利用酶母Two—hybrid系统筛选编码产物与p53相作用的人类基因

用酵母ｔｗｏ－ｈｙｂｒｉｄ系统在人胚胎脑组织ｃＤＮＡ表达文库中寻找编码产物与ｐ５３相互作用的基因,在１．５×１０＾６个转化子中筛选到６８个初级阳性克隆。通过测定转化子第二轮β－半乳糖苷酶活力发现,人胚胎脑组织ｃＤＮＡ表达文库中有一个阳性克隆中的ｃＤＮＡ编码人的泛肽交联酶,可认为是泛肽交联酶参与ｐ５３在细胞内浓度的调节。     

重组野生型p53基因转染人骨肉瘤细胞株体外实验模型的建立

目的：将外源性野生型ｐ５３基因导入人骨肉瘤细胞株中，为进一步研究野生型ｐ５３蛋白诱导骨肉瘤细胞凋亡提供体外实验模型。方法：用ＤＮＡ转染技术将ＰＭ４７质粒，它是一种含激素诱导启动的鼠乳腺肿瘤病毒启动子和生化选择标志基因Ｅｃｏｇｐｔ的重组野生型ｐ５３ｃＤＮＡ质粒导入人骨肉瘤细胞株ＯＳ－７３２中，用ｇｐｔ选择培养基筛选阳性细胞克隆。结果：成功地将外源性野生型ｐ５３ｃＤＮＡ重组质粒导入人骨肉瘤细胞株ＯＳ－７３２细胞中，在ｇｐｔ选择培养基中培养２周后生长出阳性细胞克隆，命名为ＯＳ－７３２－Ｐ。结论：利用基因转染技术能将外源性野生型ｐ５３基因导入人骨肉瘤细胞株中，并能在选择培养基中生长     

卵巢癌的p53基因治疗实验研究：人野生型p53基因真核细？…

本实验构建了人野生型Ｐ５３基因与真核表达载体ｐｃＤＮＡ３的重组体,为进行卵巢癌基因治疗研究打下基础,方法：利用分子生物学基固然我隆技术从质粒ｐＧＥＸ＾－ｐ５３中用双酶切下目的片段,挤压法回收与ｐｃＤＮＡ３构成重组体。结果成功的构建了人野生型Ｐ５３基因真核细胞表达质粒。     

p^53cDNA突变和突变型p^53蛋白表达与大肠癌预后的关系

目的 探讨ｐ＾５３基因ｃＤＮＡ突变和突变型ｐ＾５３基因蛋白表达与大肠腺癌预后的关系。方法 ＲＴ－ＳＳＣＰ检测大肠腺癌组织ｐ＾５３基因ｃＤＮＡ突变，ＰＡｂ２４０单抗免疫组化检测腺癌组织突变型ｐ＾５３基因蛋白表达，比较两者与大肠腺癌预后的关系。结果 １００例大肠腺癌中，ｐ＾５３基因ｃＤＮＡ突变５１例（５１％），突变型ｐ５３基因蛋白高表达７６例（７６％），两者同步阳性４９例：ｐ＾５３基因ｃＤＮＡ突变与突     

p53基因cDNA突变及其蛋白高表达与大肠癌预后关系

１００份大肠癌组织,用ＲＴ、ＰＣＲ－ＳＳＳＣＰ检测ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变;Ｐａｂ１８０１单抗免疫组化检测ｐ５３基及其蛋白高表达并对大肠癌术后病人作５年生存随访,比较上述二结果与大肠癌预后的关系。１００例大肠癌中,ＲＴ－ＰＣ、ＳＳＣＰ显示引例大肠癌ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变（５１％）;Ｐａｂ１８０１阳性率６２％。ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变和ｐ５３基因蛋白高表达与Ｄｕｋｅｓ分期无关,ｐ５３基因ｐＤＮＡ突变与ｐ５３基因蛋白高表达相关（Ｐ＜０．０５）。结果提示,Ｐａｂｌ８０１单抗检测ｐＪ３基因蛋白高表达直接相关（ｐ＜０．０５）,ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变是大肠癌预后差的分子生物学标志物（ｐ＜０．０５）。ｐ５３基因蛋白产物受多种因素影响不能反映大肠癌的预后。     

人肝癌细胞肿瘤抑制基因转染对阿霉素敏感性的影响

目的为了解肿瘤抑制基因ｐ５３和Ｒｂ基因与肝癌对药物敏感性之间的关系，本实验用逆转录病毒介导将野生型ｐ５３或Ｒｂ基因导入人肝癌细胞株ＳＭＭＣ７７２１并观察其药物敏感性的改变。方法将野生型ｐ５３ｃＤＮＡ或ＲｂｃＤＮＡ克隆在逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ，转染人肝癌细胞株ＳＭＭＣ７７２１，筛选阳性克隆，同时以空载体ｐＬＸＳＮ和反义ｐ５３基因作为对照，免疫组化检测ｐ５３或Ｒｂ基因的表达。加入化疗药物４８ｈ后掺入３Ｈ－ＴｄＲ，１８ｈ后检测ＣＰＭ值。结果成功地构建了分别含野生型ｐ５３、Ｒｂ或反义ｐ５３的逆转录病毒载体，转染ＳＭＭＣ７７２１细胞系后获得了ｐ５３或Ｒｂ的表达；与亲代７７２１细胞相比，ｐ５３或Ｒｂ的表达阳性的７７２１细胞的生长速度均明显减慢，ｐ５３表达阳性的７７２１细胞对阿霉素的敏感性明显增强，同样条件下，Ｒｂ在７７２１细胞系内的表达则对阿霉素敏感性无影响。结论野生型ｐ５３基因转染能提高人肝癌７７２１细胞对阿霉素的敏感性     

野生型p53cDNA真核表达载体的构建

ｐ５３基因是癌症研究和肿瘤基因治疗中最引人注目的抑癌基因之一，据报道，大约一半左右癌症的起因是由于ｐ５３基因突变。在所有的抑癌基因中，ｐ５３基因是突变率极高的一种，它的失活会阻止细胞进入凋亡，从而使之处于持续分裂状态而增加突变及恶性转化的概率［１］。因此，研究野生型ｐ５３基因在肿瘤的基因治疗中有普遍性意义。１材料和方法１．１材料ｐＧＥＭ－Ｔ载体（Ｐｒｏｍｅｇｅ公司）；真核表达载体ｐｃＤＮＡ３．１（本室保存）；野生型ｐ５３ｃＤＮＡ由南京军事医学研究所朱敏生教授惠赠；限制性内切酶、ＴａｑＤＮＡ聚合酶…     

胃癌细胞DNA倍体和突变型p53基因产物表达与转移扩散的关系

采用流式细胞测量术，对５７例人胃癌存档石蜡标标本的原发灶和转移灶癌细胞的ＤＮＡ含量与倍体类型进行了检测，同时利用ＭｃＡｂ－ｐ５３对突变型ｐ５３基因产物进行了免疫组化检测。     

人动脉粥样硬化斑块p53基因突变的初步报告

从甲醛固定的成人动脉粥样硬化斑块组织中提取ＤＮＡ，用ＰＣＲ扩增ｐ５３基因片段，将扩增的ｐ５３基因片段亚克隆至ＳＫ载体内，对扩增后的片段进行核苷酸序列分析。结果发现，动脉粥样硬化斑块中ｐ５３基因内第八外显子中第２７２位密码子的Ｔ变为Ｃ。免疫组化分析观察到斑块内有ｐ５３基因突变蛋白的表达。提示：ｐ５３基因突变可能与动脉粥样硬化的细胞增殖异常有关。     

人p27和p15基因表达重组体的构建

周期素依赖性激酶抑制蛋白（ｃｙｃｌｉｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｐｒｏ－ｔｅｉｎ，ＣＫＩ），如ｐ２７和ｐ１５基因是抑癌基因的候选基因。作者通过ＰＣＲ方法获得含人ｐ２７全部编码区域的ｐ２７ｃＤＮＡ片段，并用ＰＣＲ产物ＴＡ克隆法，将其构建在真核表达载体ｐＣＲＴＭ３中；用常规酶学方法，通过ＥｃｏＲＩ和ＸｈｏＩ双酶切位点，将人ｐ１５ｃＤＮＡ片段克隆入ｐＣＲＴＭ３载体。重组体的鉴定通过限制酶图谱分析进行。人ｐ２７和ｐ１５基因真核表达重组体的构建为进一步研究其功能打下基础。     

自噬现象及其分子机制的研究进展

自噬是真核细胞特有的普遍生命现象,在维持细胞自我稳态、促进细胞生存方面起重要作用,广泛参与多种生理和病理过程.自噬与细胞卫士p53的关系密切,目前已成为肿瘤研究中的一个新热点.本文对自噬的概念、生物学特性、自噬过程及其信号调控、以及与p53的关系作以概述,同时简要概述了目前自噬的研究方法和检测方法并提出问题和展望,为进一步研究自噬奠定基础.     

非小细胞肺癌中p53与PCNA的表达及临床意义

目的:探讨p53蛋白、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及意义。方法:采用免疫组化技术(SP法)对72例NSCLC组织及10例正常支气管黏膜组织进行p53蛋白与PCNA的检测。结果:p53蛋白与PCNA在NSCLC组织中的表达明显高于正常组织,在NSCLC组织中的阳性表达率分别为58.3%(42/72),91.7%(66/72);PCNA强阳性表达率为58.3%(42/72);p53阳性表达率及PCNA强阳性表达率均与肺癌组织的分化程度、肿瘤组织大小、淋巴转移等因素密切相关,差异具有显著性(P<0.05);p53蛋白阳性表达与PCNA阳性表达呈正相关(P<0.05)。结论:p53蛋白及PCNA的表达与肺癌的发生发展过程并与分化程度及有否淋巴结转移有关。     

p53、CEA在胃黏膜上皮内瘤变及胃癌中的表达及其意义

目的 探讨p53、癌胚抗原(CEh)在胃黏膜上皮内瘤变及胃癌中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组织化学方法(S-P法)检测40例正常胃黏膜、68例胃黏膜低级别上皮内瘤变、60例胃黏膜高级别上皮内瘤变以及80例胃癌中p53、CEA的表达情况.结果 正常胃黏膜组p53、CEA均为阴性表达;p53在胃黏膜低级别上皮内瘤变组阳性表达率为17.65%,明显低于胃黏膜高级别上皮内瘤变组(40.00%,P＜0.05)和胃癌组(56.25%,P＜0.05).CEA在胃黏膜低级别上皮内瘤变组阳性表达率为36.76%,明显低于胃黏膜高级别上皮内瘤变组(68.33%,P＜0.05)和胃癌组(82.50%,P＜0.05).p53、CEA共同表达在胃黏膜低级别上皮内瘤变组为14.70%,明显低于胃黏膜高级别上皮内瘤变组(31.67%,P＜0.05)和胃癌组(45.00%,P＜0.05).结论 p53和CEA与胃癌关系密切,对胃黏膜上皮内瘤变联合检测p53和CEA,有助于发现早期胃癌.     

动脉化疗前后p53在口腔鳞癌组织中表达的生物学意义

目的 研究p53在化疗前后口腔鳞癌组织中的表达,为临床制定合理治疗方案提供生物学依据.方法 应用免疫组织化学法检测p53在化疗前后口腔鳞癌组织中的表达是否存在差异,不同临床分期,组织学分级,淋巴结有无转移间的p53表达,是否存在差异,结合临床病理资料和基因蛋白表达特征对比作差异显著性检验及相关分析.结果 口腔鳞癌p53阳性表达化疗前高于化疗后,差异有统计学意义(P<0.05);随着口腔鳞癌病理分级的升高,p53蛋白异常表达率升高(P＜0.05),与疗效和淋巴结有无转移有关(P<0.05),与临床分期、年龄和性别无关(P＞0.05).结论 P53对口腔鳞癌的分化和进展过程起重要作用.     

食管鳞癌p53基因突变和p53功能失活的对照研究

目的研究食管鳞癌p53基因突变在p53功能失活中所占的比例,并初步探索食管鳞癌p53功能失活的原因。方法对45例新鲜食管鳞癌组织（正常食管组织作为对照）进行p53基因突变检测（p53-PCR-SSCP法）、p53sD能失活检测（p53SD能测定法）以及2种p53结合蛋白MDM2和HPV16／18-E6的表达检测（免疫组化sP法）。对上述结果进行统计学分析。结果p53功能失活率为64％,p53基因突变平为49％;p53基因无突变组中,p53功能失活者HPV16／18--E6表达率高于p53功能正常者,也高于p53基因突变组l而3组间MDM2表达率无统计学差异。结论食管鳞癌p53SD能失活率高于p53基因突变率,p53sD能失活有望成为一种评价食管鳞癌生物学特性的新指标;食管鳞癌p53功能失活的原因可分为p53基因突变和非基因突变原因,前者占72％,后者占28％。在非基因突变原因中可能存在p53结合蛋白HPV16／18-E6的参与,而不存在MDM2的参与。     

涎腺肿瘤中HSP27的表达特征及与p53、PCNA的相关性研究

目的:分别研究热休克蛋白27(heat shock protein27,HSP27)在涎腺良性、恶性肿瘤中的表达特征及其与抑癌基因p53和增殖细胞核抗原(prolife rating cell nuclear antigen,PCNA)的相关性,探讨其在涎腺肿瘤发生发展中的影响和意义。方法:采用免疫组化法检测41例良性和17例恶性肿瘤中HSP27、p53、PCNA的表达。结果:(1)HSP27阳性表达于肿瘤细胞浆,p53、PCNA胞核表达为主;(2)HSP27在良性肿瘤中高表达,在恶性肿瘤中表达下降,HSP27的表达与涎腺肿瘤细胞的分化程度显著相关(P<0.01);(3)p53、PCNA在恶性肿瘤的表达均显著高于良性肿瘤。HSP27和p53、PCNA有一定反向趋势(P>0.05)。结论:HSP27表达减弱可能是涎腺恶性肿瘤分化降低的标记;HSP27的表达减少、PCNA阳性和p53突变可能协同促进恶性肿瘤细胞的增殖。     

MMP-9、p53在子宫内膜异位症组织中的表达及相关性研究

目的:探讨肿瘤相关蛋白基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、p53在子宫内膜异位症(EMc)发生、发展中的作用。方法:应用免疫组化SP法检测30例异位子宫内膜、25例在位子宫内膜和30例正常子宫内膜及20例卵巢癌组织标本中MMP-9、p53蛋白的表达情况。结果:(1)MMP-9在子宫内膜异位症患者异位内膜中阳性表达率为86.7%,分别高于其在内异症在位内膜中的表达44%及正常子宫内膜中的表达16.7%(P<0.01),而与其在卵巢癌组织中的表达90%差异无统计学意义(P>0.05);MMP-9在内异症在位内膜中的表达高于正常子宫内膜(P<0.05);(2)p53在子宫内膜异位症患者异位内膜中的阳性表达率为20%(6/30),高于其在正常子宫内膜及内异症在位内膜中的阴性表达(P<0.05);p53在卵巢癌组织中的阳性表达率为50%(10/20),显著高于异位内膜组织的表达(P<0.05);(3)Spearman等级相关分析显示,MMP-9与p53在内异症异位子宫内膜中的表达无相关性(rs=-0.294,P>0.05)。结论:MMP-9与p53可能通过各自不同的生物...     

顺铂诱导体外儿童睾丸卵黄囊瘤细胞凋亡及p53的表达

目的:探讨p53在顺铂诱导儿童睾丸卵黄囊瘤细胞凋亡发生过程中的作用机制.方法:通过原代培养儿童睾丸卵黄囊瘤细胞获取实验对象,再用顺铂进行凋亡的诱导,TUNEL法检测凋亡细胞,免疫细胞化学方法检测p53表达的变化.结果:在顺铂作用下,细胞发生圆缩脱壁,凋亡小体形成.凋亡指数随着作用时间延长而增加(P＜0.01),p53的表达在早期(12 h)即达到高峰,此后未见持续增强情况.结论:顺铂能够诱导儿童睾丸卵黄囊瘤细胞的凋亡,而p53表达的增强可能是其重要的环节.     

鼻咽癌口腔黏膜急性放射损伤与p53基因多态的关系

目的 探讨p53基因的单核苷酸多态与鼻咽癌（NPC）口腔黏膜急性放射损伤的关系。方法 以PCR-RFLP（聚合酶链反应-限制性片断长度多态性）分析方法，对56例单纯放疗或同步放化疗的NPC患者，进行p53的72密码子Arg—Pro多态检测，并对口腔黏膜的急性放射损伤评级。结果 携带72Pro等位基因的患者的口腔黏膜急性放射损伤程度与未携带72 Pro等位基因的患者之间的差异无统计学意义（P〉0．05）；单次剂量大与同步放化疗患者的口腔黏膜急性放射损伤的程度明显增加，差异有统计学意义（分别P〈0．01和P〈0．05）。结论 鼻咽癌患者p53的72密码子Arg-Pro基因型与口腔黏膜急性放射损伤无关。     

eIF-4E、p53在皮肤鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的 检测皮肤鳞状细胞癌中 eIF-4E、p53 的表达,以探讨它们的临床意义.方法 用免疫组化 SABC 法分别检测 7 例正常成人皮肤以及 32 例皮肤鳞状细胞癌中 eIF-4E、p53 的表达水平.结果 在正常表皮中 eIF-4E、p53 表达均为阴性.在皮肤鳞状细胞癌中的表达率分别为 93.8%和56.3%,明显高于正常成人皮肤(P<0.05).结论 在皮肤鳞状细胞癌中,eIF-4E、p53 均可作为肿瘤标志物,且 eIF-4E 蛋白表达率高、特异性强,是一种更具潜质的肿瘤标志物.