五味子酚上调SIRT1改善H_2O_2对SH-SY5Y细胞增殖的抑制作用研究

目的:探讨SIRT1/LC3自噬通路在五味子酚(Schisanhenol,Sal)抗H_2O_2诱导的SH-SY5Y细胞增殖活力下降中的作用。方法:加入不同浓度Sal(50、10μmol/L)处理SH-SY5Y细胞4 h后,再加入H_2O_2 100μmol/L处理12 h,采用MTT法检测细胞增殖能力,Western blot检测SIRT1蛋白和自噬蛋白标志物(LC3蛋白、Beclin-1蛋白)的表达水平。结果:H_2O_2组细胞增殖活力较对照组显著下降(P0.001);Sal组不同浓度(50、10μmol/L)干预后的细胞增殖活力均高于H_2O_2组(P=0.001、0.017),且随着Sal浓度增加,细胞增殖活力增强。H_2O_2组SIRT1蛋白含量较对照组明显降低(P0.001),Sal组不同浓度(50、10μmol/L)的SIRT1蛋白含量均明显高于H_2O_2组(P=0.001、0.014)。H_2O_2组Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达均高于对照组,比较差异均有统计学意义(P0.001);Sal组(50μmol/L)的Beclin-1的蛋白表达低于H_2O_2组,且不同浓度(50、10μmol/L)LC3-Ⅱ蛋白表达均低于H_2O_2组,比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论:Sal可通过上调SIRT1蛋白表达,拮抗H_2O_2引起的过度自噬,从而起到拮抗H_2O_2对SH-SY5Y细胞增殖的抑制作用。     

龙胆苦苷对过氧化氢诱导HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用研究

目的对龙胆苦苷对过氧化氢(H_2O_2)所致HepG2细胞氧化损伤的作用及其机制进行研究。方法以800μmol/L H_2O_2损伤细胞6 h建立模型; CCK8法检测细胞存活率选取龙胆苦苷10、20、40μmol/L作为干预剂量;实验分为5组,即正常组、模型组和龙胆苦苷低、中、高剂量组,诱导成功后用微量法检测细胞内MDA含量变化,荧光共聚焦检测细胞内ROS水平,运用Westem blot法检测各组细胞Nrf2蛋白的表达,以及对细胞中Nrf2激活的分子机制进行硏究。结果与正常组比较,模型组MDA含量、ROS水平增加(P 0. 05),Nrf2蛋白表达量明显下调(P 0. 05)。与模型组比较,龙胆苦苷高剂量组MDA含量显著降低(P 0. 05),Nrf2蛋白表达量明显上调(P 0. 05)。结论龙胆苦苷预处理可提高细胞存活率,促进Nrf2核转移,Nrf2的表达变化与P13K/AKT通路有关,可增强体内抗氧化性应激系统、清除氧自由基、降低细胞凋亡。     

利福平通过促进自噬保护帕金森病模型细胞损伤

目的: 探讨利福平对α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)多聚体水平的影响及其与细胞自噬的关系。方法: 用不同浓度鱼藤酮、利福平、自噬抑制剂氯喹和自噬促进剂雷帕霉素处理SH-SY5Y细胞,MTT法检测细胞存活率,筛选最佳实验浓度;蛋白质印迹法检测氯喹和雷帕霉素处理后不同时间点细胞内Beclin-1表达水平,确定最佳作用时间;蛋白质印迹法检测鱼藤酮、氯喹和雷帕霉素处理后Beclin-1和α-syn多聚体的表达;将SH-SY5Y细胞分为对照组、鱼藤酮组、利福平+鱼藤酮组和利福平组,流式细胞术检测4组细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测α-syn多聚体及自噬标志蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、p62的表达;在上述分组基础上,蛋白质印迹法检测氯喹和雷帕霉素预处理后各组细胞α-syn多聚体的表达。结果： 利福平浓度为150 μmol/L时细胞存活率最高;氯喹、雷帕霉素调节自噬的最佳处理条件分别为10 μmol/L(1 h)、10 nmol/L(2 h);与对照组相比,鱼藤酮、氯喹均能显著增加细胞内α-syn多聚体表达(P均＜0.01),降低Beclin-1表达(P均＜0.05),雷帕霉素能显著提高Beclin-1表达(P＜0.01);与对照组比较,鱼藤酮组细胞凋亡率明显上升(P＜0.05),p62和α-syn多聚体表达增加,Beclin-1和LC3-Ⅱ/Ⅰ表达明显降低(P均＜0.01);与鱼藤酮组相比,利福平+鱼藤酮组细胞凋亡率明显降低(P＜0.05),p62和α-syn多聚体表达明显减少,Beclin-1和LC3-Ⅱ/Ⅰ表达明显升高(P均＜0.01);与利福平+鱼藤酮组比较,氯喹预处理后α-syn多聚体表达明显增加(P＜0.01)。 结论： 利福平能减少鱼藤酮诱导的多巴胺能神经元凋亡,可能通过促进细胞自噬降低α-syn多聚体表达。     

间充质干细胞来源的外泌体通过microRNA-21-5p调节心脏自噬并影响心肌缺血大鼠的心脏功能

目的探讨间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)分泌的外泌体(exosome,Exos)是否通过miR-21-5p调节心脏自噬并影响心肌缺血大鼠的心脏功能。方法在体外,观察MSCs-Exos对H_2O_2刺激H9C2s的影响;通过CCK-8测定法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;荧光显微镜检测细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生;免疫印迹分析自噬相关蛋白和荧光GFP-LC3测定自噬体形成。在大鼠MI/RI模型中,通过TUNEL测定、免疫组织化学染色及超声心动图分别检查了MSCs-Exos对细胞凋亡、心肌LC3B表达和心脏功能影响。结果在体外实验中,MSCs-Exos显著提高了H_2O_2刺激的H9C2细胞活力(P0. 05),降低了ROS的产生和细胞凋亡率(P0. 05)。而与H_2O_2+MSCs-Exos组相比,H_2O_2+MSC-ExossimiR~(-21-5p)组细胞活力显著降低(P0. 01),ROS的产生和细胞凋亡率显著增加(P0. 01)。Western blot检测显示:与H_2O_2组相比,H_2O_2+MSCs-Exos组LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ和LC3B-Ⅱ的表达显著增强(P0. 01),p62的表达显著降低(P0. 01);与H_2O_2+MSCs-Exos组相比,H_2O_2+MSC-ExossimiR~(-21-5p)组的LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ和LC3B-Ⅱ的表达显著降低(P0. 05),p62的表达显著增强(P0. 05)。自噬通量结果:与H_2O_2组比较,H_2O_2+MSCs-Exos组细胞中存在的GFP-LC3点数增加;而与H_2O_2+MSCsExos组相比,H_2O_2+MSC-ExossimiR~(-21-5p)组细胞中存在的GFP-LC3点数显著降低(P0. 05)。在体内,RT-qPCR分析结果显示:在MSCs-Exos中和MI/RI后心肌组织中miR-21-5p的表达均呈正相关性。与其他各组相比,MI/RI+MSCs-Exos组的LC3B表达显著增强(P0. 01);心肌细胞凋亡显著减少(P0. 01);分数缩短率(FS%)和左心室射血分数(LVEF)均显著提高(P0. 05)。结论 MSCs-Exos可通过调节心肌自噬改善MI/RI大鼠的心脏功能,其作用机制可能与miR-21-5p转移有关。     

抑制miR-30a/HMGA2介导的骨肉瘤细胞自噬对化学药物治疗诱导的细胞凋亡的作用

目的：探讨微小RNA(microRNA,miR)-30a/高迁移率族蛋白A2(high mobility group protein A2,HMGA2)介导的骨肉瘤细胞自噬对化学药物治疗(以下简称化疗)药物诱导的细胞凋亡的影响。方法：随机选取30例经化疗药物治疗后表现为化疗敏感和化疗抵抗的骨肉瘤患者组织,分为化疗敏感组(n=15)和化疗抵抗组(n=15),采用real-time PCR检测两组中miR-30a和HMGA2的mRNA表达水平,以及骨肉瘤细胞U2-OS经不同浓度的化疗药物(顺铂、阿霉素、氨甲蝶呤)处理后miR-30a的mRNA表达水平;采用蛋白质印迹法检测细胞内自噬相关因子Beclin 1,自噬微管相关蛋白1轻链3B(microtubule associated protein 1 light chain 3B,LC3B)、自噬抑制因子P62的表达情况。在骨肉瘤细胞U2-OS中转染miR-30a模拟物和抑制剂,构建miR-30a高表达组、低表达组和对照组,采用蛋白质印迹法检测经过顺铂和阿霉素处理后上述3组细胞内Beclin 1,LC3B和P62的表达情况;采用单丹磺酰尸胺(monodansylcada,MDC)染色法检测细胞内自噬水平,ROS荧光探针-二氢乙啶(dihydroethidium,DHE)检测细胞内ROS水平,细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡程度,线粒体膜电位荧光探针JC-1检测细胞线粒体氧化损伤程度;采用双荧光素酶法检测miR-30a与HMGA2的相互作用,同时通过转染HMGA2模拟物和HMGA2-shRNA干扰质粒载体,构建HMGA2高表达组、低表达组和对照组,采用蛋白质印迹法检测经过顺铂和阿霉素处理后上述3组细胞内Beclin 1,LC3B和P62的表达情况。结果：化疗抵抗组中miR-30a的mRNA水平显著低于化疗敏感组(P<0.05),HMGA2的表达与miR-30a相反(均P<0.05)。在相对低浓度(5 μml/L)的化疗药物刺激下,骨肉瘤细胞U2-OS内的miR-30a mRNA表达下调,Beclin 1和LC3B均显著上调(均P<0.01),P62显著下调(P<0.01)。在miR-30a高表达组中,与对照组相比,Beclin 1和LC3B的表达水平与miR-30a明显下降(P<0.05),P62的表达水平明显升高(P<0.05),在miR-30a低表达组中则相反;在经过化疗药物处理后的miR-30a高表达组中,细胞自噬水平更低,细胞存活率更低,ROS水平更高,线粒体氧化损伤程度更高,细胞凋亡水平更高(均P<0.05),miR-30a低表达组则相反(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测验证了miR-30a与HMGA2的靶向互补配对关系;与对照组相比,HMGA2高表达组中Beclin 1和LC3B的表达水平与HMGA2明显升高(P<0.05),P62的表达水平明显下降(P<0.05),在HMGA2低表达组中则相反。结论：积极发挥miR-30a/HMGA2抑制骨肉瘤细胞自噬的功能,能够破坏细胞应对ROS介导的自噬与凋亡的平衡,增强化疗药物对细胞的杀伤作用。     

氧糖剥夺(OGD)诱导SH-SY5Y细胞自噬性死亡

目的探讨应用体外氧糖剥夺(Oxygen-glucose Deprivation,OGD)模型诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬性死亡与自噬过程的潜在作用机制。方法应用自噬抑制剂(3-Methyladenine,3MA)和siRNA沉默ATG5的表达后,OGD处理24小时,LDH检测各组细胞的死亡率(P0.01);Western blotting检测各组细胞中自噬相关蛋白的表达水平。结果 OGD诱导SH-SY5Y细胞自噬水平升高;细胞死亡率增加,应用3MA和siRNA技术沉默ULK1基因后,细胞死亡率(P0.05)及自噬蛋白Beclin1、LC3蛋白表达水平显著降低,P62蛋白表达水平升高。结论自噬参与并促进了OGD诱导SH-SY5Y细胞死亡。     

芍药苷对LPS诱导H9C2细胞氧化应激损伤的作用

目的探讨芍药苷对脂多糖（1ipopolyrsaccharides,LPS）诱导H9C2细胞氧化应激损伤的作用。方法采用LPS刺激H9C2细胞来检测相应的氧化应激指标从而间接反映细胞损伤程度,通过检测细胞内活性氧团基（reactiveoxygenspecies,ROS）水平的变化来观察芍药苷对其作用。本实验将细胞分为正常对照组、LPS氧化损伤组、LPS加芍药苷组（低、中、高剂量）,按实验设计因素处理后,用荧光酶标仪及流式细胞仪检测细胞内ROS水平。结果芍药苷对H9C2细胞具有低毒性,它可以降低胞内ROS的水平,且在本实验使用浓度范围内,芍药苷使细胞内ROS降低呈浓度依赖性;在本实验设计的时问范围内,芍药苷使细胞内ROS下降呈时间依赖性。结论芍药苷对LPS诱导H9C2细胞氧化应激损伤具有明显的改善作用。     

姜黄素对过氧化氢诱导内皮细胞凋亡及衰老的影响

目的 探讨姜黄素对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)自噬、凋亡及衰老的影响.方法 体外培养HUVECs,分为对照组(只给予培养基),模型组(给予60 μmol/L H2O2),姜黄素组(给予60μmol/L H2O2+ 10 μmol/L姜黄素),3-MA组[(给予60 μmol/L H2O2+ 10μmol/L姜黄素+1 mmol/L3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine)],培养4d后,DCFH-DA法检测细胞培养液中活性氧(ROS)的含量,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色检测细胞衰老程度,Western blot技术检测自噬相关蛋白LC3和p62的表达水平.结果 与对照组相比,模型组ROS含量、凋亡率、SA-β-gal阳性率及p62水平升高(均P＜0.05),而LC3-Ⅱ/Ⅰ比值差异无统计学意义(P＞0.05).与模型组比,姜黄素组ROS含量、凋亡率及SA-β-gal阳性率及p62水平降低(均P＜0.05),但LC3-Ⅱ/Ⅰ比值升高(P＜0.05).与姜黄素组比较,3-MA组ROS含量、凋亡率、SA-β-gal阳性率及p62水平升高(均P＜0.05),但LC3-Ⅱ/Ⅰ比值降低(P＜0.05).结论 姜黄素可减轻H2O2诱导内皮细胞凋亡及衰老,其机制与提高内皮细胞自噬有关.     

丹酚酸B介导AMPK活化加剧氧化应激诱导的甲状腺癌细胞凋亡和自噬

【摘要】 目的 探讨丹酚酸B对氧化应激诱导的甲状腺癌细胞凋亡和自噬的影响。 方法 选择不同浓度的丹酚酸B处理甲状腺癌TPC-1和甲状腺滤泡上皮细胞Nthy-ori 3-1细胞,24 h后CCK8检测细胞存活率;选择无显著毒性的剂量 (2.5、5、10 μg/mL) 进行后续实验,流式细胞术检测细胞内活性氧（ROS）水平和细胞凋亡;蛋白印迹法检测细胞内和线粒体内细胞色素C以及凋亡、自噬相关蛋白的表达水平;免疫荧光检测LC3的水平;此外,在细胞中加入腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）抑制剂Compound C (50 nM) 后,将细胞随机分为对照组、丹酚酸B 10 μg/mL组、Compound C组、Compound C+丹酚酸B 10μg/mL组,〖JP2〗流式细胞术检测细胞内ROS水平和细胞凋亡;蛋白印迹法检测AMPK相关蛋白和自噬相关蛋白的表达。结果 TPC-1 和Nthy-ori 3-1细胞的存活率以丹酚酸B浓度依赖的方式降低,丹酚酸B浓度超过20 μg/mL时,TPC-1细胞的存活率显著降低（P＜0.05）;当丹酚酸B浓度超过40 μg/mL时,Nthy-ori 3-1细胞的存活率显著降低（P＜0.05）。与对照组相比,经5、10 μg/mL丹酚酸B预处理后,TPC-1细胞内的ROS水平、凋亡率、Bax、Cleaved caspase 3、Beclin1和细胞质中Cyto C的蛋白表达水平、LC3的水平、AMPK磷酸化水平、LC3 II/LC3-I 的比值均显著升高（P＜0.05）;Bcl-2、P62和线粒体中Cyto-C的蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05）。与对照组相比,丹酚酸B 10 μg/mL组AMPK磷酸化水平、LC3 II/LC3 I比值、ROS水平、细胞凋亡率均显著升高（P＜0.05）;Compound C组AMPK磷酸化水平,LC3-II/LC3-I比值、ROS水平、细胞凋亡率均显著降低（P＜0.05）。与Compound C组比较,Compound C+丹酚酸B 10 μg/mL组AMPK磷酸化水平、LC3-II/LC3-I 的比值、ROS水平、细胞凋亡率均显著升高（P＜0.05）。结论 5、 10 μg/mL的丹酚酸B可通过介导的AMPK活化加剧氧化应激诱导的甲状腺癌细胞的凋亡和自噬,以10 μg/mL的丹酚酸B效果最佳。     

远志皂苷调节细胞自噬抗Aβ25-35诱导的SH-5Y5 Y细胞凋亡的研究

目的 从细胞自噬角度探讨远志皂苷(tenuifolin,Ten)抑制Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞凋亡的作用及分子机制.方法 建立Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞损伤模型,通过MTT法和流式细胞术测定细胞活力和凋亡率,单丹磺酰尸胺(MDC)染色检测自噬小泡的变化,Western blot检测LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达水平的变化.结果 Ten抑制Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞活力降低及凋亡率增加,减少Aβ25-35诱导的自噬体增加,显著降低自噬蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达水平.结论 Ten通过调节Aβ25-35诱导的细胞自噬,从而抑制Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,发挥神经保护作用.     

莲心碱对乳腺癌细胞MDA-MB-231自噬功能的影响

目的 观察莲心碱作用于乳腺癌细胞MDA-MB-231后,自噬表型的变化,初步论证莲心碱对乳腺癌细胞MDA-MB-231自噬功能的调控作用.方法 透射电子显微镜观察莲心碱处理后MDA-MB-231的亚细胞结构变化,激光共聚焦显微镜观察pEGFP-LC3或ptfLC3(mRFP-EGFP-LC3)转染后自噬小体的形成和自噬流的变化,Western blot检测自噬相关蛋白LC3B,SQSTM1/p62,Beclin1的表达,以及论证自噬流的变化.结果 透射电镜显示,与对照组比较,莲心碱处理后MDA-MB-231细胞内有较多自噬空泡出现,部分分裂的线粒体,但未见到高密度的嗜锇性的自噬溶酶体结构;EGFP-LC3转染后,莲心碱组自噬体数量显著多于对照组(P＜ 0.01);Western blot检测到自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ,SQSTM1/p62表达呈现量效性和时效性的增多[20 μmol/L组或24 h组与对照组比较(P＜0.01)],Beclin1未见显著变化[20 μmol/L组与对照组比较(P＞0.05)];mRFP-EGFP-LC3转染后,对照组可见少量自噬体和自噬溶酶体,莲心碱和Bafilomycin A1处理组均可见大量自噬体结构,未见显著自噬溶酶体结构;Westem blot证实莲心碱处理后增多的LC3B-Ⅱ不受Bafilomycin A1预处理的影响[莲心碱组LC3B-Ⅱ,SQSTM1/p62蛋白水平与Bafilomycin A1预处理加莲心碱组比较(P＞0.05)].结论 莲心碱抑制自噬小体成熟,阻断乳腺癌细胞MDA-MB-231自噬降解作用.     

水飞蓟宾对H2O2诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及机制的研究

目的 探究水飞蓟宾对过氧化氢(H2O2）诱导SH-SY5Y细胞损伤保护作用及可能机制。方法 采用体外培养方法,建立SH-SY5Y细胞H2O2的损伤模型。 用水飞蓟宾预处理细胞后测定细胞的存活率(MTT);活性氧(ROS)、细胞凋亡和线粒体膜电位的变化(流式细胞术);Western blot法检测Cleaved-Caspase-9、Cleaved-Caspase-3蛋白表达情况。结果 与模型组相比较,用50 μM和100 μΜ的水飞蓟宾预处理SH-SY5Y细胞3 h能明显减轻过氧化氢诱导的SH-SY5Y的损伤,显著提高细胞存活率(P<0.01)和减少凋亡(P<0.05),减少细胞内活性氧自由基(ROS)的水平,稳定线粒体膜电位(P<0.05),使Cleaved-Caspase-9和Cleaved-Caspase-3的表达量下降。结论 水飞蓟宾可以保护SH-SY5Y细胞免受H2O2的损伤,其机制可能与水飞蓟宾的抗氧化性、保护线粒体膜电位和降低Cleaved-Caspase-9和Cleaved-Caspase-3的表达量来实现的。     

叶酸对铝诱导的人神经母细胞瘤细胞活性氧和线粒体膜电位水平的影响

目的 探讨叶酸对铝诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)活性氧(ROS)和线粒体膜电位(MMP)水平的影响.方法 叶酸与不同金属共同处理SH-SY5Y细胞24 h,不同浓度Al分别染毒SH-SY5Y细胞6 h,不同浓度叶酸干预Al诱导SH-SY5Y细胞6 h,检测上述各组细胞ROS水平.测定叶酸对Al诱导SH-SY5Y细胞的毒性、MMP水平.结果 与control组比较,300μmol/L Al诱导SH-SY5Y细胞的ROS水平最高(P<0.05).50μmol/L叶酸+300μmol/L Al组细胞DCF相对荧光值、MMP降低的细胞比例、细胞存活率分别为15926±8200、38.04％、82.7％,与300μmol/L Al组20118±12503、45.88％、71.9％比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 叶酸可能通过拮抗铝诱导的SH-SY5Y细胞ROS水平升高来阻止MMP的降低,从而提高铝诱导下SH-SY5Y细胞的存活率.     

全反式维甲酸诱导分化对SH-SY5Y细胞拮抗细胞毒性研究的影响

[目的]观察全反式维甲酸(RA)诱导分化对以人神经母细胞瘤SH-SY5Y作为体外神经毒性研究模型的影响。[方法]RA诱导SH-SY5Y细胞分化并于相差显微镜观察细胞形态学变化;采用MTT法检测细胞活力;通过测定细胞内乳酸脱氢酶(LDH)的释放量观察毒性物质对SH-SY5Y细胞的作用;硝基蓝四氮唑(NBT)还原法检测细胞的还原能力;荧光探针(DCFH-DA)测定细胞内活性氧(ROS)荧光强度。[结果]MTT检测和LDH测定发现,RA诱导SH-SY5Y细胞分化,提高了细胞活力,使SH-SY5Y细胞拮抗其对毒性物质的反应。NBT还原实验和DCFH-DA测定显示,RA诱导分化可降低H2O2诱导的细胞内ROS的水平。[结论]RA通过提高细胞活力而拮抗毒性物质对SH-SY5Y细胞的毒性作用,其作用机制可能与细胞内ROS水平有关。未分化型SH-SY5Y细胞是进行PD疾病的神经毒性实验和神经保护研究的良好细胞模型。     

HSPA1L在H2O2诱导SH-SY5Y细胞损伤中的作用

目的 研究HSPA1L蛋白在H2O2诱导SH-SY5Y细胞损伤中的作用.方法 将SH-SY5Y细胞用不同浓度的H2O2(1 200、800、600、400、200、100、50、0μmol/L)处理24 h,倒置显微镜观察SH-SY5Y细胞形态学的变化,MTF法检测SH-SY5Y细胞存活率,Western-blot检测SH-SY5Y细胞HSPA1L蛋白表达水平的变化.结果 与0 μmol/L组比较,不同浓度H2O2处理后,细胞形态发生了剂量依赖性损伤;SH-SY5Y细胞的存活率随H2O2浓度升高,呈现剂量依赖性降低;HSPA1L蛋白的表达水平随H2O2浓度升高,呈现剂量依赖性升高.结论 HSPA1L在H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤模型中,呈现剂量依赖性升高,这可能是细胞应对氧化应激损伤的一种补偿机制.     

栀子苷对氧化应激所致H9C2心肌细胞损伤的保护作用机制研究

目的探讨栀子苷(GE)对H9C2心肌细胞氧化应激损伤的保护作用及机制。方法研究于2016年12月—2017年9月在武汉大学心血管病研究所进行。采用过氧化氢(H_2O_2)建立H9C2细胞氧化应激损伤模型。将细胞分为3组:PBS组、H_2O_2组以及H_2O_2+GE组,分别给予磷酸缓冲盐溶液(PBS)、H_2O_2(200μmol/L)、H_2O_2+GE(100μmol/L),刺激后继续培养24 h。检测各组内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,丙二醛(MDA)、活性氧簇(ROS)水平,检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(KEAP1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)通路及其下游的血红素加氧酶-1(HO-1)和SOD-1的mRNA水平,CCK-8检测细胞存活率,原位末端缺口标记法(TUNEL)检测细胞凋亡。结果 H_2O_2处理后,H9C2心肌细胞内SOD和GSH-Px的活性下降,与H_2O_2组比较,H_2O_2+GE组细胞SOD和GSH-Px活性增加;H_2O_2处理可导致H9C2心肌细胞MDA水平明显升高,栀子苷可抑制这种脂质过氧化产物的产生;H_2O_2可诱导H9c2细胞ROS的产生,栀子苷处理后ROS的水平显著下降。H_2O_2刺激细胞后,KEAP1转录水平上升,Nrf2、HO-1、SOD-1转录水平下降;栀子苷处理后,KEAP1转录水平下降、Nrf2、HO-1、SOD-1转录水平回升;栀子苷明显升高细胞存活率,减轻细胞凋亡。结论栀子苷可通过激活KEAP1/Nrf2通路抑制H_2O_2引起的心肌细胞的氧化损伤。     

芍药苷对过氧化氢诱导SH-SY5Y细胞PCNA及Caspase-3表达的影响

目的探讨芍药苷对过氧化氢(H2O2)诱导SH-SY5Y氧化损伤的保护作用及其可能机制。方法MTT法测定细胞存活率,细胞免疫化学技术检测细胞细胞核增殖抗原(PCNA)、Caspase-3的表达。结果 0.87mmol/L H2O2可使细胞存活率降低,PCNA的表达减少,Caspase-3的表达增加。经过39μg/mL和62.5μg/mL浓度的芍药苷处理后,H2O2诱导的SH-SY5Y细胞存活率明显升高,PCNA的表达明显增加,同时抑制Caspase-3的表达。结论芍药苷可抑制过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,其作用机制可能与其增加细胞PCNA的表达,减少Caspase-3的表达有关。     

黄芪甲苷通过激活自噬抑制缺氧缺糖/复氧复糖诱导的PC12细胞凋亡

目的研究黄芪甲苷通过激活细胞自噬抑制缺氧缺糖/复氧复糖诱导PC12细胞凋亡的作用。方法取对数生长期的PC12细胞,随机分为7组:正常对照组、模型组、溶媒组、黄芪甲苷组、黄芪甲苷+自噬抑制剂组、自噬抑制剂组、自噬激活剂组。除正常对照组外,其余各组剥夺氧、糖3h后再复氧、复糖12 h,并于复氧、复糖的同时给予相应药物处理。用透射电镜观察自噬小体的变化,Western blot检测LC3-II、Beclin1、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)的表达,流式细胞术和TUNEL染色检测细胞凋亡。结果与正常对照组相比,模型组出现典型的自噬小体,LC3-II、Beclin1表达均增多(P0.05),同时Caspase3表达、细胞凋亡率和凋亡指数也升高(P0.05)。与模型组相比,黄芪甲苷组、自噬激活剂组自噬小体数量、LC3-II和Beclin1表达均增多(P0.05),Caspase3表达、细胞凋亡率和凋亡指数均下降(P0.05);而自噬抑制剂组自噬小体数量、LC3-II和Beclin1表达减少(P0.05),Caspase3表达、细胞凋亡率和凋亡指数升高(P0.05);溶媒组与模型组之间无显著差异(P0.05)。与黄芪甲苷组相比,黄芪甲苷+自噬抑制剂组、自噬抑制剂组自噬小体数量、LC3-II和Beclin1表达均减少(P0.05),Caspase3表达、细胞凋亡率和凋亡指数均升高(P0.05)。结论黄芪甲苷可通过激活细胞自噬而抑制缺氧缺糖/复氧复糖诱导的PC12细胞凋亡,从而发挥神经保护作用。     

黄芪总苷对H_2O_2诱导的衰老心肌细胞氧化应激及PI3K/AKT通路的影响

【目的】观察黄芪总苷对H_2O_2诱导的衰老心肌细胞氧化应激及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路的影响,探讨黄芪总苷对心肌细胞的保护作用。【方法】通过H_2O_2诱导大鼠心肌H9C2细胞,建立衰老心肌细胞模型。将造模后的细胞随机分成模型对照组,黄芪总苷低、中、高剂量组(剂量分别为10、20、40 mg/L),另设空白对照组。黄芪总苷低、中、高剂量组细胞分别给予对应质量浓度处理48 h,空白对照组和模型对照组不加黄芪总苷处理。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖能力,羟胺法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸(TBA)检测丙二醛(MDA)含量,化学荧光法检测活性氧(ROS)含量,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测PI3K/AKT通路蛋白PI3K、AKT磷酸化水平。【结果】与空白对照组比较,模型对照组细胞存活率、SOD活性、p-PI3K/PI3K比值和p-AKT/AKT比值显著降低,MDA、ROS含量显著升高(P0.05);黄芪总苷低、中、高剂量组对上述指标有均显著改善作用,并呈剂量依赖性。【结论】黄芪总苷可减缓H_2O_2诱导的心肌细胞衰老,其机制可能与减轻氧化应激反应、激活PI3K/AKT通路有关。     

APE1乙酰化调节电离辐射诱导的HeLa细胞自噬

目的 探讨脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子(apurinic/aprimidinic endonuclease/redox factor-1,APE1/Ref-1)乙酰化对电离辐射诱导HeLa细胞自噬的调节作用.方法 给予Elekta precise直线加速器处理HeLa细胞及子系细胞APE1wT和APE1 K6R/KTR,应用免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)的方法检测APE1乙酰化修饰及Beclin1/Bcl2的结合,流式细胞仪检测细胞自噬的水平,免疫荧光激光共聚焦检测LC3的聚集,Western blot检测APE1、LC3和p62的表达.结果 HeLa细胞APE1乙酰化水平随着照射剂量的增加和照射后时间的延长而逐渐升高(P＜0.05).HeLa细胞LC3Ⅱ的表达与照射剂量呈正相关,而与p62呈负相关(P＜0.05);电离辐射促进细胞的自噬水平和LC3的聚集.电离辐射后,LC3Ⅱ上调;与对照组APE1wT相比,APE1 K6R/K7R细胞Beclin1/Bcl2结合增强,LC3Ⅱ/LC3 I比值降低,p62表达上调(P＜0.05).结论 APE1乙酰化通过Beclin1/Bcl2途径调节电离辐射诱导的HeLa细胞自噬.