自制HYD液低温保存大鼠肝脏方法的改进

为探讨改进大鼠肝脏低渐保存方法对鼠肝的影响，即将切取后的鼠肝灌入一定量的自制保存液（ＨＹＤ）后结扎进出肝脏的各血管，应用大鼠离体肝灌注模型，地传统保存法（对照组）和改进保存法（２０％组，３０％组及４０％组）肝脏微循环指标（门静脉灌注压，流出液内内皮素－１，台盼蓝分布时间及组织学改变），流出液有关酶指标水平及分泌胆汁量进行了系统，结果：２０％组，３０％组及４０％组肝脏微循环指标及分泌胆汁量明显优于对     

HX—3液和UW液保存大鼠肝脏效果的比较

采用大鼠肝脏非循环离体灌注模型比较自制的ＨＸ－３液和ＵＷ液对大鼠肝脏的保存效果。实验结果显示，经ＨＸ－３液原位灌洗并保存４８小时的肝脏肝组织含水量正常，而同等条件下换用ＵＷ液，肝组织的含水量虽无明显变化，但都低于正常值；随着保存时间的延长，两组肝窦内皮细胞死亡率逐渐上升，但在２４小时以内两组肝窥内皮细胞死亡率的差异不显著．     

h DAF转基因猪在肝脏离体灌注实验中对超急性排斥反应的阻止作用

目的在离体肝脏灌注实验中,观察人衰变加速因子(hDAF)转基因猪对肝脏超急性排斥反应的阻止作用.方法全麻下分别分离出门静脉、肝上及肝下下腔静脉、腹主动脉,分别经腹主动脉和门静脉插管,用UW液对肝脏进行原位灌注,然后摘取肝脏置于4℃的冷容器中,冷缺血时间少于1 h;灌注中,血液经肝下下腔静脉流出,循经膜氧和器-热交换器,然后经门静脉返回肝脏,血流速度0.75～1     

hDAF转基因猪在肝脏离体灌注实验中对超急性排斥反应的防止作用

目的 在离体肝脏灌注实验中,观察人衰变加速因子（hDAF)转基因猪对肝脏超急性排斥反应的阻止作用。方法 全麻下分别分离出门静脉、肝上及肝下下腔静脉、腹主动脉,分别经腹主动脉和门静脉插管,用UW液对肝脏进行原位灌注,然后摘取肝脏置于4℃的冷容器中,冷缺血时间少于1h;灌注中,血液经肝下下腔静脉流出,循经膜氧和器一热交换器,然后经门静脉返回肝脏,血流速度0.75-1ml/克肝组织,共灌注16只猪,将其分为猪血灌注猪肝脏组（P-P组,n=6)、人血灌注猪肝脏组（H-P组,n=5)和人血灌注hDAF转基因猪肝脏组（H-hDAF组,n=5)。结果 经组织学检查,P-P组有正常的组织学结构;H-P组显示有明显的血管内皮细胞的损害、出血、血小板及纤维蛋白的沉积;H-hDAF组除1例有轻度的血管内皮损害和出血外,其余为基本正常的组织学结构。H-hDAF组在灌注过程中的胆汁产量,凝血功能及门脉压力的变化都明显好于H-P组。结论 hDAF的转基因猪对肝脏的超急性排斥反应有明显的阻止作用,这为将来临床应用hDAF的转基因猪肝脏做体外灌注支持治疗提供了理论支持。     

磷酸肌酸对离体大鼠肝脏冷保存的保护作用

目的探讨磷酸肌酸(CP)对大鼠离体肝脏冷保存的保护作用。方法建立大鼠肝脏单纯冷保存离体灌注模型,对照组予单纯威斯康星大学保存液(UW液)灌注肝脏,低剂量组以UW液为基液加入1 g/100 ml CP灌注肝脏,中剂量组以UW液为基液加入2 g/100 ml CP灌注肝脏;高剂量组以UW液为基液加入3 g/100 ml CP灌注肝脏。各组大鼠肝脏分别于4℃相应灌注液中冷保存后0、6、12、18、24 h共5个时间点,分别检测肝下下腔静脉内保存液的丙氨酸转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)含量,检测肝脏组织丙二醛(MDA)含量、髓过氧化物酶(MPO)活性,观察肝脏组织肝细胞的凋亡指数(AI)和肝脏组织核因子-κB阳性表达率,光学显微镜下观察肝脏组织的病理学变化。结果低、中、高剂量组大鼠肝脏在冷保存12 h后,ALT及LDH含量均低于对照组(均为P0.05);冷保存18 h后低、中、高剂量组大鼠肝脏组织的MDA、MPO含量均低于对照组(均为P0.05);在冷保存12 h及18 h时,低、中、高剂量组大鼠肝脏的肝细胞AI及核因子-κB阳性表达率均低于对照组(均为P0.05);冷保存24 h后,高剂量组保存液的ALT、MDA含量均明显高于对照组及低、中剂量组(均为P0.05)。病理检查结果显示,高、中、低剂量组大鼠肝脏的损伤明显轻于对照组,各剂量组之间比较无明显差别。结论在UW液中加入CP对大鼠离体肝脏冷保存有较好的保护作用,优于单纯应用UW液保存。     

大鼠自体肝移植中三种不同肝脏灌注方法的比较

目的比较三种不同的肝脏冷灌注方法的灌注效果。方法建立大鼠自体肝移植模型60例,通过不同的冷灌注方法(A经门静脉灌注法、B经腹主动脉灌注法、C经门静脉和腹主动脉同时灌注法),比较其灌注效果、术后存活情况和手术时间。结果A法灌注后光镜下可见小叶间动脉红细胞残存;B法、C法灌注后小叶间动脉、静脉均未见红细胞残留。各组手术时间分别为(50±3.0)min,(53±4.0)min,(58±3.5)min;术后存活率分别为95%(19/20),90%(18/20),80%(16/20)。结论B法是三种不同冷灌注方法中相对既简单又彻底的一种,对大鼠自体(或异体)肝移植冷灌注可优先选用;但对于非吻合肝动脉及与肝动脉无关的研究也可选用A法灌注;而C法并非必需。     

缺血预处理对大鼠移植肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的　探讨缺血预处理 (ischemicpreconditioning ,IP)对大鼠移植肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。 方法　采用SD大鼠原位肝移植动物模型 ,供肝冷保存时间 10 0min ,无肝期 2 5min。 64只SD大鼠随机均分成两组 :对照组 ,获取供肝前仅以肝素生理盐水经门静脉灌注 ;IP组 ,获取供肝前阻断肝门血供 10min ,再灌注 10min ,然后再以肝素生理盐水经门静脉灌注。每组受体的一半 (n =8)用于观察存活率 ,另一半 (n =8)用于移植肝脏再灌注 2h后取血及肝脏检测。结果　IP组的 1w存活率、胆汁分泌量、抗氧化酶活力、血清NO水平均明显高于对照组 (P<0 .0 5 ) ,血清ALT、AST、LDH、TNF及肝组织中的过氧化产物含量均明显低于对照组 (P<0 .0 5 ) ,组织的病理改变也轻于对照组。结论　IP能够提高血清NO水平 ,降低血清TNF含量 ,对大鼠移植肝脏的缺血再灌注损伤具有保护作用     

活体/离体门静脉灌注转染IRAK-4-shRNA对大鼠移植肝脏再灌注损伤的影响

目的通过观察活体或冷保存期离体门静脉灌注供肝转染白细胞介素-1受体相关激酶-4（IRAK-4）特异短发夹RNA（shRNA）对再灌注后受体TNF-α产生的影响,判断以IRAK-4为肝移植缺血再灌注损害（I/RI）治疗靶点的可行性并探索可行的shRNA治疗途径.方法雄性SD大鼠,随机分为冷缺血转染组、活体转染组、对照组,以两袖套法建立同种异体肝移植模型.冷缺血转染组于冷缺血期经门静脉灌注转染携带染IRAK-4-shRNA的转染质粒pSIIRAK-4;活体转染组在门静脉袖套吻合完成后,经门静脉分支注入pSIIRAK-4;对照组不予任何处理.按门静脉血流恢复后第0 min、60 min及180 min分为三个亚组,逆转录-聚合酶链式反应及蛋白免疫印记法测定肝组织的染IRAK-4 mRNA和蛋白表达水平;酶连免疫吸附法检测肝组织NF-κB活性及血清TNF-α含量.结果再灌注后活体转染组、对照组的IRAK-4蛋白与mRNA表达水平、NF-κB活性以及TNF-α含量均高于冷缺血转染组（P＜0.01）;冷缺血转染组的IRAK-4表达明显抑制,再灌注后各时点差异无显著性（P＞0.05）.结论以IRAK-4为靶点的冷缺血shRNAs转染途径能有效减轻肝移植时的I/RI,但能否以IRAK-4作为预防其他器官的I/RI的治疗靶点尚需深入研究.     

应用次优供肝的肝脏移植：供肝切取技术的影响

D＇Amico F，Vitale A，GringeriE等纳入15例患者采用随机对照试验，检验了供肝切取技术对于次优供体肝脏移植术后结局的影响。他们比较了改良双重灌注（MDP）技术（压脉器夹闭脾静脉和肠系膜静脉的流入血流，经腹主动脉和门静脉冷灌注）和单纯腹主动脉灌注（SAP）技术。该研究表明，当应用MDP技术切除供肝的时候，     

FK506对肝脏保存再灌注中ICAM-1 mRNA表达的影响

本研究建立离体大鼠肝脏保存再灌注模型 ,观察肝脏保存再灌注中细胞间粘附分子 1(ＩＣＡＭ 1)ｍＲＮＡ表达变化和ＦＫ5 0 6的作用。材料和方法一、动物模型及分组健康Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠 5 4只 ,体重 2 0 0～ 2 5 0ｇ ,随机分为9组 ,每组 6只。于下腔静脉注入肝素 5 0Ｕ ,游离门静脉 ,胆总管 ,肝上、下腔静脉 ,分别插管 ,右肾静脉平面结扎 ,切断肝下下腔静脉 ,经门静脉原位灌注 1℃乳酸林格液 2 0ｍｌ,迅速切除肝脏。正常组 :(保存 0ｈ组 ,6只 )切除肝脏后立即与灌注系统连接 ,行离体鼠肝循环再灌注 ,灌注液为自制ＫＨＢ平衡液 ,加入新鲜…     

小鼠肝移植中两种肝动脉重建方法的比较

目的比较小鼠肝移植中两种不同肝动脉重建方法的效果。方法应用雄性C57BL/6小鼠建立小鼠肝脏移植模型,随机分为肠系膜上动脉重建组（14对）和腹主动脉重建组（16对）。手术采用异氟醚吸入麻醉。供肝经门静脉灌注4℃威斯康星大学保存液（UW液）。两组小鼠的肝动脉重建分别采用供体肠系膜上动脉或供体肾下腹主动脉与受体腹主动脉端侧吻合两种方法。移植肝血流恢复后重建肝动脉。胆管采用内支架管的方法重建。观察术后2周移植物的存活情况和肝动脉通畅与否。用组织病理学方法检查移植肝的组织形态变化,用免疫组织化学法观察肝脏再生功能。结果术中无小鼠死亡,手术成功率为100%。肠系膜上动脉重建组供体肝动脉游离时间为（12.1±2.5）min,腹主动脉重建组为（17.3±3.1）min,比较差异有统计学意义（P〈0.05）。腹主动脉重建组肝动脉吻合时间为（14.5±2.9）min,肠系膜上动脉重建组相应为（12.4±3.3）min,比较差异无统计学意义（P〉0.05）。肠系膜上动脉重建组移植物术后2周存活率为93%（1只死于吻合口血栓形成）,腹主动脉重建组为100%。肠系膜上动脉重建组术后2周肝动脉通畅率为86%,腹主动脉重建组为100%。组织病理学检查示两组的移植肝组织正常,肝脏再生反应不明显。结论小鼠肝移植中,与应用肠系膜上动脉重建比较,应用腹主动脉吻合重建肝动脉的效果更好且安全,建议首选供受体腹主动脉吻合重建小鼠肝动脉的方法。     

小鼠肝动脉重建对长时间冷保存移植肝存活率的影响

目的研究小鼠肝动脉重建(hepatic arterial reconstruction,HAR)对长时间冷保存移植肝存活率的影响。方法同系雄性C57BL/6小鼠68只,分为冷保存时间(cold preservation time,CPT)1 h组、CPT4 h组、CPT8 h组、CPT16 h组、CPT16 h+HAR组(供、受体小鼠各一半)。小鼠供肝经门静脉灌注4℃UW液后保存。肝脏移植采用缝合法(肝上下腔静脉)和袖套法(门静脉、肝下下腔静脉)吻合,胆管采用内支架管重建法。小鼠HAR采用含供体肝动脉的腹主动脉与受体腹主动脉端侧吻合的方法。观察术后5组受体小鼠移植肝的存活时间,用组织学检查肝细胞损伤情况,用免疫组织化学法观察肝细胞再生功能。结果 CPT1 h、4 h、8 h组受体术后12 d移植物的存活率分别为7/7、10/10、9/9。CPT16 h组除1例小鼠存活外,其余均在移植术后36 h内死亡,存活率为10%(1/10),CPT16 h+HAR组受体90%(9/10)存活,两组存活率相比,差异有统计学意义(P0.01)。CPT1 h、4 h组的移植物组织损伤程度轻,CPT8 h组的移植物组织损伤程度较前两组严重,但肝细胞再生活跃。CRT16 h组的移植肝组织表现为广泛肝细胞空泡变性、坏死,肝细胞再生不明显。CPT16 h+HAR组仅有轻度的肝窦淤血,肝细胞空泡变性、坏死改变,肝细胞再生活跃。结论 HAR可提高长时间冷保存移植肝的存活率。     

入肝门静脉动脉化对大鼠肝脏损害的初步研究

目的：初步研究入肝门静脉完全动脉化加门腔分流术对大鼠肝脏的损害程度。方法100只肝硬化造模大鼠随机分为A组（n=40）,入肝门静脉完全动脉化（PVA）＋门腔分流（PCS）;B组（n=40）,仅行门腔完全分流;C组（n=20）,门静脉阻断30 min＋右肾切除。分别将各组大鼠术前和术后1、2、4、8周的肝组织切片行肝细胞诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）免疫组织化学染色,然后进行图像分析。各取8只正常大鼠,分别于PVA术前及术后4、8周行肝组织切片,马松染色后分析正常大鼠PVA手术前后肝脏纤维增生情况。结果（1）A组2只（5%）大鼠肝脏切片中常规HE染色可见汇管区明显扩张,小叶间静脉内径显著扩张,静脉壁增厚明显,壁内可见红染的纤维增生。（2）大鼠刚完成肝硬化造模时,肝细胞胞质的iNOS表达至峰值,3组平均IOD达600583±32828;3组大鼠术后均较术前有明显下降,差异有统计学意义（P＜0.01）;术后4周内, A组仍明显高于B、C两组,差异有统计学意义（P＜0.01）;至术后8周时,3组iNOS表达差异无统计学意义。（3）正常大鼠肝间质胶原纤维染色在术前及术后4、8周的总累积光密度值差异无统计学意义。结论术后8周内,PVA不会导致正常大鼠肝间质纤维化增加,可使部分肝硬化大鼠汇管区及小叶间静脉壁纤维化;PVA对肝细胞的损害主要集中在术后4周内,待肝脏对新的血流动力学改变及其相应的影响达到稳态后,PVA对肝脏的损害则不明显。     

大鼠自体原位肝移植逆灌注法对急性肺损伤的影响

目的探讨大鼠自体原位肝移植术中经下腔静脉逆灌注与经门静脉顺灌注法对急性肺损伤的影响。方法SD大鼠24只随机分成逆灌注组、顺灌注组、假手术组,分别建立大鼠自体原位肝移植逆灌注、顺灌注和假手术模型,检测3组术后6h腹主动脉血气、肺髓过氧化物酶活性、肺干湿重比值及肺组织病理形态学变化。结果与假手术组比较,逆灌注组、顺灌注组的动脉血pH值、PaO2、肺干湿重比值明显降低,肺髓过氧化物酶活性显著增高,差异均有统计学意义（P〈0．05）。与顺灌注组比较,逆灌注组动脉血pH值、PaO2、肺干湿重比值升高,肺髓过氧化物酶活性降低,差异有统计学意义（P〈0．05）。逆灌注组、顺灌注组术后肺组织均存在急性损伤病理表现,逆灌注组损伤程度有所减轻。结论大鼠自体原位肝移植逆灌注法、顺灌注法后均存在急性肺损伤,逆灌注法较顺灌注法损伤程度要轻。     

门脉建立侧袖式大鼠肝/小肠整块联合移植模型

目的 建立大鼠肝、小肠整块联合移植模型.方法 用Wistar大鼠行同种异体肝、小肠整块联合移植.肝肠联合移植整块切取移植物时,保留门静脉完整性,利用供体腹段下腔静脉在门静脉侧壁上建立一侧袖,并安置套管.然后按kamada二套管法行原位肝移植,动脉重建通过供体腹主动脉与受体腹主动脉行端侧吻合以建立肠系膜上动脉及肝固有动脉血供.回肠末端在右下腹造瘘.结果 手术成功率为86%,动物平均存活时间大于30 d.病理组织学检查发现移植肝和小肠结构正常.结论 用门脉建立袖套式血管吻合技术施行大鼠肝、小肠整块联合移植模型是可行的.     

Microvasculature of small liver metastases in rats

Neovascularization is important in the development of liver metastasis. We sought to define the origin and fine structure of the blood supply of small experimental liver metastases in rats using an injection replica method. Liver metastases were produced by intraportal inoculation of ascitic fluid containing AH60C hepatoma cells in male Donryu rats (n = 40). Intrahepatic microvasculature was studied by scanning electron microscopy and by stereomicroscopy of microvascular casts produced by perfusion via the abdominal aorta or portal vein 7 days following tumor inoculation. Intrahepatic microvasculature in rats without liver metastases (n = 10) also was studied by scanning electron microscopy. In the normal liver, branches of the hepatic artery typically terminated in the peribiliary plexus and less frequently led to sinusoids and terminal portal veins. In 69 metastatic tumors ranging from 269 to 1875 microm in diameter, arterially perfused metastatic tumors larger than 300 microm showed newly developed neovascularization. Portally perfusion of metastatic tumors did not visualize neovascularization irrespective of tumor size. At the periphery of metastases, tumor vessels disclosed by arterial perfusion most often communicated with the peribiliary plexus and less frequently with terminal arterioles. Metastatic liver tumors as small as 300 microm in diameter receive their main blood supply from the hepatic artery but not from the portal vein, and tumor vessels more often are derived from the arterially filled peribiliary plexus rather than from terminal arterioles.     

门静脉动脉化加门腔分流对肝硬化大鼠肝储备功能的影响

目的研究入肝门静脉动脉化加门腔分流术对肝硬化大鼠肝脏储备功能的影响。方法 100只肝硬化大鼠随机分为A组（n=40）,入肝门静脉完全动脉化＋门腔分流;B组（n=40）,仅行门腔完全分流;C组（n=20）,门静脉阻断30min＋右肾切除。分别检测术前和各组大鼠术后1周、2周、4周及8周动脉血酮比（AKBR）及吲哚氰氯15min潴留率（ICGR15）。结果术后A组大鼠的AKBR较术前及B、C两组均有明显升高,差异有明显统计学意义（P〈0.01）,并于术后2周,可达到稳态;术后A组大鼠ICGR15较术前及B、C两组明显降低,差异也有统计学意义（P〈0.01）,并于术后2周可达到稳态。结论入肝门静脉动脉化能明显促进肝硬化大鼠肝脏储备功能恢复,有助于预防门腔分流术后肝衰竭。     

大鼠供肝质量的快速评价方法

目的 探讨供肝质量的快速评价方法。方法 建立大鼠酒精性肝病模型,然后取不同时期的大鼠肝组织做快速石蜡切片、普通石蜡切片和冰冻切片,观察病理改变,并行病理学综合评分,同时对肝脏进行门静脉灌洗,监测灌洗时门静脉压力及流量。结果 实验组病理学综合评分随实验时间的延长逐渐增高;快速石蜡切片的病理学综合评分与普通石蜡切片比较,差异无显著性（Ｐ〉０．０５）;实验组大鼠在恒定流量进行门静脉灌洗时,门静脉压力升高     

Ghrelin对大鼠离体胰腺胰岛素分泌及Glut-2蛋白表达的影响

目的探讨Ghrelin对大鼠离体胰腺组织胰岛素分泌及葡萄糖转运蛋白-2（Glut-2）表达的影响。方法将25只Wistar大鼠随机分为正常对照组（NC组）、高糖组（HCG组）、高糖＋高浓度Ghrelin（10-8mol/L）组（HCG＋HCGh组）、高糖＋中浓度Ghrelin（10-9mol/L）组（HCG＋MCGh组）及高糖＋低浓度Ghrelin（10-10mol/L）组（HCG＋LCGh组）,每组5只。建立大鼠离体胰腺灌注模型,经腹主动脉远端相应灌注低糖（5.5 mmol/L）、单纯高糖（33.3 mmol/L）溶液或加入上述不同浓度Ghrelin的高糖（33.3 mmol/L）溶液。采用ELISA法测定门静脉流出液的胰岛素水平,采用免疫组化染色方法半定量测定Glut-2蛋白在离体胰腺组织中的表达水平,采用透射电镜观察胰岛β细胞的超微结构改变。结果 5组大鼠的空腹血浆葡萄糖（FBG）、空腹血浆胰岛素（FINS）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）及胰岛素分泌指数（HOMA-β）比较差异均无统计学意义（P〉0.05）。用低糖溶液灌注时,5组大鼠门静脉流出液的胰岛素水平比较差异无统计学意义（P〉0.05）;而用高糖溶液灌注后,胰岛素的分泌在3 min和10～12 min时出现了2个高峰（以HCG＋HCGh组最高）。NC组大鼠胰岛β细胞Glut-2蛋白的平均光密度值高于其余4组（P〈0.05）。透射电镜观察结果显示,高糖各组大鼠离体胰腺的凋亡征象较NC组严重,但HCG＋HCGh组的细胞器损害程度较HCG＋MCGh组及HCG＋LCGh组轻。结论在大鼠离体胰腺中,Ghrelin可促进高浓度葡萄糖诱导的胰岛素分泌,对胰岛β细胞起保护作用。     

犬改良背驮式肝移植供肝获取的技术细节

目的介绍犬改良原位背驮式肝移植供肝获取的技术细节。方法回顾性总结24只（包括4只预实验）犬改良原位背驮式肝移植供肝获取的技术细节。结果供肝切除时间平均32（28-36）min,修肝时间平均64（54-70）min。其中,门静脉灌注时间平均11（10-13）min,供肝热缺血时间0 min,冷缺血时间（直至复流前）平均180（152-224）min。获得无肝素的动脉全血300（180-350）ml。病理检查结果：肝细胞轻度水肿,其余无异常。供肝植入10 min后16只即有胆汁分泌,新肝功能良好。结论程序化、标准化获取供肝是犬肝移植获得成功的重要条件,也是保证实验结果可靠、一致的前提。