外源性细胞因子对柯萨奇病毒性心肌炎小鼠脾Th17细胞的影响

目的:观察转化生长因子(TGF)-β、白细胞介素(IL)-6和IL-23对柯萨奇病毒性心肌炎(VMC)小鼠脾中Th17细胞分化增殖的影响。方法:以6周龄雄性Balb/c小鼠腹腔注射柯萨奇病毒液建立VMC模型,1周后磁珠分离脾脏CD4+T淋巴细胞,分成对照组、TGF-β+IL-6组和TGF-β+IL-6+IL-23组进行体外培养。5d后应用流式细胞术测定刺激后Th17细胞的百分比;逆转录-聚合酶链式反应测定细胞中IL-17mRNA的表达;ELISA测定细胞培养上清液IL-17的水平。结果:与对照组比较,TGF-β+IL-6组Th17细胞数稍增加[(1.64±0.43)%∶(1.96±0.35)%],IL-17mRNA表达水平及细胞培养上清液IL-17浓度稍增加,但差异无统计学意义(P>0.05)。而TGF-β+IL-6+IL-23组Th17细胞数显著增加(4.08±0.77)%、IL-17mRNA表达水平及细胞培养上清液IL-17浓度均明显高于前2组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:外源性TGF-β联合IL-6对VMC小鼠脾中已分化的Th17细胞无增殖作用,而添加外源性IL-23则能显著增加Th17细胞数及其效应分子IL-17的表达。     

外源性转化生长因子-β对病毒性心肌炎小鼠脾Th17细胞增殖的影响△

目的观察外源性转化生长因子（transforming growth factor,TGF-β）对病毒性心肌炎小鼠脾辅助性T淋巴细胞亚群（Th17）细胞增殖的影响。方法BALB／c小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3建立病毒性心肌炎小鼠模型,1周后磁珠分离脾CD4’T淋巴细胞进行体外培养,分别用植物血凝素加TGF．B或单独用植物血凝素进行培养,5d后流式细胞术测定培养后卟17细胞比例、逆转录一聚合酶链反应（PT-PCR）测定培养细胞白细胞介素-17（interleukin-17,IL．17）mRNA的表达、酶联免疫吸附测定（ELISA）法测定培养上清液中白介素-17的水平。结果与单独用植物血凝素培养组比较,植物血凝素加TGF-β组的Th17细胞比例稍有增加,但差异无统计学意义（2．32％±1．48％孤1．82％±0．17％,P〉0．05）。两组培养细胞白介素-17mRNA及上清液中自介素-17浓度比较,差异也无统计学意义（P均〉0．05）。结论外源性TGF—β对病毒性心肌炎小鼠脾中已分化的Th17细胞无增殖作用。     

日本血吸虫感染小鼠肠系膜淋巴结Th17细胞的免疫应答

目的观察C57BL/6小鼠感染日本血吸虫后肠系膜淋巴结Th17细胞的免疫应答。方法 20只C57BL/6小鼠随机分为感染组和对照组,每组10只,感染组小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴,每鼠(40±5)条。感染后5~6周分离小鼠肠系膜淋巴结的淋巴细胞,分别用抗小鼠CD3单克隆抗体(anti-CD3,1μg/ml)和抗小鼠CD28单克隆抗体(anti-CD28,1μg/ml)刺激,培养4 h后收集细胞,RT-PCR检测小鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞中白细胞介素17(IL-17)和维甲酸相关孤独受体(ROR-γt)mRNA的转录水平;培养72 h后,ELISA检测细胞培养上清液IL-17和γ干扰素(IFN-γ)的含量。同时用佛波酯(PMA,10 ng/ml)和离子霉素(1μg/ml)刺激淋巴细胞5 h后,胞内细胞因子染色,流式细胞术检测Th17细胞的含量和其他细胞因子的产生。结果 ELISA检测结果显示,感染小鼠肠系膜淋巴结培养物上清液中IFN-γ[(214.3±62.6)pg/ml]和IL-17[(176.8±62.1)pg/ml]的含量明显高于健康小鼠[(46.7±13.9)和0 pg/ml](P<0.05)。RT-PCR检测结果显示,IL-17和ROR-γt mRNA转录水平也明显高于健康小鼠。感染小鼠肠系膜淋巴细胞CD4+T细胞中,Th17细胞的比例为(0.55±0.03)%,明显高于健康小鼠[(0.16±0.01)%](P<0.05)。在CD4+T细胞中,IL-17+IL-4+细胞占0.06%,IL-17+IFN-γ+和IL-17+IL-5+细胞各占0.02%,IL-17+IL-9+细胞占0.01%,未检测到IL-17+IL-10+和IL-17+Foxp3+细胞。结论日本血吸虫感染C57BL/6小鼠的肠系膜淋巴结能诱导Th17细胞产生。Th17细胞能分泌IL-4,及少量的IFN-γ、IL-5和IL-9,不分泌IL-10,也不表达Foxp3。     

病毒性心肌炎患儿血清白细胞介素-15、IFN-γ的变化及自然杀伤细胞活性的相关研究

目的:探讨血清白细胞介素-15(IL-15)、γ-干扰素(IFN-γ)及自然杀伤细胞(NK细胞)活性在病毒性心肌炎(VM)患儿血清中的检测及意义.方法:应用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测观察组患儿及正常对照组儿童的血清IL-15、IFN-γ水平;采用乳酸脱氢酶释放法检测观察组患儿及正常对照组儿童的NK细胞的活性水平.结果:VM患儿血清IL-15浓度为(348.58±25.36)ng/L,IFN-γ浓度为(60.40±20.10)ng/L,均显著高于对照组;观察组患儿急性期血清NK细胞活性高于正常对照组.结论:IL-15参与了VM早期免疫防御,急性期血清IL-15水平和IFN-γ、NK细胞活性呈明显相关性.     

神经生长因子对哮喘大鼠Th1/Th2类细胞因子表达的调控研究

目的探讨在支气管哮喘中神经生长因子(NGF)对T1亚群辅助淋巴细胞(Th1)与T2亚群辅助淋巴细胞(Th2)类细胞因子表达的调控作用机制。方法于2004年3月至2004年12月对中南大学湘雅二医院应用鸡卵清蛋白(OVA)建立鼠哮喘模型,并将SD大鼠随机分为4组:哮喘组、正常对照组、外源性NGF干预组(NGF组)、抗NGF抗体干预组(抗NGF抗体组),每组8只。模型建立后取肺组织分别作以下研究:通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测哮喘组和对照组NGFmRNA;同时测定4组Th1类细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)、Th2类细胞因子白细胞介素4(IL-4)的mRNA表达改变。结果(1)哮喘组与对照组相比较:肺组织NGFmRNA表达明显增强[(90.4±7.6)%对(51.8±12.3)%,P<0.01];IL-4mRNA表达明显增强[(48.0±8.1)%对(19.4±8.4)%,P<0.05],IFN-γmRNA表达明显减低[(32.8±8.1)%对(43.4±8.9)%,P<0.01];哮喘组中肺组织的NGFmRNA相对表达量与IFN-γ/IL-4mRNA表达比值呈显著负相关(r=-0.963,P<0.01)。(2)NGF组与哮喘组相比较,IL-4mRNA表达显著增高[(62.0±12.2)%对(48.0±8.1)%,P<0.01];IFN-γmRNA表达显著降低[(19.9±8.1)%对(32.8±8.1)%,P<0.01]。(3)抗NGF抗体干预组与哮喘组相比较,肺组织中IL-4mRNA表达显著减低[(20.1±7.1)%对(48.0±8.1)%,P<0.01],IFN-γmRNA表达显著增高[(45.4±9.4)%对(32.8±8.1)%,P<0.05]。结论NGF下调Th1类细胞因子表达,上调Th2类细胞因子表达,由此参与促进放大哮喘Th1/Th2类细胞因子免疫失衡效应。     

LFA-1基因缺失对小鼠Nave T细胞体外向Th17细胞分化的影响

背景:淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)参与T细胞的活化和功能调节,与炎症性肠病的发病密切相关。目的:观察LFA-1基因缺失(LFA-1-/-)对小鼠Nave T细胞体外向Th17细胞分化的影响。方法:繁殖LFA-1-/-子代小鼠,提取鼠尾DNA,PCR法鉴定基因型。LFA-1-/-子代小鼠为实验组,野生型(WT)C57BL/6J小鼠为对照组,磁珠分选脾脏单个核细胞中的CD4+CD62L+Nave T细胞并检测其纯度。体外建立不同Th17细胞诱导分化体系[转化生长因子-β(TGF-β)、TGF-β+白细胞介素-6(IL-6)和TGF-β+IL-6+IL-23],以流式细胞术检测两组分选得到的Nave T细胞在不同体系中诱导出的Th17细胞比率,荧光定量PCR法和ELISA法检测Th17细胞特异性转录因子ROR-γt和特异性标记物IL-17A表达。结果:15只子代小鼠均为LFA-1-/-小鼠,磁珠分选得到的CD4+CD62L+Nave T细胞纯度大于95%。低剂量TGF-β+IL-6即能诱导出Th17细胞,在此基础上加入IL-23能促进更多Th17细胞产生。与WT对照组相比,LFA-1-/-组Nave T细胞在TGF-β+IL-6+IL-23体系中诱导产生Th17细胞的效应更为明显(17.2%±1.4%对5.7%±0.2%,P0.001),ROR-γt、IL-17A mRNA表达上调(P0.001),细胞培养上清液中IL-17A浓度升高(P0.01)。结论:LFA-1基因缺失能促进小鼠Nave T细胞体外向Th17细胞分化。     

血清IFN-γ、IL-4、IL-5及IL-17对儿童哮喘影响及相关性研究

目的探究血清IFN-γ、IL-4、IL-5及IL-17对儿童哮喘影响及相关性。方法分析2013年1月~2014年6月在我院收治的39例哮喘急性期儿童的临床资料,并列为观察组,选取37例在我院进行健康检查的健康儿童作为对照组。结果观察组患者血清IFN-γ、IL-4、IL-5及IL-17水平显著高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05);观察组患者VC%、FEV1/FVC%、MMER水平明显低于对照组,差异具有统计学意义(P0.05);观察组患者IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-17水平与FEV1/FVC(%)水平呈现显著负相关。结论儿童哮喘发病与Th1、Th2及Th17细胞分泌的IFN-γ、IL-4、IL-5及IL-17有关,其表达水平升高与哮喘的严重程度呈正比。     

Th17淋巴细胞对甲型H1N1流行性感冒病毒清除作用的探讨

目的 探讨甲型H1N1流行性感冒(流感)患者Th17淋巴细胞表型、比例及其与病毒清除之间的关系.方法 将甲型H1N1流感患者70例、季节性流感患者30例、健康对照者68例分别纳入3组.通过细胞内染色,流式细胞技术测定3组人群外周血Th1、Th2、Th17、调节性T细胞(Treg)淋巴细胞比例;ELISA法测定血浆及外周血单个核细胞(PBMC)培养上清液中的IFN-γ、转化生长因子-β(TGF-β)、IL-6水平;RT-PCR检测鼻咽拭子甲型H1N1流感病毒载量.统计学方法采用单因素方差分析和线性相关分析.结果 甲型H1N1流感患者Th17淋巴细胞比例为(2.740±0.210)%,较健康对照者的(3.443±0.154)%及季节性流感患者的(3.443±0.277)%显著下降(F=4.242,P＜0.05),而3组间Th1、Th2、Treg淋巴细胞比例无明显差异;甲型H1N1流感患者血浆TGF-β水平为(10±8)ng/mL,较健康者的(43±32)ng/mL及季节性流感患者的(18±10)ng/mL显著下降(F=17.72,P＜0.01);甲型H1N1流感患者PBMC中TGF-β水平为(782±736)pg/mL,较健康者的(1462±315)pg/mL及季节性流感患者的(1481±348)pg/mL显著下降(F=5.730,P＜0.01);Th17淋巴细胞比例与病毒清除时间呈负相关(r=-0.38,P=0.02).结论 甲型H1N1流感患者Th17淋巴细胞比例显著降低,且与TGF-β水平密切相关,其降低可能导致机体延长排毒时间.     

白细胞介素17A对柯萨奇B3病毒性心肌炎小鼠病毒复制的影响及其机制

目的:研究白细胞介素17A(IL-17A)对柯萨奇B3(CVB3)病毒性心肌炎(VMC)小鼠病毒复制的影响及其可能的机制。方法:雄性Balb/c小鼠野生型(WT)和IL-17A基因敲除型(IL-17A-/-)分别感染CVB3建立VMC模型(WT-VMC组和IL-17A-/--VMC组),同时雄性Balb/c WT小鼠腹腔内注射PBS建立对照组(WT-PBS组)。14d后分别留取小鼠心脏及脾脏,计算心体比(HW/BW)并行HE染色观察心肌病理,心肌空斑法测定CVB3病毒滴度,RT-PCR法测定心肌中CVB3RNA、γ干扰素(IFN-γ)mRNA的表达,流式细胞分析法检测脾Th1细胞亚群的比例(CD4+Th1),Western blot法测定心肌中转录因子T-bet蛋白的表达。结果:与WT-PBS组相比,WT-VMC组小鼠心肌炎症明显,HW/BW及心肌病理积分显著升高,CVB3病毒滴度、CVB3RNA及IFN-γmRNA的表达、脾CD4+Th1细胞比例、心肌T-bet蛋白表达均明显升高(均P0.05)。与WT-VMC组相比,IL-17A-/--VMC组小鼠心肌的炎症程度明显减轻,HW/BW及病理积分减小,CVB3病毒滴度与CVB3RNA的表达明显下降(均P0.05),而IFN-γmRNA的表达、脾CD4+Th1细胞比例、心肌T-bet蛋白的表达均较WTVMC组明显升高(均P0.05)。结论:IL-17A抑制VMC小鼠的抗病毒免疫功能,促进CVB3病毒复制,其机制可能与抑制T-bet表达有关。     

病毒性心肌炎患儿血管细胞黏附分子-1白细胞介素-6的改变及临床意义

目的 了解可溶性血管细胞黏附分子-1(sVCAM-l)、白细胞介素-6(IL-6)在病毒性心肌炎中的改变及意义. 方法 取外周静脉血,采用双抗体夹心ELISA法检测sVCAM-l、IL-6. 结果 病毒性心肌炎sVCAM-l(1376.8±54.76 ng/ml)较对照组(714.85±276.54 ng/ml)明显增高(P<0.01).病毒性心肌炎IL-6(99.52±54.58 pg/ml)较对照组(54.61±32.41 pg/ml)明显增高,两者差异有统计学意义(P<0.01).病毒性心肌炎患儿血清sVCAM-l、IL-6呈正相关,r=0.3210. 结论 sVCAM-l、IL-6在病毒性心肌炎患儿中明显增高,并在病毒性心肌炎发病过程发挥作用.