激动剂诱导的阿片受体内吞和分选机制

激动剂持续作用所导致的阿片受体内吞和信号失敏是机体对阿片类药物产生耐受重要分子机制，但其内吞的分子机制和内吞后受体的分选途径不清楚。我们实验室以前的研究工作确定了GRK在激动剂诱导的阿片受体磷酸化中的作用并阐述了其分子机制（Mol．Pharmacol．2000，58：1050—1056；J．Biol．Chem．2001，276：4709—4716；J．Biol．Chem．2003，278：30219—30226）。本研究在此基础上以delta阿片受体（DOR）为模型探讨了受体磷酸化和内吞的关系，受体内吞的分子机制及细胞对受体内吞后去向的调控机制，取得如下结果：     

μ阿片受体的内吞抑制吗啡耐受的形成

阿片类药物是至今最有效的镇痛药,但是长期应用会产生药物耐受,大大限制了其临床应用。μ阿片受体和特定的激动剂结合后会出现内吞。研究发现,μ阿片受体是否内吞与耐受的发生有密切关系;加强μ阿片受体的内吞能够抑制受体耐受。不同的激动剂导致μ阿片受体内吞的能力是不同的;其导致耐受的能力和导致内吞的能力呈负相关。激动剂越容易引起μ受体内吞,就越不容易产生吗啡耐受。内吞的作用在于能抑制过度刺激μ受体而导致的环腺苷酸(cyclicadenosine monophosphate,cAMP)等兴奋性信号通路的激活,而内吞的μ受体也会很快回到细胞膜上,恢复和阿片类药物结合后激活抑制性GTP结合蛋白的能力。因此,对受体的内吞和其后迁移过程展开研究,可能为慢性疼痛的治疗找到新的路径。     

阿片受体脱敏作用中G蛋白偶联受体激酶和arrestin的研究进展

临床上,许多病人使用阿片类药物来缓解疼痛,但由于反复或长期使用导致的耐受和依赖而限制其应用。长期使用阿片受体激动剂会导致受体本身适应性变化,称为阿片受体的脱敏(desensitization),包括受体与G蛋白脱偶联、受体内吞和下调[1]。阿片受体的脱敏是其信号途径调节的重要机制,与耐受的形成密切相关。越来越多的研究显示,G蛋白偶联受体激酶(G protein coupled receptor kinases,GRKs)所介导的受体磷酸化,以及β-arrestin的结合与阿片受体脱敏之间具有密切关系,提示了GRKs和arrestin在调节阿片受体脱敏中具有关键性作用。本文综述了GRK…     

蛋白激酶在阿片受体脱敏中的作用

阿片类镇痛药耐受性在受体水平的变化包括：受体下调、内吞和G蛋白脱偶联。在阿片受体的信号转导过程中，蛋白激酶(PKA，PKC，CaMKⅡ，GRK和MAPK)对阿片类镇痛药的耐受性、依赖性及阿片受体与谷氨酸受体之间的相互作用等方面起作用。本文综述了蛋白激酶在阿片受体脱敏中的作用。     

κ阿片受体介导的降血压作用

目的观察κ阿片受体激动剂U50488H对大鼠血压的影响并探讨其作用机制。方法监测正常大鼠心率(HR)、动脉压(ABP)、左心室内压(LVP)及左室的收缩(+dp/dtm ax)和舒张功能(-dp/dtm ax)等血流动力学指标和尿量的变化;分离正常大鼠腹主动脉,测定血管张力的变化。结果在整体水平,静脉注射U50488H可降低大鼠HR、ABP、LVP及±dp/dtm ax;而且可增加大鼠的尿量。在离体水平,U50488H对大鼠腹主动脉具有明显的剂量依赖性舒张作用;以上效应均可被选择性κ阿片受体阻断剂nor-BNI所阻断。结论激动κ阿片受体可引起降压作用,抑制心肌收缩力、舒张血管和利尿是其降压的主要机制。     

TGF-β Ⅲ型受体介导的信号通路及其在纤维化疾病中的作用

转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)在细胞的自我调控包括细胞增殖、分化、凋亡、胚胎发育、免疫监督、血管再生等过程中发挥重要作用。TGF-βⅢ型受体(TβRⅢ)是TGF-β超家族的辅助受体之一,TβRⅢ不仅能介导TGF-β超家族配体依赖的Smad经典通路,还可以介导非Smad依赖的信号通路,参与调控细胞的多种信号通路,在纤维化、肿瘤、心血管系统等疾病中发挥重要作用。该文就TβRⅢ参与的信号通路及其在纤维化疾病中的作用作一综述。     

β-arrestin在TLR-IL-1R系统中的角色

1 Arretins家族和LR-IL-1R系统 Arretins家族是一组与G蛋白偶联受体激酶（Gprotein-coupled recptor kinase,GRK）联合作用造成受体脱敏的可溶性蛋白,对细胞内的信号转导起抑制作用。其家族至少包括6个成员,     

阿片受体介导脑缺血耐受的基础研究进展

自1973年发现阿片受体后，人们主要针对其镇痛作用作了大量研究。然而随着研究的深入．有结果证明阿片受体有脑保护作用，参与介导脑缺血缺氧耐受。现将阿片受体介导脑缺血耐受的基础研究做简单综述。     

心肌肥厚对κ阿片受体介导的信号通路受损

目的：分离正常及慢性缺氧性右心肥厚的心室肌细胞,观察细胞内[Ca^2 ]i及细胞内pHi对心肌κ－阿片受体激动后的反应。方法：以fura-2和BCECF分别为[Ca^2 ]i和pHi的指示剂,用光谱荧光法测定电刺激引起的细胞内[Ca^2 ]i瞬变及pHi。结果：κ阿片受体选择性激动剂U50,488H可降低电刺激引起的[Ca^2 ]i瞬变和增加pHi,该作用是由蛋白激酶C（PKC）所介导。在肥厚的心室肌细胞,U50,488H的上述作用显著减弱。与此相对应,PKC的激动剂PMA引起的[Ca^2 ]i瞬变降低和pHi的增加作用在肥厚的心室肌细胞亦消失。用NH4C1法观察Na^ -H^ 交我器的功能显示其在肥厚的心室肌细胞无明显改变。结论：心肌肥厚时κ－阿片受体介导的信号通路受损,受损部位发生在PKC与效应器之间。     

阿片受体与丝裂原活化蛋白激酶信号交联及其对阿片耐受与依赖的影响

中枢神经系统主要存在 μ、δ、κ阿片受体以及新发现的阿片受体样 - 1(ORL - 1)受体。阿片受体急性激活时激活Gi o蛋白 ,三磷酸鸟苷 (GTP)置换Gα结合的三磷酸鸟苷 (GDP)后 ,Gα与 βγ亚单位解离 ,它们分别作用于下游多个效应分子 ,可调节腺苷酸环化酶和磷酯酶C(PLC)的活性 ,激活K +通道 ,抑制Ca2 + 通道并增加胞内Ca2 + 浓度。阿片长期作用于机体后可产生严重的耐受和依赖 ,伴随有神经系统细胞和分子水平的功能以及基因表达的改变[1] 。1996年LiLY等报道了激活阿片受体可将丝裂原活化蛋白激酶 (mitogen -activatedproteinkinase…     

吗啡依赖的μ-受体跨膜信号转导机制的研究进展

吗啡等阿片类物质 ,主要通过作用于大脑中的μ-阿片受体 ,影响中枢和周围神经系统而发挥镇痛等生物学效应。阿片受体属于Ｇ -蛋白偶联受体超家族 (ＧＰＣＲｓ)的成员之一 ,具有７个跨膜螺旋片段 ,它主要依靠抑制性Ｇ -蛋白的介导调控细胞内第二信使系统而发挥其作用。当持续给予吗啡处理时 ,常常会产生吗啡镇痛作用的耐受。在细胞水平 ,吗啡耐受被认为是持续药物处理后 ,神经元膜上的阿片受体处于持续脱敏状态 ,从而影响跨膜信号转导的多个环节。近年来 ,持续暴露于吗啡的神经元的许多功能改变已经引起人们的广泛注意。持续吗啡暴露后发生 …     

NO-cGMP信号转导系统的上调参与阿片类药物耐受和戒断的生化机制

目的　观察阿片激动剂长时程作用对NO-cGMP信号转导系统的影响。方法　选用iNOS cDNA稳定表达的NG-LNCXiNOS细胞,采用NOS活性和cGMP放免测定,Western杂交和NADPH黄递酶组化染色技术。结果阿片类药物长时程作用剂量依赖性增高胞浆相iNOS活性和胞内cGMP含量,药物作用强弱顺序是DPDPE> DADLE>吗啡,EC₅₀都在nmol.L^-1数量级。用纳洛酮急性戒断阿片耐受细胞,造成酶活性和cGMP水平增加更显著。DPDPE长时程作用还引起iNOS基因表达增强和NADPH黄递酶染色阳性细胞增多。结论　提示NO-cGMP信号转导系统上调可能是阿片耐受和成瘾的重要生化改变。     

OPIOID RECEPTOR SIGNALLING MECHANISMS

1. Three pharmacological types of opioid receptors, mu, delta and kappa, and their corresponding genes have been identified. Although other types of opioid receptors have been suggested, their existence has not been established unequivocally. A fourth opioid receptor, ORL1, which is genetically closely related to the others, has also been isolated. ORL1 responds to the endogenous agonist nociceptin (orphanin FQ) and displays a pharmacological profile that differs greatly from mu, delta and kappa receptors. 2. All opioid receptors mediate many of their cellular effects via activation of heterotrimeric G-proteins. The mu, delta and kappa receptors are all capable of interacting with the pertussis toxin-sensitive G-protein alpha-subunits Gi1, Gi2, Gi3, Go1, Go2 and the pertussis toxin-insensitive Gz and G16. None of the opioid receptors interacts substantially with Gs and mu receptors do not activate Gq, G11, G12, G13, or G14. 3. Differential coupling of different opioid receptors to most types of G-proteins is marginal. The mu, delta and kappa receptors appear to preferentially activate Go and Gi2 over other pertussis toxin-sensitive G-proteins, although there is evidence that mu receptors show some preference for Gi3. delta Receptors couple more efficiently to G16 than do mu or kappa receptors. 4. There is some evidence that opioid receptors, particularly mu and ORL1 receptors, can also couple to cellular effectors in a G-protein-independent manner. 5. In general, the consequences of activation of any of the opioid receptors in a given cell type depend more on the profile (stoichiometry) of the G-proteins and effectors expressed than on the type of opioid receptor present in the cell. Notions that different types of opioid receptors intrinsically couple preferentially to one type of effector rather than another should, therefore, be discarded.     

SEPARATION OF OPIOID PEPTIDES UTILIZING HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY

Chromatographic procedures have been developed for resolving all of the known enkephalins and endorphins on a single column. The effect of eluant pH on the retention times and separation of the enkephalins and β-endorphin was determined. By combining these separations with a sensitive radioreceptor assay it is possible to assay all of the opioid peptides in the pituitary gland or in various regions of the brain from individual small laboratory animals.     

阿片δ受体拮抗剂Naltrindole对免疫排异反应的抑制作用

目的：观察选择性阿片δ受体拮抗剂纳曲酮(naltrexone)对移植排异反应的影响。方法：整体实验以小鼠异体异位心肌组织移植为模型, ip naltrindole或纳曲酮(5 mg.kg^-1, bid), 观察移植心肌组织的存活时间;离体实验中,将两种不同品系小鼠淋巴细胞混合培养,观察naltrindole、 纳曲酮或亮脑啡肽对淋巴细胞反应的影响。结果：Naltrindole可显著延长小鼠异体异位移植心肌组织的存活时间；并明显抑制混合淋巴细胞反应。 Naltrindole的上述作用均较纳曲酮强。阿片δ受体激动剂亮脑啡肽（D-Ser²-Lue-enkephalin）可以促进混合淋巴细胞反应。结论：阿片δ受体在移植免疫排异反应中起重要介导作用, naltrindole对此移植排异反应有明显抑制作用。     

大鼠蛛网膜下腔联合注射kappa受体激动剂和NMDA受体拮抗剂协同镇痛

以大鼠热辐射甩尾潜伏期为测痛指标，蛛网膜下腔（ｉｔ）联合注射非镇痛剂量的ｋａｐｐａ阿片受体激动剂强啡肽（ｄｙｎｏｒｐｈｉｎ，Ｄｙｎ）Ａ－（１－１３）５ｎｍｏｌ或Ｕ５０４８８Ｈ（ｔｒａｎｓ－（±）－３，４－ｄｉｃｈｌｏｒｏ－Ｎ－ｍｅｔｈｙｌ－［２－（１－ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｙｌ）－ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌ］－ｂｅｎｚｅｎｅａｃｅｔａｍｉｄｅ）１００ｎｍｏｌ和Ｎ－ｍｅｔｈｙｌ－Ｄ－ａｓｐａｒｔａｔｅ（ＮＭＤＡ）受体拮抗剂ＤＬ－２－ａｍｉｎｏ－５－ｐｈｏｓｐｈｏｎｏｖａｌｅｒｉｃａｃｉｄ（ＡＰｖ）１０ｎｍｏｌ或ｋｙｎｕｒｅｎｉｃａｃｉｄ（ＫＹＮ）５０ｎｍｏｌ有显著的协同镇痛效应，其效应与ＮＭＤＡ受体拮抗剂呈一定量效关系。Ｋａｐｐａ阿片受体特异性拮抗剂ｎｏｒ－ｂｉｎａｌｔｏｒｐｈｉ－ｍｉｎｅ（ｎｏｒ－ＢＮＩ）１５ｎｍｏｌｉｔ可完全翻转ＤｙｎＡ－（１－１３）５ｎｍｏｌ和ＡＰｖ１０ｎｍｏｌ及Ｕ５０４８８Ｈ１００ｎｍｏｌ和ＫＹＮ５０ｎｍｏｌ的协同镇痛。说明协同作用是通过ｋａｐｐａ受体和谷氨酸能神经元之间的相互作用实现的。     

咪唑啉受体及其对阿片药理作用的调节机制

用稳定转染咪唑啉1型受体(I1R)的细胞(CHO-I1),对I1R信号转导途径进行了初步研究。首次直接证实I1R的信号转导途径与活化PC-PLC继而产生DAG,其后引起丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)酶促级联反应过程有关。采用共同稳定表达μ阿片受体(MOR)和I1R的CHO细胞表达系统(CHO-μ/I1细胞),对I1R在受体后水平抑制吗啡依赖的可能分子机制进行了研究。首次提供了胍丁胺通过作用于I1R而抑制吗啡依赖的直接实验证据,其分子机制可能主要是胍丁胺激活I1R抑制吗啡慢性处理时cAMP通路和Ca2+信号通路代偿性适应而抑制吗啡依赖的形成。     

酪氨酸激酶受体的信号转导途径与肿瘤治疗

许多肿瘤中可见不同酪氨酸激酶受体的过度表达或过度激活 ,如上皮细胞肿瘤中常见ＥＧＦＲ家族受体的过度表达 ,胶质瘤中常见ＰＤＧＦＲ家族受体的过度表达等。这些受体或生长因子的过度表达导致受体的过度激活 ,从而导致其下游信号途径的激活 ,最终导致细胞的转化、增殖和抵抗细胞凋亡、促进细胞生存 ,与肿瘤的发生、发展密切相关。因此 ,许多学者致力于从阻断酪氨酸激酶受体信号转导途径角度来研究新的抗肿瘤药物 ,并已取得巨大突破 ,如针对ＨＥＲ2受体人源化的抗体ＨｅｒｃｅｐｔｉｎＴＭ 已被美国ＦＤＡ批准用于ＨＥＲ2过表达的乳腺癌的…     

海洛因依赖临床特征与μ阿片受体基因多态的关联

目的 :探讨 μ阿片受体 (OPRM1)基因多态与海洛因依赖及其临床特征的相关性。 方法 :采用病例对照设计 ,分别检测2 0 2名海洛因依赖患者和 187名正常对照OPRM1基因A118G位点和C17T位点多态 ,分析该多态性与海洛因依赖及其临床特征的相关性。结果 :未发现C17T位点的多态性 ;A118G位点多态在病例组和对照组间的差异无显著性 ;A118G位点多态与海洛因依赖患者的临床特征无显著性相关。结论 :OPRM1基因A118G位点多态与海洛因依赖无显著性相关。