肠毒素大肠埃希菌定时定量PCR法检测

肠产毒素菌大肠埃希菌（ETEC）是引起腹泻的重要病原之一，患者除腹泻也可呈轻度水泻或严重的霍乱样症状。ETEC中的肠毒素可分为不耐热肠毒素（LT）和耐热肠毒素（ST）。目前检测肠毒素ETEC的方法主要有动物试验、组织培养和免疫学方法等，这些方法检测周期长，操作繁杂，灵敏度不高。一般PCR方法虽然操作简便、快速、特异性较强，但存在假阳性、灵敏度不高等问题。     

PCR法检测结核杆菌

结核分枝杆菌,俗称结核杆菌,是引起结核病的病原菌。可侵犯全身各器官,但以肺结核为最多见。结核病的症状和体征往往不典型,虽可借助X线摄片诊断,但确诊仍有赖于细菌学检查。一般涂片检查菌数需5x103～4/ml,培养需1x102/ml,标本中菌数少于此数时不易获得阳性结果,且培养需时较长。目前已将多聚酶链反应（PCR）扩增技术应用于结核分枝杆菌DNA鉴定,每ml中只需含几个细菌即可获得阳性。PCR是聚合酶链式反应的简称,是一种酶促化学反应,可以在试管里将待测的目的基因在很短的时间内扩增几十万倍乃至上百万倍,大大提高了基因诊断的灵敏度,降低了分析的难度。操作中需注意实验器材的污染问题,以免出现假阳性。现将荧光定量PCR法检测结核杆菌结果,报告如下。     

PCR法在早期梅毒诊断中的应用

目的提高早期梅毒诊断的敏感性和特异性。方法采用PCR技术对梅毒螺旋体（Tp）的DNA多聚酶Ⅰ基因（polA）特异性片段进行扩增,共检测385份生殖器溃疡分泌物,同时做暗视野镜检和TpELISA血清学试验。结果 PCR法共检测出阳性75例,敏感性和特异性分别为74.5%、99.3%;PCR法与暗视野镜检及TpELISA结果比较差异有统计学意义。结论 PCR法在早期梅毒诊断中具有快速、有效、结果可靠的优点,可作为血清学的补充试验。     

PCR快速检测沙门菌试剂盒的研制与应用

目的 在优化聚合酶链反应(PCR)检测沙门菌程序的基础上,研制沙门菌PCR检测试剂盒。方法 通过样品检测，确定试剂盒的组成及各种组分对保存期的影响，对PCR和ELISA2种快速检测试剂盒进行比较。结果 该试剂盒能检测出20Pg的沙门菌DNA；在含有Taq酶、未冻干、-20℃的条件下，试剂盒保存期为12个月；以国标法做参照，ELISA试剂盒的敏感性和特异性分别为100％，97.2％．PCR试剂盒的敏感性和特异性均为100％；ELISA和PCR试剂盒的符合率为97．2％；PCR试剂盒检测临床粪便样品150份，检测结果与国标法相符。结论 沙门菌PCR试剂盒具有特异、灵敏、快速等优点，适用于沙门菌快速检测。     

实时荧光PCR法检测正常人脑膜炎奈瑟菌

目的建立一种简易快速的实时荧光PCR方法（Q—PCR）并用于检测正常人群中脑膜炎奈瑟菌。方法采集成都市正常人群的咽拭子1008份，分别采用培养分离法和Q—PCR法检测Nm。绪果Q—PCR法方法的灵敏度、特异性分别为100％和100％，阴性预测值（NPV）为100．00％，阳性预测值13．09％，检出限为250du／ml体系，Q—PCR方法检出时间为3h，培养法阳性结果需时4d。Q—PCR技术检测1008份正常人群的咽拭子中NmDNA的阳性率为8．33％，培养法为1．09％。结论Q—PCR技术的灵敏度高于培养法，Q—PCR法具有灵敏、特异、经济、快速的特点，可用于疾病的快速诊断，特别适合正常人群的带菌率调查。     

PCR法检测血清HBV DNA及与若干HBV免疫学指标关系

本文比较了PCR法检测血清HBVDNA与ELISA法检测HBsAg、HBeAg的结果。用血清加热-PCR法检测HBV549bp特异DNA片段，用ELISA法检测HBsAg和NBeAg。133份食品从业人员体检血清样品中．57份HBsAg（－），其中未检出HBVDNA；60份HBsAg（＋）、HBeAg（－），其中检出8份HBVDNA（＋），HBVDNA检出率为13.3％；16份HBsAg（＋）、HBeAg（＋），其中检出15份HBVDNA（＋），HBVDNA检出率为93．8％。PCR法检测HBVDNA能更直接地反映HBV传染性。结果初步提示正常人体检中．仅凭HBsAg（＋）、HDeAg（－）确定其无传染性是不够充分的。     

实时荧光定量PCR法检测NG、CT和UU的临床意义

目的应用实时荧光定量PCR（real-time fluorescent quantitativePCR，FQ—PCR）法检测淋病奈瑟菌（NG）、沙眼衣原体（CT）和解脲支原体（UU），探讨该法的阳性检出率、敏感性和特异性。方法对临床疑似性病患者，取尿道或宫颈分泌物，同时用分离培养法和FQ—PCR法检测NG、CT、UU。结果168例患者中，培养法阳性检出数46例，阳性率27．38％，FQ—PCR法阳性检出数72例，阳性率42．86％。FQ—PCR法特异性为76．61％，灵敏度为97．83％。分别用FQ—PCR法和培养法检测NG、CT和UU，前者阳性率均高于后者。结论用实时荧光定量PCR法检测NG、CT以及UU，具有快速、敏感、特异、检出率高等优点，对临床诊断治疗及流行病学调查有重要意义。     

应用PCR法检测沙门菌

目的 研究沙门菌的PCR检测方法.方法 引物选择沙门菌的hilA基因,应用PCR法检测沙门菌.结果 PCR能检测经选择性增菌液培养的沙门菌,扩增片段在497 bp.结论 应用PCR检测沙门菌,具有快速、特异、灵敏和简便的特点.     

PCR检测技术在志贺菌引起的腹泻疫情中的应用

目的：通过采用PCR方法对某次疫情中分离的福氏1 a志贺菌进行保守基因检测及毒力基因分析研究,探讨在感染性腹泻疫情中,PCR技术快速检测志贺菌的应用。方法：对标本中分离的7株福氏1 a志贺菌,用PCR方法检测侵袭性质粒抗原基因（ipaH）、志贺肠毒素1（ShET-1）和志贺肠毒素2（ShET-2）的基因检测,并进行基因分型。结果：7株F1 a菌均检测出ipaH基因,ShET-1和ShET-2,基因型为ShET1（＋）/ShET2（＋）,整个实验可在3 h内完成。结论：该所建立的PCR检测方法准确、快速、简便、特异性强,为其应用于环境、食品及临床腹泻样本中志贺菌的检测打下良好基础。ShET-1/ShET-2基因分型对福氏志贺菌暴发流行中的同源性分析有重要意义。     

PCR法鉴定单核细胞增生李斯特菌

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes，Lm)是一种人畜共患病的病原菌。Lm是最重要的食源性病原体之一，主要污染肉类、乳制品和蔬菜等。Lm鉴定方法包括传统的分离鉴定法、免疫学鉴定方法等。分离培养鉴定法比较简单，但是操作烦琐、耗时长，不适合日常对于食品的检测。Lm免疫学检测操作简便，可在同一时间内检测大量样品，但由于菌体及鞭毛抗原交叉反应的存在，难以进行李斯特菌种间特异性鉴别。PCR法具有特异性强、灵敏度高和速度快等优点。     

子代T4的PCR和real time PCR测定

目的：为建立通过测定转换样品T4而检验样品大肠杆菌的新方法,探讨快速测定转换样品中T4的PCR技术.方法：以T4DNA纯化样品水稀释液和转换样品沸水浴处理产物分别为模板样液,经过两对引物PCR及real time PCR的试用和比较,优选定量检测转换样品中T4的适宜方法和条件.结果：源自T4 ligase的一对引物具有较高的灵敏度和特异性;针对纯化T4DNA配制的模板样液,优化的PCR和real time PCR至少可分别精确检出39.25和3.925 pg/ml的T4DNA;针对沸水浴处理转换样品制备的模板样液,PCR和real time PCR可清楚区别不同浓度的转换样品,PCR的检出极限为500 PFU/ml T4的转换样品,real time PCR的检测极限为35 PFU/ml T4的转换样品.结论：采用PCR和real time PCR可快速定量测定转换样品中的T4含量,real time PCR比PCR的灵敏度高约一个数量级.     

强力打造民族品牌──晶芯荧光定量PCR系列通用试剂盒

荧光定量基因扩增PCR检测技术近几年来得到长足发展，已广泛应用于医院、大学、研究机构、检验检疫等从事基因诊断和研究的部门。该项技术可应用于传染病（如肝炎、性病、非典、禽流感、爱滋病等），遗传病，癌症等以检测核酸DNA／RNA为特征的疾病诊断，以及转基因生物改良、动植物检疫、动物性别判断和法医等方面。随着PCR检测技术的普及，[第一段]     

Pneumocystosis and quantitative PCR

Objective

Pneumocystis pneumonia (PCP) is now predominantly observed in immunosuppressed non-HIV-infected patients. The sensitivity of the PCR is here higher than direct examination (DE) of respiratory secretions because the infection is caused by a lower inoculum of Pneumocystis jirovecii (P. jirovecii). The objective of our retrospective study was to assess the contribution of quantitative PCR (qPCR) in the diagnosis of PCP.

应用PCR和时间分辨PCR对口腔器械乙肝污染的调查

[目的]探究口腔科常用器械乙肝病毒污染的可能性,寻找一种快速有效的消毒方法. [方法]通过对随机采集的120例口腔科器械的冲洗液进行PCR和时间分辨PCR检测以评价其污染状况及监测消毒效果. [结论]本次试验结果乙肝病毒对口腔科器械的污染状况好于文献报道,但仍存在污染及交叉感染的可能.     

比较常规PCR与多重PCR在食物中毒致病菌检测中的应用

目的通过对常规聚合酶链反应(PCR)与多重PCR在检测6种食物中毒致病菌中的比较研究,建立一个快速、准确、灵敏、有效的针对该6种致病菌进行PCR检测的平台。方法利用6种导致患者腹泻的食物中毒致病菌的特异性序列为靶序列,设计了6对特异性引物进行PCR反应,优化并建立了PCR检测体系。结果通过实验确定常规PCR适宜的退火温度为58℃,而多重PCR适宜的退火温度为62℃;常规PCR的基因组DNA检测灵敏度可达到2×10-7ng/μl,而多重PCR的基因组DNA检测灵敏度只有2×10-6ng/μl;常规PCR比多重PCR更容易从食物中毒样品中检测出致病菌。结论 6种导致患者腹泻的食物中毒微生物完全可以在同批次中完成检测,PCR检测方法操作简单、速度快、灵敏度高、稳定性和重复性好,具有较广阔的应用前景和较大的经济与社会效益。     

应用特异性引物鉴定红色毛癣菌

目的探讨建立一种快速、简单可重复的鉴定红色毛癣菌的方法. 方法利用特异性引物TR1F和TR1R对32株皮肤癣菌进行PCR扩增. 结果红色毛癣菌和苏丹毛癣菌产生特征性带型,而其他皮肤癣菌为阴性. 结论这种PCR方法可以快速、准确、敏感地鉴定红色毛癣菌.     

短串联重复序列PCR及其应用

STR（short tandem repeat）基因座广泛分布于各种真核生物基因组中，是高度多态性标记的丰富来源，并可用PCR反应来检测。扩增区域重复序列熏复次数的差异导致STR基因座的等位基因不同的分型，可区别不同的基因型。本文介绍了短串联重复序列PCR的基本原理和分析方法，并简要介绍了短串联重复序列PCR在亲缘关系鉴定、种群遗传结构分析、基因图谱以及基因诊断等方面的应用。     

多重PCR与PCR-荧光探针法检测外环境霍乱弧菌的比较研究

目的：对比多重PCR与PCR-荧光探针法从外环境中直接检测霍乱弧菌的效果。方法：收集40份水样和40份水产品样本,再以20份已知特性菌株作对照。将上述样本和菌株进行培养后提取模板,分别进行多重PCR和PCR-荧光探针法检测。结果：两种方法均从40份水样中检出14份非O1非O139群霍乱弧菌,两种方法均能从40份水产品中检出29份O1群霍乱弧菌及3份非O1非O139群霍乱弧菌。以上检出霍乱弧菌均可经血清学试验证实。20份已知特性样本两种方法均鉴定无误,最低检出限均为10^2cfu/ml。结论：两种方法灵敏度和特异度均极高,多重PCR方法因能同时进行致病力的初步判断,检验速度相对较快,成本较为经济而更为实用。     

实时荧光定量PCR法与常规PCR法及细菌培养法检测单增李斯特菌的比较

目的：比较实时荧光定量PCR法、常规PCR法及细菌培养法检测单核细胞增生性李斯特菌的灵敏度与特异性。方法：采用建立的实时荧光定量PCR、常规PCR及传统细菌培养法3种方法,同时对单核细胞增生性李斯特菌等细菌进行检测。结果：实时荧光定量PCR检测的灵敏度可达19 cfu/ml,且有很高的特异性,对英诺克李斯特菌等10种相关细菌均无交叉反应,从细菌核酸提取至完成检测仅需3 h左右。结论：实时荧光定量PCR检测由于在密封环境中进行,避免了产物与环境间的交叉污染,且是3种方法中最为快速敏感的方法,适用于公共卫生应急疫情的实验室快速诊断。