伸筋易骨矫形手法对兔膝关节软骨细胞代谢及Sox9表达的影响

[目的]探讨伸筋易骨矫形手法对兔膝关节软骨细胞代谢及Sox9表达的影响。[方法]将膝骨关节炎(KOA)模型兔随机分为3组,治疗组采用伸筋易骨矫形手法治疗,对照组采用关节腔注射玻璃酸钠治疗,模型组不做干预,同条件饲养,取材后分离膝骨关节软骨细胞体外培养,镜下观察并通过四甲基偶氮唑盐比色法(MMT)对比3组软骨细胞增殖情况;通过蛋白免疫印迹分析3组软骨细胞Sox9的表达变化。[结果]镜下观察治疗组、对照组关节软骨的增殖速度均快于空白组,其中治疗组增殖速度最快,MMT法检测治疗组软骨细胞增殖能力高于对照组(P0.05),蛋白免疫印迹分析显示治疗组Sox9表达高于对照组(P0.05)。[结论]伸筋易骨矫形手法具有提高软骨细胞增殖速度,增强软骨细胞增殖能力,同时该手法可以提高损伤软骨组织Sox9的表达水平,从而促进软骨细胞的合成代谢。     

伸筋易骨法调控家兔软骨细胞增殖减轻软骨变性的实验研究

[目的]研究伸筋易骨法影响调控甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)促进兔软骨细胞增殖减轻软骨变性的作用。[方法]新西兰大耳白兔编号后随机分为正常组、假手术组、模型组、推拿组、玻璃酸钠组,每组各10只,改良Hulth法制备膝骨性关节炎(KOA)兔模型,推拿组采用伸筋易骨法治疗21 d,玻璃酸钠组采用关节腔玻璃酸钠注射治疗,每周1次,共治疗3周,取材后透射电镜观察细胞器情况,扫描电镜观察软骨组织表面的变性和修复情况,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PTHrP mRNA的表达。[结果]RT-PCR法检测各组软骨组织PTHrP mRNA的表达,假手术组与正常组PTHrP mRNA的表达经统计学比较,无统计学意义(P>0.05),模型组与正常组比较,具有统计学意义(P<0.05),推拿组、玻璃酸钠组与模型组比较,具有统计学意义(P<0.05),推拿组与玻璃酸钠组相比,无统计学意义(P>0.05),推拿组、玻璃酸钠组与正常组相比,具有统计学意义(P<0.05)。扫描电镜检查显示,模型组软骨表面垄沟样明暗带明显紊乱,胶原纤维裸露;推拿组和玻璃酸钠组软骨表面有纤维爬过,提示软骨修复。透射电镜观察显示,模型组软骨细胞形态肥大,粗面内质网形态异常,核膜上多个膜孔,线粒体消失,胶原纤维断裂;推拿组和玻璃酸钠组软骨细胞细胞形态结构基本正常,细胞内可见多个自噬小体。[结论]伸筋易骨法能够调控软骨合成代谢关键蛋白PTHrP的表达,减缓软骨变性,促进软骨修复,减轻KOA症状。     

屈膝点按叩揉法调控L型电压依赖性钙通道影响软骨细胞代谢的机制研究

[目的]通过分析屈膝点按叩揉法调控L型电压依赖性钙通道影响软骨细胞合成代谢,探讨该手法防治膝骨性关节炎(KOA)的分子机制。[方法]50只新西兰大耳白兔随机分成5组,运用Hulth造模法构建KOA兔模型,治疗组采用屈膝点按叩揉法治疗,阳性对照组采用关节腔注射玻璃酸钠注射液治疗,正常组、假手术组及模型组同条件饲养。通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法检测L型电压依赖性钙通道α1亚基及合成代谢相关蛋白的表达。[结果]治疗组、阳性对照组Cav1.2、Cav1.3、Cav1.4、PTHr P、ColⅡ蛋白的表达均高于模型组,差异具有统计学意义(P0.05),治疗组Cav1.2、Cav1.3、Cav1.4、PTHr P、ColⅡ蛋白的表达与阳性对照组相比无统计学差异(P0.05)。[结论]屈膝点按叩揉法通过影响L型电压依赖性钙通道蛋白,增加细胞内钙离子浓度,上调甲状旁腺激素相关蛋白(PTHr P)的表达,进而发挥促软骨细胞合成代谢的作用。     

伸筋易骨矫形手法治疗KOA轻度内翻畸形的临床研究

[目的]分析伸筋易骨矫形手法治疗膝关节骨性关节炎(KOA)轻度内翻畸形的有效性。[方法]将70例KOA轻度内翻畸形患者随机分为两组。观察组采用伸筋易骨矫形手法治疗,对照组采用玻璃酸钠注射液关节腔注射治疗。两组均治疗21 d,分析治疗前后局部胫股力线解剖角(α角),膝关节功能积分,下肢力线偏移距离(L),下肢绝对长度(H),股四头肌、腘绳肌肌张力变化。[结果]两组治疗后膝关节功能、股直肌、腘绳肌肌肉张力均有显著提高(P0.05),观察组优于对照组(P0.05)。观察组α角和L显著减少(P0.05),对照组无明显变化(P0.05)。两组患者H均无明显变化(P0.05)。[结论]伸筋易骨矫形手法是治疗KOA轻度膝内翻畸形的有效方法,能够有效减小膝关节内翻畸形的角度,显著提高膝关节功能。     

伸筋易骨法治疗膝关节骨性关节炎临床观察

[目的]观察伸筋易骨法治疗膝关节骨性关节炎的临床疗效,检测伸筋易骨法对膝关节周围软组织的调节作用,为膝关节骨性关节炎提供一种安全、有效的治疗方法。[方法]将100例膝关节骨关节病患者随机分成2组,每组各50例,治疗组采用以五体辨证为特点的"伸筋易骨法"治疗,对照组予传统推拿手法治疗。[结果]2组患者症状与功能积分比较,伸筋易骨法的疗效明显好于传统推拿(P0.01),治疗前后2组肌肉张力比较,两组均可改善膝关节周围软组织功能(P0.05),但治疗组效果更优(P0.01)。[结论]实验表明传统推拿疗法和伸筋易骨法均对膝关节骨性关节炎有一定疗效,但伸筋易骨法的效果更为明显。     

活血通络药物对膝骨关节炎小鼠凋亡软骨细胞体外干预的影响

目的 体外培养膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)小鼠凋亡软骨细胞模型,对凋亡软骨细胞模型进行形态学观察和鉴定,传代培养第一代凋亡软骨细胞模型.培养成功后,分别以不同浓度的骨痹合剂以及氨糖美辛、生理盐水干预后,进行形态学观察和绘制细胞生长曲线,确定凋亡软骨细胞变化最明显的时间点以及促进凋亡软骨细胞增殖的最佳给药浓度,观察活血通络药物对凋亡软骨细胞的影响.方法 取SPF级小鼠80只,20只用于软骨细胞取材,60只用于含药血清制备.首先取正常小鼠、KOA造模小鼠各10只,处死后取软骨细胞,对原代细胞进行传代培养,培养成功后对小鼠正常软骨细胞和小鼠KOA退变软骨细胞进行形态特征染色观察以及细胞比较鉴定.取SPF小鼠60只,随机分为骨痹合剂组、氨糖美辛组、生理盐水组,每组20只,分别以3种药物灌胃3d后取含药血清保存备用.以第一代软骨细胞,加入5％、10％、20％不同浓度骨痹合剂、氨糖美辛、生理盐水含药血清进行细胞干预,2、4、6、8 d后,同时观察3组血清不同药含药浓度分别对凋亡软骨细胞模型增殖的影响.结果 由甲苯胺蓝染色后发现,正常软骨细胞以及KOA软骨细胞均成功培养及传代.检测后发现,KOA模型分离出的软骨细胞凋亡程度较高.经含药血清干预后发现,骨痹合剂和氨糖美辛均抑制细胞凋亡,促进细胞增殖,对细胞起保护作用.经MTT检测后发现骨痹合剂组中,10％含药血清相对于5％和20％含药血清浓度更加促进细胞增殖,说明10％含药血清浓度相对为最佳浓度,2d的时间点各组增殖变化最为明显.结论 10％的含骨痹合剂血清相较其余组别可更好地抑制小鼠KOA软骨细胞凋亡,促进软骨细胞增殖.     

女贞子提取物干预大鼠膝骨关节炎的实验研究

目的观察女贞子提取物对膝骨关节炎(KOA)大鼠关节疼痛的影响,研究其对KOA大鼠软骨的保护作用。方法32只SD大鼠随机分为正常组、模型组、女贞子灌胃组和女贞子注射组。模型组、女贞子灌胃组和女贞子注射组均采用碘乙酸关节腔注射造模法构建大鼠KOA模型,女贞子灌胃组大鼠进行女贞子提取物灌胃处理,女贞子注射组大鼠予以关节腔内注射女贞子提取物。治疗持续4周,于最终给药后1周测定行为学数据;取各组大鼠膝关节软骨组织,进行番红O染色和Mankin′s评分,免疫组化检测Col2的表达。取大鼠原代软骨细胞,以不同浓度的女贞子提取物进行干预,采用MTT法测定女贞子提取物对软骨细胞增殖的影响,选取最佳浓度。RT-PCR测定女贞子提取物对软骨细胞中OA相关基因表达的调节作用,并进行统计分析。结果疼痛模型数据显示,模型组的压痛阈值与正常组相比显著下降(P<0.01);女贞子注射组与模型组比较有显著提高(P<0.01);女贞子灌胃组与模型组比较有提高(P>0.05)。组织病理学结果显示,模型组的Mankin′s评分高于空白组(P<0.01);女贞子注射组Mankin′s评分较模型组显著下降(P<0.01);女贞子灌胃组与模型组比较有下降(P>0.05)。免疫组化分析显示女贞子注射组和女贞子灌胃组软骨中Col2表达增加。女贞子提取物可促进大鼠原代软骨细胞的增殖,RT-PCR分析结果显示与TNF-α处理组相比,女贞子组显著下调Col10、MMP13的表达,上调Col2和Aggrecan的表达。结论女贞子提取物关节腔注射对软骨细胞的保护效果优于灌胃给药;女贞子提取物对大鼠KOA疼痛模型有干预作用,其机制与抑制软骨细胞肥大和分解代谢有关。     

伸筋易骨法调节兔膝关节周围软组织张力影响软骨形态的研究

[目的] 评价伸筋易骨法对膝关节周围软组织张力及软骨形态的影响,以探讨其对膝关节骨性关节炎（KOA）的治疗作用。[方法] 选择6~8月龄雌性健康新西兰大耳白兔50只,随机分为5组。其中模型组、推拿组、玻璃酸钠组采用Hulth造模法模拟KOA,正常组、假手术组不做干预。造模成功后,推拿组予伸筋易骨法治疗3周,玻璃酸钠组予局部关节内注射每周1次,共3周,模型组不予任何治疗。治疗结束后,测试股直肌、股二头肌张力,并取软骨组织进行HE染色后光镜下进行形态学观察,并进行Markin评分。分析推拿组与其余4组的异同。[结果] 模型组较正常组,股直肌FDD值和S值显著降低（P<0.05）,股二头肌FDD值和S值显著升高（P<0.05）。推拿组和玻璃酸钠组相较于模型组的股直肌FDD值和S值均显著升高（P<0.05））;推拿组和玻璃酸钠组相较于模型组股二头肌的FDD值和S值均显著降低（P<0.05）。推拿组和玻璃酸钠组相较于模型组,Mankin’s评分比较有统计学意义（P<0.05）。[结论] 伸筋易骨法可以显著增加关节周围肌肉的肌力、调节组织张力、改善关节活动功能,对保护膝关节周围软组织功能具有重要意义。     

独活寄生汤含药血清对膝骨性关节炎大鼠软骨细胞代谢，BMP-7及SIRT1表达的影响

目的:观察独活寄生汤含药血清对膝骨性关节炎(KOA)大鼠关节软骨细胞代谢、骨形成蛋白-7(BMP-7)及沉默信息调节因子相关酶1(SIRT1)的影响,为独活寄生汤的临床应用补充理论依据。方法:采用Hulth法建立KOA模型大鼠,模型成功后采用酶原消化法培养KOA软骨细胞;另将40只大鼠分为独活寄生汤低、中、高剂量组(0.85,1.7,3.4 g·kg~(-1))及硫酸氨基葡萄糖组(硫酸氨基葡萄糖胶囊0.3 g·kg~(-1)),灌胃14 d后处死取血清;将培养细胞分为正常组、模型组、独活寄生汤含药血清低、中、高剂量组(对应剂量组大鼠血清培养)及硫酸氨基葡萄糖胶囊组(硫酸氨基葡萄糖组大鼠血清培养);采用结晶紫法检测各组软骨细胞增殖能力;采用荧光原位末端转移酶标记法(TUNEL)法检测各组软骨细胞凋亡情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组软骨细胞中基质金属蛋白酶-13(MMP-13),MMP-3,Ⅱ型胶原蛋白(ColⅡ),聚集蛋白聚糖(Aggrecan),BMP-7及SIRT1 mRNA的表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测各组软骨细胞中MMP-13,MMP-3,ColⅡ,Aggrecan,BMP-7及SIRT1的表达。结果:(1)与正常组软骨细胞比较,模型组细胞增殖能力明显降低,与模型组细胞比较,独活寄生汤含药血清低、中、高剂量组及硫酸氨基葡萄糖组软骨细胞增殖能力提高(P0.01);(2)与正常组软骨细胞比较,模型组细胞凋亡数量明显增加,与模型组软骨细胞比较,独活寄生汤低、中、高剂量组及硫酸氨基葡萄糖组细胞凋亡数量明显降低(P0.01);(3)与正常组软骨细胞比较,模型组细胞MMP-13,MMP-3表达升高,ColⅡ,Aggrecan,BMP-7及SIRT1下降(P0.01);与模型组比较,低剂量组细胞中MMP-13,MMP-3 mRNA及蛋白表达无明显变化;硫酸氨基葡萄糖组及中、高剂量组细胞中MMP-13,MMP-3 mRNA及蛋白表达明显下降,且剂量越高上述蛋白及mRNA表达越低;硫酸氨基葡萄糖组及低、中、高剂量组细胞中ColⅡ,Aggrecan,BMP-7及SIRT1表达升高,且随剂量的增高而升高(P0.01)。结论:独活寄生汤含药血清可通过增加KOA软骨细胞内BMP-7及SIRT1的表达,增加KOA软骨细胞合成代谢、抑制分解代谢,从而起到抑制KOA软骨细胞凋亡,促进软骨细胞再生的作用,进而起到治疗KOA的目的。     

拔伸松动手法对兔膝关节骨性关节炎关节液中自由基代谢的影响

目的研究拔伸松动手法对兔膝关节骨性关节炎(KOA)模型兔关节液中的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化脂质(LPO)、丙二醛(MDA)的影响,探讨拔伸松动法促进兔KOA软骨损伤修复的机制。方法将80只健康成年家兔随机分为实验组、对照组、模型组、空白组,每组20只。除空白组外,其余各组采用Videman T法建立KOA模型。实验组采用拔伸松动手法干预;对照组塞来昔布胶囊经胃灌药干预;模型组和空白组,不做治疗干预。实验完成后,抽取实验兔膝关节液,黄嘌呤酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)含量,ELISA法检测过氧化脂质(LPO)含量。结果实验组关节液中SOD浓度高于对照组和模型组(P<0.05);LPO浓度和MDA浓度均低于对照组和模型组(P<0.05)。结论拔伸松动手法可以升高KOA模型兔关节液中SOD浓度,降低LPO和MDA浓度,增强机体清除氧自由基的能力,促进损伤软骨的修复。     

海桐伸筋透骨汤治疗膝骨性关节炎的临床疗效观察

[目的]评价海桐伸筋透骨汤治疗早、中期膝骨性关节炎的疗效。[方法]118例膝骨性关节炎患者采用随机、平行对照的试验方法,分为对照组和观察组,对照组单纯使用玻璃酸钠注射治疗,观察组在对照组基础上使用海桐伸筋透骨汤热敷治疗,5周为1个疗程。治疗后,观察临床疗效,视觉模拟(VAS)评分变化及Lequesne指数评分变化。[结果]对照组总有效率为74.6%,观察组总有效率为95%,观察组总有效率明显高于对照组(P0.05)。在VAS评分和Lequesne指数评分中休息痛、运动痛、压痛、肿胀、晨僵及行走能力及总积分方面,观察组均明显优于对照组(P0.05)。[结论]海桐伸筋透骨汤治疗早、中期膝骨性关节炎有明显疗效,中西医结合疗法治疗膝骨性关节炎具有明显优势。     

独活寄生汤含药血清对膝骨性关节炎大鼠关节软骨细胞凋亡及GRP78，CHOP，HIRA及ASFla表达的影响

目的:观察独活寄生汤含药血清抗膝骨性关节炎(KOA)大鼠关节软骨细胞凋亡、内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78),CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)及衰老蛋白组蛋白调节因子(HIRA),染色质组装和调节复合因子1a(ASF1a)的影响。方法:采用Hulth法建立KOA模型大鼠,模型成功后采用酶原消化法培养正常软骨细胞与KOA软骨细胞;另将40只大鼠分为独活寄生汤低、中、高剂量组(0.85,1.7,3.4 g·kg~(-1))及阳性药组(硫酸氨基葡萄糖胶囊3 g·kg~(-1)),灌胃14 d后处死取血清;将培养细胞分为空白组、模型组、独活寄生汤含药血清低、中、高剂量组(对应剂量组大鼠血清培养)及阳性药组(阳性药组大鼠血清培养);采用活性检测试剂盒(CCK-8)法检测各组软骨细胞增值率;采用TUNEL法检测各组软骨细胞凋亡情况;蛋白质免疫印迹(Western blot)检测各组软骨细胞中ASF1a,HIRA,GRP78及CHOP蛋白的表达。结果:与空白组软骨细胞比较,模型组细胞增殖抑制率明显升高,与模型组细胞比较,独活寄生汤含药血清低、中、高剂量组及阳性药组软骨细胞增殖抑制率降低(P0.05);与空白组软骨细胞比较,模型组细胞凋亡数量明显增加(P0.05),与模型组软骨细胞比较,独活寄生汤低、中、高剂量组及阳性药组细胞凋亡数量明显降低(P0.05);与空白组软骨细胞比较,模型组细胞中ASF1a,HIRA,GRP78及CHOP蛋白表达明显升高(P0.05),与模型组软骨细胞比较,独活寄生汤低、中、高剂量组及阳性药组细胞中ASF1a,HIRA,GRP78及CHOP蛋白表达降低(P0.05)。结论:独活寄生汤含药血清可通过减少KOA软骨细胞内质网应激相关因子GRP78,CHOP及衰老相关因子ASF1a,HIRA的表达,从而起到抑制KOA软骨细胞衰老、凋亡,促进软骨细胞再生的作用,进而起到治疗KOA的目的。     

整体分层针刀法结合推拿治疗KOA轻度内翻畸形的临床研究

[目的]探究整体分层针刀法结合推拿手法治疗膝关节骨性关节炎(KOA)轻度内翻畸形的联合临床疗效。[方法]将70例KOA轻度内翻畸形患者随机分为两组,观察组采用整体分层针刀法结合推拿治疗,对照组仅采用推拿治疗。对比治疗前后患者的膝关节疼痛视觉模拟评分法(VAS)评分、Lysholm评分、下肢力线偏移距离及胫股力线解剖角来进行疗效评估。[结果]治疗后两组各项指标均得到改善,观察组指标改善情况优于对照组。[结论]整体分层针刀法结合推拿手法治疗KOA轻度内翻畸形具有较好的联合治疗效果,是一种安全、有效、费用低廉的治疗方法。     

兔膝关节骨性关节炎模型的 建立及软骨细胞的分离、培养

[目的] 探讨复制兔膝骨性关节炎(KOA)的实验动物模型及其软骨细胞的分离、培养。[方法] 用改良Hulth造模法复制膝骨性关节炎, 进行X线摄片、透射电镜观察造模后细胞形态的改变, 用双酶解法分离膝骨关节软骨细胞, 末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口末端标记测定法(TUNEL法)观察细胞的凋亡。[结果] 正常组膝关节面光滑平整, 软骨细胞膜完整。造模组膝关节内侧间隙明显变窄, 关节面粗糙有骨赘生成, 软骨细胞胞核固缩, 细胞膜破损。[结论] 改良Hulth造模法复制KOA操作简单、创伤小, 可保持膝关节一定的稳定性, 为KOA可靠的造模方法。机械-酶消化法可获得数量多、纯度高的软骨细胞, 且软骨的存活率高。     

摇法对KOA兔滑膜MMPs分泌功能的作用研究

[目的] 研究推拿摇法对膝骨性关节炎（KOA）兔膝关节滑膜炎症影响及对滑膜基质金属蛋白酶（MMPs）分泌功能的作用。[方法] 将50只新西兰大耳白兔编号后随机分为5组,其中模型组、塞来昔布组、摇法组采用关节腔木瓜蛋白酶注射造模,假模型组关节腔等剂量生理盐水注射,正常组不做干预,同条件、同期饲养,取材后HE染色观察滑膜组织炎性浸润程度;酶联免疫吸附（ELISA）法检测各组滑膜液内基质金属蛋白酶1（MMP1）、基质金属蛋白酶13（MMP13）的表达。[结果] 苏木精-伊红（HE）染色显示,模型组滑膜组织增厚,滑膜细胞形态异常,炎性细胞浸润,血管翳形成;摇法组滑膜轻度增厚,细胞形态基本正常,炎性浸润较模型组明显改善;塞来昔布组滑膜增厚4~5层,衬里细胞扁平,炎症浸润较模型组明显改善。ELISA法检测各组滑膜液中MMP1、MMP13的表达,假模型组与正常组MMP1、MMP13的表达经统计学比较,无统计学意义（P>0.05）,模型组与正常组比较,差异具有统计学意义（P<0.05）,塞来昔布组与模型组比较,差异具有统计学意义（P<0.05）,摇法组与模型组比较,差异具有统计学意义（P<0.05）,塞来昔布组与摇法组相比,无统计学意义（P>0.05）。[结论] 摇法具有缓解滑膜炎症浸润,抑制MMP1、MMP13分泌的作用,摇法可以通过缓解滑膜炎性反应降低KOA软骨基质分解代谢,减轻KOA症状。