囊性纤维化跨膜传导调节因子基因突变与呼吸道疾病

<正>囊性纤维化跨膜传导调节因子(cystic fibrosis transmembrane conductanceregulator,CFTR)是一种环腺苷酸(cAMP)激活的ATP门控性氯离子(Cl-)通道,广     

囊性纤维化跨膜调节因子在小鼠胸膜腔液体转运中的作用

目的:探讨囊性纤维化跨膜调节因子(cystic fibrisis transmembrane conductance regulator.CFTR)在小鼠胸腔液体转运中的作用。方法:小鼠吸入麻醉后,胸膜腔内分别注入0.25ml等渗液体,分别予以异丙肾上腺素、CFTR激动剂CF-16和抑制剂CF_(mh)-172.在不同时间点回收胸腔液体,测量其容积。根据胸腔液体滤出率和吸收率变化,研究CFTR在胸腔液体转运中的作用。用RT-PCR检测ENaC和CFTR在胸膜上的表达情况。结果:小鼠胸膜上有ENaC和CFTR的表达,CFTR抑制剂CF_(mh)-172显著抑制异丙肾上腺素对于胸腔液体吸收的促进作用(P<0.01),激动剂CF-16不能显著增强异丙肾上腺素的这种作用(P>0.05)。结论:CFTR抑制剂可以显著抑制异丙肾上腺素对胸腔内等渗液体吸收促进作用,但是CFTR激动剂则没有明显作用。     

囊性纤维化的诊治进展

囊性纤维化(CF)是累及全身多脏器的致死性常染色体隐性遗传病。在我国,由于CF发病率低,缺乏广泛推行的诊断技术,临床医师对该疾病认识不足等因素,导致对该疾病的诊断量少且诊断级别低。为增强临床工作者对该疾病的认识,现将相关研究文献中目前关于CF诊断检测技术及治疗药物进行综述。     

急性心肌梗死后囊性纤维化跨膜转运调节体氯通道基因表达的变化

目的：研究猪急性心肌梗死（AMI）后囊性纤维化跨膜转运调节体（CFTR）氯通道基因表达的变化，探讨急性心肌梗死后早期室性心律失常发生的分子机制。 方法：通过结扎猪左前降支远端1 /3-1 /2处2h然后再灌注建立AMI模型，同时设立相应的假手术(SH)组。术后24h取左心室梗死区、边缘区和正常区内层（Endo）、中层（Mid）和外层（Epi）心肌（SH组取对应位置心肌），应用逆转录－聚合酶链反应(RT－PCR)半定量分析CFTR氯通道基因表达的改变。 结果： 与SH组相比，AMI组CFTR mRNA表达在梗死区三层心肌中均明显下降（P<0.05），在边缘区三层心肌中均明显上升（P<0.05），在正常区三层心肌中均没有显著性改变（P>0.05）。AMI组CFTR mRNA表达在梗死区和边缘区的三层心肌之间以及在梗死区、边缘区和正常区同一层心肌之间有显著性差异（P<0.05）。 结论：AMI后CFTR氯通道基因表达在梗死区、边缘区和正常区心肌之间以及局部心肌三层间呈不均一性改变，可能是AMI后室性心律失常发生的分子生物学基础之一。     

囊性纤维化跨膜传导调节因子对脑缺血再灌注损伤小鼠线粒体功能及氧化应激的影响

目的探讨囊性纤维化跨膜传导调节因子(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator,CFTR)对脑缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)小鼠线粒体功能及氧化应激的影响。方法 60只C57BL小鼠随机分为对照组、IRI组、Forskolin(FSK)组和FSK+IRI组各15只。IRI组和FSK+IRI组采用改良四血管闭塞法制备脑IRI模型,对照组和FSK组仅手术、不制备脑IRI模型。模型制备成功后,FSK+IRI组、FSK组腹腔注射FSK 2mg/kg,IRI组、对照组腹腔注射等量生理盐水;缺血再灌注后48h,检测4组线粒体膜电位、线粒体呼吸控制率(respiratory control rate,RCR)以及线粒体活性氧(reactive oxygen species,ROS)、过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)水平、三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione,GSSG)水平,计算GSH/GSSG;检测线粒体呼吸链complexⅠ和complexⅢ蛋白相对表达量、complexⅠ和complexⅢ活性。结果 IRI组和FSK+IRI组小鼠线粒体膜电位[(224.18±24.51)、(341.46±32.57)mV]、ATP水平[(6.52±1.03)、(13.24±1.65)mol/g]、RCR(2.12±0.64、3.97±0.86)均低于对照组[(437.15±53.14)mV、(19.47±2.64)mol/g、7.84±1.21]和FSK组[(441.05±56.43)mV、(18.93±2.71)mol/g、7.73±1.15](P0.05),且IRI组低于FSK+IRI组(P0.05);IRI组和FSK+IRI组小鼠线粒体ROS(2.29±0.56、1.64±0.43)、H2O2(2.24±0.77、1.41±0.52)水平高于对照组(1.28±0.27、0.97±0.35)和FSK组(1.31±0.32、1.03±0.36)(P0.05),且IRI组高于FSK+IRI组(P0.05);IRI组和FSK+IRI组线粒体GSH[(0.51±0.24)、(0.94±0.31)nmol/μg]和GSH/GSSG值(0.17±0.04、0.81±0.27)低于对照组[(1.35±0.42)nmol/μg、1.38±0.35]和FSK组[(1.42±0.38)nmol/μg、1.45±0.41](P0.05),且IRI组低于FSK+IRI组(P0.05);4组线粒体complexⅠ和complexⅢ蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P0.05);IRI组和FSK+IRI组线粒体complexⅠ活性低于对照组和FSK组(P0.05),且IRI组低于FSK+IRI组(P0.05);4组线粒体complexⅢ活性比较差异无统计学意义(P0.05)。结论激活CFTR可减轻脑IRI小鼠线粒体氧化应激,保护线粒体功能,发挥脑保护作用。     

某些物理因子对钠离子主动跨膜转运的影响

论述了碘溴矿泉水及其生物活性组分I~-、Br~-和分子态碘、煤泥及其组分、静电场、电磁场、磁场、超声、静水压力等物理因子对钠离子主动跨膜转运的影响。     

HOXB7基因沉默表达对大鼠氧化应激及肝脏Nrf2表达的影响

目的探讨同源盒基因(HOX)B7基因沉默表达对大鼠氧化应激及肝脏NF-E2相关因子2(Nrf2)表达的影响。方法C57野生型雄性大鼠20只(对照组)与HOXB7基因沉默C57雄性大鼠20只(沉默组)分别采用皮下多点注射50%四氯化碳法建立肝硬化模型。记录两组建模后第4周、第8周大鼠体重;采用速率法检测两组建模后第4周、第8周血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)含量;采用化学比色法检测建模后第4周、第8周肝脏组织丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽还原酶(GSH)含量;免疫组化分析SOD表达;记录建模后第8周的肝脏Nrf2 mRNA与蛋白表达水平。结果两组大鼠建模后主要表现为毛发不整、反应变迟缓,病理显示所有大鼠均建模成功。建模后第4周、第8周沉默组大鼠体重显著高于对照组(P<0.05)、血清AST、ALT、GGT值以及肝脏组织MDA含量均显著低于对照组(P<0.05),肝脏组织T-SOD和GSH含量显著高于对照组(P<0.05);沉默组建模后第8周的肝脏SOD表达阳性率显著高于对照组(P<0.05)。沉默组建模后第8周的肝脏Nrf2 mRNA与蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.05)。结论HOXB7基因沉默表达能抑制大鼠氧化应激反应,提高肝脏SOD表达水平,有利于肝脏Nrf2的表达,从而能促进肝硬化大鼠恢复体重,降低肝功能损伤。     

蝉花对糖尿病大鼠肾小球沉默信息调节因子1表达的影响

目的探讨蝉花对糖尿病大鼠肾小球沉默信息调节因子1（silent information regulation 2homolog 1,SIRT1）表达的影响及其对肾脏的保护作用。方法 40只SD大鼠,随机分为对照组10只、蝉花组10只、DM模型组10只、DM＋蝉花组10只,DM模型组与DM＋蝉花组以单次腹腔注射含链脲佐菌素柠檬酸盐缓冲液60mg/kg建立糖尿病大鼠模型,对照组与蝉花组单次腹腔注射等量柠檬酸盐缓冲液。蝉花组和DM＋蝉花组给予蝉花菌丝提取液1.8g/（kg·d）灌胃治疗,对照组和DM模型组给予饮用水灌胃。治疗期间观察各组大鼠一般情况,于24周后检测各组大鼠肾功能,取肾皮质行组织病理学检查,采用RT-PCR及Western blot法检测大鼠肾小球SIRT1基因及蛋白表达情况。结果 DM模型组和DM＋蝉花组大鼠体质量、血浆胰岛素水平较对照组和蝉花组明显降低（P〈0.01）,食物摄取量、空腹血糖、糖化血红蛋白较对照组和蝉花组明显增高（P〈0.01）;DM＋蝉花组尿素氮、24h尿白蛋白、24h尿蛋白、尿白蛋白肌酐比和肾脏指数（（17.80±2.46）mmol/L、（789.00±103.20）μg/d、（18.20±3.05）mg/d、（64.50±8.34）μg/mg、8.00±1.36）较DM模型组（（22.90±3.29）mmol/L、（1 495.00±251.30）μg/d、（25.00±3.88）mg/d、（82.20±13.32）μg/mg、8.53±1.57）明显降低,大鼠肾组织系膜面积比、肾小球硬化指数及肾小球基底膜厚度（（17.80±4.87）%、56.20±17.10、（229.40±40.87）nm）较DM模型组（（26.20±6.11）%、81.00±19.48、（320.70±54.09）nm）明显减少（P〈0.05）,肾小球SIRT1mRNA和蛋白表达水平（（77.80±13.84）%、（70.60±15.17）%）较DM模型组（（36.80±12.03）%、（27.00±15.38）%）明显增高（P〈0.05）。结论蝉花可上调糖尿病大鼠肾小球SIRT1表达,可能是其延缓糖尿病肾病进展的主要机制之一。     

创伤性脑损伤对大鼠海马胶质细胞源性神经营养因子及其受体表达的影响

目的研究创伤性脑损伤对大鼠海马胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）及其受体（GFRα-1、Ret）表达的影响。方法复制Marmarou＇s大鼠落体打击损伤模型,将大鼠随机分为正常组、假手术组及损伤后1h组、2h组、4h组、8h组、12h组、24h组、48h组、72h组和5d组。制备组织芯片,采用免疫组化法检测海马GDNF、GFRα-1、Ret的表达情况。结果正常组、假手术组海马中可见到GDNF及其受体低水平表达,损伤后2h海马GDNF的表达达到高峰,损伤后72h降至正常水平;GFRα-1和Ret的表达在损伤后4h达到高峰,以后逐渐下降。结论大鼠创伤性脑损伤后海马GDNF及其受体在早期即明显表达,两者在脑损伤后表达的时序性变化特点基本一致,共同参与创伤性脑创伤的病理生理过程。     

细胞外信号调节激酶1／2传导通路对增生性瘢痕的影响

目的：观察细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）传导通路对增生性瘢痕的影响。方法：用免疫组化方法和常规病理技术检测Ras、磷酸化ERK1／2和C－fos在14例增生性瘢痕和14例正常皮肤中的表达变化规律。结果：在正常皮肤中，Ras、磷酸化ERK1／2和C-fos蛋白表达较低，随着增生性瘢痕不断成熟，这3种蛋白表达逐渐增强。在成熟期瘢痕中，这3种蛋白阳性细胞率明显高于正常皮肤（P＜0．01）。结论：增生性瘢痕的发生和成熟可能与激活ERK1／2信号传导通路，促进C-fos转录因子表达有关。     

A mitochondrial superoxide theory for oxidative stress diseases and aging

Fridovich identified CuZnSOD in 1969 and manganese superoxide dismutase (MnSOD) in 1973, and proposed ”the Superoxide Theory,” which postulates that superoxide (O₂^•−) is the origin of most reactive oxygen species (ROS) and that it undergoes a chain reaction in a cell, playing a central role in the ROS producing system. Increased oxidative stress on an organism causes damage to cells, the smallest constituent unit of an organism, which can lead to the onset of a variety of chronic diseases, such as Alzheimer’s, Parkinson’s, amyotrophic lateral sclerosis and other neurological diseases caused by abnormalities in biological defenses or increased intracellular reactive oxygen levels. Oxidative stress also plays a role in aging. Antioxidant systems, including non-enzyme low-molecular-weight antioxidants (such as, vitamins A, C and E, polyphenols, glutathione, and coenzyme Q₁₀) and antioxidant enzymes, fight against oxidants in cells. Superoxide is considered to be a major factor in oxidant toxicity, and mitochondrial MnSOD enzymes constitute an essential defense against superoxide. Mitochondria are the major source of superoxide. The reaction of superoxide generated from mitochondria with nitric oxide is faster than SOD catalyzed reaction, and produces peroxynitrite. Thus, based on research conducted after Fridovich’s seminal studies, we now propose a modified superoxide theory; i.e., superoxide is the origin of reactive oxygen and nitrogen species (RONS) and, as such, causes various redox related diseases and aging.     

α-硫辛酸抑制慢性低氧大鼠骨骼肌线粒体的氧化应激**

背景：α-硫辛酸被誉为“全能抗氧化剂”和“线粒体营养剂”,但其是否可用于慢性低氧骨骼肌的防护,及其相关机制尚不清楚。目的：观察α-硫辛酸对慢性低氧大鼠骨骼肌线粒体活性氧生成及抗氧化酶系的作用,并探讨α-硫辛酸作用的相关信号通路。方法：将36只 SD 大鼠随机分为常氧对照组、单纯低氧组和单纯低氧+α-硫辛酸组。低氧干预为常压低氧帐篷,氧体积分数设定为11.3%;α-硫辛酸干预为标准饲料中添加α-硫辛酸(0.25%)。各种干预均持续4周。结果与结论：α-硫辛酸显著上调Sirtuin-3表达,提高线粒体ATP合成活力和膜电位,上调线粒体态3呼吸速率、呼吸控制比和磷氧比,下调态4呼吸速率,促进并上调锰超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶等线粒体抗氧化酶系活性,从而抑制线粒体H2O2产生速率,降低线粒体丙二醛含量。表明α-硫辛酸可提高慢性低氧骨骼肌线粒体能量代谢效率,抑制活性氧生成。并通过提高线粒体抗氧化酶系活性,抑制低氧诱导的氧化应激。α-硫辛酸对低氧骨骼肌线粒体的保护效应可能与其上调态3呼吸速率有关。     

靶向转酮醇酶样基因1 siRNA表达载体的构建及鉴定

目的构建针对转酮醇酶样基因1(TKTL1)特异性小干扰RNA(siRNA)真核表达载体并检测其沉默效应。方法采用人U6 SnRNA启动子,分别把被9 bp序列间隔的19 bp长短的TKTL1靶序列的反向重复序列,置于pEGFP-C1-U6质粒载体中,构建成TKTL1短发夹环RNA,产生重组质粒pEGFP-C1-U6/TKTL1,分别用PstⅠ和SalⅠ酶切鉴定及测序分析,并将重组质粒转染人结肠癌细胞株LoVo,通过RT-PCR检测TKTL1基因表达水平的变化。结果酶切鉴定与DNA测序分析证明,TKTL1基因的siRNA表达载体构建正确,RT-PCR结果表明转染重组质粒的LoVo细胞TKTL1基因的表达水平明显降低。结论成功构建了针对TKTL1基因的siRNA表达载体,转染LoVo细胞后可显著抑制TKTL1基因表达。     

人参皂苷Rg1通过改善氧化应激、线粒体损伤及炎症反应对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的保护作用研究

目的:观察人参皂苷Rg1预处理对于大鼠脊髓缺血再灌注损伤后的干预效果,从氧化应激、线粒体损伤及炎症反应等方面探讨人参皂苷Rg1对抗脊髓缺血再灌注损伤的可能机制。方法:构建大鼠脊髓缺血再灌注损伤模型,随机分为假手术组、缺血组、缺血再灌注组及药物组4组。于损伤后6、12、24、48h分别检测血SOD、MDA含量;并取脊髓组织检测SOD、MDA、COX、IL-6、NF-κB水平;行HE染色。结果:人参皂苷Rg1的干预可以使大鼠血清及脊髓组织SOD活性升高、MDA含量减少,脊髓组织COX活性升高、IL-6及NF-κB水平降低、神经细胞萎缩变形减少。结论:人参皂苷Rg1可以通过抑制线粒体损伤,以及减轻大鼠脊髓缺血再灌注损伤后的氧化应激、炎症反应,达到保护神经细胞的目的。     

奥美沙坦酯对阿霉素肾病大鼠klotho蛋白表达及氧化应激的影响

目的探讨奥美沙坦酯对阿霉素肾病大鼠klotho蛋白(KL)表达和氧化应激的影响。方法阿霉素肾病大鼠随机分为阿霉素肾病组(ADR组)、奥美沙坦酯干预组(OLM组),每组11只,另设10只正常大鼠作为对照组(NC组)。OLM组大鼠给予奥美沙坦酯10mg/(Kg·d)灌胃,ADR组及NC组大鼠给予等量生理盐水灌胃。于第8周时检测大鼠24h尿蛋白、血清白蛋白、总胆固醇、甘油三酯、尿素氮、肌酐、氧化应激指标(SOD、MDA)、KL mRNA及klotho蛋白表达水平。结果与NC组比较,第8周时ADR组与OLM组24h尿蛋白、总胆固醇、甘油三酯、MDA水平明显增加,KL mRNA、klotho蛋白表达、SOD活性降低,差异具有统计学意义(P<0.05);ADR组与OLM组相比,上述改变更加明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论阿霉素肾病大鼠klotho蛋白的表达降低,奥美沙坦酯可提高阿霉素肾病大鼠肾脏klotho蛋白的表达,抑制氧化应激,延缓肾病进展。     

survivin基因沉默对“三阴”乳腺癌细胞株中caspase3和caspase7基因的影响

目的 探讨“三阴”乳腺癌细胞中沉默survivin基因对抑癌基因caspase3和caspase7的影响.方法 针对survivin基因设计干扰片段并与真核表达载体pGCsilencerTMU6/Neo/GFP进行连接,之后转染“三阴”乳腺癌细胞MDA-MB-231;通过RT-PCR鉴定survivin基因mRNA水平沉默效果;用RT-PCR检测沉默survivin基因对caspase3和caspase7表达及细胞凋亡的影响.结果 survivin基因沉默可引起MDA-MB-231细胞凋亡;caspase3和caspase7表达升高,灰度分析结果显示差异具有统计学意义（P =0.008）.结论 （1）RNAi技术沉默MDA-MB-231细胞中survivin基因,达到了对其表达的抑制效果;（2）survivin基因沉默可上调caspase3和caspase7的表达;（3） survivin基因沉默可引起细胞凋亡;（4） survivin基因可作为“三阴”乳腺癌基因治疗的新靶点.     

静脉补铁对慢性肾衰竭大鼠氧化应激状态的影响

[目的]研究静脉补铁对慢性肾衰竭大鼠氧化应激状态的影响，为慢性肾衰竭铁剂治疗方法的选择及静脉补铁时营养干预改善机体氧化应激状态提供实验依据。[方法]随机将32只大鼠分为正常对照组、正常补铁组、肾衰竭对照组、肾衰竭补铁组。。肾衰竭组通过采用腺嘌呤灌胃的方法建立大鼠肾衰竭模型，肾衰竭补铁组与正常补铁组给予一次性尾静脉注射铁剂，两周后观察各组血肌肝（Cr）、尿素氮（BUN）、血清铁、铁蛋白、血浆还原型谷胱甘肽（GSH）、维生素E、一氧化氮（No）、丙二醛（MDA）含量的变化。[结果]肾衰竭各组Cr、BUN与正常两组比较，均有统计学意义（〈0．05）；各补铁组血清铁、铁蛋白与各对照组比较，均有统计学意义（P〈0．05）；肾衰竭对照组与正常对照组血浆GSH、维生素E、NO、MDA比较，均有统计学意义（P〈0．05）；。肾衰竭补铁组与。肾衰竭对照组血浆N0、MDA比较。均有统计学意义（P〈0．05）。[结论]慢性肾衰竭大鼠体内存在氧化应激，静脉补铁可能进一步加剧其体内氧化应激状态。     

静脉补铁对慢性肾衰竭大鼠氧化应激状态的影响

[目的]研究静脉补铁对慢性肾衰竭大鼠氧化应激状态的影响,为慢性肾衰竭铁剂治疗方法的选择及静脉补铁时营养干预改善机体氧化应激状态提供实验依据.[方法]随机将32只大鼠分为正常对照组、正常补铁组、肾衰竭对照组、肾衰竭补铁组.肾衰竭组通过采用腺嘌呤灌胃的方法建立大鼠肾衰竭模型,肾衰竭补铁组与正常补铁组给予一次性尾静脉注射铁剂,两周后观察各组血肌肝(Cr)、尿素氮(BUN)、血清铁、铁蛋白、血浆还原型谷胱甘肽(GSH)、维生素E、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量的变化.[结果]肾衰竭各组Cr、BUN与正常两组比较,均有统计学意义(＜0.05);各补铁组血清铁、铁蛋白与各对照组比较,均有统计学意义(P＜0.05);肾衰竭对照组与正常对照组血浆GSH、维生素E、NO、MDA比较,均有统计学意义(P＜0.05);肾衰竭补铁组与肾衰竭对照组血浆NO、MDA比较,均有统计学意义(P＜0.05).[结论]慢性肾衰竭大鼠体内存在氧化应激,静脉补铁可能进一步加剧其体内氧化应激状态.