酶酚酸酯对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠神经功能的影响

目的观察酶酚酸酯(MMF)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠神经功能改善及脑脊髓组织的影响。方法用豚鼠全脊髓匀浆和完全弗氏佐剂制成的完全抗原免疫Wistar大鼠,制备EAE大鼠模型,以生理盐水和完全弗氏佐剂注射的Wistar大鼠作为对照。对照组大鼠7只,造模成功且存活的大鼠为25只,随机分为MMF大剂量组（n=8只）,MMF小剂量组（n=8只）,模型组（n=9只）。连续给药14d,每天观察记录神经功能评分及体重变化,14d后HE染色观察脑、脊髓组织病理变化。结果EAE大鼠的造模成功率为72.1%。与对照组相比,各组EAE大鼠神经功能评分明显增加,体重明显下降(P＜0.01),脑脊髓组织病理学变化主要表现为血管周围有大量炎细胞浸润;与模型组相比,用MMF治疗后神经功能评分有所下降,体重增加,病理表现有不同程度的减轻,且大剂量MMF疗效优于小剂量MMF(P＜0.01)。结论MMF能改善EAE大鼠的症状,促进神经功能恢复,并具有剂量依赖性。     

咪唑克生对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脊髓GFAP及mRNA表达的影响

目的探讨咪唑克生（Ida）对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）Lewis大鼠脊髓内胶质纤维酸性蛋白（GFAP）蛋白及其mRNA表达的影响。方法将30只雌性Lewis大鼠分为三组：正常对照组、EAE组和Ida组。以豚鼠脊髓匀浆（GPSCH）诱发制备大鼠EAE模型,并于给予GPSCH当日开始分别腹腔注射10mg/kgIda（Ida组）和生理盐水（EAE组和对照组）连续10d,观察EAE症状并评分。用免疫组化法和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法分别检测GFAP蛋白及mRNA在脊髓中的表达。结果10d后Ida组大鼠的临床症状和病理学改变减轻（〈0.05）。脊髓组织中GFAP蛋白及其mRNA的表达,EAE模型组显著高于对照组,Ida组较EAE组显著增高,差异有统计学意义（〈0.05）。结论Ida可促进GFAP在EAE大鼠脊髓中的表达,可能是其保护EAE大鼠的部分作用机制。     

不同剂量阿托伐他汀钙对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脊髓内NF-κB表达及血清炎性因子的影响

目的探讨不同剂量阿托伐他汀钙对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠脊髓内NF-κB表达及血清炎性因子的影响。方法 82只Wistar大鼠随机抽取10只为健康对照组,余72只以50%豚鼠全脊髓匀浆诱发建立EAE模型,而后随机分为EAE模型组、大剂量阿托伐他汀组(大剂量组)、小剂量阿托伐他汀组(小剂量组)各24只,采用量化评分法,比较造模后14d、21 d不同剂量阿托伐他汀钙对EAE大鼠血清白介素-2(IL-2)、同型半胱氨酸(Hcy)及脊髓内核转录因子-κB(NF-κB)水平的影响,同时对其发病率及潜伏期进行比较。结果造模后高剂量组发病率及病死率明显低于低剂量组及EAE模型组,14 d及21 d时神经功能评分均低于低剂量组及EAE模型组(P<0.05),而低剂量组与EAE模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。造模后14 d及21 d,EAE模型组血清IL-2、Hcy水平及脊髓NF-kB阳性表达水平均较健康对照组升高(P<0.05),高剂量组低于低剂量组与EAE模型组(P<0.05),而低剂量组与EAE模型组差异无统计学意义(P>0.05)。21 d时,高剂量组、低剂量组、EAE模型组上述各项指标均较14 d时下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论高剂量阿托伐他汀钙能降低大鼠EAE的发病率及病情严重程度,可能与其抗炎及免疫调节机制有关。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠模型的建立

目的 为深入研究人类多发性硬化症建立EAE大鼠模型。方法 采用双后退足垫皮内注射豚鼠全脊髓匀浆（GPSPH）-福氏完全佐剂（CFA）混合乳剂，辅以注射百日咳疫苗，诱导Wistar大鼠EAE模型。取对照及发病高峰期大鼠脑、脊髓组织，常规病理切片，HE染色。ELISA法检测血清MBP抗体。结果 一次性双后腿足垫皮内注射GPSPH-CFA混合乳剂可诱导Wistar大鼠EAE模型，临床症状约在造病后10-15d出现。同时注射百日咳疫苗能提高发病率和发病程度。EAE大鼠脑、脊髓组织HE染色见大量淋巴细胞浸润，在血管周围形成淋巴鞘，但未见脱髓鞘改变。与对照组相比，EAE大鼠血清中抗MBP抗体明显增高。结论 非敏感品系Wistar大鼠可用于制备EAE动物模型。发病大鼠除有EAE临床症状外，还伴有中枢神经系统炎性改变和血清MBP抗体的增高。     

阿托伐他汀对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠的影响

目的 观察不同剂量阿托伐他汀对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠脊髓内核转录因子-κB(NF-κB)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响,探讨阿托伐他汀对EAE发病的保护机制.方法 以豚鼠脊髓匀浆诱发Wistar大鼠建立EAE模型,采用量化评分法,比较不同剂量的阿托伐他汀对EAE发病率、潜伏期、临床症状和组织学的影响,并用免疫组化方法检测脊髓中NF-κB和GFAP的表达.结果 高剂量阿托伐他汀延长了大鼠发病的潜伏期,改善了大鼠发病的严重程度,下调NF-κB及上调GFAP在脊髓中的表达(P＜0.05).结论 高剂量阿托伐他汀对EAE大鼠有保护作用,可能与其对中枢神经系统的免疫机制有一定影响有关.     

实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑组织PGE 2表达的研究

目的：检测实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）大鼠脑组织PGE2表达情况,探讨其在EAE发病过程中的作用。方法将30只Wistar雌性大鼠随机分为正常对照组、佐剂对照组及EAE模型组,各10只,使用新鲜豚鼠脊髓匀浆（GPSCH）与含卡介苗(BCG)的弗氏完全佐剂（CFA）建立EAE模型。对各组大鼠发病潜伏期、进展期及发病高峰期神经功能障碍评分进行记录,采用免疫组织化学方法检测大鼠脑组织前列腺素E 2（PGE 2）的表达,并用ImagePro Plus软件对PGE2含量进行平均光密度值测定。结果正常对照组及佐剂对照组大鼠未发病,EAE模型组大鼠均发病。正常对照组及佐剂对照组大鼠脑组织中未见PGE 2表达,EAE模型组大鼠脑组织中则可见PGE 2表达,且PGE 2含量与EAE大鼠发病潜伏期呈负相关,与发病进展期及发病高峰期神经功能障碍评分呈正相关。结论 PGE2可能参与了EAE疾病的发生发展过程。     

火把花根片对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑IL-2和IFN-γ mRNA的影响

目的:探讨火把花根片对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)Wistar大鼠的治疗作用及IL-2和IFN-γmRNA的影响。方法:模型组采用豚鼠髓鞘蛋白匀浆和福氏完全佐剂诱发大鼠急性EAE;治疗组在模型组基础上予以火把花根片(300 mg.kg-1,BID)治疗,观察症状并评分;HE染色和Loyez氏髓鞘染色,观察病理和髓鞘改变;RT-PCR法测定脑组织的IL-2和IFN-γ的mRNA表达水平。结果:治疗组未出现EAE症状,脑组织IL-2和IFN-γ的mRNA表达水平分别为0.345±0.032、0.353±0.023,与模型组比较P<0.01;脑和脊髓小血管周围炎症细胞浸润明显减少;髓鞘结构完整。结论:火把花根片对EAE有治疗作用,其机制与抑制了脑组织IL-2和IFR-γ的mRNA表达有关。     

黄岑苷对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的影响

目的观察不同浓度黄岑苷(baicalin)对实验性自身免疫脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠模型的作用,并研究其初步机制。方法建立实验性自身免疫性脊髓炎小鼠模型,免疫后第3天给予高低剂量黄岑苷灌胃,每天1次,共20 d。对小鼠活动进行神经功能评分,TUNEL染色检测脊髓组织细胞凋亡情况,ATP水平检测试剂盒检测脊髓组织ATP含量水平,免疫印迹法(Western blot)检测Bax、Bcl-2、cleaved cas-9和cleaved cas-3蛋白表达水平。结果黄岑苷能够提高实验性自身免疫脑脊髓炎小鼠神经功能,延后发病时间;黄岑苷干预后,Tunel染色结果显示脊髓组织凋亡细胞数下降,ATP水平下降,免疫印迹法结果显示Bcl-2的蛋白表达显著上升,Bax、cleaved cas-9和cleaved cas-3的蛋白表达显著下降。结论黄岑苷可通过抑制线粒体内源性凋亡途径抑制细胞凋亡,保护线粒体,提高实验性自身免疫脑脊髓炎小鼠神经功能,为预防疾病提供了实验理论依据。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠模型的建立及病理特征

目的建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠模型,观察其组织病理特征。方法 采用豚鼠全脊髓匀浆制备抗原免疫Lewis大鼠建立EAE模型。每天监测动物体质量和行为学变化。应用HE染色观察脑和脊髓炎性浸润、血管袖套等变化,罗克沙尔坚牢蓝(luxol fast blue,LFB)染色观察脊髓脱髓鞘变化,电子显微镜观察脊髓髓鞘超微结构。结果 随着病程进展,EAE模型组大鼠体质量下降明显;从第8天起出现行为学异常,神经功能损伤评分逐渐增高,于第12天达峰值。病理形态学检查显示,EAE模型组大鼠脑组织血管周围和脑实质有大量炎性细胞浸润;脊髓腰膨大脊膜出现炎性水肿,并有炎性细胞浸润;脊髓血管周围有大量炎性细胞密集环绕,呈"袖套样"改变;脊髓髓鞘大面积脱失,且髓鞘板层松散。结论 采用该模型作为急性MS的研究模型较为理想。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠模型的建立

目的为深入研究人类多发性硬化症建立EAE大鼠模型.方法采用双后腿足垫皮内注射豚鼠全脊髓匀浆(GPSPH)-福氏完全佐剂(CFA)混合乳剂,辅以注射百日咳疫苗,诱导Wistar大鼠EAE模型.取对照及发病高峰期大鼠脑、脊髓组织,常规病理切片,HE染色.ELISA法检测血清中抗MBP抗体.结果一次性双后腿足垫皮内注射GPSPH-CFA混合乳剂可诱导Wistar大鼠EAE模型,临床症状约在造病后10～15d出现.同时注射百日咳疫苗能提高发病率和发病程度.EAE大鼠脑、脊髓组织HE染色见大量淋巴细胞浸润,在血管周围形成淋巴鞘,但未见脱髓鞘改变.与对照组相比,EAE大鼠血清中抗MBP抗体明显增高.结论非敏感品系Wistar大鼠可用于制备EAE动物模型.发病大鼠除有EAE临床症状外,还伴有中枢神经系统炎性改变和血清MBP抗体的增高.     

不同剂量富氢气生理盐水对实验性自身免疫性脑脊髓炎的治疗作用观察

目的 探讨富氢气生理盐水对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）大鼠的治疗作用及最佳剂量范围。 方法 用豚鼠脊 髓匀浆与完全弗氏佐剂免疫 SD 大鼠制作 EAE 模型;造模成功后第 1~20 天大鼠腹腔注射不同剂量（0、3、6ml/kg）富氢气生理盐水,观 察并记录大鼠体重、行为学评分;第 21 天处死大鼠取脑、脊髓作 HE 染色,检测脊髓 IL-17、INF-γ 表达水平以及血清超氧化物歧化酶（SOD）活性。 结果 6ml/kg 富氢气生理盐水剂量组临床发病率较低,仅为 30.0%;且发病后能抑制体重下降,最高临床评分与累积临 床评分均最低,中枢组织炎症细胞浸润最少。３、6ml/kg 剂量的富氢气生理盐水均能抑制 EAE 大鼠 IL-17、INF-γ 的释放,提高 SOD 活性;但 6 ml/kg 剂量效果更佳。 结论 6ml/kg 剂量的富氢气生理盐水可能对降低 EAE 大鼠临床发病率有积极作用,且能抑制发病大 鼠体重下降,降低神经缺损行为学评分,并能促进 SOD 活性,从而抑制 EAE。     

他克莫司对大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎的实验性治疗

目的:研究新型免疫抑制剂他克莫司(Tacrolimus,FK506)对大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的治疗作用和作用机制,并与已论证的传统治疗方法甲基泼尼松龙对EAE实验治疗做临床对比其疗效.方法:豚鼠脊髓匀浆和完全福氏佐剂制成的混合液诱导SD大鼠建立EAE模型,免疫10 d后将FK506分别以1 mg/kg,0.5 mg/kg剂量给予每日腹腔注射EAE大鼠,连续给药10 d,观察其发病情况,外周血T淋巴细胞CD3 、CD4 、CD8 、NK细胞比率,免疫后30 d,观察脑、脊髓组织病理变化,免疫组织化学生长相关蛋白43(Growth associated protein 43,Gap-43)显示神经再生的形态学证据.结果:FK506能减轻EAE的临床症状,促进EAE的临床缓解和恢复;减轻中枢神经系统的炎症浸润;减轻髓鞘和轴突损伤,促进轴突再生作用,且停药后未见动物复发.结论:FK506对实验性变态反应性脑脊髓炎有一定的实验性治疗作用.     

应激对大鼠自身免疫性脑脊髓炎模型的影响

目的:观察应激刺激对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)SD大鼠细胞免疫的影响。方法:用豚鼠脊髓抗原免疫SD大鼠,制作SD大鼠EAE模型,并随机分为抗原免疫+应激处理组(A组)和单纯抗原免疫组(B组),观察两组大鼠EAE的发病率及病情严重程度。3周后处死SD大鼠,检测大鼠外周血CD4+、CD8+细胞比例和CD4+/CD8+比值。结果:接种豚鼠脊髓抗原的两组大鼠10d后开始发病,A组大鼠EAE发病率和病情严重评分均高于B组,差异有统计学意义(P<0.01)。A组外周血CD4+比例、CD4+/CD8+比值均低于B组,差异有统计学意义(P<0.05),CD8+细胞比例与B组相当,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:应激刺激对EAE大鼠细胞免疫有抑制作用,促发并加重大鼠EAE病情。     

2- BFI对EAE大鼠中枢神经系统内小胶质细胞及MCP-1的影响

目的：观察2-（2-苯并呋喃基）-2-咪唑啉[2-（-2- benzofuranyl）-2- imidazoline,2- BFI]对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）大鼠中枢神经系统内小胶质细胞及MCP-1的影响,并探讨其保护EAE大鼠的作用机制。方法50只雌性SD大鼠随机分为EAE组、2- BFI低剂量组、2- BFI中剂量组、2- BFI高剂量组及对照组,每组10只,采用豚鼠脊髓匀浆免疫诱导SD大鼠建立EAE模型,观察每组大鼠发病情况并进行临床症状评分;采用HE染色和LFB髓鞘染色观察中枢神经系统的病理变化,对其炎症浸润程度加以评分;用免疫组化法测定脑干中激活的小胶质细胞及MCP-1阳性细胞数量。结果与EAE组比较,大、中、小剂量2- BFI干预组大鼠EAE发病率下降,临床症状减轻,潜伏期延长,中枢神经系统内炎性细胞浸润减少,2- BFI中剂量组在EAE临床症状和病理学改变方面差异有统计学意义（P＜0.05）;免疫组化结果显示,与EAE组比较,2- BFI中剂量组的活化的小胶质细胞数及MCP-1阳性细胞数均减少（P＜0.05）。结论中剂量2- BFI对EAE大鼠具有神经保护作用,其作用机制可能与2- BFI抑制小胶质细胞的激活,减少MCP-1的表达有关。     

大鼠急性实验性变态反应性脑脊髓炎模型的建立

目的建立大鼠急性实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)模型.方法采用豚鼠脊髓和福氏完全佐剂混合乳剂一次性注入Wistar大鼠双足垫和尾部,同时腹腔注射左旋咪唑诱导大鼠发生EAE.观察发病情况;HE染色观察病理变化;Loyez氏髓鞘染色法观察髓鞘改变.结果空白对照组大鼠均未出现症状,HE染色大脑白质及脊髓无炎性细胞浸润;Loyez氏染色未见髓鞘脱失;模型组临床症状发生率为87.5%,HE染色见大脑白质及脊髓血管周围有大量炎性细胞浸润;Loyez氏染色见部分脱髓鞘改变.结论用豚鼠脊髓髓鞘蛋白和福氏完全佐剂混合乳剂同时辅以左旋咪唑成功地诱导Wistar大鼠发生急性EAE.     

盐酸奥芬米洛对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴功能的影响

目的 观察盐酸奥芬米洛对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型大鼠的下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)功能的影响.方法 以1.0 mg/kg盐酸奥芬米洛治疗EAE Lewis大鼠和肾上腺切除的EAEWistar大鼠,检测各组EAE Lewis大鼠和肾上腺切除的EAE Wistar大鼠的皮质醇水平,同时观察肾上腺切除的EAE Wistar大鼠的神经症状和Th1,Th2分泌型细胞因子水平.结果 1.0 mg/kg盐酸奥芬米洛可显著提高肾上腺切除的EAE Wistar大鼠的血清皮质醇水平(P＜0.01),可显著降低Wistar大鼠血清γ-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)水平和IFN-γ/IL-4比值(P＜0.01).结论 盐酸奥芬米洛抑制EAE发生的作用途径可能是通过增强HPA轴的功能,提高大鼠皮质醇水平来抑制Th1分泌型细胞因子,从而调节Th1/Th2的失衡.     

银杏提取物对自身免疫性脑脊髓炎小鼠脱髓鞘免疫炎性病变的影响

目的探讨银杏提取物(GBE)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脱髓鞘免疫炎症病变的影响。方法将小鼠分为EAE模型组(腹腔注射生理盐水)和GBE组[腹腔注射GBE 70 mg/(kg.d)],应用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白33-55(MOG33-55)配以完全弗氏佐剂(CFA)免疫小鼠,诱发EAE模型。通过神经功能评分、免疫组化染色以及酶联免疫吸附实验(ELISA),观察GBE对EAE小鼠的影响。结果 GBE组小鼠发病潜伏期[(12.5±0.64)d]较EAE组[(10.7±0.47)d]显著延长(P<0.05),并且GBE组发病高峰期(CFA免疫后第21天)神经功能评分较EAE组显著降低(P<0.05)。海马伞矢状切片免疫组化染色结果证实GBE组CD4+T淋巴细胞较EAE组明显减少,仅可见CD4+T淋巴细胞散在分布。ELISA检测结果显示发病高峰期GBE组TNF-α含量较EAE组明显降低(P<0.05)。结论 GBE可能通过抑制CD4+T淋巴细胞激活、减少炎症介质释放,从而保护延缓EAE小鼠脱髓鞘病变进程。     

不同剂量MoG35-55对EAE小鼠p—JAK1、BDNF表达的影响

目的：比较不同剂量髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55（myelin oligodendrocyte glycoprotein 35-55,MOG35-55）多肽片段免疫诱导 C57BL/6小鼠实验性变态反应性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）其磷酸化酪氨酸蛋白激酶1（phospho-Janus kinase 1,p-JAK1）,脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）表达的变化。方法将 C57BL/6小鼠采用数字表法随机分为对照组、MOG35-5550μg（MOG-50）组和 MOG35-55200μg（MOG-200）组。 EAE 小鼠分别以每只动物50μg 或200μg MOG35-55的抗原皮下多点注射诱导造模,对照组乳剂中不含 MOG35-55。观察各组小鼠的发病率、病死率、体质量、神经功能评分的变化。并用 Western blotting 法检测酪氨酸蛋白激酶1（Janus kinase 1,JAK1）及 p-JAK1在皮质中的表达情况;免疫组织化学染色的方法检测 BDNF 在皮质中的表达情况。结果 MOG35-5550μg 和200μg 均能成功诱导 EAE 模型,并增强 p-JAK1的表达,减少 BDNF 的表达。其中 MOG-200组在体质量减轻、神经功能评分及 p-JAK1表达方面较 MOG-50组作用明显,且与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 MOG-200组 p-JAK1、BDNF 变化明显,可以作为研究药物干预作用的理想模型。