抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体的制备及其鉴定

目的制备抗呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）的单克隆抗体，并对其特性进行系统地鉴定。方法以活的ＲＳＶＬｏｎｇ株滴鼻（ＴＣＩＤ５０为１×１０－６，取１００ＴＣＩＤ５００１２５ｍｌ进行）加ＲＳＶ感染Ｈｅｐ２细胞（ＣＰＥ达～）腹腔注射免疫Ｂａｌｂ／ｃ鼠，用细胞融合技术制备能稳定分泌抗ＲＳＶ的单克隆抗体细胞株。结果细胞融合一次成功，融合率为９６％，抗ＲＳＶ抗体阳性孔率为６５％。鉴定１株杂交瘤细胞Ｆ３株，染色体数为９８条，抗体亚类属ＩｇＧ１，对ＲＳＶ抗原特异；在无补体存在的情况下其腹水抗体中和效价为１∶１２８，且具融合抑制活性，腹水融合抑制效价为１∶６４。结论Ｆ３株单克隆抗体为抗ＲＳＶＦ蛋白的ＭｃＡｂ。     

增殖性玻璃体视网膜病变的药物体外筛选试验

目的：研究４种药物对体外成纤维细胞培养的增殖抑制作用及有效浓度。方法：对传代培养的成纤维细胞经一定浓度的柔红霉素、阿霉素、地塞米松、５－ＦＵ培养４８ｈ后，观察细胞生长情况，并分别求得对兔皮肤成纤维细胞的半数抑制浓度（ＩＤ５０）。结果：柔红霉素、阿霉素对体外成纤维细胞的增殖均有显著抑制作用，呈浓度依赖性改变；地塞米松和５－ＦＵ的抑制作用相对较弱，但地塞米松分别与其他３种药物的半数抑制浓度合用后的效果，比单用上述４种药物的抑制作用明显增强。结论：柔红霉素、阿霉素能有效抑制体外兔成纤维细胞，并提示与地塞米松合用可能成为有价值的防治增殖性玻璃体视网膜病变（ＰＶＲ）的用药方式     

非霍奇金淋巴瘤中EB病毒BNLF_1片段及其表达产物的检测及意义

为研究ＥＢ病毒与非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）的关系，采用ＰＣＲ、原位杂交、ＬＳＡＢ（ｌａｂｅｌｉｎｇｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｖｉｎｂｉｏｔｉｎ）免疫组化技术，检测３２例ＮＨＬ和３３例反应性增生淋巴结中的ＥＢＶＢＮＬＦ１基因片段及其表达产物潜伏膜蛋白（ＬＭＰ１）。ＮＨＬ中ＥＢＶＢＮＬＦ１ＰＣＲ扩增阳性率为５３％，明显高于反应性增生淋巴结组２７％（Ｐ＜０．０５），其中５例Ｔ细胞淋巴瘤全部阳性。１７例ＰＣＲ阳性的ＮＨＬ中５例原位杂交阳性。ＬＭＰ１检测仅２例阳性。结果表明本组病例半数以上ＮＨＬ中有ＥＢＶ感染，可能与肿瘤的发生发展有一定关系。     

血管紧张素Ⅱ2型受体基因缺失抑制诱导的成纤维细胞凋亡

目的探讨血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）２型受体（ＡＴ２）基因表达与成纤维细胞凋亡的关系。方法分别从正常（ＡＴ２＋／＋）和ＡＴ２受体基因缺失（ＡＴ２／）胎鼠培养皮肤成纤维细胞,经ＡｎｇⅡ诱导后,采用ＲＴＰＣＲ检测成纤维细胞ＡｎｇⅡ的ＡＴ１和ＡＴ２受体ｍＲＮＡ表达,分别用基因组ＤＮＡ电泳、ＴＵＮＥＬ染色和流式细胞仪等定性和定量方法检测细胞的凋亡改变。结果经１０８、１０７、１０６和１０５ｍｏｌ／Ｌ浓度的ＡｎｇⅡ刺激４８小时,成纤维细胞的ＡＴ１和ＡＴ２受体基因表达均有显著增强,并与浓度呈正相关。经１０６和１０５ｍｏｌ／Ｌ浓度的ＡｎｇⅡ诱导７２小时,ＡＴ２＋／＋成纤维细胞出现了明显的标志着细胞凋亡的基因组ＤＮＡ片段化,凋亡细胞分别是（１２３±２７）％和（２１７±６７）％,而ＡＴ２／成纤维细胞则未出现明显的细胞凋亡改变。结论ＡＴ２受体基因缺失后,抑制了ＡｎｇⅡ介导的成纤维细胞凋亡,为进一步揭示ＡｎｇⅡ的生理和病理作用提供了实验依据     

玻璃体中碱性成纤维细胞生长因子的定量

目的：定量研究增殖性玻璃体视网膜病变（ＰＶＲ）患者玻璃体中碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）的含量，阐明ｂＦＧＦ在ＰＶＲ中的作用和影响。方法：双夹心酶联免疫吸附技术测定正常对照组２０只眼、ＰＶＲ－Ｃ组３５只眼、ＰＶＲ－Ｄ组２６只眼和单纯玻璃体出血组２５只眼患者玻璃体内ｂＦＧＦ含量，以及ＰＶＲ－Ｄ病人（１５例）血清内ｂＦＧＦ含量。结果：①玻璃体内ｂＦＧＦ含量：对照组ｍｅｄｉａｎ５．２０ｎｇ／Ｌ，ｑｕ     

视网膜下液体对人成纤维细胞的刺激作用

观察２３例孔源性视网膜脱离患者视网膜下液体（ＳＲＦ）对培养的人成纤维细胞生长的刺激作用，同时采用￣３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定了ＳＲＦ对成纤维细胞ＤＮＡ的合成作用。结果表明，所有ＳＲＦ均有刺激成纤维细胞增殖的能力，增殖率为５５．４％～２７７．８％，ＳＲＦ能促进成纤维细胞的ＤＮＡ合成（Ｐ＜０．０５）。ＳＲＦ与视网膜脱离的增殖性玻璃体视网膜病变（ＰＶＲ）程度、脱离范围和脱离持续时间呈正相关。     

重组人造血生长因子对抗白血病药物作用的影响

采用流式细胞仪及ＩＮＴ细胞毒检测，研究造血生长因子（ｒｈＨＧＦ）对抗白血病药物细胞毒性的影响，并探讨ＨＧＦ与化疗药物联合应用的作用机理。研究结果表明：３种抗白血病药物柔红霉素（ＤＮＲ）、三尖杉酯碱（Ｈ）、足叶乙甙（ＶＰ１６）对白血病细胞敏感性存在较大差异；ＧＭＣＳＦ、ＩＬ３均能增加ＶＰ１６、ＤＮＲ对白血病细胞的杀伤作用；ＧＭＣＳＦ能提高Ｈ的细胞毒性作用，而对正常骨髓细胞，３种ｒｈＨＧＦ均不能增加３种化疗药物的细胞毒性     

EB病毒与原发性鼻咽部B细胞性淋巴瘤有关与继发性者无关

目的：对１９ 例鼻咽部Ｂ细胞性恶性淋巴瘤与ＥＢ 病毒（ＥｐｓｔｅｉｎＢａｒｒ ｖｉｒｕｓ,ＥＢＶ） 感染的相关性进行研究。方法：利用免疫组织化学及原位杂交方法对ＥＢＶ 进行检测,并用免疫组化及原位杂交双染法标记肿瘤细胞,以鉴定ＥＢＶ阳性的细胞为Ｂ淋巴瘤细胞。结果：ＥＢＶ 编码的小ｍ ＲＮＡ探针（ＥＢＥＲ） 原位杂交显示,８ 例原发性鼻咽部Ｂ细胞性恶性淋巴瘤中３ 例绝大多数肿瘤细胞呈阳性表达,１ 例潜在性膜蛋白１（ｌａｔｅｎｔ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ １,ＬＭＰ１）阳性。而１１ 例继发性鼻咽部Ｂ细胞性恶性淋巴瘤ＥＢＥＲ全部为阴性。全部病例进行了ＬＭＰ１ 检测,除１ 例原发者,全部阴性。利用ＥＢＥＲＩＳＨ（ＥＢＥＲ原位杂交） 和免疫组化ＣＤ 标记物进行双标记染色证实,ＥＢＥＲ 和ＬＭＰ１阳性细胞为ＣＤ２０ 阳性,ＣＤ４５ＲＯ 阴性。鼻咽部原发性Ｂ细胞性恶性淋巴瘤ＥＢＶ 表达４／８ ,而继发者为０／１１。结论：ＥＢＶ 与鼻咽部原发性Ｂ细胞恶性淋巴瘤有较高的相关性,而与继发性者无关。     

生长因子在视网膜增殖膜的表达

目的：了解血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）和碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）在视网膜增殖膜细胞的表达及其与增殖性玻璃体视网膜病变（ＰＶＲ）的关系。方法：免疫组化法研究ＰＤＧＦ和ｂＦＧＦ在２０例视网膜前膜和１例视网膜下膜（视网膜脱离术后继发）细胞中的表达情况。结果：①１５／２１（７１．４％）例标本对抗ＰＤＧＦ抗体呈阳性反应，１４／２１（６６．７％）例对抗ｂＦＧＦ呈阳性反应；②Ｅａｌｅｓ病和增殖性糖尿病视网膜病引起的血管增殖性前膜（≥６１个细胞／视野，１０００×）较ＰＶＲ引起的非血管增殖性前膜（３１～６０个细胞／视野）内细胞密度高，黄斑前膜（≤３０个细胞／视野）最低。结论：ＰＤＧＦ和ｂＦＧＦ在ＰＶＲ发展过程中起重要作用；ＰＶＲ膜上增殖细胞可产生ｂＦＧＦ，它是导致严重ＰＶＲ时玻璃体内ｂＦＧＦ含量异常升高的主要原因。     

蝎毒抗癌多肽对肝癌小鼠免疫功能的影响

目的：观察蝎毒抗癌多肽（ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｆｒｏｍＢｕｔｈｕｓｍａｒｔｅｎｓｉｖｅｎｏｍ,ＡＰＢＭＶ）对肝癌Ｈ２２带瘤小鼠ＮＫ细胞活性,外周血白细胞计数,淋巴细胞增殖,迟发型超敏反应和血清溶血素水平的影响。方法：将接种Ｈ２２细胞２４ｈ后的带瘤小鼠随机分为４组,每组１０只：空白对照组（等体积生理盐水,腹腔注射）,５Ｆｕ组（５Ｆｕ１０ｍｇ·ｋｇ－１）,ＡＰＢＭＶ组（ＡＰＢＭＶ００３ｍｇ·ｋｇ－１,腹腔注射）,ＡＰＢＭＶ＋５Ｆｕ组（ＡＰＢＭＶ００３ｍｇ·ｋｇ－１＋５Ｆｕ１０ｍｇ·ｋｇ－１,腹腔注射）,连续给药５ｄ。给药期间及给药后对带瘤小鼠进行相应的处理,观察经治疗后Ｈ２２带瘤小鼠上述指标的变化。结果：ＡＰＢＭＶ组及ＡＰＢＭＶ＋５Ｆｕ组带瘤小鼠的ＮＫ细胞活性和ＤＮＣＢ诱导的皮肤迟发型超敏反应明显增强,淋巴细胞转化指数明显增高,与对照组及单用５Ｆｕ组相比有显著差异（Ｐ＜００５或Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．００１）;ＡＰＢＭＶ单独应用使带瘤小鼠白细胞计数显著提高（与对照组相比Ｐ＜００１）,５Ｆｕ组白细胞计数明显减少（与对照相比Ｐ＜００１）,ＡＰＢＭＶ与５Ｆｕ联合应用     

异环磷酰胺联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌近期疗效

４０例晚期非小细胞肺癌患，经用ＩＦＯ＋ＤＤＰ或ＩＦＯ＋ＶＰ－１６治疗，２例ＣＲ（５％），１７例ＰＲ（４２．５％），ＣＲ＋ＰＲ为４７．５％（１９／４０）。毒性反应主要是骨髓抑制和消化道症状。结果揭示含异环磷酰胺的联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌疗效较好，有一定程度骨髓抑制，配合Ｇ－ＣＳＦ治疗恢复较快。     

马氏钳蝎蝎毒对人食管癌细胞株细胞周期的影响

应用流式细胞仪（ＦＡＣ４２０），分析经含不同浓度马氏钳蝎蝎毒（ＳｃｏｖｐｉｏｎＶｅｎｏｍＣｒｕｄｓ，ＳＶＣ）的培养基，培养人食管癌细胞株（Ｅｃａ１０９），观察蝎毒对人食管癌细胞株细胞周期的影响。结果：ＳＶＣ可使Ｅｃａ１０９细胞ＤＮＡ指数下降，引起细胞周期中Ｇ０／Ｇ１期细胞的积聚和Ｓ期细胞明显减少，导致Ｅｃａ１０９细胞的增殖指数降低。与对照组比差异均有显著性（Ｐ＜００５）。提示：ＳＶＣ可能抑制Ｅｃａ１０９细胞ＤＮＡ合成，起到抑制癌细胞增殖的作用。     

反义c-myc、增殖细胞核抗原基因片断抑制血管平滑肌细胞相关基因表达

目的研究有效的防治血管术后再狭窄的方法，以及应用反义ｃｍｙｃ、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）基因片断来封闭其相应基因表达的可行性。方法设计并合成ｃｍｙｃ、ＰＣＮＡ正义、反义及四个碱基错配的反义寡核苷酸，经体外稳定性检测和细胞转染实验证实其有效性后，分别作用于体外培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ），应用逆转录ＰＣＲ半定量测定及计算机图像分析的方法，观测其对ｃｍｙｃ、ＰＣＮＡ基因表达的影响。结果设计合成的寡核苷酸在血清培养基中１～５天未被完全降解；寡核苷酸能顺利进入ＶＳＭＣｓ内；１０μｍｏｌ／Ｌ浓度的反义ｃｍｙｃ、ＰＣＮＡ作用于ＶＳＭＣｓ后１～５天，其相应的ｃｍｙｃ和ＰＣＮＡ基因表达减弱，计算机图像分析表明其表达产物与对照组相比差异有显著意义（Ｐ＜０．０５），而正义和错配反义寡核苷酸无此效应（Ｐ＞０．０５）。结论反义ｃｍｙｃ和ＰＣＮＡ寡核苷酸可通过抑制其相应基因表达来实现阻遏血管平滑肌细胞增殖     

莪术体外抑制成纤维细胞生长的初步研究

应用体外培养的人发结膜成纤维细胞，观察中药莪术在休外对细胞增殖的影响。结果：１０％莪术液对细胞生长有极显著的抑制作用（Ｐ〈０．０１），而５％莪术液和对照组则对细胞生长无抑制作用（Ｐ〉０．０５），提示莪术可作为抗青光眼滤过性手术的辅助用药，预防成纤维细胞增殖导致的手术失败。     

肿瘤化疗药物对人LAK细胞活性的影响

用四氮唑（ＭＴＴ）法分别检测顺氨氯铂（ＰＤＤ），丝裂霉素－Ｃ（ＭＭＣ）、阿霉素（ＡＭＤ）、氟尿嘧啶（５－Ｆｕ），阿糖胞苷（Ａｒａ－ｃ），长春新碱（ＶＣＲ）对ＩＬ－２诱导人外周血ＬＡＫ细胞活性的影响，及其与ＬＡＫ细胞对胃癌细胞的相加杀伤作用。①ＭＭＣ、ＡＤＭ、５－Ｆｕ、ＶＣＲ对ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞活性稍有下降，Ａｒａ－Ｃ能抑制ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞活性，ＰＤＤ对ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞活性明显提高。     

五倍子对兔眼结膜成纤维细胞的抑制作用（Ⅰ）

报告了用五倍子提取液对体外培养的３～５代兔眼结膜成纤维细胞的抑制作用，结果显示五倍子提取液对成纤维细胞有显著抑制作用。五倍子终浓度２５μｇ／ｍｌ对成纤维细胞的抑制率为１７．２４％，与不加药的对照组比较差异显著（Ｐ＜０．０５），五倍子提取液终浓度越高对成纤维细胞的抑制率就越高，五倍子提取液终浓度７５～６００μｇ／ｍｌ对成纤维细胞的抑制率为３６．４８％～９７．８９％，与对照组比较差异非常显著（Ｐ＜０．００１）。细胞形态学观察结果可见五倍子对成纤维细胞具有明显的影响。与对照药物５－Ｆｕ及高三尖杉酯碱对成纤维细胞的抑制作用相等。３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验提示五倍子抑制成纤维细胞的作用机理是抑制成纤维细胞的ＤＮＡ合成。     

抗人卵巢癌单克隆抗体COC183-B2重链可变区基因的体外扩增、克隆及序列分析

目的：分离抗人卵巢癌单克隆抗体ＣＯＣ１８３Ｂ２重链可变区（ＶＨ）基因并测定其序列。方法：用反转录ＰＣＲ扩增抗人卵巢癌单抗ＣＯＣ１８３Ｂ２ＶＨ基因，将其克隆入ＰＵＣ１９载体，重组子用Ｓａｎｇｅｒ’ｓ双脱氧链终止法测定序列，将序列与ＧｅｎｅＢａｎｋ及已发表的抗体序列比较。结果：ＶＨ基因全长３５４ｂｐ，属鼠免疫球蛋白重链混杂亚类（ｓｕｂｇｒｏｕｐｍｉｓｃｅｌａｎｅｏｕｓ），由种系基因的ＶＨ，Ｄｓｐ２．５及ＭＵＳＪＨ４重排而来。该ＶＨ基因序列已被ＧｅｎｅＢａｎｋ收录（ａｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏＡＦ０４５０２３）。结论：该ＶＨ基因为抗人卵巢癌单抗ＣＯＣ１８３Ｂ２功能性重链可变区基因。     

200例毛细支气管炎患儿病毒抗原检测及分析

应用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶桥联酶标法（ＡＰＡＡＰ）检测２００例毛细支气管炎鼻咽分泌物（ＮＰＳ）脱落细胞７种病毒抗原。结果表明，病毒检测总阳性率８５．５％，阴性１４．５％。呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）阳性率３８％。其后依次为腺病毒（Ａｄｖ）、流感病毒Ａ（ＦｌｕＡ）／副流感病毒１．３型（ＰＩＶ１，３）、ＦｌｕＢ，ＰＩＶ２型。两种病毒混合感染占１０．５％，以Ｒｓｖ＋Ａｄｖ为多见。结论：毛细支气管炎感染原以呼吸道病毒为主，ＲＳＶ和Ａｄｖ占绝大多数．混合感染也不容忽视。     

呼吸道合胞病毒对人肺腺癌细胞系PAa的影响

目的：探讨呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）感染对体外培养人肺腺癌细胞系ＰＡａ的影响。方法：应用ＲＳＶ体外感染ＰＡａ细胞,观察ＰＡａ细胞的变化：聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合单链构象多态性分析（ＳＳＣＰ）检测ＰＡａ细胞ｐ５３基因突变情况。结果：ＲＳＶ感染ＰＡａ细胞２４ｈ后,细胞出现融合病变,形成巨融合细胞;病变细胞ｐ５３第５、６、７、８、９外显子突变热点区域未见单链多态性变化。结论：ＲＳＶ对ＰＡａ细胞形态影响明     

中国广东籍汉族人细胞色素P450_2E_1基因5'侧翼区多态性

目的：探讨中国广东籍汉族人细胞色素Ｐ４５０２Ｅ１基因５′侧翼区的多态性分布规律。方法：利用聚合酶链反应和ＲｓａⅠ、ＰｓｔⅠ限制性片段长度多态性（ＰＣＲＲＦＬＰ）技术对８２名正常中国广东籍汉族人的细胞色素Ｐ４５０２Ｅ１基因５′侧翼区的多态性进行了检测。结果：８２名正常中国广东籍汉族人的细胞色素Ｐ４５０２Ｅ１基因５′侧翼区Ｃ１（ＲｓａⅠ＋,ＰｓｔⅠ）、Ｃ２（ＲｓａⅠ,ＰｓｔⅠ＋）等位基因频率分别为０８５４,０１４６;基因型Ｃ１Ｃ１、Ｃ１Ｃ２、Ｃ２Ｃ２的比率分别为０７３２、０２４４、００２４,符合ＨａｒｄｙＷｅｉｎｂｅｒｇ平衡分布。结论：中国广东籍汉族人细胞色素Ｐ４５０２Ｅ１基因５′侧翼区ＲｓａⅠ和ＰｓｔⅠ多态性分布规律与欧美人显著不同。