大鼠脊髓损伤后运动终板内乙酰胆碱酯酶和降钙素基因相关肽的变化

目的观察大鼠不同类型脊髓损伤后降钙素基因相关肽（CGRP）与乙酰胆碱酯酶（AChE）在后肢腓肠肌运动终板内的变化,以探讨不同类型脊髓损伤后CGRP和AChE与运动终板退变的关系。方法60只成年Wistar大鼠随机分为假手术组（A组）、切割型脊髓损伤组（B组）和撞击型脊髓损伤组（C组）,术后1、2、4、10周分别用Karnovsky-Roots直接法染色检测AChE、免疫组化法检测CGRP的变化。结果两损伤组大鼠术后运动终板中CGRP和AChE浓度均下降,但C组10周时有了明显恢复,而B组一直处于较低水平;CGRP的改变早于AChE。结论在大鼠不同类型脊髓损伤后,CGRP和AChE的活性和浓度与运动终板退变的程度不同。     

脊髓重建管对T8损伤大鼠后肢运动终板的调节与维持

目的观察大鼠脊髓损伤后及脊髓重建管诱导脊髓再生修复过程中后肢骨骼肌运动终板形态结构与不同类型肌纤维终板区乙酰胆碱酯酶(AChE)的变化情况。方法43只成年Wistar大鼠随机分为脊髓T₈单纯损伤组（Cx组）、脊髓T₈损伤+脊髓重建管移植修复组（CxTp组）和正常对照组（Co组）,术后2周、4周、3个月、6个月、12个月经灌注固定后取出大鼠双下肢腓肠肌、比目鱼肌和趾长伸肌,分别用氯化金染色（压片法）观察运动终板结构形态和Karnovsky-Roots直接法染色检测AChE的变化。结果Cx组和CxTp组大鼠术后运动终板结构形态与AChE活性均发生改变。Cx组终板自术后3个月起发生明显的退行性改变,AChE活性亦呈线性下降;CxTp组终板结构与形态相对稳定,没有退变迹象,术后3个月起AChE 活性显著高于同时间点Cx组。结论大鼠脊髓损伤后,运动终板发生进行性退变,脊髓重建管移植修复可以阻止终板的退行性变,使其向着利于神经康复的方向发生着AChE的复活与结构形态的可塑性变化。     

大鼠坐骨神经损伤后降钙素基因相关肽在脊髓神经元及运动终板中的变化

目的：观察周围神经损伤后降钙素基因相关肽(Calciton ingen-related peptlde，CGRP)在脊髓神经元及运动终板中的变化，以探讨CGRP与运动终板退行性变的关系。方法：以切断坐骨神经的大鼠为模型，以免疫组化方法结合计算机图像分析技术检测CGRP在脊髓神经元及运动终板中的变化，并以镀银法作同期运动终板退行性变的观察。结果：神经损伤1周后CGRP即在脊髓前角运动神经元中升至最高，并持续4周，8周后恢复正常。在正常胫前肌中可见神经末梢及运动终板均被CGRP抗体清晰标记。神经损伤1周后，CGRP在神经末梢和运动终板中即完全消失。神经切断后镀银法显示运动终板在前2周无明显变化，3周运动终板开始部分染色模糊、浅淡，8周运动终板完全消失。结论：在运动终板退行性变的机制中，CGRP的缺乏可能是一个重要的因素。     

大鼠脊髓损伤后运动功能的恢复及前角运动神经元功能的改变

目的观察大鼠不同方式脊髓损伤后损伤下段脊髓前角运动神经元内降钙素基因相关肽（CGRP）与乙酰胆碱酯酶（AChE）的变化,并对损伤后后肢运动功能的恢复情况进行比较。方法60只成年Wistar大鼠随机分为假手术组、切割型脊髓损伤组和撞击型脊髓损伤组,采用联合均分（ACOS）神经行为学评定观察损伤后大鼠运动功能的恢复,术后1、2、4、10周,用Karnovsky-Roots直接法染色检测L2～L4段脊髓AChE、免疫组化方法检测CGRP的水平。结果术后1～10周内,撞击组大鼠ACOS得分明显高于切割组,两损伤组大鼠术后前角运动神经元CGRP和AChE的含量均下降,但撞击组10周时有了明显恢复,而切割组一直处于较低水平,且CGRP的改变早于AChE。结论在大鼠不同脊髓损伤后,运动功能变化与前角运动神经元的功能状态具有一定联系;CGRP和AChE可能在对脊髓损伤后运动功能的恢复中起一定作用。     

脊髓损伤大鼠远端神经元及骨骼肌的变化

背景：目前针对脊髓损伤病灶的研究较多,而对脊髓损伤后远端神经、肌肉及运动终板三者形态结构实时变化观察和研究的文献很少。目的：观察大鼠脊髓损伤后远端肢体神经、运动终板和骨骼肌随时间推移形态学变化的自然病程。方法：将50只雌性SD大鼠随机分为对照组5只（不做处理）、假手术组10只和脊髓损伤组35只,假手术组行单纯椎板切除术,脊髓损伤组在椎板切除基础上,用横断法制成T10完全脊髓损伤模型,然后在第1,2,4,12,24周分别观察3组大鼠坐骨神经-运动终板-内侧腓肠肌的形态变化。结果与结论：①脊髓损伤组大鼠4周时部分有髓神经纤维髓鞘出现板层分离;24周时崩解髓鞘板层已模糊、碎裂髓鞘增多,薄髓与无髓神经纤维较12周时增多。②脊髓损伤组大鼠运动终板在脊髓损伤12周时明显退变突触结构与较完整突触结构并存;24周时已找不到运动终板。③脊髓损伤组大鼠内侧腓肠肌在脊髓损伤24周时,肌细胞融合,细胞核密集,融合细胞间可见大小不一空隙,结缔组织增生更加明显。结果表明大鼠在完全性横断性脊髓损伤后自然病程中,损伤平面以下周围神经、运动终板、骨骼肌的形态结构均呈规律性改变,损伤后12周时已有显著变化,24周时呈结构毁坏性改变。     

大鼠坐骨神经损伤后降钙素基因相关肽在脊髓神经元及运动终板中的变化

目的:观察周围神经损伤后降钙素基因相关肽(Calcitoningen-relatedpeptide,CGRP)在脊髓神经元及运动终板中的变化,以探讨CGRP与运动终板退行性变的关系。方法:以切断坐骨神经的大鼠为模型,以免疫组化方法结合计算机图像分析技术检测CGRP在脊髓神经元及运动终板中的变化,并以镀银法作同期运动终板退行性变的观察。结果:神经损伤1周后CGRP即在脊髓前角运动神经元中升至最高,并持续4周,8周后恢复正常。在正常胫前肌中可见神经末梢及运动终板均被CGRP抗体清晰标记。神经损伤1周后,CGRP在神经末梢和运动终板中即完全消失。神经切断后镀银法显示运动终板在前2周无明显变化,3周运动终板开始部分染色模糊、浅淡,8周运动终板完全消失。结论:在运动终板退行性变的机制中,CGRP的缺乏可能是一个重要的因素。     

经颅和经脊髓重复磁刺激对脊髓半横断大鼠运动功能的作用

目的观察经颅和经脊髓重复磁刺激对脊髓半横断大鼠运动功能的影响。方法建立T10大鼠脊髓半横断模型,脊髓半横断大鼠于术后4 d分别给予经颅和经脊髓重复磁刺激治疗,刺激强度为最大输出强度的35%,刺激频率5 Hz,每序列5 s,间歇2 min,连续10个序列,每天1次,每周5 d,连续2周。各组大鼠治疗前和治疗后进行BBB评分和水平梯子实验评价运动功能;术后38 d取患侧下肢胫前肌行降钙素基因相关肽免疫组织化学染色。结果经颅磁刺激组大鼠手术17 d后各时间点BBB评分和水平梯子实验步态正确率高于术后3 d和脊髓损伤组(P<0.05);经脊髓磁刺激组大鼠手术10 d后各时间点BBB评分和步态正确率高于术后3 d和脊髓损伤组(P<0.05),术后10 d步态正确率高于经颅磁刺激组(P<0.05)。经颅和经脊髓磁刺激组大鼠胫前肌运动终板降钙素基因相关肽表达显著高于脊髓损伤组(P<0.001)。结论早期经颅和经脊髓磁刺激可促进脊髓半横断大鼠运动功能改善,并改变远端肌肉的可塑性,经脊髓磁刺激可加速脊髓半横断大鼠运动功能恢复。     

注射硫酸软骨素酶对大鼠脊髓损伤后腓肠肌乙酰胆碱酯酶的变化及运动功能的影响

目的探讨注射硫酸软骨素酶ABC对成年大鼠脊髓损伤后不同时期后肢运动功能的恢复及腓肠肌运动终板内乙酰胆碱酯酶的影响。方法 10周龄Wistar雄性大鼠40只,采用脊髓半横断法制作模型,健侧作为对照组(A组),患侧随机分为单纯脊髓损伤组(B组)及术后注射硫酸软骨素酶ABC组(C组)。术后采用BBB评分法进行行为学观察,分别于损伤后3 d、7 d、14 d和28d各选取5只大鼠,酶化学染色法检测腓肠肌中乙酰胆碱酯酶(AChE)的表达。结果 C组在术后14~28 d BBB评分高于B组(P<0.05);B组和C组与A组相比,腓肠肌AChE活性均降低,但C组于术后14~28 d AchE活性高于B组(P<0.05)。结论大鼠脊髓损伤后注射硫酸软骨素酶可以提高AChE的活性,并可提高大鼠患肢的运动功能。     

臂丛端侧吻合术后供体神经元和运动终板中CGRP的变化

目的研究臂丛端侧吻合术后供体神经元和运动终板中CGRP的变化。方法Wister大白鼠60只,随机分为3组,每组20只,每只右侧神经外膜开窗(0.2 cm×0.2 cm),将臂丛后束损伤后的桡神经远断端端侧吻合于外膜开窗的内侧束远端0.5 cm部位,左侧不做吻合。分别于术后4、8、12周在麻醉下解剖取C4～T2脊髓节段,并将脊髓节段于正中矢状面分开,及肱三头肌,分别检测CGRP蛋白及mRNA的表达。结果神经端侧吻合后,随时间的延长,脊髓及运动终板中CGRP的表达均显著升高(P0.01),而不做吻合的对照组中,脊髓CGRP表达维持较低水平,且呈下降趋势,但差异性不显著,运动终板中无CGRP的表达。结论提高供体神经元及运动终板中CGRP的表达可能是端侧吻合促进臂丛损伤神经再生,保护靶肌肉及其运动终板的作用机制之一。     

臂丛端侧吻合术后供体神经元和运动终板中CGRP的变化

目的研究臂丛端侧吻合术后供体神经元和运动终板中CGRP的变化。方法Wister大白鼠60只,随机分为3组,每组20只,每只右侧神经外膜开窗（0.2 cm&#215;0.2 cm）,将臂丛后束损伤后的桡神经远断端端侧吻合于外膜开窗的内侧束远端0.5 cm部位,左侧不做吻合。分别于术后4、8、12周在麻醉下解剖取C4～T2脊髓节段,并将脊髓节段于正中矢状面分开,及肱三头肌,分别检测CGRP蛋白及mRNA的表达。结果神经端侧吻合后,随时间的延长,脊髓及运动终板中CGRP的表达均显著升高（P〈0.01）,而不做吻合的对照组中,脊髓CGRP表达维持较低水平,且呈下降趋势,但差异性不显著,运动终板中无CGRP的表达。结论提高供体神经元及运动终板中CGRP的表达可能是端侧吻合促进臂丛损伤神经再生,保护靶肌肉及其运动终板的作用机制之一。     

不同功率氦氖激光照射与大鼠脊髓降钙素基因相关肽表达的关系

目的 :研究不同功率氦氖(He -Ne)激光照射与大鼠坐骨神经损伤后脊髓中降钙素基因相关肽(CGRP)表达的关系。方法 :168只雄性SD大鼠制成坐骨神经损伤模型 ,应用5、10和15mW的氦氖激光照射神经损伤部位 ,免疫组化方法观察脊髓内CGRP表达的变化。结果 :神经损伤后1d脊髓内CGRP表达即增加 ,1周内各激光照射组和对照组无明显差异。第2周和第4周时 ,各激光照射组脊髓内CGRP表达均高于对照组 ,激光照射组之间比较无明显差异。阳性表达主要存在于脊髓灰质内前角运动神经元和背根感觉纤维 ;8周时各组CGRP表达仍保持较高水平 ,各组之间已无明显差异。结论 :He -Ne激光照射可引起损伤神经后大鼠脊髓中CGRP表达的变化 ,有促进完成神经再生的作用。     

骨髓间充质干细胞移植脊髓全横断模型大鼠运动和体感诱发电位的评价

背景:临床常用皮质运动诱发电位和皮质体感诱发电位来分别评价脊髓损伤后运动传导路和感觉传导路的损伤或修复情况。目的:以脊髓诱导电位监测骨髓间充质干细胞移植后急性脊髓完全性损伤大鼠下肢神经功能的变化。方法:选取健康Wistar大鼠50只,分成5组,即生理盐水组、骨髓间充质干细胞移植组、脑源性神经营养因子修饰组、神经营养素3+骨髓间充质干细胞移植组和假手术组。除假手术组外,其余各组均制作Allen’s脊髓完全性损伤动物模型,造模后各组均行相应治疗。治疗后4,8和12周行大鼠后肢运动功能评分,并于造模后24h,3,7,14d行运动和体感诱发电位检测。结果与结论:运动诱发电位检测结果提示,各治疗组的运动功能均有不同程度的恢复,与生理盐水组间差异均有显著性意义(P<0.05),大鼠后肢BBB评分也证实了各治疗组后肢运动功能明显优于生理盐水组(P<0.05)。提示经脑源性神经营养因子修饰的骨髓间充质干细胞可移植到脊髓损伤处,可改善大鼠的后肢运动,神经营养素3蛋白有可能提高骨髓间充质干细胞在体内的生存率,促进受损脊髓的轴突再生。     

脊髓全横断大鼠模型的构建

背景:脊髓全横断模型在造模时常难以保证神经纤维的完全离断。目的:构建大鼠脊髓全横断损伤模型。方法:将大鼠随机分为模型组和假手术组。模型组构建脊髓T10节段全横断模型;假手术组动物仅打开椎管与硬脊膜而后缝合,但不损伤脊髓。建模后1,3,5,7d分别进行BBB评分以评估后肢运动功能,检测其体感诱发电位和运动诱发电位来评估神经传导通路的完整性,并行形态学观察来评估脊髓肉眼观病理形态。结果与结论:与假手术组相比,模型组大鼠在建模后1,3,5,7d时,其BBB评分降低(P<0.01),未检测出体感和运动诱发电位。形态学观察结果显示模型组大鼠脊髓完全横断,而假手术组脊髓形态完整。结果提示实验成功构建了大鼠脊髓全横断模型。     

Spinal cord injury from electrocautery: observations in a porcine model using electromyography and motor evoked potentials

We have previously investigated electromyographic (EMG) and transcranial motor evoked potential (MEP) abnormalities after mechanical spinal cord injury. We now report thermally generated porcine spinal cord injury, characterized by spinal cord generated hindlimb EMG injury activity and spinal cord motor conduction block (MEP loss). Electrocautery (EC) was delivered to thoracic level dural root sleeves within 6–8 mm of the spinal cord (n = 6). Temperature recordings were made near the spinal cord. EMG and MEP were recorded by multiple gluteobiceps intramuscular electrodes before, during, and after EC. Duration of EC was titrated to an end-point of spinal motor conduction block (MEP loss). In 5/6 roots, ipsilateral EMG injury activity was induced by EC. In 4/5 roots, EMG injury activity was identified before MEP loss. In all roots, a minimum of 20 s EC and a temperature maximum of at least 57 °C at the dural root sleeve were required to induce MEP loss. Unexpectedly, conduction block was preceded by an enhanced MEP in 4/6 trials. EMG injury activity, preceding MEP loss, can be seen during near spinal cord EC. Depolarization and facilitation of lumbar motor neurons by thermally excited descending spinal tracts likely explains both hindlimb EMG and an enhanced MEP signal (seen before conduction block) respectively. A thermal mechanism may play a role in some unexplained MEP losses during intraoperative monitoring. EMG recordings might help to detect abnormal discharges and forewarn the monitorist during both mechanical and thermal injury to the spinal cord.     

运动训练对大鼠损伤远端脊髓超微结构及脑源性神经营养因子表达的影响

目的:明确运动训练对大鼠脊髓损伤(SCI)后远端脊髓超微结构及脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响。方法:成年雌性SD大鼠18只,采用改良Allen撞击法制作T9不完全性SCI模型。术后随机分为损伤后1周组、对照组(未行训练)及训练组(术后1周开始训练,共4周)。分别在损伤前、损伤后第1、2、3、4及5周时采用BBB评分评定运动功能,训练结束后取腰膨大段脊髓进行电镜观察超微结构,免疫组化检测BDNF蛋白表达情况。结果:①BBB评分:对照组与训练组BBB评分均较损伤后1周、2周明显提高,但训练组较对照组增加更为显著(P<0.05)。②超微结构:损伤后1周组,髓鞘排列规律整齐、轴索较均匀一致、核仁清晰;对照组髓鞘松散、轴索与髓鞘间出现空隙、轴突变性及空泡;训练组髓鞘完整、较薄、轴索均匀、髓鞘下及神经纤维周围基质中少见空泡。③BDNF免疫组化:BDNF免疫反应阳性产物多分布于脊髓前角,中央管周围也有出现,背角少见;训练组BDNF阳性染色颗粒增多,平均光密度值较损伤后1周组及对照组均显著增加(P<0.05)。结论:运动训练能减轻损伤远端脊髓继发性损害,并促进BDNF蛋白的表达。     

胸段完全性脊髓损伤患者的三维步态分析

目的通过对胸段完全性脊髓损伤(TCSCI)患者配戴交互式步行矫形器(RGO)的三维步态分析,比较分析脊髓损伤(SCI)平面与步行能力之间的关系,探讨重建SCI患者步行能力的量化指标。方法选择在本中心住院且配戴RGO进行步行训练3个月以上的TCSCI患者10例,采用Vicon三维步态分析系统进行步态检测与分析。应用Spearman秩和相关系数对TCSCI患者的不同SCI平面与其步态的运动学和时空参数等的相关性进行统计学检验。结果步频和跨步长分别为(37.4±2.15) 步/min和(91.6±9.09) cm;髋关节摆动角度及髋关节伸展和屈曲时相的角速度分别为(42.57 °±5.43 °)、(20.88 °±2.18 °)/s和(124.75 °±9.31 °)/s。步速(r=0.80,P<0.01)、跨步长(r=0.78,P<0.01)、助行架的压力峰值(r=0.82,P<0.01)、髋关节摆动角度(r=0.77,P<0.01)、助行架的压力均值(r=-0.67,P<0.05)和髋关节伸展的角速度(r=0.75,P<0.05)与SCI平面之间均有显著的相关性。结论TCSCI患者双上肢过度负载和髋关节摆动幅度受限是其步行能力受限的主要原因;降低过度负载的康复训练方法有助于改善重建的步行功能。     

大鼠急性脊髓完全性损伤后血脊膜屏障通透性的变化

目的:探讨大鼠急性脊髓完全性损伤后血脊膜屏障(blood-spinal cord barrier,BSCB)通透性的变化。方法:本研究选用wistar大鼠48只,制作Allen氏脊髓打击模型(打击当量300gcf),随机分为对照组(n=6)和脊髓损伤组(n=42),后者又根据伤后不同时间点分为2、8、24、48、72h以及1、2周组,每组6只,再分为A组和B组,每组各3只。A组从大鼠股静脉注射2%的伊文思蓝(Evens blue,EB),通过荧光显微镜下观察;B组用干湿重法测定脊髓水肿变化情况。结果:随着脊髓损伤时间的延长,脊髓组织EB蓝染的范围逐渐增大,荧光光斑数量增加,强度增强,24～48h达高峰,与脊髓组织内水肿时间一致,72h后水肿逐渐减轻,其内开始出现坏死灶,1～2周可见明显大小不等的囊腔形成,未见EB蓝染。结论:脊髓损伤后BSCB的通透性增高,并在24～48h达高峰,72h后逐渐下降,1周后BSCB通透性明显减小。     

Enhanced stretch reflex excitability of the soleus muscle in persons with incomplete rather than complete chronic spinal cord injury

OBJECTIVE: To compare excitabilities of spinal stretch reflex among clinically complete spinal cord injury (SCI), incomplete SCI, elderly healthy, and young healthy subjects. DESIGN: Case comparison. SETTING: Research laboratory. PARTICIPANTS: Volunteer sample of 12 complete SCI, 10 incomplete SCI, 10 elderly, and 11 young subjects. INTERVENTION: Mechanically induced stretch reflex, H-reflex, and M response in electromyographic activity of the soleus muscle were recorded in all subjects. MAIN OUTCOME MEASURES: Absolute peak-to-peak stretch reflex amplitude and maximum H-reflex (Hmax), and those values relative to the maximum M response (Mmax) amplitude (relative peak-to-peak stretch reflex amplitude) and H/M ratio. RESULTS: Both the absolute and relative peak-to-peak stretch reflex amplitudes showed the greatest values in incomplete SCI among the 4 groups. Although absolute and relative peak-to-peak stretch reflex amplitudes of the incomplete SCI group were greater than those of the complete SCI group, the H/M ratios of both groups were comparable, and were greater than those of the younger and elderly groups. CONCLUSIONS: The results suggest that the greater absolute and relative peak-to-peak stretch reflex amplitudes of incomplete SCI were mostly due to the greater maximum motor potential (Mmax), while the elevated spinal motoneuronal excitability shown by the increased H/M ratio was maintained in the chronic stage after both complete and incomplete SCIs.     

脊髓全横断大鼠模型的构建

背景：脊髓全横断模型在造模时常难以保证神经纤维的完全离断。目的：构建大鼠脊髓全横断损伤模型。方法：将大鼠随机分为模型组和假手术组。模型组构建脊髓T10节段全横断模型;假手术组动物仅打开椎管与硬脊膜而后缝合,但不损伤脊髓。建模后1,3,5,7d分别进行BBB评分以评估后肢运动功能,检测其体感诱发电位和运动诱发电位来评估神经传导通路的完整性,并行形态学观察来评估脊髓肉眼观病理形态。结果与结论：与假手术组相比,模型组大鼠在建模后1,3,5,7d时,其BBB评分降低（P〈0.01）,未检测出体感和运动诱发电位。形态学观察结果显示模型组大鼠脊髓完全横断,而假手术组脊髓形态完整。结果提示实验成功构建了大鼠脊髓全横断模型。