细菌型淡豆豉发酵底物及前酵、后酵工艺研究

目的:研究细菌型淡豆豉发酵底物及前酵、后酵工艺。方法:分别以黄豆和黑豆为底物,以枯草芽孢杆菌为发酵菌种,以4种异黄酮成分的含量为指标考察淡豆豉前酵和后酵工艺。结果:以黄豆和黑豆为底物前酵过程都出现大豆苷和染料木苷的含量下降,大豆苷元和染料木素含量上升的结果,后酵样品中除黄豆后酵组大豆苷元的含量继续升高外,其他异黄酮成分的含量均有不同程度的下降;发酵后黄豆组结合型糖苷含量低于黑豆组,苷元含量则高于黑豆组。结论:从结合型糖苷的降解和苷元的转化角度分析,生产细菌型淡豆豉不需要后酵过程,以黄豆为底物优于黑豆。     

大豆加工品大豆黄卷和淡豆豉的质量评价

目的对不同品种大豆(黑豆、青豆、黄豆、褐豆)为原料加工的大豆黄卷和淡豆豉进行含量测定,分析大豆黄卷和淡豆豉的实验室加工品和市售品中异黄酮含量的差异,为大豆黄卷和淡豆豉的制备研究及临床用药提供科学依据。方法以不同品种大豆为原料加工大豆黄卷和淡豆豉,采用紫外分光光度法测定总黄酮含量,使用HPLC法对药材中大豆苷、大豆苷元、染料木素、染料木苷含量进行测定。采用C_(18)色谱柱(250mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-1%醋酸溶液为流动相,进行梯度洗脱,检测波长260 nm,柱温30℃,流速1.0 ml·min~(-1)。结果黄豆加工成的大豆黄卷中结合型糖苷大豆苷和染料木苷总量最大,含量范围为0.1090%～0.1431%,黑豆加工成的淡豆豉中游离型苷元大豆苷元和染料木素总量最大,含量范围为0.0937%～0.1628%。结论黄豆适宜加工成大豆黄卷,黑豆适宜加工淡豆豉,这也是市售品大豆黄卷和淡豆豉质量参差的原因。     

UPLC同时测定淡豆豉中6种异黄酮的含量

目的:建立同时测定淡豆豉中的大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、黄豆苷元、黄豆黄素、染料木素6种异黄酮类成分含量的UPLC方法。方法:采用ACQUITY UPLC~ BEH C_(18)色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.7μm);流动相为0.1%冰乙酸-乙腈,梯度洗脱;流速0.3 mL/min;检测波长254 nm;柱温25℃;进样量10μL。结果:大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、黄豆苷元、黄豆黄素、染料木素分别在0.088~5.280μg/mL(r_1=0.9997)、0.092~5.520μg/mL(r_2=0.9998)、0.152~9.120μg/mL(r_3=0.9998)、0.100~6.000μg/mL(r_4=0.9999)、0.072~4.320μg/mL(r_5=0.9998)、0.048~3.840μg/mL(r_6=0.9995)范围内线性关系良好,精密度、重现性、回收率均符合要求。结论:该方法快速、简便,重复性好,适用于同时测定淡豆豉中大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、黄豆苷元、黄豆黄素、染料木素的含量。     

UPLC法测定中药淡豆豉中3种主要异黄酮苷元的含量

目的：建立同时测定淡豆豉中3种异黄酮苷元（大豆苷元、黄豆黄素、染料木素）的超高效液相色谱（UPLC）分析方法。方法：采用UPLC色谱系统,C18色谱柱（100mm×2．1mm,1．71xm）,乙腈-0．1％甲酸水溶液（24：76）为流动相,样品经80％甲醇提取后,用UPLC—UV进行分析检测,检测波长260nm。结果：淡豆豉中大豆苷元、黄豆黄素、染料木素在5min完全分离并进行含量测定,大豆苷元、黄豆黄素、染料木素在相应的浓度范围内呈现良好线性关系,其平均加样回收率分别为100．5％,99．06％,97．84％。结论：本方法快速、准确,灵敏度高,可用于同时测定淡豆豉中大豆苷元、黄豆黄素和染料木素的含量,为更好地评价淡豆豉药材质量提供新方法。     

HPLC法同时测定炮制前后鸡内金中6种黄酮类成分

目的 建立HPLC法同时测定炮制前后鸡内金中大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、大豆苷元、黄豆黄素、染料木素的含量。方法 该药物的分析采用Spursil AQ C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5μm);流动相乙腈-0.1%甲酸，梯度洗脱；体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长254 nm。结果 6种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 0),平均加样回收率95.44%～104.10%,RSD 2.41%～4.01%。鸡内金生品和炮制品中大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、大豆苷元、黄豆黄素、染料木素的平均含量分别为1.10、0.22、1.33、0.27、0.77、0.62 mg/g和0.94、0.20、1.12、0.77、2.32、1.75 mg/g。结论 该方法稳定可靠，可用于鸡内金生品和炮制品的质量控制。     

淡豆豉UPLC指纹图谱

目的建立淡豆豉UPLC指纹图谱。方法淡豆豉80%甲醇提取液的分析采用ACQUITY UPLCBEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm);流动相0.1%冰乙酸-乙腈,梯度洗脱;体积流量0.3 m L/min;检测波长260 nm;柱温25℃;进样量10μL。通过SPSS1 21.0软件进行聚类分析。结果 11批样品的指纹图谱中有10个共有峰,其中6个为大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、黄豆苷元、黄豆黄素、染料木素,相似度均高于0.900,可分为2类。结论该方法简便快速,可用于淡豆豉的质量控制。     

基于发酵原理的淡豆豉异黄酮分析方法

目的:探究淡豆豉中异黄酮合适的分析评价方法,分析《中国药典》方法(简称药典法)的科学性。方法:从发酵原理的角度,分析淡豆豉异黄酮不同分析方法的差异;应用高效液相色谱法,同时定量分析药典法淡豆豉与对照组淡豆豉发酵过程中3种异黄酮苷元的变化。结果:淡豆豉中大豆苷元、黄豆黄素、染料木素3种苷元的线性、精密度、重复性、稳定性均良好,平均加样回收率分别为99.76%,99.96%,100.22%。与前酵制曲工序结束样品相比,两种方法经过后酵再闷工序后,苷元含量显著增加;与对照组相比,药典法工艺制备淡豆豉样品异黄酮苷元总量有显著优势,以后发酵再闷15 d作为发酵终点,异黄酮苷元总量可达1 212.23μg·g~(-1)。结论:历代以来,淡豆豉发酵制备讲究"发透"。从发酵原理分析,淡豆豉发酵制备过程中异黄酮总量略有下降,异黄酮苷元类化合物含量显著升高。采用HPLC法直接定量分析生物活性较高的异黄酮苷元类成分,该分析方法较为简单,灵敏度、准确度较高,建立合适的标准,可更有效控制淡豆豉的质量。药典法收载工艺发酵制备的淡豆豉,质量较佳。     

淡豆豉药材发酵前后活性成分的变化研究

目的对淡豆豉药材发酵前后的异黄酮苷和苷元成分、总异黄酮、纤溶酶的含量进行测定,并对其含量变化进行比较。方法采用HPLC法测定淡豆豉中大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素的含量,紫外可见分光光度法测定淡豆豉中总异黄酮的含量,纤维蛋白平板法测定淡豆豉纤溶酶活力。结果原料大豆经过发酵后,大豆苷、染料木苷含量减少,大豆苷元、染料木素含量增加,总异黄酮无明显变化,黑大豆中苷元成分略高于黄大豆。发酵过程还产生一种具有溶栓作用的纤溶酶。结论淡豆豉发酵过程为结合型糖苷向游离型苷元转化的过程,同时产生原料大豆中没有纤溶酶活性,不同原料大豆的发酵,其活性成分也有差异。     

优化HPLC法测定淡豆豉中大豆异黄酮的含量

目的:优化淡豆豉中大豆异黄酮的高效液相色谱含量测定方法。方法:采用色谱柱为Agilent Hyper-sil C18(4.0 mm×250 mm 5,μm),流动相为甲醇-0.09%醋酸(48:52),流速1.0 mL.min-1,测定波长为254nm,检测温度为25℃的色谱条件测定。结果:线性范围:大豆苷40.6～203μg(r=0.9998),染料木苷11.15～55.75μg(r=0.9926),大豆苷元12.05～60.25μg(r=0.9933),染料木素5.5～27.5μg(r=0.9946)。测定精密度:大豆苷RSD=1.59%,染料木苷RSD=1.7%,大豆苷元RSD=0.8%,染料木素RSD=1.6%。大豆异黄酮总量24h稳定性RSD=1.49%,重复性RSD=1.06%,加样回收率:大豆苷为(99.24±3.77)%,染料木苷为(99.66±5.82)%,大豆苷元为(99.41±4.33)%,染料木素为(99.06±7.09)%。结论:本法简便、可靠、灵敏,可作为大豆异黄酮的质量控制方法。     

淡豆豉与黑豆提取物抗癌细胞增殖作用及4种异黄酮成分的含量测定

目的:探讨淡豆豉和黑豆提取物对乳腺癌MCF-7细胞增殖的调节作用,并检测提取物中4种异黄酮成分的含量。方法:MTT法观察淡豆豉和黑豆提取物对乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖率的影响,Annexin/PI法流式细胞仪分析检测细胞的早期凋亡,高效液相色谱法检测淡豆豉和黑豆提取物中4种异黄酮成分大豆苷、染料木苷、大豆苷元和染料木素的含量变化。结果:淡豆豉和黑豆提取物对MCF-7细胞的增殖均有抑制作用且诱发癌细胞凋亡,但高浓度淡豆豉提取物的抑制癌细胞增殖作用明显高于黑豆(P0.05)。淡豆豉提取物中大豆苷、大豆苷元和染料木素的含量显著高于黑豆提取物(P0.01),但染料木苷的含量未见明显变化。结论:淡豆豉提取物与黑豆相比具有较强的抑制癌细胞增殖作用,淡豆豉中含量较高的异黄酮成分大豆苷、大豆苷元和染料木素,可能是其较强的抗癌细胞增殖作用的物质基础。     

淡豆豉关键质量指标的确定及标准修订

目的:拟根据淡豆豉的质量问题,选择适合的质量控制指标,采用生药鉴定学、薄层鉴别、含量测定等方法,开展淡豆豉质量标准研究工作,为淡豆豉药材质量标准的提升和完善提供参考。方法:采用传统生药鉴定方法,对淡豆豉及其伪品的性状特征进行比较,找出具有鉴别专属性的性状特征,修订淡豆豉的性状鉴别项;对淡豆豉标准薄层鉴别中的展开剂进行优化,建立专属性强的薄层鉴别方法;根据淡豆豉发酵前后的成分差异,以能体现发酵程度的大豆苷元、染料木素为指标,建立含量测定方法,以Agilent SB C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱为固定相,以乙腈-1%冰醋酸(25∶75)为流动相,流速为1 mL·min~(-1),柱温为40℃,检测波长为260 nm。结果:建立的性状鉴别项,能从种脐特征区分伪品黑芸豆;建立的薄层鉴别方法也能有效地区分伪品;选择的大豆苷元、染料木素作为含量测定指标,可以有效地区分正伪品及未发酵品,考虑到不同发酵工艺的差异造成的含量差异,建议淡豆豉中染料木素、大豆苷元的总量不得少于0.040%。结论:建立的性状鉴别项、薄层鉴别项和含量测定方法能够更好地控制淡豆豉质量,可为2020年版《中华人民共和国药典》关于淡豆豉药材质量标准的修订提供参考。     

淡豆豉中豆豉多糖、大豆异黄酮的超声提取及含量检测

目的:提取中药淡豆豉中大豆异黄酮和豆豉多糖,并分别检测两种活性成分的含量。方法:采用超声提取大豆异黄酮和豆豉多糖;聚酰胺薄膜层析定性、HPLC定量检测大豆异黄酮;硫酸-苯酚法显色,在紫外分光光度计下对豆豉多糖的含量进行检测。结果:实验结果表明,聚酰胺薄膜层析法最佳展开剂系统为甲醇∶醋酸∶水(18∶1∶1)。HPLC最佳流动相:甲醇∶乙酸∶水(12∶1∶10),染料木苷、大豆苷元和染料木素在20 min内分离良好。中药淡豆豉含有染料木苷1076.8μg/g、大豆苷元310.48μg/g、染料木素141.93μg/g、豆豉多糖0.91%。结论:精密度实验和加样回收实验均RSD<3%,证明检测方法及结果准确、可靠。     

UPLC法同时测定黑豆甘草汤中8个指标成分

目的建立UPLC法同时测定黑豆甘草汤中8个指标成分。方法采用0.1 mol·L~(-1)盐酸与丙酮溶液提取样品,运用UPLC技术,使用ACE Excel 2 C_(18)(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,以甲醇(A)-0.1%甲酸水(B)为流动相,梯度洗脱;体积流量为0.3 mL·min~(-1);检测波长为260 nm和530 nm,柱温35℃,进样量为5μL。结果黑豆甘草汤中矢车菊-3-O-葡萄糖苷、大豆苷、黄豆黄苷、甘草苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素、甘草酸单铵盐分别在11.88~380.0μg·mL~(-1)(R~2=0.999 2)、16.88~540.0μg·mL~(-1)(R~2=0.999 5)、12.50~400.0μg·mL~(-1)(R~2=0.999 3)、14.38~460.0μg·mL~(-1)(R~2=0.999 2)、17.50~560.0μg·mL~(-1)(R~2=0.999 6)、15.63~500.0μg·mL~(-1)(R~2=0.999 5)、6.00~192.0μg·mL~(-1)(R~2=0.999 2)、15.63~500.0μg·mL~(-1)(R~2=0.999 5)范围内线性关系良好;平均回收率均在95.12%~105.83%。结论所建立的UPLC法可同时测定黑豆甘草汤中8个指标成分,结果稳定可靠,可作为黑豆甘草汤的质量控制的方法。     

淡豆豉发酵制备过程异黄酮变化规律研究

目的 基于淡豆豉的发酵过程,研究其中大豆异黄酮（SIF）类物质的变化规律。方法 采用紫外-可见分光光度法测定发酵原料中SIF类物质含量。采用高效液相色谱法同时定量原料及不同发酵阶段样品中9个SIF,以乙腈和0.1%醋酸溶液为流动相,检测波长为254 nm。结果 发酵原料马料豆中异黄酮质量分数为（3 244.41±925.57）μg·g^–1,9个SIF中苷类占99.10%,苷元占0.90%,SIF主要以丙二酰基葡萄糖苷、葡萄糖苷形式存在。经过前处理（泡、蒸）,样品中苷类占95.71%,苷元占4.29%,SIF主要以葡萄糖苷形式存在。前酵结束时,样品中苷类占52.11%,苷元占47.89%,SIF主要以葡萄糖苷和苷元形式存在。后酵阶段苷类持续减少,苷元持续增多,后酵第七天时,样品中苷类全部转化为苷元,SIF总量为（1 940.20±29.12）μg·g^–1,相较于紫外-可见分光光度法测定所得马料豆中SIF含量损失了约38%。若继续发酵,则苷元含量减少,且以染料木素减少最为明显。结论 相较于雄黑豆,马料豆更适宜用于发酵淡豆豉。发酵过程中,异黄酮苷类转化为苷元,同时伴随着苷元的破坏分解,故苷元含量表现为先升高后降低,苷类最大程度转化为苷元时,淡豆豉达到“发透”水平。《中华人民共和国药典》2020年版中淡豆豉的含量测定项标准不足以评价优劣,建议结合原料种类及发酵原理进一步优化。     

基于16S rRNA测序技术研究染料木素和大豆苷元对大鼠肠道菌群的影响

目的 探讨不同给药时间内不同比例的染料木素和大豆苷元对大鼠肠道菌群的影响,并筛选最佳给药条件。方法SD大鼠随机分为对照组、染料木素-大豆苷元（1∶1）组、染料木素-大豆苷元（2∶1）组和染料木素-大豆苷元（3∶1）组,给予药物干预28 d,收集粪便,采用16S rRNA高通量测序对对照组和不同比例染料木素-大豆苷元给药7、14、21、28 d后的大鼠肠道菌群结构进行分析测定。结果 对给药组与对照组之间的α多样性、β多样性及门或属水平上物种组成进行差异分析,发现染料木素和大豆苷元可以改变大鼠肠道菌群结构和组成,显著提高肠道中乳杆菌的丰度。结论 染料木素-大豆苷元（1∶1）给药21 d能够调控大鼠肠道菌群中乳杆菌的丰度。     

HPLC测定红车轴草中大豆苷元、染料木素、芒柄花素和鹰嘴豆芽素A的含量

目的:建立测定红车轴草中大豆苷元、染料木素、芒柄花素和鹰嘴豆芽素A含量的高效液相色谱方法.方法:Kro-masil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈-0.1%H3PO4(40:60),流速:1.0 mL·min-1,检测波长:254nm,柱温:25℃.结果:大豆苷元、染料木素、芒柄花素和鹰嘴豆芽素A的线性范围分别为0.0662～0.6620 μg,0.0978～0.9780μg,0.0866～0.8660μg和0.0992～0.9920μg.该方法回收率大豆苷元为98.9%(RSD=0.46%),染料木素为98.8%(RSD=1.21%),芒柄花素为98.8%(RSD=0.71%),鹰嘴豆芽素A为97.5%(RSD=1.33%).结论:该法简便、快速、准确.     

UPLC法同时测定黑豆甘草汤中8个指标成份的质量控制研究

目的：建立UPLC法同时测定黑豆甘草汤中8个指标成分的质量控制方法。方法：采用含0.1 mol?L-1的盐酸丙酮溶液提取样品,运用UPLC技术,使用ACE Excel 2 C18（100×2.1 mm,1.7 μm）色谱柱,以甲醇（A）-0.1 %甲酸水（B）为流动相,梯度洗脱;体积流量为0.3 mL?min-1;检测波长为260 nm和530 nm,柱温35 ℃,进样量为5 μL。结果：黑豆甘草汤中矢车菊-3-O-葡萄糖苷、大豆苷、黄豆黄苷、甘草苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素、甘草酸铵盐分别在11.88～380.0 μg?mL-1（R2=0.9992）、16.88～540.0μg?mL-1（R2=0.9995）、12.50～400.0μg?mL-1（R2=0.9993）、14.38～460.0μg?mL-1（R2=0.9992）、17.50～560.0μg?mL-1（R2=0.9996）、15.63～500.0μg?mL-1（R2=0.9995）、6.00～192.0μg?mL-1（R2=0.9992）、15.63～500.0μg?mL-1（R2=0.9995）内线性关系良好;平均回收率均在95.12 %～105.83 %。结论：所建立的UPLC法可同时测定黑豆甘草汤中8个指标成分,结果稳定可靠,可作为含黑豆甘草汤的质量控制的方法。     

大豆与其生物发酵制品淡豆豉异黄酮含量研究

目的:探讨大豆与其生物发酵制品淡豆豉中异黄酮的含量变化。方法:大豆通过传统的发酵方法制备成淡豆豉,通过比色法测定了大豆和淡豆豉总黄酮含量;高效液相色谱法对大豆和淡豆豉中大豆黄素和染料木素含量进行测定。结果:大豆总黄酮含量0.637mg.g-1,游离苷元含量0.152mg.g-1;淡豆鼓中总黄酮含量0.731mg.g-1,游离苷元含量1.701mg.g-1。结论:大豆和淡豆豉总黄酮含量基本相当,淡豆豉中大豆异黄酮游离苷元含量是大豆中的10～40倍。     

RP-HPLC法测定血脂康胶囊中大豆苷元、黄豆黄素和染料木素

目的建立血脂康胶囊中大豆苷元、黄豆黄素、染料木素的测定方法。方法采用反相高效液相色谱法,YMC-C18分析柱,乙腈-水(0.1%磷酸)梯度洗脱为流动相,检测波长256nm。结果大豆苷元、黄豆黄素、染料木素在测定范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为97.8%、99.1%、97.9%,RSD分别为2.02%、1.93%、1.84%(n=5)。结论方法操作简便、准确、重现性好,可用于同时测定血脂康胶囊中大豆苷元、黄豆黄素、染料木素的量。     

淡豆豉和黑豆乙醇提取物的促成骨细胞增殖活性及HPLC-MS分析

目的比较分析淡豆豉和黑豆乙醇提取物促大鼠颅骨成骨细胞增殖活性及二者的化学成分。方法采用MTT法对淡豆豉和黑豆的乙醇提取物进行促大鼠颅骨成骨细胞增殖活性的研究,并通过高效液相色谱-质谱联用技术对二者化学成分进行比较分析。结果淡豆豉和黑豆的乙醇提取物对大鼠成骨细胞的促增殖率分别可达到36.5%和28.2%,其主要有效成分为异黄酮类化合物,经液质联用分析共鉴定出15个黄酮类成分。结论黑豆发酵成淡豆豉后的成分变化主要体现在由苷类成分脱糖转化为苷元,含有量显著增加的大豆苷元和染料木素两种苷元主要由丙二酰大豆苷(大豆苷元-G-M)和丙二酰染料木苷(染料木素-G-M)脱丙二酰基和葡萄糖转化而来。