑制物组(P0.05);转染后48 h,相同面积下miR-373类似物组迁移细胞数[(181.28±11.29)个]明显多于miR-373抑制物组[(61.82±8.29)个]和空白对照组[(109.73±8.22)个](P0.05),空白对照组多于miR-373抑制物组(P0.05)。结论 miR-373可能作为癌基因作用于胃癌组织,且能增强胃癌细胞的增殖和迁移能力。     

沉默p21活化激酶1表达对人黑素瘤A375细胞凋亡及侵袭能力的影响

目的探讨shRNA沉默p21活化激酶1(p21-activated kinase 1, PAK1)基因表达对人黑素瘤A375细胞凋亡、迁移及侵袭能力的影响。方法对数生长期人黑素瘤A375细胞随机分为转染组(转染PAK1特异性shRNA)、阴性对照组(转染NC-shRNA)、空白对照组(不进行转染)。转染后培养72 h,采用实时荧光定量PCR法检测A375细胞PAK1 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测A375细胞PAK1及p-PAK1蛋白相对表达量,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力。结果转染后培养72 h,转染组PAK1 mRNA相对表达量(0.45±0.07)、PAK1蛋白相对表达量(0.53±0.01)、p-PAK1蛋白相对表达量(0.21±0.03)均低于阴性对照组(0.98±0.04、0.65±0.02、0.38±0.04)、空白对照组(1.00±0.08、0.67±0.51、0.36±0.02)(P0.05),细胞凋亡率[(11.20±0.21)%]高于阴性对照组[(5.86±0.51)%]、空白对照组[(5.43±0.03)%](P0.05),迁移细胞数[(47.00±2.23)个]、侵袭细胞数[(30.00±4.44)个]较阴性对照组[(76.00±4.85)、(54.00±3.67)个]、空白对照组[(77.90±4.97)、(56.00±4.12)个]少(P0.05),阴性对照组上述各指标与空白对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论沉默PAK1基因表达可促进人黑素瘤A375细胞凋亡,降低其迁移及侵袭能力。     

miRNA-146a-5p对癫痫大鼠海马神经元NF-κB信号转导通路的影响

目的观察miRNA-146a-5p(miR-146a-5p)对癫痫大鼠海马神经元核因子κB(NF-κB)信号转导通路的影响。方法体外培养新生SD大鼠海马神经元,随后制备癫痫海马神经元模型,随机分为三组,空白对照组(control组):转染时添加等体积opti-MEM培养基;阴性对照组(NC组):转染80 n M浓度NC至癫痫大鼠海马神经元; miR-146a-5p组:转染80 n M浓度miR-146a-5p mimics至癫痫大鼠海马神经元。转染后培养24 h,再用200 ng/ml脂多糖(LPS)诱导6 h,采用免疫荧光双染法鉴定体外培养海马神经元,采用膜片钳技术检测正常大鼠海马神经元和癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测未经LPS诱导各组海马神经元miR-146a-5p表达水平及经LPS诱导后各组海马神经元核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化IκBα(p IκBα)、NF-κB P65、IKB激酶-β(IKKβ) mRNA表达水平,采用Western blot法检测经LPS诱导后各组海马神经元IκBα、p IκBα、NF-κB P65、IKKβ蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测经LPS诱导后各组细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达水平。结果体外培养7 d的癫痫大鼠海马神经元与正常大鼠海马神经元相比较形态未见明显异常;癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率明显较正常大鼠海马神经元明显增加(P 0. 05); miR-146a-5p组海马神经元miR-146a-5p表达水平明显高于control组和NC组(P 0. 05);经LPS诱导后miR-146a-5p组海马神经元p IκBα、NF-κB P65、IKKβmRNA及蛋白表达水平明显低于control组和NC组(P 0. 05),而IκBαmRNA及蛋白表达水平明显高于control组和NC组(P 0. 05);经LPS诱导后miR-146a-5p组细胞培养液中TNF-α、IL-1、IL-6、ICAM-1表达水平明显低于control组和NC组(P 0. 05)。结论miR-146a-5p可抑制LPS诱导的癫痫大鼠海马神经元NF-κB信号转导通路中p IκBα、NF-κB P65、IKKβmRNA及蛋白表达,促进IκBαmRNA及蛋白表达,减少TNF-α、IL-1、IL-6、ICAM-1等炎症因子的释放。     

miR-34a-3p通过靶基因YAP1调控黑色素瘤A375细胞的增殖和凋亡

目的探讨miR-34a-3p通过靶基因YAP1调控黑色素瘤A375细胞的增殖和凋亡。方法通过荧光定量PCR检测miR-34a-3p在黑色素瘤和正常皮肤组织中的表达,并通过双荧光素酶报告基因检测miR-34a-3p的靶基因,黑色素瘤A375细胞转入miR-34a-3p模拟剂(miR-34a-3p mimics组),转入对照物miR-NC(对照组miR-NC),miR-34a-3p mimics组转染YAP1表达载体(miR-34a-3p mimics+YAP1组)。通过MTT和流式细胞术分别检测miR-34a-3p和YAP1对黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响,并通过Western blot检测miR-34a-3p对YAP1蛋白表达的影响。结果黑色素瘤组中的miR-34a-3p的表达量(0. 67±0. 21)低于正常皮肤组织(1. 35±0. 47),差异具有统计学意义(P 0. 05)。双荧光素酶报告基因显示,miR-34a-3p mimics与YAP1 3'UTR WT载体共转染组荧光强度(0. 39±0. 11)明显低于对照miR-NC与WT载体共转染组(0. 98±0. 35),差异具有统计学意义(P 0. 05)。而miR-34a-3p mimics与YAP1 3'UTR MUT载体共转染组(1. 31±0. 23)与其对照miR-NC与MUT载体共转染组(1. 22±0. 21)之间的荧光强度无显著差异(P 0. 05)。在培养24 h、48 h和72 h后,miR-34a-3p mimics组细胞细胞活力低于对照组miR-NC,差异具有统计学意义(P 0. 05); miR-34a-3p mimics+YAP1组细胞活力高于miR-34a-3p mimics组,差异具有统计学意义(P 0. 05)。miR-34a-3p mimics组细胞的凋亡率高于对照组miR-NC,差异具有统计学意义(P 0. 05)。miR-34a-3p mimics+YAP1组细胞凋亡率低于miR-34a-3p mimics组,差异具有统计学意义(P 0. 05)。与对照组miR-NC比,miR-34a-3p mimics组细胞的YAP1蛋白表达量显著降低,cleaved caspase 9表达水平显著升高,差异具有统计学意义(P 0. 05)。而与miR-34a-3p mimics组比较,miR-34a-3p mimics+YAP1组细胞凋YAP1蛋白表达量显著增加,cleaved caspase 9表达水平显著降低,差异具有统计学意义(P 0. 05)。结论miR-34a-3p能够通过调控靶基因YAP1的表达,抑制黑色素瘤A375细胞的增殖,促进细胞凋亡。     

SARI过表达对CBFL细胞凋亡的影响及其机制

目的:探讨SARI基因过表达对核结合因子白血病(CBFL)细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:通过17号外显子测序验证CBFL细胞模型Kasumi-1细胞负载c-KIT N822K突变。构建SARI基因过表达慢病毒载体,并转染Kasuimi-1细胞。采用荧光定量PCR和Western blot鉴定细胞转染后SARI基因过表达效果。设置空白对照(CON)、空载体对照(NC)和SARI过表达(OE) 3组。MTT法检测各组细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白BCL-2、BAX、Cyto C、Caspase 9、Caspase 3、cleaved-Caspase 3、PARP、cleavedPARP,以及PI3K/Akt通路蛋白PI3K(p85)、p-PI3K(p85)、Akt、p-Akt的表达变化。结果:Kasumi-1细胞具有c-KIT N822K突变。成功构建稳定过表达SARI基因的Kasumi-1细胞。与NC组细胞相比,OE组细胞增殖减缓,凋亡增加;抗凋亡蛋白BCL-2表达降低,促凋亡蛋白BAX表达增高;出现Cyto C蛋白的表达; Caspase 9、Caspase 3表达降低,cleaved-Caspase3表达增高; PARP表达降低,活性剪切体cleaved-PARP表达增高,PI3K/Akt通路蛋白p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt磷酸化水平下调(P 0. 05)。结论:SARI基因过表达可通过线粒体途径诱导CBFL细胞凋亡,机制可能与PI3K/Akt信号通路失活有关。     

miR-153-3p调控神经突的生长

目的探讨miR-153-3p在大、小鼠神经突生长中的作用。方法对数生长期C57BL/6小鼠N2A细胞和Rattus norvegicus大鼠PC12细胞,随机分为miR-153-3p过表达组(转染miR-153-3p过表达试剂miR-153-3p mimic)、miR-153-3p抑制组(转染miR-153-3p表达抑制剂miR-153-3p inhibitor)、过表达对照组(转染miR-153-3p mimic空白对照试剂miR-153-3p mimic NC)、抑制剂对照组(转染miR-153-3p inhibitor空白对照试剂miR-153-3p inhibitor NC)。转染48 h,采用实时荧光定量PCR法检测4组细胞miR-153-3p mRNA相对表达量,免疫荧光法检测神经突生长情况。结果 miR-153-3p过表达组N2A细胞、PC12细胞miR-153-3p mRNA相对表达量(28.98±1.63、19.67±0.88)均高于miR-153-3p抑制组(0.94±0.19、0.89±0.05)、过表达对照组(0.99±0.08、1.00±0.09)、抑制剂对照组(1.00±0.04、1.00±0.14)(P0.05),miR-153-3p抑制组、过表达对照组、抑制剂对照组比较差异均无统计学意义(P0.05);miR-153-3p过表达组N2A细胞、PC12细胞神经突总长度[(31.13±3.85)、(38.08±2.12)μm]和最长神经轴突长度[(18.04±2.58)、17.48±1.75)μm]均较miR-153-3p抑制组[N2A细胞:(54.53±1.83)、(31.74±2.36)μm;PC12细胞:(64.46±12.85)、(29.46±7.36)μm]、过表达对照组[N2A细胞:(42.53±6.29)、(24.99±3.47)μm;PC12细胞:(53.58±4.88)、(25.31±3.66)μm]、抑制剂对照组[N2A细胞:(41.33±2.77)、(24.57±3.86)μm;PC12细胞:(44.44±7.59)、(23.04±4.31)μm]短(P0.05),且过表达对照组、抑制剂对照组PC12细胞、N2A细胞神经突总长度和最长神经轴突长度较miR-153-3p抑制组短(P0.05),过表达对照组、抑制剂对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论miR-153-3p可抑制小鼠N2A细胞、大鼠PC12细胞神经突生长。     

结直肠癌组织microRNA-16-5p、microRNA-493-5p表达与PI3K/Akt/mTOR信号通路和预后的关系研究

目的 探讨结直肠癌组织微小RNA-16-5p(miR-16-5p)、microRNA-493-5p(miR-493-5p)表达与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路和预后的关系。方法 选取2016年1月至2019年1月该院收治的126例接受根治性切除手术的结直肠癌患者,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测癌组织及癌旁组织中miR-16-5p、miR-493-5p及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关基因mRNA的表达水平并进行比较,分析癌组织中miR-16-5p、miR-493-5p与PI3K/Akt/mTOR信号通路相关基因mRNA及临床病理特征的关系。术后随访3年,采用Kaplan-Meier生存曲线分析miR-16-5p、miR-493-5p高表达和低表达患者的预后情况。结果 总RNA A₂₆₀/A₂₈₀为1.90,琼脂糖凝胶电泳提示28S与18S rRNA带亮度比值均>1.5,总RNA浓度750 ng/μL,说明RNA纯度高、完整性较好。癌组织中miR-16-5p...