miR-200c在胃癌早期诊断中的作用研究现状及展望

胃癌(gastric cancer, GC)是消化道最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率在所有癌症中均位列第二位,且中晚期GC患者所占比例较高,有不断上升的趋势,治疗疗效极差.近年来,大量的研究证明, miR-200c在GC患者血清中的含量明显升高,并且miR-200c的水平与上皮间质转化及淋巴结转移密切相关.因此,深入揭示miR-200c在GC诊断中的作用不仅有助于GC的早期诊断,还可以用来制定新的有效治疗策略以及判断GC患者的预后.本文就miR-200c在GC早期诊断中的作用研究进展进行综述,并对其应用前景进行展望.     

miR-200c通过下调TUBB3基因表达逆转老年肺癌患者顺铂耐药性的机制

目的探讨miR-200c逆转肺癌细胞顺铂耐药性的作用机制。方法 miR-200c模拟物转染肺癌A549细胞后,采用实时定量PCR法检测miR-200c的表达;采用细胞活力测定(MTS)法检测miR-200c对肺癌A549细胞顺铂耐受性的影响。采用流式细胞术(FCM)检测肿瘤细胞凋亡率的变化。采用Western blotting检测肿瘤细胞耐药蛋白survivin和Bcl-2蛋白的表达。通过生物信息学分析发现miR-200c下游靶分子TUBB3表达存在差异后,构建TUBB3 3′UTR的野生型和突变型荧光素酶报告载体,然后利用双荧光素酶活性分析miR-200c对TUBB3基因表达的结合位点和调控作用。通过Western blotting检测miR-200c对TUBB3蛋白表达的调控作用以及Bcl-2蛋白和肿瘤细胞耐药蛋白survivin的表达。采用SPSS 19.0统计软件分析实验数据。结果与对照组相比,miR-200c转染肺癌细胞株后,肺癌细胞对顺铂的敏感性呈明显增加趋势[IC_(50)分别为(37.3±3.1)和(15.3±3.3)μmol/L,P0.01]。过表达miR-200c的A549/DDP组的细胞凋亡率明显高于NC组(P0.01)。而肿瘤耐药相关基因Bcl-2和survivin蛋白表达降低。转染miR-200c mimics的A549/DDP细胞中TUBB3蛋白和mRNA的表达均下调(P0.01)。双荧光素酶活性分析显示miR-200c对TUBB3基因表达具有调控作用(P0.01)。这些结果均证实TUBB3为miR-200c的下游靶基因。pcDNA-TUBB3质粒转染后,过表达miR-200c的A549/DDP细胞株survivin和Bcl-2蛋白表达较miR-200c mimics组上调。结论 miR-200c可通过下调TUBB3基因的表达逆转肺癌顺铂耐药细胞的耐药性。     

miR-200c改善转化生长因子－β1诱导的肾小管上皮细胞纤维化的机制

目的探讨miR-200c是否通过调节自噬缓解转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞纤维化。方法不同浓度(0、5、10、15、20、30 ng/ml)TGF-β1刺激HK2细胞48 h后倒置显微镜下观察细胞形态,CCK-8检测细胞增殖情况。选择致HK2细胞增殖最快的TGF-β1浓度(c)进行转染实验:细胞转染40 nmol/L无意义序列RNA(NC组);细胞转染40 nmol/L无意义序列RNA后c浓度TGF-β1处理细胞48 h(NC+T组);细胞转染40 nmol/L miR-200c mimics(M组);细胞转染40 nmol/L miR-200c mimics后c浓度TGF-β1处理细胞48 h(M+T组)。qRT-PCR检测miR-200c转染效率。Western blotting检测4组细胞Smad通路蛋白Smad2和Smad3、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、钙黏蛋白(E-cad)表达量,以及自噬相关蛋白LC3(包括LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值)和P62。结果 10 ng/ml的TGF-β1刺激HK2细胞48 h后增殖最快,镜下细胞形态由正常的卵圆形铺路石状变为长梭形,纤维化形态最明显。qRT-PCR显示M组miR-200c表达量是NC组(212.42±12.25)倍(t=24.41,P=0.000),说明转染有效。Western blotting结果显示,与NC组比较,NC+T组加入10 ng/ml TGF-β1的HK2细胞Smad2、Smad3和α-SMA表达量增加,E-cad蛋白表达量降低(P0.05)。与NC+T组比较,M+T组Smad2、Smad3和α-SMA表达量减少,E-cad表达量增加(P0.05),提示miR-200c表达增加抑制了纤维化。进一步发现,M组较NC组的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达水平增加,P62表达水平降低,提示自噬活性增加;M+T组较NC+T组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达水平增加,P62表达水平降低,提示miR-200c表达升高缓解了纤维化程度。结论 miR-200c可能通过激活细胞自噬缓解TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞纤维化。     

DNA甲基转移酶3A基因在胃癌中的表达及其临床意义

目的 研究DNA甲基转移酶3A（DNMT3A）在天津汉族人群胃癌（GC）组织中的表达,并分析DNMT3A的表达与胃癌临床病理因素之间的关系,探讨其在胃癌发生发展中的作用.方法 用免疫组织化学法检测DNMT3A在130例胃癌组织及256例胃炎组织中的表达,将两者进行对比并分析其与胃癌临床病理之间的关系.结果 DNMT3A蛋白在胃癌组织中的阳性细胞表达率（78.4％）明显高于胃炎组织的表达率（64.4％）,两者间比较差异有统计学意义（P＜0.05）.DNMT3A蛋白的异常表达与胃癌患者年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度无明显相关,与组织分化程度、淋巴结转移及TNM分期密切相关（P＜0.05）.结论 在胃癌组织中,DNMT3A蛋白呈高表达状态,并与肿瘤组织分化、淋巴结转移及TNM分期有关,DNMT3A的高表达可能与胃癌的发生、发展有关,且可能是胃癌发生的早期诊断指标.     

胃癌组织中miR-200a、miR-92a表达变化与患者临床病理参数和预后的关系

目的 探讨胃癌组织中微小RNA(miR)-200a、miR-92a表达变化及与患者临床病理参数和预后的关系.方法 选择104例胃癌患者,采用RT-qPCR法检测胃癌及癌旁正常胃组织中miR-200a、miR-92a表达.分析miR-200a、miR-92a表达与胃癌患者临床病理参数的关系.Kaplan-Meier生存分...     

靶向沉默miR-345表达对胃癌细胞周期的影响及其机制

目的探讨miR-345影响胃癌细胞生长周期的作用机制。方法采用脂质体介导转染miR-345反义寡核苷酸至胃癌细胞MGC803、MKN45以沉默miR-345表达,采用实时英光定量PCR(Real-time PCR)、蛋白免疫印迹(Western blotting)检测胃癌细胞中p21Cip1水平,随后检测CDK4、CDK6、Cyclin D1、p-Rb、Rb蛋白水平,进一步克隆形成实验比较其增殖能力,流式细胞术检测miR-345对胃癌细胞周期的影响。结果脂质体介导转染miR-345反义寡核苷酸至胃癌细胞MGC803、MKN45可以抑制miR-345的表达;p21Cip1的mRNA和蛋白水平在低miR-345表达的胃癌细胞系中升高;下调miR-345的表达后MGC803、MKN45细胞中CDK4、CDK6、Cyclin D1和总Rb蛋白的表达水平无明显变化,但Rb蛋白的磷酸化水平显著降低。结论沉默miR-345的表达能够明显阻滞胃癌细胞从G1期向S期的进程,减慢细胞生长速度;其机制与上调p21Cip1进而抑制Rb蛋白的磷酸化有关。     

circPTPRA与miR-1252在胃癌中的表达及其对细胞生物学行为的影响

目的 探讨circPTPRA与miR-1252在胃癌中的表达及其对胃癌细胞生物学行为的影响.方法 取术中切除的胃癌组织与癌旁组织(距癌组织>5 cm处的组织)进行实验,随后采用qRT-PCR检测胃癌组织、癌旁组织中circPTPRA与miR1252的表达情况.体外培养人胃癌细胞HGC-27,分别转染pcDNA、pcDN...     

miR-206对血管内皮细胞增殖的影响及其机制

目的研究miR-206对血管内皮细胞增殖的影响及其机制,为临床动脉硬化疾病提供新的诊疗方向。方法收集临床病理首次确诊为糖尿病下肢动脉粥样硬化病变的患者病变处动脉内皮组织和正常内皮组织,qPCR检测miR-206的表达;而后通过基础实验研究将HUVEC分为未转染组、miR-206-mimics组和miR-206-inhibitor组,观察转染效率;三组细胞均采用CCK8检测细胞增殖情况,Transwell进行迁移能力评估,流式细胞仪检测细胞周期情况,Western blot检测Cx43表达情况。结果糖尿病动脉硬化患者下肢动脉(均为胫腓动脉)病变处内皮细胞miR-206的mRNA表达较正常组织内皮细胞明显增加(P0.05);HUVEC转染miR-206-mimics后,miR-206表达显著升高(P0.05),转染miR-206-inhibitor后,miR-206表达明显降低(P0.05);在HUVEC转染miR-206-mimics 24 h后,细胞增殖率相比于未转染组和miR-206-inhibitor组要明显降低(P0.05);在HUVEC转染miR-206-mimics后,细胞迁移能力明显降低(P0.05),细胞周期在G2期发生阻滞,而HUVEC转染miR-206-inhibitor后细胞迁移能力提高(P0.05);miR-206-mimics组细胞Cx43表达明显降低,而miR-206-inhibitor组细胞Cx43表达明显增加。结论 miR-206可以抑制血管内皮细胞的增殖,将内皮细胞阻滞在有丝分裂G2期,并且抑制内皮细胞迁移,其对内皮细胞增殖的影响可能是通过调节Cx43表达来实现的。     

Baicalin suppresses the migration and invasion of breast cancer cells via the TGF-β/lncRNA-MALAT1/miR-200c signaling pathway

Metastasis is the major cause of death and failure of cancer chemotherapy in patients with breast cancer (BC). Activation of TGF-β/lncRNA-MALAT1/miR-200c has been reported to play an essential role during the metastasis of BC cells. The present study aimed to validate the suppression of BC-cell migration and invasion by baicalin and explore its regulatory effects on the TGF-β/lncRNA-MALAT1/miR-200c signaling pathway. We found that baicalin treatment inhibited cell viability and migration and invasion. Mechanistically, baicalin treatment significantly downregulated the expression of TGF-β, ZEB1, and N-cadherin and upregulated E-cadherin on both mRNA and protein levels. Additionally, baicalin treatment significantly downregulated the expression of lncRNA-MALAT1 and upregulated that of miR-200c. Collectively, baicalin significantly suppresses cell viability, migration, and invasion of BC cells possibly by regulating the TGF-β/lncRNA-MALAT1/miR-200c pathway.     

没药甾酮对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响

目的研究没药甾酮对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响。方法以正常人肝细胞L-02作为对照,采用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐法观察不同浓度没药甾酮（5～100μmol/L）对人肝癌细胞HepG2和L-02细胞增殖的影响并观察细胞形态的变化;应用流式细胞术检测细胞周期变化和凋亡发生。结果不同浓度没药甾酮均可显著抑制人肝癌细胞HepG2生长,并呈时间、剂量依赖性,最大抑制率可达81.9%±1.92%（100μmol/L）;没药甾酮可使G0/G1期细胞比例增多,G2/M期细胞比例下降,可将细胞阻滞于G0/G1期;没药甾酮诱导人肝癌细胞HepG2发生凋亡,50μmol/L和75μmol/L没药甾酮早期细胞凋亡率分别为24.91%±2.41%、53.03%±2.28%,与对照组相比,差异均具有统计学意义（P〈0.05）。结论没药甾酮可抑制人肝癌细胞HepG2增殖并诱导凋亡,其作用可能与干扰细胞周期有关。     

熊果酸对人胃癌细胞株MGC-803的抑制作用及其机制

目的观察熊果酸（UA）对胃癌细胞株MGC-803的抑制增殖作用。方法培养胃癌细胞株MGC-803,以MTT比色法及生长曲线测定UA对MGC-803抑制增殖的作用。免疫印记法测定p-ERK1/2、CyclinD1、p21^waf/tip。表达。结果MTT实验及生长曲线均显示UA明显抑制MGC-803细胞增殖,免疫印记法显示UA抑制pERK1/2、CyclinD1表达,同时上调p21^waf/vip。表达。结论熊果酸可以抑制MGC-803增殖,机制与影响p-ERK1／2及下游CyclinD1、p21^waf/cipl表达有关。     

洛铂对肝癌HepG2细胞增殖和调亡的作用及机制

目的在体外细胞中研究洛铂对肝癌HepG2细胞在增殖、凋亡方面的作用及其机制。方法将HepG2细胞分为洛铂组(增殖实验:5、10、15μmol/L组;凋亡实验:10μmol/L;侵袭实验:4μg/ml)和对照组(不加药物)。利用CCK8法和流式细胞术分别检测2组HepG2细胞的增殖和凋亡情况。通过Western Blot初步检测2组细胞中增殖、凋亡相关蛋白NF-κB、Bcl-2、Bax、Bid、Puma、Caspase-3的表达变化。增殖实验采用双因素方差分析,凋亡实验采用χ2检验,侵袭实验采用t检验。结果在作用于细胞24、48、72 h后,对照组与实验组细胞生长增殖抑制率差异有统计学意义(F=273.5,P<0.01),同一时间不同浓度间、同一浓度不同时间差异均有统计学意义(F分别为1857、1365,P值均<0.01)。2组间细胞凋亡率比较差异有统计学意义(χ2=1821,P<0.001)。实验组HepG2细胞中穿透Transwell小室的细胞数少于对照组(21.30±2.74 vs 45.00±4.26,t=11.89,P<0.001)。洛铂组HepG2细胞Bcl-2表达水平下降,NF-κB、Bax、Puma、Caspase-3表达水平升高。结论洛铂可通过影响一系列增殖、凋亡蛋白发挥抑制肝癌细胞增殖及促进凋亡的作用,但细胞内信号通路复杂,需要进一步研究。     

miR-451在胃癌组织中的表达及临床意义

目的观察miR-451在胃癌组织中的表达,并探讨其与胃癌相关临床因素的关系。方法收集18例胃癌患者的胃癌组织和胃癌旁组织,应用RT-PCR技术检测miR-451的表达水平(以U6为对照),并分析其与胃癌相关临床因素的关系。结果与胃癌旁组织相比,miR-451在胃癌组织中明显下调(P<0.05)。其中上调6例,下调12例,下调比率66.67%(12/18)。miR-451的表达水平与胃癌的分化相关(P<0.05),与年龄、性别、TNM分期、Borrmann分型、浸润深度、淋巴结转移等无明显相关。结论 miR-451在胃癌组织中低表达,并与胃癌的分化程度密切相关,表明其可能参与了胃癌的发生和发展过程。     

microRNA-200c对3T3-L1前体脂肪细胞向脂肪细胞分化的调控作用

目的 探讨microRNA(miRNA)-200c对3T3-L1前体脂肪细胞分化的影响.方法 利用实时PCR检测miRNA-200c在小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向脂肪细胞分化过程及向骨细胞分化过程中的表达.通过将miRNA-200c类似物、miRNA-200c抑制剂转染至3T3-L1前体脂肪细胞,从而在细胞中增强或抑制miRNA-200c的表达,油红O染色检测转染后3T3-L1前体脂肪细胞诱导成熟后的脂滴形成情况.实时PCR检测转染后脂肪细胞特异性转录因子过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)和表征基因aP2在成脂过程中的表达变化.结果 实时PCR结果显示,在小鼠骨髓MSCs诱导成脂后miRNA-200c表达升高(t=24.709,P＜0.01),而诱导成骨后,miRNA-200c表达下降(t=8.783,P＜0.01).转染miRNA-200c类似物后,3T3-L1前体脂肪细胞中脂滴明显增多,PPARγ和aP2表达显著升高(t=7.674、9.657,P均＜0.01);转染miRNA-200c抑制剂后,3T3-L1前体脂肪细胞中脂滴明显减少,PPARγ、aP2表达显著降低(t=9.483、6.419,P均＜0.01).结论 miRNA-200c能够促进3T3-L1前体脂肪细胞向脂肪细胞分化.     

硫酸软骨素对Lewis肺癌细胞增殖及侵袭能力的影响

目的 观察硫酸软骨素（CS）对Lewis肺癌细胞（LLC）增殖及侵袭能力的影响,并探讨其可能机制.方法 常规方法培养LLC,并给予含不同剂量CS的培养液培养LLC.采用MTT法检测CS对LLC增殖的影响,流式细胞术PI染色法检测CS对LLC细胞周期的影响,Transwell侵袭实验检测CS对LLC侵袭能力的影响.结果 与对照组比较,CS组A值随CS浓度增加而降低（P均＜0.05）;与对照组比较,9、30 mg/mL CS组S期升高（P均＜0.05）;与对照组比较,9、30 mg/mL CS组LLC穿膜细胞数降低（P均＜0.05）.结论 CS对Lewis小鼠肺癌细胞具有抑制增殖和侵袭的作用,其机制可能与抑制细胞分裂周期有关.     

转染Zbtb7a基因对人胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的 观察转染Zbtb7a基因对人胃癌细胞系SGC7901增殖及凋亡的影响,并探讨其机制.方法 将pcDNA3.1-Zbtb7a和pSilencer 3.1-H1-mk用Lipofectamine2000转染SGC7901细胞,采用RT-PCR和Western Blot法检测MK mRNA及蛋白表达,CCK-8试剂盒和平板克隆法检测细胞增殖,流式细胞仪Annexin V-PI染色检测细胞凋亡.结果 转染Zbtb7a后,SGC7901细胞中MK表达水平明显升高,细胞增殖能力明显增强（P＜0.05）,并且0.5ng/mL TRAIL诱导的细胞凋亡受到抑制（P＜0.05）.Zbtb7a高表达后干扰MK的表达,细胞增殖及克隆能力则明显降低（P＜0.05）,TRAIL诱导的细胞凋亡数也明显增加（P＜0.05）.结论 Zbtb7a可以通过上调MK的表达,促进SGC-7901细胞增殖以及抑制TRAI诱导的细胞凋亡.     

微小RNA-200家族对糖尿病及其并发症的影响

糖尿病并发症可引起人体心、脑和肾等重要组织和器官损害,严重危害人类健康,但其发病机制并不十分清楚。近年研究发现微小RNA（microRNA,miRNA）在糖尿病及其并发症的发生发展中起重要作用。miRNA是真核生物中一类长度约22～25个核苷酸的内源性非编码小分子RNA,通过转录后机制调控其下游靶基因的表达,进而影响疾病的病理生理学过程。其中miRNA-200（miR-200）家族对糖尿病及其并发症的调控研究较多。miR-200家族不仅对胰岛素相关信号通路具有调控作用,在糖尿病微血管及大血管并发症中也发挥重要调控作用。因此,探讨miR-200家族与糖尿病及其并发症之间的关系,可为糖尿病及其并发症的诊断及治疗提供新的思路。