L-4F抑制低密度脂蛋白对热休克蛋白90的影响

目的探讨L-4F(一载脂蛋白A-I类似物)能否抑制低密度脂蛋白(lowdensitylipoprotein,LDL)对热休克蛋白90(heatshockprotein90,hsp90)与内皮一氧化氮合酶(endothelialnitricoxidesynthase,eNOS)结合的影响和LDL诱导的脂质氢过氧化物产生的增加。方法采用牛主动脉内皮细胞(bovineaorticendothelialcells,BAEC)进行细胞培养,用LDL6.2mmol/L和/或L-4F10μg/ml处理细胞24小时,然后,①分对照、L-4F、A23187(钙离子导体)、L-4F+A23187、LDL、LDL+L-4F、LDL+A23187、LDL+A23187+L-4F8组,用免疫沉淀法测定磷酸化内皮一氧化氮合酶(phosphorylationofeNOS,P-eNOS)、eNOS和hsp90的表达和结合情况;②用Auerbach法测定有BAEC和无BAEC情况下LDL诱导的脂质氢过氧化物的产生情况。结果①LDL减少A23187刺激状态下的BAEC的hsp90与eNOS的结合,而经L-4F预处理的LDL对hsp90与eNOS结合无抑制作用;②在无BAEC情况下,L-4F稍微抑制LDL诱导的脂质氢过氧化物的产生,然而在BAEC培养情况下,L-4F可以明显抑制LDL诱导的脂质氢过氧化物的产生。结论L-4F可以阻止LDL对hsp90与eNOS结合的抑制,并可能与L-4F抑制脂质氢过氧化物的产生有关,这可能是L-4F保护内皮细胞功能、抑制动脉粥样硬化形成的一个重要机制。     

L-4F和SC-4F在细胞培养中预防低密度脂蛋白诱导内皮功能失调的比较

目的探讨L4F(一个载脂蛋白A I类似物)结构特殊性在抑制动脉粥样硬化形成中的重要性,比较L4F和一个氨基酸成分与其完全相同但序列不同的4F—Scramble4F(SC4F)在预防低密度脂蛋白(LDL)诱导的内皮功能失调中的作用。方法采用牛主动脉内皮细胞(BAEC)作细胞培养,用LDL6.2mmol/L和L4F10μg/ml或SC4F10μg/ml处理细胞24h,然后用超氧化物歧化酶可抑制的铁化细胞色素C还原法测定BAEC的氧自由基(superoxide,O·-2)产量;用氯化钒Ⅲ臭氧化学发光法测定BAEC的一氧化氮的产量。结果L4F和SC4F本身不影响BAECO·-2的产生;LDL可明显诱导BAECO·-2产生增加,而L4F可以抑制LDL导致的BAECO·-2产生,但SC4F对LDL导致的BAECO·-2的产生无抑制作用;LDL可明显抑制一氧化氮的产生,经L4F预处理的LDL对一氧化氮产生的抑制作用消失,但SC4F预处理的LDL仍能抑制一氧化氮的产生。结论L4F可以预防LDL诱导的内皮功能失调,维持正常的一氧化氮和O·-2平衡,而SC4F无此作用,表明L4F在预防动脉粥样硬化方面有氨基酸序列的结构特殊性,为将来开发新的预防和治疗动脉粥样硬化药物提供线索。     

对内皮细胞产生超氧阴离子作用的研究

目的:研究四氢生物喋呤(BH4)、L-精氨酸、局部血管紧张素Ⅱ生成对内皮细胞产生超氧阴离子(O2-)的作用以探讨它们对内皮功能的影响.方法:将BH4、L-精氨酸、血管紧张素Ⅰ和厄贝沙坦加人体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs),根据不同干预浓度及干预因素组合,实验共分14组,干预8小时后取出上清液分别测定O2-(Fenton反应原理)、一氧化氮(NO,硝酸还原酶法)和血管紧张素Ⅱ(放射免疫分析法)的浓度.结果:与对照组相比,不同浓度的BH4和L-精氨酸组的血管紧张素Ⅱ水平均显著减低,NO水平显著升高(除外L-精氨酸10 μM组);BH420 μM组O2-水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05～0.01).与对照组相比,血管紧张素I加不同浓度的BH4和厄贝沙坦各组NO水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05～0.01).与对照组相比,血管紧张素Ⅰ组O2-的产生增加,差异均有统计学意义(P<0.05～0.01);与血管紧张素Ⅰ组相比,血管紧张素Ⅰ加不同浓度的BH4和厄贝沙坦各组的O2-水平均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05～0.01).结论:BH4在防止一氧化氮合成酶解耦联中可能起主要作用,BH4和L-精氨酸均能促进NO的产生并且抑制血管紧张素Ⅱ的生成.BH4及BH4和厄贝沙坦合用可以抑制局部血管紧张素Ⅱ生成引起的O2-产生增加,并促进NO的产生.     

L-4F明显改善脂蛋白氧化张力下的血管舒张功能

目的　　探讨L 4F(一种载脂蛋白A 1类似物 )能否改善脂蛋白氧化张力下内皮依赖的血管舒张功能。方法　实验分三部分 ,均采用小鼠的颈内动脉作乙酰胆碱诱导下的内皮依赖血管舒张功能试验。第一部分采用C5 7BL6小鼠 ,分 2组 :对照组用PBS液 1L/L、L 4F组用L 4F 10mg/L预处理血管 30min。第二部分采用C5 7BL6小鼠 ,分 3组 ,对照组用RPMI 16 4 0培养液 10 0ml/L、低密度脂蛋白 (lowdensitylipoprotein ,LDL)组用LDL 10 0mg/L、LDL L 4F组用LDL 10 0mg/L L 4F 1mg/L预处理血管 30min。第三部分分 3组 ,对照组采用C5 7BL6小鼠 ,不作处理 ,高胆固醇血症组和L 4F组均采用低密度脂蛋白受体缺乏小鼠 ,用高脂、高胆固醇喂养 4周 ,其中高胆固醇血症组同时用生理盐水 10ml·kg-1·d-1腹膜腔内注射 (L 4F组用L 4F 1mg·kg-1·d-1)。结果　 (1)L 4F本身对内皮依赖的血管舒张功能没有影响 ;(2 )L 4F可以部分改善低密度脂蛋白对内皮依赖的血管舒张功能的抑制 ;(3)L 4F可以明显改善高胆固醇血症对内皮依赖的血管舒张功能的损害 ,达到与对照组的血管舒张功能无区别。结论　L 4F可明显改善脂蛋白氧化张力下内皮依赖的血管舒张功能 ,可能为将来治疗动脉粥样硬化等血管性疾病提供一种新颖的治疗方法     

L-4F对载脂蛋白E缺失小鼠高密度脂蛋白抗炎抗氧化功能的影响

目的观察载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)模拟肽L-4F对高脂喂养apoE缺失小鼠HDL抗炎、抗氧化功能的影响,探讨L-4F的抗动脉粥样硬化(AS)机制。方法 8周龄C57BL/6J小鼠18只,普通饲料喂养作为对照组;8周龄apoE缺失小鼠30只,高脂饲料喂养,喂养4周后,随机处死2种小鼠各6只,检测相应指标作为研究基线(第4周)。其余apoE缺失小鼠随机分为AS组和L-4F组[L-4F1mg/(kg.d)腹腔注射)],每组12只。实验第8、16周末取标本测定血脂水平、血清对氧磷酯酶1(PON1)、髓过氧化物酶(MPO)活性、高敏C反应蛋白(hs-CRP)含量及HDL炎症指数(HII),观察主动脉斑块面积。结果实验16周后,与AS组比较,L-4F组血脂水平无明显变化,血清PON1活性明显升高,MPO活性、hs-CRP、HII显著下降,主动脉斑块/血管内膜表面积比值明显减小(P<0.05,P<0.01)。结论 L-4F可通过升高PON1活性、降低MPO活性,抑制炎性反应、降低HII等,改善HDL抗炎抗氧化功能,从而减少主动脉内中膜厚度和斑块面积,发挥抗AS作用。     

17β-雌二醇对氧化型低密度脂蛋白由钙介导细胞骨架损伤的抑制作用

目的　通过观察 1 7β 雌二醇 (1 7β E2 )与氧化低密度脂蛋白 (OX LDL)作用于血管内皮细胞后细胞内微丝肌动蛋白的变化以及同细胞内钙离子变化间的关系 ,以探讨雌激素的血管保护作用机制。方法　采用ECV 30 4脐静脉内皮细胞株体外培养 ,分为空白对照组 ,OX LDL(2 0 0 μg/ml)组 ,4× 1 0 - 7mol/LE2 作用组 ,E2 保护组 ,采用激光扫描共聚焦显微镜分别观察OX LDL作用后 1 2h时的胞内钙离子的变化及OX LDL作用 2 4h时的细胞骨架微丝的改变。结果　OX LDL作用 1 2h后细胞内钙离子浓度明显升高 ,而细胞骨架微丝也在 2 4h后发生明显的破坏。雌激素预处理后可明显抑制OX LDL作用导致后细胞内钙离子浓度的升高 ,并且明显地防止细胞骨架微丝损伤的发生。结论　 1 7β E2 可能通过抑制OX LDL导致的细胞内钙离子升高从而防止细胞骨架微丝损伤的发生 ,这可能是雌激素产生血管保护作用的机制之一。     

糖皮质激素对慢性阻塞性肺疾病急性发作期患者肺功能及血清ApoA-Ⅰ 、ApoB浓度有改善作用

目的:探讨糖皮质激素在慢性阻塞性肺疾病急性发作期(AECOPD)患者治疗中的应用价值。方法:选取2017年2月-2019年6月在宣城市人民医院接受治疗的110例AECOPD患者,采用随机数字表法分为试验组和对照组,各55例,均给予止咳、祛痰、吸氧、抗感染等常规治疗,试验组在此基础上再给予吸入布地奈德治疗,疗程4周;比较2组治疗前、后的第1秒用力呼气容积占预计值的百分比(FEV1%pred)、用力肺活量(FVC)、动脉血Pa O2、动脉血Pa CO2、p H值和血清载脂蛋白(Apo) A-Ⅰ、载脂蛋白B(Apo B)的变化及临床疗效。结果:治疗前2组FEV1%pred、FEV1/FVC、Pa O2、Pa CO2、p H值和血清Apo A-Ⅰ、Apo B水平差异无统计学意义(P均 0. 05);治疗后,试验组患者FEV1%pred、FEV1/FVC、Pa O2、p H值和血清Apo A-Ⅰ浓度高于对照组(P均0. 05),Pa CO2测定值及血清Apo B浓度低于对照组(P均0. 05);治疗4周后,试验组患者的临床疗效优于对照组(P 0. 05)。结论:糖皮质激素吸入治疗能有效改善AECOPD患者肺功能,调节血清Apo A-Ⅰ、Apo B水平,从而提高临床疗效。     

血管紧张素-(1-7)在减轻兔腹主动脉球囊损伤后血管壁胶原合成中的作用

目的 探讨血管紧张素(ANG)-(1-7)对兔腹主动脉球囊损伤后血管壁胶原合成的影响及转化生长因子(TGF)β/Smad通路在其中的作用.方法 将32只健康新西兰白兔随机分为4组.假手术组不予任何处理,模型组、ANG-(1-7)组和ANG-(1-7)+A-779组均行腹主动脉球囊扩张术,术后分别通过微泵持续静脉给予生理盐水(2.5 μl/h)、ANG-(1-7)(576 μg·kg~(-1)·d~(-1)及ANG-(1-7)+A-779(576 μg·kg~(-1·d~(-1)4周.于术前、术后4周采血,用酶联免疫吸附测定方法测定血浆中ANG Ⅱ的水平.术后4周行腹主动脉造影及苏木精-伊红染色,计算血管腔的内径及新生内膜面积和管腔狭窄率等.以逆转录聚合酶链反应及免疫组织化学法测定血管壁中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的含量和表达部位,同时以Western blot方法测定血管组织中TGF-β_1、磷酸化Smad2的表达水平.结果 术后4周,与模型组相比,ANG-(1-7)组和ANG-(1-7)+A-779组管腔内径较大[(4.11 ±0.10)mm和(3.34±0.1) mm比(2.88 ±0.08)mm,P均<0.05],新生内膜面积[(0.27±0.09)mm~2和(0.38±0.01)mm~2比(0.41±0.02)mm~2,P均<0.05],内膜厚度[(208 ±17)μm和(407 ±25)μm比(448 ±15)μm,P均<0.05]和管腔狭窄率[(28.1 ±2.7)%和(36.8 ±2.2)%比(40.1 ±2.7)%,P均<0.05]均较小,ANG-(1-7)+A-779组与ANG-(1-7)组间差异也有统计学意义(P<0.05).与假手术组比较,术后4周模型组、ANG-(1-7)组和ANG-(1-7)+A-779组血管组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白,TGF-β_1和磷酸化Smad2的表达水平均较高(P<0.01或P<0.05),ANG-(1-7)组Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白,TGF-β_1和磷酸化Smad2的表达均低于模型组(P均<0.05),ANG-(1-7)+A-779组与模型组间Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白,TGF-β_1和磷酸化Smad2的表达差异无统计学意义.术后模型组和ANG-(1-7)组血浆中ANG Ⅱ水平均较术前升高(P<0.05),但两组差异无统计学意义.结论 ANG-(1-7)可明显减轻兔腹主动脉球囊损伤后的再狭窄及血管壁胶原合成,这可能与调节组织中TGF-β_1的表达,间接抑制Smads途径的激活有关.     

shRNA沉默Kir6.2基因表达载体的构建及其对HepG2细胞增殖和侵袭的影响

目的 构建shRNA体内表达载体pGenesil-3-shRNA,研究抑制Kir6.2基因表达对HepG2细胞增殖和侵袭的影响. 方法 以Kir6.2基因为目的 基因,以产生shRNA质粒载体pGenesil-3为表达模板,细胞内转录合成2条shRNA.重组质粒经BamH Ⅰ和Hind Ⅲ酶切鉴定和测序后,使用Lipofectamine 2000转染HepG2细胞.实验分为SK组(未转染)、SK-HK组(阴性对照),SK-K1(转染干扰序列1)组和SK-K2(转染干扰序列2)组.G418筛选出荧光单克隆进行培养.Westernblot检测Kir6.2蛋白在各组细胞中的表达.MTT法和Transwell系统分别检测各组细胞的增殖和侵袭能力. 结果 经酶切、测序鉴定,重组质粒符合设计要求.Western blot检测结果显示SK组,SK-HK组、SK-K1组和SK-K2组Kir6.2蛋白质相对表达量分别为0.9349±0.0443,0.9098±0.0195,0.2869±0.0295,0.3256±0.0341;和对照组相比,实验组Kir6.2蛋白减少.MTT法检测SK组、SK-HK组、SK-K1组、SK-K2组细胞的增殖分数分别为0.7523±0.0681,0.7351±0.0589,0.2494±0.0485,0.2261±0.0298,F=0.2401,P=0.000.Transwell实验结果显示,SK组、SK-HK组,SK-K1组、SK-K2组细胞的穿膜数分别为47.0±7.1,40.7±8.0,14.3±5.1,15.0±3.7,F=-30.74,P=0.000.和对照组相比,实验组HepG2细胞增殖和侵袭能力均明显降低.结论 抑制HepG2细胞Kir6.2基因的表达可降低HepG2细胞的增殖和侵袭能力.     

一氧化氮参与了缺血预处理后5′-核苷酸酶的延迟升高

目的 :观察在缺血预处理期间抑制一氧化氮合酶对 2 4h后 5′-核苷酸酶活性的影响和对缺血预处理第二保护窗的影响。方法 :阻断兔冠脉 5 m in,再灌注 10 min,重复 4次 ,造成缺血预处理。在缺血预处理期间静脉注射一氧化氮合酶抑制剂 NG-硝基 - L-精氨酸甲酯 （L- NAME） ,缺血预处理后 2 4h,提取心肌标本测量 5′-核苷酸酶活性 ,或阻断冠脉 30 m in再灌注 12 0 min,测量心肌梗死面积。结果 :缺血预处理 2 4h后 ,心肌细胞膜和胞浆 5′-核苷酸酶活性均较假手术对照组明显升高。静脉注射 L- NAME阻断了缺血预处理所致的细胞膜和胞浆 5′-核苷酸酶活性的升高。缺血预处理组心梗面积明显小于对照组 ,而 L- NAME阻断了这种保护作用。结论 :一氧化氮参与了缺血预处理所致的 5′-核苷酸酶活性的延迟升高。延迟升高的 5′-核苷酸酶活性可能参与了缺血预处理的第二保护窗。     

多指(趾)-肥胖-肾-眼综合征2例并文献复习分析

目的总结Laurance-Moon-Bardet-Biedl综合征(LMBBS)(多指-肥胖-肾-眼综合征)的发病情况及临床表现,并与国外文献报道进行比较。以提高临床医生对该综合征的认识。方法对1987—2003年对汕头大学医学院附属第二医院的2例LMBBS报告,以及国外462例、国内94例文献,进行分析。结果LMBBS有较高的血缘率及阳性家族史,视网膜色素变性、智力低下、肥胖、性发育不良和多指(趾)畸形五大主症,临床表现复杂多变。结论应避免近亲结婚。国外新近提出的诊断标准及调查方法,有利于患者儿童期的早期诊断。     

多指（趾）-肥胖-肾-眼综合征2例并文献复习分析

目的 总结Laurance—Moon—Bardet—Biedl综合征（LMBBS）（多指-肥胖-肾-眼综合征）的发病情况及临床表现，并与国外文献报道进行比较。以提高临床医生对该综合征的认识。方法 对1987—2003年对汕头大学医学院附属第二医院的2例LMBBS报告，以及国外462例、国内94例文献，进行分析。结果 LMBBS有较高的血缘率及阳性家族史，视网膜色素变性、智力低下、肥胖、性发育不良和多指（趾）畸形五大主症，临床表现复杂多变。结论 应避免近亲结婚。国外新近提出的诊断标准及调查方法，有利于患者儿童期的早期诊断。     

Kiss1-/- mice exhibit more variable hypogonadism than Gpr54-/- mice

The G protein-coupled receptor Gpr54 and its ligand metastin (derived from the Kiss1 gene product kisspeptin) are key gatekeepers of sexual maturation. Gpr54 knockout mice demonstrate hypogonadotropic hypogonadism, but until recently, the phenotype of Kiss1 knockout mice was unknown. This report describes the reproductive phenotypes of mice carrying targeted deletions of Kiss1 or Gpr54 on the same genetic background. Both Kiss1 and Gpr54 knockout mice are viable but infertile and have abnormal sexual maturation; the majority of males lack preputial separation, and females have delayed vaginal opening and absence of estrous cycling. Kiss1 and Gpr54 knockout males have significantly smaller testes compared with controls. Gpr54 knockout females have smaller ovaries and uteri than wild-type females. However, Kiss1 knockout females demonstrate two distinct phenotypes: half have markedly reduced gonadal weights similar to those of Gpr54 knockout mice, whereas half exhibit persistent vaginal cornification and have gonadal weights comparable with those of wild-type females. FSH levels in both Kiss1 and Gpr54 knockout males and females are significantly lower than in controls. When injected with mouse metastin 43-52, a Gpr54 agonist, Gpr54 knockout mice fail to increase gonadotropins, whereas Kiss1 knockout mice respond with increased gonadotropin levels. In summary, both Kiss1 and Gpr54 knockout mice have abnormal sexual maturation consistent with hypogonadotropic hypogonadism, although Kiss1 knockout mice appear to be less severely affected than their receptor counterparts. Kiss1 knockout females demonstrate a bimodal phenotypic variability, with some animals having higher gonadal weight, larger vaginal opening, and persistent vaginal cornification.     

Book Reviews - Livres Nouveaux - Buchbesprechungen

Book reviewed in this article:
Boorman, K. E. and Dodd, D. E: An Introduction to Blood Group Serology. J. & A.
Wuhrmann, F. and Wunderly, Ch.: Die Bluteiweißkörper des Menschen. 3. Auff. Benno Schwabe