雌二醇对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠炎性细胞凋亡的研究

目的:探讨雌二醇(E2)对去卵巢后实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠脑脊髓细胞凋亡的作用。方法:建立去卵巢10d后Wistar大鼠EAE模型,随机分为EAE组、E2治疗组和假手术组。E2治疗组从发病后连续3d,每日肌肉注射E2(1mg/kg)1次。在免疫后16d处死动物,取脑和脊髓用3′末端脱氧核糖核酸转移酶介导的duTP缺口末端标记(TUNEL)原位末端法检测大鼠脑脊髓凋亡细胞数。结果:与EAE对照组相比,E2治疗组和假手术组的中枢神经系统(CNS)TUNEL阳性细胞的凋亡率明显增高。结论:E2对EAE有治疗作用,其机制可能与其抑制CNS炎症细胞浸润及增加炎性细胞的凋亡有关。     

Fas配体基因对大鼠颈动脉损伤后血管中层平滑肌细胞密度的影响

目的:探讨腺病毒载体介导Fas配体(FasL)基因导入对大鼠颈动脉损伤后血管中层平滑肌细胞密度的影响。方法:实验分治疗组(Ad-FasL组)和正常对照组两组(Ad-βgal组),每组动物均为6只。利用重组腺病毒载体分别将Ad-FasL、Ad-βgal导入大鼠颈动脉球囊损伤的内膜,3、14d后观察其对血管中层平滑肌细胞密度的影响。结果:与正常对照组相比较,通过腺病毒载体介导导入FasL基因的被球囊损伤的大鼠颈动脉,3d后损伤血管中层平滑肌细胞密度降低,14d后血管中层平滑肌细胞密度恢复到正常水平。结论:FasL可抑制血管中层平滑肌细胞密度,从而抑制球囊损伤后的内膜增生。     

雌激素对大鼠主动脉组织细胞色素C、线粒体Ca2+、胞浆游离Ca2+水平的影响

目的:研究雌激素对大鼠主动脉组织细胞色素C、线粒体Ca2 、胞浆游离Ca2 水平的影响,以探讨雌激素对心血管系统的保护作用.方法:将30只雌性大鼠随机分为三个组,假手术组(A组)、去卵巢组(B组)及去卵巢 雌二醇治疗组(C组),每组各10只.正常饮食后处死大鼠,对主动脉组织细胞色素C、线粒体Ca2 、胞浆游离Ca2 的水平进行测定.结果:去卵巢模型组同去卵巢 雌二醇治疗组相比,线粒体Ca2 、细胞色素C含量明显降低(P＜0.05;P＜0.01),而胞浆内细胞色素C含量则明显升高(P＜0.05).结论: 雌激素可能是通过调节细胞色素C、线粒体Ca2 、胞浆游离Ca2 水平,清除自由基、从而减少氧化应激对心血管系统的损伤作用.     

实验性糖尿病大鼠脑细胞凋亡的探讨

目的 :研究糖尿病对脑细胞凋亡的影响。方法 :采用四氧嘧啶制造糖尿病大鼠模型 ,差速离心法提取脑线粒体并分析细胞色素 C(Cyt C)含量。用原位细胞凋亡 TUNEL法观察糖尿病大鼠脑细胞凋亡情况。结果 :与正常对照组相比 ,糖尿病大鼠脑线粒体 Cyt C含量明显升高 (P <0 .0 5 )脑神经细胞凋亡数显著升高 (P <0 .0 5 )。结论 :糖尿病对大鼠脑细胞凋亡有显著影响 ,可能由 Cyt C触发引起     

菟丝子黄酮对去势雌性大鼠血清雌激素水平和血管平滑肌细胞的影响

目的：观察补肾中药菟丝子的有效成分菟丝子黄酮对老年血管的保护作用，并探讨其作用机制。方法：菟丝子经溶剂提取、聚酰胺柱分离得黄酮提取物。SD雌性大鼠随机分成正常对照组，模型对照组，菟丝子黄酮高、低剂量组及阳性对照组。实验动物按分组造模、给药42d后，观察血清中的雌激素水平和主动脉平滑肌细胞凋亡率的变化。结果：菟丝子黄酮能上调去势雌性大鼠血清雌激素水平（P〈0．01），提高其主动脉平滑肌细胞早期凋亡率（P〈0．01）。结论：菟丝子黄酮通过升高雌激素水平和促进主动脉平滑肌细胞凋亡发挥其对老年血管的保护作用。     

炔雌醇环丙孕酮对多囊卵巢综合征大鼠卵巢组织形态影响的研究

目的观察炔雌醇环丙孕酮对多囊卵巢综合征(PCOS)模型大鼠卵巢组织形态和超微结构的影响。方法应用来曲唑造模法建立PCOS大鼠模型,随机分为正常对照组、PCOS模型组、炔雌醇环丙孕酮组,应用放射免疫法测定各组大鼠性激素水平、光镜观察大鼠卵巢组织形态改变、电子显微镜观察卵巢超微结构。结果①应用来曲唑干预21d后,PCOS模型大鼠血清黄体生成素(LH)、睾酮和卵泡刺激素(FSH)的水平明显高于正常对照组,而雌二醇和孕酮水平低于对照组(P<0.01),提示造模成功。药物干预后,与PCOS模型组比较,炔雌醇环丙孕酮组大鼠血清LH、FSH和睾酮水平下降,血清雌二醇、孕酮水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。②光镜观察:PCOS组大鼠卵巢组织呈多囊性改变,未见成熟卵泡及黄体生成;对照组卵巢组织可见不同发育阶段的卵泡及黄体的生成;炔雌醇环丙孕酮组较PCOS组大鼠有所改善,可见成熟卵泡及黄体的生成。③电镜观察:PCOS组比正常对照组大鼠卵巢电镜下见颗粒细胞出现凋亡形态特征,卵泡膜细胞较多,内可见脂滴明显增多;炔雌醇环丙孕酮组大鼠卵巢镜下颗粒细胞凋亡所特有的超微结构变化明显改善,可见正常的颗粒细胞和卵丘,线粒体增多,有大量滑面内质网;卵泡膜细胞凋亡明显增多。结论用来曲唑建立PCOS大鼠模型是一种较为理想的方法;炔雌醇环丙孕酮能够从形态学上改善PCOS大鼠的卵巢组织,恢复排卵功能。     

重组人白介素-10对大鼠血管平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响

目的　观察重组人白介素 10 (rhIL 10 )分别对肿瘤坏死因子 (TNF α)和血小板源性生长因子 (PDGF BB)刺激下离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响。方法　体外培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞 ,采用MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态 ,应用流式细胞术测定细胞周期。结果　与对照组相比 ,肿瘤坏死因子和血小板源性生长因子均对血管平滑肌细胞增殖具有明显的刺激作用 (P <0 0 5 )。rhIL 10单独应用对血管平滑肌细胞生长没有影响 (P >0 0 5 )。在TNF α和血小板源性生长因子分别刺激下 ,rhIL 10均可抑制血管平滑肌细胞的生长(P <0 0 5 )。流式细胞术测定的结果显示rhIL 10分别可以使TNF α和PDGF BB作用下的VSMCs大部分处于G0 /G1期 ,与对照组相比差异有显著性 (P <0 0 1)。结论　重组人白介素 10可抑制细胞因子和生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖     

辣椒素对AngⅡ诱导VSMC增殖迁移及DOCA-盐引起的高血压大鼠血管重构的影响

目的 探讨辣椒素(Cap)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖迁移及醋酸去氧皮质酮(DOCA)-盐引起的高血压大鼠血管重构的影响.方法 40只WKY大鼠根据不同干预措施分为对照组(Con组),肩胛部皮下注射普通植物油,普通饲料喂养,正常饮水;模型组(DOCA组)予DOCA-盐干预;DOCA+Ca...     

17β-雌二醇增加卵巢切除大鼠心肌内皮型一氧化氮合酶的表达和一氧化氮生成

目的 :观察 17β 雌二醇替代治疗对卵巢切除大鼠心肌组织中一氧化氮 (NO)和内皮源性一氧化氮合酶 (eNOS)的影响。方法 :成年雌性SD大鼠经双侧卵巢切除术 ,假手术组作为对照 ,术后 3周随机分为假手术组 ,模型对照组 ,17β 雌二醇(0 .1mg·kg-1·d-1)和溶媒 (芝麻油 )皮下注射治疗组 ,处理 6周 ,记录大鼠的血压、心率、子宫重量 ;检测血中雌二醇的含量 ;亚硝酸还原酶法检测心肌匀浆中NO含量 ;Westernblot分析心肌中eNOS及eNOS调节蛋白小凹蛋白 1(caveolin 1)的蛋白表达情况。结果 :17β 雌二醇治疗组的心率 (314± 16次 分 )较其他各组低 ,与溶媒对照组比较 ,雌二醇替代治疗组心肌匀浆中NO的含量增加一倍 ,eNOS蛋白表达明显增加 (P <0 .0 1) ,而作为eNOS的内源性抑制物caveolin 1的表达却明显减少 (P <0 .0 5 )。结论 :雌激素替代治疗直接增加卵巢切除大鼠心肌eNOS的表达量以及NO的产生 ,减少抑制eNOS活性的小凹蛋白 1表达。     

虎杖苷对缺血缺氧下平滑肌细胞蛋白激酶C的影响

目的　观察虎杖苷对缺血缺氧作用下血管平滑肌细胞(VSMC)蛋白激酶C(PKC)活性的影响以探讨其抗休克作用的机制。方法　取大鼠胸主动脉培养VSMC,用Koyama方法复制VSMC缺血缺氧模型。用液体闪烁计数仪测定PKC的活性。结果　缺血缺氧状态下VSMC胞浆PKC的活性上升(vs正常组P<0 .05),但胞膜的PKC活性下降(vs正常组P<0 .05),经PD治疗后胞浆PKC的活性下降(vs缺血缺氧组、治疗对照组P<0. 05,vs正常组P>0 05 ),胞膜的PKC活性上升(vs缺血缺氧组、治疗对照组P<0 .05,vs正常组P>0 .05)。结论　PD对缺血缺氧作用下的VSMCPKC的活性有调节作用,这可能是PD抗休克作用的分子机制之一。     

去势雌性大鼠主动脉平滑肌细胞雌激素受体的变化

目的：探讨绝经后血管平滑肌细胞雌激素受体的变化。方法：采用切除双侧卵巢、高脂饲料喂养造模大鼠，观察去势雌性大鼠血脂的变化，并应用免疫组化法(SP法)测定主动脉平滑肌细胞雌激素受体变化。结果：去势雌性大鼠血脂代谢紊乱，主动脉平滑肌细胞雌激素受体水平下降。结论：绝经后女性心血管疾病发病率与雌激素受体水平下降有关。     

色满卡林对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的：观察色满卡林对自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的影响。方法：30只12 wk龄SHR,随机分为高血压组、色满卡林组,另设正常对照组。色满卡林组给予色满卡林0.6 mg·kg~(-1)·d~(-1),分2次灌胃；另2组每日给予等量的生理盐水,共16 wk。监测尾动脉收缩压。用免疫组化法检测Bcl-2,Bax和PCNA蛋白表达。荧光标记TUNEL法检测VSMCs凋亡,计算VSMCs凋亡指数(SMAI)。结果：高血压组与正常对照组比较,收缩压明显增高(P＜0.05)；VSMCs中的Bcl-2,PCNA蛋白表达明显增强(P＜0.05)；SMAI明显减少(P＜0.01)；Bax蛋白表达2组间差异无显著意义(P＞0.05)。与高血压组比较,色满卡林组尾动脉收缩压呈降低趋势,但差别无显著意义(P＞0.05)；VSMCs的Bcl-2和PCNA蛋白的表达减少(P＜0.05),Bcl-2/Bax比值下降；SMAI增加(P＜0.05)。结论：色满卡林促进了SHR的VSMCs凋亡,可能机制是通过调节VSMCs的Bcl-2/Bax蛋白表达平衡。     

高磷通过SET8调控p53/Bcl-2/Caspase信号通路促进血管平滑肌细胞钙化

摘要：目的 探讨组蛋白赖氨酸甲基转移酶SET8在高磷诱导血管平滑肌细胞（VSMCs）钙化中的作用及机制。 方法 选取80～100 g的清洁雄性SD大鼠6只,取其胸主动脉,分离VSMCs后进行原代培养。VSMCs传至第3～4 代,铺6孔板,并给予相应刺激。将VSMCs随机分为正常组和高磷组（10 mmol/L β-甘油磷酸）,培养4 d后茜素红染 色观察钙结节形成情况,甲基麝香草酚蓝比色法钙含量,流式细胞数检测细胞凋亡,RT-PCR 和 Western blot 检测 SET8、p53、Bcl-2、Bax、Caspase3的mRNA和蛋白的表达水平。之后用脂质体将SET8-shRNA质粒与NS-shRNA转染 VSMCs 作为 SET8-shRNA 组和空质粒组,未转染组作为正常对照组,RT-PCR 和 Western blot 检测 p53、Bcl-2、Bax、 Caspase3的mRNA和蛋白的表达水平。结果 （1）高磷组钙盐沉积较正常组明显增加（P＜0.05）。（2）流式细胞仪检 测结果显示,与正常组相比,高磷组VSMCs的细胞凋亡率明显增加（P＜0.05）。（3）与正常组相比,高磷组Bcl-2、SET8 的mRNA和蛋白表达水平下降;p53、Bax、Caspase3的mRNA和蛋白表达水平升高（P＜0.05）。（4）干扰SET8基因表达 后钙盐沉积增加（P＜0.05）,Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平下降;p53、Bax、Caspase3的mRNA和蛋白表达水平升高 （P＜0.05）。结论 高磷通过SET8调控p53/Bcl-2/Caspase信号通路,下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,上调促凋亡蛋白 Bax和Caspase3的表达,进而参与调控VSMCs的钙化。     

胞外pH值通过BMP-2信号通路影响高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化

目的 探讨骨形态发生蛋白2（bone morphogenetic protein 2,BMP-2）信号通路在不同pH值环境影响高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）钙化中的作用。方法 选取5～8周龄健康雄性SD大鼠,体外分离培养大鼠胸主动脉VSMCs,采用免疫细胞化学方法鉴定。将VSMCs用随机抽样法分为正常对照组(pH7.4)、pH7.4+高磷组、pH7.1+高磷组及pH7.7+高磷组。采用茜素红染色及邻甲酚酞络合酮比色法检测细胞钙化情况,酶联免疫吸附法检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测BMP-2、Smad1及 Runt 相关转录因子2（Runx2） mRNA的表达。结果 与正常对照组相比,pH7.4+高磷组大鼠VSMCs的钙含量增加（P<0.05）、茜素红染色钙化结节增多,Runx2 mRNA表达及ALP活性均增高（P<0.05）;与pH7.4+高磷组相比,pH7.1+高磷组大鼠VSMCs的钙含量减低（P<0.05）、茜素红染色钙化结节减少,Runx2 mRNA表达及ALP活性均降低（P<0.05）,BMP-2、Smad1mRNA表达均降低（P<0.05）,pH7.7+高磷组大鼠VSMCs的钙含量增加（P<0.05）、茜素红染色钙化结节增多,Runx2 mRNA表达及ALP活性均增高（P<0.05）,BMP-2、Smad1mRNA表达均增高（P<0.05）。结论 胞外酸性环境（pH7.1）抑制高磷诱导的大鼠VSMCs钙化,胞外碱性环境（pH7.7）促进高磷诱导的大鼠VSMCs钙化,其机制可能是通过BMP-2信号通路介导了VSMCs的表型转化。     

氧化甾醇诱导血管平滑肌细胞凋亡及其作用特点的研究

目的研究３β,５α,６β－胆甾烷二醇（Ｔｒｉｏｌ）诱导血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）凋亡及其与２５－羟胆固醇（２５－ＯＨ）比较的特点。方法体外培养ＶＳＭＣｓ、光镜、透射电镜及ＴＵＮＥＬ技术。结果ＶＳＭＣｓ经Ｔｒｉｏｌ处理后,贴壁层细胞呈现核染色质浓集,核碎裂和凋亡小体形成等凋亡的超微结构变化;ＴＵＮＥＬ显示ＶＳＭＣｓ凋亡细胞数随Ｔｒｉｏｌ浓度的增加而增多;剂量为 ３０ μｍｏｌ·Ｌ－１的 Ｔｒｉｏｌ和 ２５－ＯＨ诱导 ＶＳＭＣｓ的凋亡作用,前者不能而后者能被 ５０ μｍｏｌ·Ｌ－１的胆固醇所抑制。结论Ｔｒｉｏｌ能诱导ＶＳＭＣｓ凋亡,不同氧化甾醇可能有不同的作用通道和机制;氧化甾醇诱导ＶＳＭＣｓ凋亡可能是引起动脉粥样硬化斑块破溃,导致急性心血管事件发生的机制之一。     

半胱氨酸对人血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察半胱氨酸(Cys)对人血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和凋亡的影响.方法 采用组织贴块法体外培养人VSMCs,用不同浓度的Cys培养液孵育细胞24h,用MTT法检测VSMCs增殖,流式细胞术检测VSMCs凋亡.RT-PCR法检测bax mRNA的表达.结果 体外培养的人VSMCs在终浓度为100、200、500和10001μmol/L Cys的培养液中孵育24h后的吸光度(A)值均高于对照组(P<0.05),表明Cys可诱导人VSMCs增殖;但同时.VSMCs凋亡细胞数明显高于对照组(P<0.05),bax的表达增强,表明Cys亦诱导了人VSMCs凋亡.结论 浓度较高时半胱氨酸可同时诱导VSMCs增殖和凋亡.     

镁离子对大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响 , 镁离子对大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响

目的 探讨不同浓度镁离子对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的影响。方法 原代培养获取 VSMCs,进行形态学及免疫细胞鉴定,后将VSMCs随机分为阴性对照组、高磷组、镁干预组。阴性对照组采用含10%胎牛血清培养,高磷组采用高磷培养基培养,镁干预组在高磷培养基的基础上分别加入不同浓度氯化镁,使镁离子终浓度分别为1、2、3 mmol/L（镁干预组1~3）,刺激7 d后行钙化检测,测定钙含量及碱性磷酸酶（ALP）活性,并行反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞内核心结合因子α1（Cbfα1）mRNA的表达。结果 高磷组和镁干预组VSMCs均有钙盐沉积,其钙含量均高于阴性对照组;镁干预组随镁离子浓度增大钙化结节逐渐缩小,除镁干预组1钙含量与高磷组无差异外,镁干预组2和镁干预组3均低于高磷组（均P＜0.05）。VSMCs ALP活性和Cbfα1 mRNA的表达除镁干预组3与阴性对照组无差异外,其余组均高于阴性对照组（P＜0.05）。镁干预组随镁离子浓度增大,ALP活性和Cbfα1 mRNA的表达水平均逐渐降低,且均低于高磷组（P＜0.05）。结论 镁离子可在一定程度上抑制高磷诱导的VSMCs钙化和成骨样转分化,其可能是通过降低VSMCs中Cbfα1的表达来实现的。     

离体和在体机械损伤致血管平滑肌增殖模型的建立

目的建立离体和在体机械损伤致血管平滑肌增殖模型。方法原代培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs),体外建立机械划伤致VSMCs增殖模型,采用5-溴脱氧尿嘧啶(5-BrUd)掺入法,流式细胞术检测细胞增殖情况;整体动物上,采用新西兰兔左侧颈总动脉球囊损伤,术后7d取颈总动脉段,常规病理切片,HE染色,观测血管内膜厚度、内膜面积、内膜厚度/中膜厚度、内膜面积/中膜面积。结果机械划痕损伤12 h后划伤处两侧的细胞开始有部分增殖和迁移,24 h后细胞增殖较为明显。流式细胞术检测机械损伤后细胞增殖增多(P<0.05)。整体动物上,与假手术组比较,模型组术后7 d血管内膜厚度、内膜面积、内膜厚度/中膜厚度、内膜面积/中膜面积显著增加(P<0.01)。结论机械损伤可以导致离体和在体血管平滑肌细胞增殖。     

NF-κB的双元件诱饵ODN对大鼠颈动脉内膜增生的抑制作用

【摘要】目的 观察核因子（NF）-κB的双元件诱饵ODN序列对大鼠球囊损伤术后血管内膜增生及血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的作用。方法 在大鼠主动脉行球囊导管扩张术,建立血管内膜损伤模型。将含有人工合成的 NF-κB p65亚基的双元件诱饵ODN序列的混合液灌注入损伤部位。分别于3 d和7 d后观察血管内膜损伤修复情况。原代培养VSMC,用能够表达NF-κB p65亚基的双元件诱饵ODN序列的载体包装病毒并感染原代VSMC,MTT试验观察细胞增殖情况,高内涵分析检测细胞凋亡情况,Western Blotting检测NF-κB p65、白细胞介素（IL）-8、单核细胞趋化蛋白（MCP）-1表达水平。结果 球囊损伤术后灌注双元件ODN组血管内膜增生明显较灌注单元件ODN组及错序对照组降低。感染双元件ODN表达腺病毒载体的原代VSMC与感染单元件ODN表达载体及错序对照表达载体的原代细胞相比,细胞增殖水平明显降低,细胞凋亡明显增加,IL-8表达水平明显下调,而NF-κB p65表达水平无明显变化。双元件ODN组与单元件ODN组的MCP-1表达差异无统计学意义,但较错序对照组均明显降低。结论 转染 NF-κB p65亚基的双元件诱饵ODN序列可减轻损伤血管在修复过程中的血管内膜增生,这种效应可能由其对VSMC 增殖的抑制作用所致。