蚤休总皂甙与半边莲生物碱对内皮素及内皮型一氧化氮合酶合成影响的对比研究

前期工作显示,清热解毒类中药半边莲和蚤休对动脉内皮具有一定保护作用,进一步研究发现半边莲上述保护作用的有效成分主要是其生物碱组分,而蚤休的有效成分为其总蚤甙.按照祖国医学的观点,半边莲与蚤休同属抗蛇毒中药,其药用机制基本相同;按照现代医学观点,动脉粥样硬化的早期病变为动脉内皮损伤,其中,动脉内皮细胞的内皮素(endothelin,ET)与内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)表达失衡是重要参与因素.     

内皮素-1和一氧化氮/一氧化氮合酶系统与视网膜疾病

视网膜微循环血流量由神经递质、激素、代谢因素、肌源性和内皮源性因素调节.内皮细胞作为循环血液和血管平滑肌细胞之间的屏障,在调节血管张力、血流速度中起着极其重要的作用.     

诱导型一氧化氮合酶和内皮型一氧化氮合酶在胃癌中的表达关系及临床意义

目的 检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)在小鼠正常胃组织及原位移植人胃癌组织SGC-7901中的表达情况,探讨严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠胃癌不同阶段时iNOS和eNOS含量变化的相关性研究及临床意义.方法 采用苏木精-伊红染色法进行检测.结果 可见eNOS和iNOS在10只正常胃组...     

内皮型一氧化氮合酶基因与冠心病

冠状动脉粥样硬化性心脏病 (简称冠心病 )是由遗传与环境因素共同所致的复杂疾病。分子遗传学的发展 ,为分析冠心病的遗传机制提供了可能。内皮细胞一氧化氮作为心血管功能上一种重要的调节分子 ,与冠心病的发生、发展有关［１］。一氧化氮合酶(ＮＯＳ)是左旋精氨酸一氧化氮途径的关键酶 ,其基因的突变可能影响ＮＯＳ蛋白的功能及活性 ［２］。ＮＯＳ基因被列为冠心病的一个候选基因［３］。因此 ,ＮＯＳ基因的突变可能与冠心病及心肌梗死风险有关 ,且已有证据证明此相关性 ［２ ,４～６］。人体内ＮＯＳ至少有３种 :内皮型 (ｅＮＯＳ)、神…     

血府逐瘀胶囊对急性心肌梗死再灌注后心肌及内皮素-1、一氧化氮／一氧化氮合酶体系影响的实验研究

目的：观察血府逐瘀胶囊对急性心肌梗死（acute myocardial infarction．AMI）再灌注后心肌组织及一氧化氮（nitric oxide,NO）／一氧化氮合酶（nitric oxide synthase．NOS）体系和内皮素-1（endothelin-1，ET-1）的影响，探讨其改善血管内皮功能的机制。 方法：Yorkshire猪45只，随机分成假手术组、模型对照组和血府逐瘀胶囊治疗组。开胸结扎左冠状动脉前降支90min后，松解2h制备AMI再灌注模型。测定造模前后和再灌注后血清ET-1和NO的含量；冠状动脉造影观察心肌血流恢复情况；Western blot分析心肌组织内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）和ET—1蛋白表达；病理学分析心肌组织形态变化。 结果：血府逐瘀胶囊组造模后和再灌注后血ET-1水平低于模型组（P〈0．01），而NO表达水平明显高于模型组（P〈0．01）。冠状动脉造影提示治疗组冠状动脉血流通畅情况优于对照组，但结果没有统计学意义（P=0．253）。Western blot显示血府逐瘀胶囊组eNOS蛋白表达较模型组有所提高。ET-1蛋白表达则有所下降（P〈0．01）。HE染色及微血管密度分析显示与模型对照组相比，血府逐瘀胶囊组毛细血管扩张程度明显减轻。心肌组织损伤明显改善，微血管密度明显增加。 结论：内皮细胞受损可能是无再流现象发生的重要机制之一．血府逐瘀胶囊可能通过调控NO和ET-1基因表达来达到对AMI的治疗作用。     

AngⅡ抑制HUVECs内皮型一氧化氮合酶的表达和NO的释放

目的观察AngⅡ对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及内皮NO生成的影响,探讨其可能机制.方法 采用胰蛋白酶消化法进行HUVECs的原代培养,3～5代用于实验;通过RT-PCR和Western Blot检测eNOS的mRNA和蛋白表达水平;利用Griees反应原理测定上清NO释放量.结果与无刺激组相比, AngⅡ(10-8 M、10-7 M、10-6M)抑制HUVECs eNOS mRNA和蛋白表达(P《0.05);HUVECs未受刺激时NO生成量是(50.21±4.39)μM,不同浓度的AngⅡ(10-8 M、10-7 M、10-6M)与HUVECs共孵育12 h可明显减少NO 释放(30.01±4.10)μM、(21.33±4.81)μM、(16.35±2.56)μM,使其浓度分别下降49.7%、63.4%、71.1%.结论AngⅡ明显抑制HUVECs表达eNOS,并呈浓度效应减少内皮NO的释放.     

慢性肾炎及中医证型与血中内皮素,一氧化氮关系探讨

为了解血浆内皮素（ＥＴ）与一氧化氮（ＮＯ）在慢性肾炎患者及中医证型中的变化,用放射免疫法测量血浆ＥＴ含量,用镉活化比色法测定血清ＮＯ含量,结果：１２３例慢性肾炎患者血ＥＴ显著高于正常人组（Ｐ〈０．０１）,血ＮＯ与正常人组无显著差异（Ｐ〉０．０５）,血ＥＴ含量在中医各证型中依次为正常人组〈肺肾气虚组〈脾肾阳虚组〈气阴两虚组〈肝肾阴虚组。血ＮＯ含量在中医各证型中依次为肺肾气虚组〉气阴两虚组〉正常人组〉     

AngⅡ抑制HUVECs内皮型一氧化氮合酶的表达和NO的释放

目的:观察AngⅡ对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及内皮NO生成的影响,探讨其可能机制。方法:采用胰蛋白酶消化法进行HUVECs的原代培养,3~5代用于实验;通过RT-PCR和W estern B lot检测eNOS的mRNA和蛋白表达水平;利用G riees反应原理测定上清NO释放量。结果:与无刺激组相比,AngⅡ(10-8M、10-7M、10-6M)抑制HUVECs eNOS mR-NA和蛋白表达(P<0.05);HUVECs未受刺激时NO生成量是(50.21±4.39)μM,不同浓度的AngⅡ(10-8M、10-7M、10-6M)与HUVECs共孵育12 h可明显减少NO释放(30.01±4.10)μM、(21.33±4.81)μM、(16.35±2.56)μM,使其浓度分别下降49.7%、63.4%、71.1%。结论:AngⅡ明显抑制HUVECs表达eNOS,并呈浓度效应减少内皮NO的释放。     

诱生型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子在喉癌中表达的研究进展

喉癌是耳鼻喉—头颈外科最常见的恶性肿瘤之一,发病率仅次于鼻咽癌,占全身恶性肿瘤的1.2%～1.6%,诱生型一氧化氮合酶（iNOS）和血管内皮生长因子（VEGF）是近年来研究较多的肿瘤蛋白相关因子,人们对一氧化氮（NO）与肿瘤生物学行为的研究中发现,iNOS在肿瘤的发生发展过程中起着重要的作用。     

内皮型一氧化氮合酶在心血管疾病中的调节作用研究进展

一氧化氮(NO)是由一氧化氮合酶(NOS)生成和释放的非常重要的气体信号分子,在心血管疾病发生发展中发挥非常重要的调节作用,本文就内皮型一氧化氮合酶(eNOS)与心血管疾病之间的关系进行综述,旨在为探讨心血管疾病的发病机制及可能的防治药物的研发提供参考。     

内皮源性一氧化氮合酶基因多态性对脓毒症患者疾病严重程度及预后的影响

目的 探讨一氧化氮合酶(eNOS)894G→T,-786T→C基因多态性与脓毒症患者疾病严重程度及预后的相关性.方法 于2007年4月至2009年5月,在北京9个教学医院ICU随机收集严重脓毒症患者117例,应用PCR-RLFP及PCR-SSCP方法检测eNOS 894G→T,-786T→C等位基因和基因型.记录患者一般情况、致病微生物,入ICU后24 h内急性心理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHE)Ⅱ评分、7 d内SOFA评分、感染性休克发生率、致休克时间(从发生感染至出现休克时间)、休克持续时间、人ICU后7及28 d病死率.结果 eNOS 894 G→T基因多态性中基因型GT携带者感染性休克的发生率较基因型GG携带者有增加趋势(87%vs 68.1%,P=0.071),且致休克时间明显缩短[1.0(0.1-6.5)d vs 2.0(0.10-27.0)d,中位数(范围),P<0.05].此类患者APACHE Ⅱ(24±7 vs 19±7)及序贯器官衰竭分析(SOFA)评分(9±3 vs 5±3)显著升高(P<0.05,P<0.001),7 d和28 d病死率显著增高(34.8%vs 0%,P<0.001;78.3%vs 23.4%,P<0.001).多因素分析发现,年龄、SOFA评分以及基因型GT为影响严重脓毒症预后的独立高危风险因素.本研究未发现eNOS 0786T→C基因多态性与脓毒症患者疾病严重程度及预后存在相关性.结论 eNOS 894C→T(而非-786T→C)基因多态性与脓毒症患者疾病严重程度及预后存在密切关系.基因型GT携带者器官功能损害更加显著,并且与感染性休克的发病过程关系密切.     

肺动脉内皮细胞缺氧时内皮型一氧化氮合酶基因表达的变化及蛋白激酶C亚型的作用

目的　研究蛋白激酶C(PKC)及其亚型对缺氧引起的肺动脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)基因表达变化的调控作用。方法　将原代培养的猪肺动脉内皮细胞置于缺氧 (5 %O2 )条件培养 2、6、12、2 4、4 8h ,用RT PCR的方法检测eNOSmRNA的含量。用蛋白质免疫印迹技术检测eNOS和 8种PKC亚型的表达水平。加入选择性PKC抑制剂BIMⅠ (1μmol/L)和G 6 983(1μmol/L) 后观察其对 5 %O2 所引起的eNOSmRNA水平变化的影响。采用瞬时转染的方法 ,通过荧光素酶报告基因实验检测eNOS基因转录起始点上游长 1 6kb启动子区域的活性。加入转录抑制剂放线菌素D后比较不同时间点常氧培养组和 5 %O2 培养组eNOSmRNA的含量。结果　 5 %O2培养 12h可使肺动脉内皮细胞eNOS表达增加 ,2 4h达高峰。缺氧 2 4h组eNOSmRNA和蛋白质水平分别是常氧组的 171%± 18% (P <0 0 1)和 16 6 %± 2 1% (P <0 0 5 )。BIMⅠ和G 6 983可抑制缺氧 2 4h引起的eNOSmRNA表达上调。缺氧时新型蛋白激酶Cε(nPKCε)发生了膜转位。报告基因实验表明 ,缺氧 2 4h肺动脉内皮细胞eNOS基因启动子活性明显增加 ,为常氧组的 (2 2 9± 0 73)倍。放线菌素D实验表明缺氧对肺动脉内皮细胞eNOSmRNA的稳定性无明显影响。结果表明 ,缺氧上调eNOSmRNA是由于基因转录增强     

血管紧张素转换酶抑制剂和血管紧张素Ⅱ-1型受体拮抗剂联合应用对内皮型一氧化氮合酶的影响

目的探讨血管紧张素转换酶抑制剂(福辛普利)、血管紧张素Ⅱ1型(ATⅡ1)受体拮抗剂(依贝沙坦)及二者合用对内皮型一氧化氮和酶(eNOS)及心室重构的影响。方法将86只心肌梗死后24h的大鼠分为(1)安慰剂组(22只);(2)福辛普利组(20只,10mg·kg-1·d-1);(3)依贝沙坦组(23只,50mg·kg-1·d-1);(4)福辛普利+依贝沙坦组(21只,10mg·kg-1·d-1+50mg·kg-1·d-1);另设假手术正常对照组(18只)。分别于心肌梗死后2周及6周检查(1)测平均动脉压、左室舒张末压(LVEDP);(2)心室重量/体重;(3)免疫组化及图像分析方法测非梗死区总胶原;(4)RT PCR法测定eNOSmRNA表达及免疫组化方法测eNOS蛋白质表达。结果安慰剂组比假手术组大鼠LVEDP升高(P<0.05),心室重量指数增加(P<0.01),非梗死区总胶原含量2周(6.1%±0.7%比3.6%±0.5%)、6周(5.1%±0.8%比3.6%±0.4%,均P<0.01)明显增加;福辛普利、依贝沙坦及两药合用后这些指标均降低。心肌梗死后6周时依贝沙坦组和联合组总胶原含量较福辛普利组降低更明显(3.4%±0.7%和3.3%±0.7%比4.2%±0.6%,均P<0.05)。两药单独应用eNOSmRNA表达在心肌梗死后2周时高于假手术组和安慰剂组,差异无统计学意义,但在心肌梗死后6周时增加,差异有统计学意义。而联合用药组在2、6周均较其余各组有显著增加(分别     

一氧化氮合酶基因转染小鼠内皮祖细胞的实验研究

目的 探讨利用脂质体介导内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因体外转染小鼠骨髓来源的内皮祖细胞(EPC)的可行性.方法 密度梯度离心法分离ICR小鼠骨髓来源单个核细胞培养制备小鼠EPC并鉴定;构建、扩增、提取并纯化pcDNA3.0/eNOS基因质粒;用EPC培养基配成2×105·mL-1细胞悬液,按0.6 mL/孔重新铺6孔板,待细胞生长至80％左右融合时,用脂质体LipofectamineTM 2000体外转染eNOS基因至EPC.转染48 h后,采用RT-PCR检测EPC中eNOS的表达,硝酸还原酶法检测EPC中一氧化氮(NO)的含量,荧光探针DCFH-DA活性氧检测氧自由基(ROS)的含量.结果 成功培养EPC,成功构建pcDNA3.0/eNOS基因载体.转染48 h后,EPC中eNOS表达量明增加(P＜0.01),NO含量明显升高(P＜0.01),ROS含量明显降低.结论 脂质体介导eNOS基因能够有效转染小鼠EPC,并能在EPC中有效表达.     

腺病毒介导eNOS转染高肺血流肺动脉高压大鼠模型的研究

目的 观察腺病毒介导的内皮型一氧化氮合酶基因(eNOS)转染对高肺血流肺动脉高压大鼠模型肺动脉高压形成的影响.方法 随机将40只大鼠分为假手术组、手术组、实验组和对照组,每组10只.手术组、实验组和对照组采用套管连接法建立左向右分流肺动脉高压模型,实验组采用气管吸入法转染重组腺病毒AdCMVeNOS,采用免疫组化法观察eNOS蛋白表达,采用比色法测定肺组织eNOS活性,测量各组大鼠平均肺动脉压(mPAP)、右心室平均压(mRVP)、平均颈动脉压(mCAP)、右心肥厚指数(RVHI),采用HE染色观察肺动脉形态学改变,计算管壁厚度与血管外径比值(WT%).结果 实验组免疫组化染色可见全层血管壁内棕黄色颗粒,eNOs表达强度明显高于对照组(P<0.05),假手术组eNOS表达的阳性细胞介于实验组与对照组之间.手术组和对照组的eNOS活性比假手术组明显降低(P<0.05);实验组的eNOS活性显著高于对照组,且较假手术组亦明显升高(P<0.05).手术组和对照组大鼠的mRVP、mPAP、RVHI和WT%均明显高于假手术组(P<0.05).与对照组相比,实验组大鼠mRVP、mPAP、RVHI和WT%均显著降低(P<0.05);手术组与对照组各值之间差异不明显.结论 腺病毒介导的eNOS基因转染能够上调高肺血流肺动脉高压大鼠肺组织中eNOS表达及其活性,延缓肺动脉高压的发展和肺血管的重塑.     

银杏酮酯对大鼠坐骨神经损伤后诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的观察银杏酮酯（EGb50）对大鼠坐骨神经损伤后神经中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。方法SD大鼠156只,随机分成假手术组、损伤对照组与实验组,后两组切断右侧坐骨神经并缝合。实验组给予EGb50 200mg·kg^-1·d^-1溶于1ml生理盐水中灌胃,损伤对照组给予生理盐水1ml灌胃,假手术组仅显露右侧坐骨神经,术后不作处理。分别于术后1、3、7、14、21及28d取吻合口远端的神经,采用免疫组织化学和实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）方法检测损伤神经组织中iNOS的表达水平。结果实验组iNOS阳性染色吸光度均值（A）在术后3、7、14和21d均明显低于对照组（均P〈0．05）,术后1、3和7d,实验组坐骨神经中iNOSmRNA的表达均低于对照组（P〈0．01）。结论银杏酮酯可抑制大鼠坐骨神经损伤后神经纤维中iNOS的表达,其促进神经再生的作用机制可能与抑制iNOS的表达有关。     

窄带噪声暴露对豚鼠血浆一氧化氮合酶活性和一氧化氮含量的影响

目的通过观察窄带噪声暴露对豚鼠血浆一氧化氮合酶（NOS）活性及一氧化氮（NO）含量的影响,探讨噪声暴露后豚鼠听觉功能变化的机制。方法 40只雄性健康白化种豚鼠,随机分为对照组和噪声暴露组,每组20只。利用Bio-LOG-IC系统检测噪声暴露前后豚鼠听觉脑干诱发电位（ABR）阈值,测定2组豚鼠暂时性听阈偏移（TTS）值,以评价听觉功能改变差异。实验结束后,取血浆用相应试剂盒分别测定血浆NO含量和NOS活性。结果对照组TTS均值为（0±2.9）dB,血浆诱导型一氧化氮合酶（iNOS）活性为（12.4±2.8）U/ml,NO含量为（31.6±19.7）μmol/L,总一氧化氮合酶（T-NOS）活性为（28.2±2.6）U/ml;噪声暴露组TTS均值（23.2±5.3）dBi,NOS活性（14.4±1.5）U/ml、NO含量（35.8±23.8）μmol/L。噪声暴露组与对照组比较均增高,差异有统计学意义（P〈0.05）。噪声暴露组T-NOS活性（[29.8±1.2）U/ml]有增强趋势,但与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论窄带噪声暴露后豚鼠血浆iNOS活性增高,生成大量具有耳毒性作用的NO,可能是内耳损伤的重要因素。     

三七总皂甙增强人内皮源性一氧化氮合酶基因启动子活性

目的探讨三七总皂甙(tPNS)对人内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)基因启动子转录活性的调控机制。方法以基因重组技术构建人eNOS基因启动子区(-1~ -1 600 bp)驱动的萤火虫荧光素酶报告基因载体peNOS-Luc,采用脂质体介导的细胞基因共转染技术将peNOS-Luc、空载体pGL2-Basic和β-半乳糖苷酶表达质粒pCMV-β共转染NIH3T3细胞,用细菌脂多糖(LPS)、tPNS和转移生长因子β1(TGFβ1)等因子分别刺激转染后的NIH3T3细胞,检测并比较荧光素酶/β-半乳糖苷酶活性,以确定LPS、tPNS和TGFβ1对人eNOS基因启动子转录活性的影响。结果(1)酶切和测序结果均证实重组载体peNOS-Luc构建正确;(2)重组载体peNOS-Luc在NIH3T3细胞中有效表达;(3)在LPS刺激下,人eNOS启动子的转录活性降低,而在tPNS和TGFβ1刺激下,其启动子的转录活性增强,其中,TGFβ1较tPNS所致的转录活性更强。结论正确构建了人eNOS基因启动子区(-1~-1 600 bp)驱动的萤火虫荧光素酶报告基因载体peNOS-Luc;tPNS在NIH3T3细胞中增强人eNOS基因启动子的转录活性。     

Role of nitric oxide and inducible nitric oxide synthase in human abdominal aortic aneurysms: a preliminary study

Background Nitric oxide （NO） is an important mediator in the pathophysiology of many vascular diseases. However, the definite role of NO in human abdominal aortic aneurysm （AAA） formation is unclear. The aim of this study was to investigate production of NO and expression of inducible nitric oxide synthase （iNOS）, and their possible role in AAA. Methods A total of 28 patients with AAA, 10 healthy controls, and 8 patients with arterial occlusive disease were enrolled into this study. Standard colorimetric assay was used to examine NO concentration in plasma from patients with AAA and normal controls, and in cultured smooth muscle cells （SMCs）. Expression of iNOS in aortas and cultured SMCs were detected by immunochemistry. The correlation of iNOS expression with age of the patient, size of aneurysm, and degree of inflammation was also investigated by Cochran-Mantel-HaenszelX^2 test and Kendall＇ Tau correlation. Results Expression of iNOS increased significantly in the wall of aneurism in the patients with AAA compared to the healthy controls （P〈0.05） and the patients with occlusive arteries （P〈0.05）. iNOS protein and media NOx （nitrite＋nitrate） also increased in cultured SMCs from human AAA （n=4, P〈0.05）, while plasma NOx decreased in patients with AAA （n=25） compared to the healthy controls （n=20）. There was a positive correlation between iNOS protein and degree of inflammation in aneurismal wall （Kendall coefficient=0.5032, P=0.0029） Conclusions SMCs and inflammatory cells were main cellular sources of increased iNOS in AAA, and NO may play a part in pathogenesis in AAA through inflammation.     

内皮一氧化氮合酶基因多态性与高脂血症的关系

目的：探讨内皮一氧化氮合酶基因内含子4(eNOS4)多态性与高脂血症的关系。方法：取患者血清,用电化学发光法、钟点法测定血糖、空腹胰岛素(FINS)、糖化血红蛋白(HbAlC)、总胆固醇(TC)、甘油三脂（TG）。从患者全血中提取DNA,进行多聚酶链反应(PCR),对PCR产物行6％聚丙烯酰胺凝胶电泳：部分PCR产物被克隆进载体,选阳性集落,进行核酸测序。结果：对照组eNOS4只有2种等位基因(a和b),而糖尿病患者有3种等位基因(a、b和c),对第3种多态(等位基因c)进行了序列分析,其基因序列较等位基因b多27bp,即：GAA GTC TAG ACC TGC TGC GGG GGT GAG。患者组等位基因a携带者血清TG及TC显著增高。结论：糖尿病患者eNOS4上的多态性有3种等住基因即：a、b和c;等住基因a与高脂血症．特别是高TG血症显著相关。