一种显示尼氏体的简单方法

我们在科研工作中摸索出一种显示尼氏体的简单方法,对采用4％多聚甲醛(用10％甲醛或95％乙醇固定均可)固定的鸡胚背根节细胞悬液的涂片,用苏本精染色,清晰地显示了神经细胞浆内的嗜碱性物质-尼氏体。1 材料和方法 Hamburger 35期来亨鸡胚,摘取腰段背根节,用0.125％胰蛋白酶消化(37℃)30分钟,打散成细胞悬液后涂片,稍干后用4％多聚甲醛固定10分钟,自来水冲洗至无福尔马林气味后,用苏木精染色10分钟,用1％盐酸酒精分色90秒钟,常规脱水、透明、封片后置显微镜下观察。     

Ⅳ型胶原和纤维连结蛋白在肝病患者肝组织中的分布

IV型胶原和纤维连接蛋白(Fn )是机体细胞外组织的主要基质成份。本研究利用自制的荧光标记抗IV型胶原单克隆抗体(McAb)和罗丹明标记抗Fn抗体对14例(男13女1)肝活检组织进行染色,探讨IV型胶原和Fn在肝组织中分布情况与肝脏病变的相互关系。肝活检标本经福尔马林固定、石蜡包埋后作HE染色。用间接染色法制备免疫病理标本,用缓冲甘油封片后置荧光显微镜下观察。14例肝病患者的病理诊断如下:慢性迁延性肝炎1例;急性黄疸性肝炎1例;慢性小叶性肝炎1例;慢性活动性肝炎8例;肝炎后肝硬化3例。结果表明,随着慢性活     

介绍一种FAAPT冷冻切片快速固定液

手术中冷冻切片的病理诊断是根据冷冻切片组织学形态来进行 ,以确定病变组织的良恶性为目的〔1〕。制作冷冻切片包括制片、固定、染色三个环节 ,在冷冻切片中固定液的选择是不可忽视的一个因素。我们在工作中经反复试验在众多固定液中选择ＦＡＡ液 (福尔马林 -醋酸 -乙醇 ) ,经改良配成一种适合于冷冻切片的ＦＡＡＰＴ(福尔马林 -醋酸 -乙醇 -苦味酸 -ＴｒｉｔｏｎＸ - 10 0 )快速固定液。该液具有固定速度快、渗透力强、ＨＥ染色鲜艳、组织结构清晰等优点。1　材料与方法1 1　ＦＡＡＰＴ固定液的配制　福尔马林 15ｍｌ,醋酸 3ｍｌ,95 %乙醇…     

大鼠视网膜标本石蜡切片的固定方法

目的探讨制备大鼠视网膜石蜡切片的固定方法。方法将大鼠眼球固定于4%多聚甲醛(PFA)和不同浓度(1%、5%、10%、20%)甲醇组成的混和固定液中并制成石蜡切片,经HE染色后在显微镜下观察。结果经4%PFA+不同浓度甲醇固定的眼球外形均无明显变形和收缩。用添加1%和5%甲醇固定液固定的标本未见明显的视网膜脱离,而用添加10%和20%甲醇固定液的眼球的周边部视网膜出现轻度脱离。显微镜下视网膜组织结构完整清晰,各层细胞排列紧密,无明显裂隙,染色鲜艳。相反,采用福尔马林固定的视网膜发生严重脱离。结论 4%PFA+甲醇的固定方法即可保持视网膜结构完整,无脱离,又能提高抗原保存性,效果优于福尔马林固定液,是适合大鼠眼球,尤其是视网膜固定的一种有效方法。     

新鲜组织块标本经乙醇直接固定二年的流式细胞术DNA分析

本文报道了一种实体组织用于DesoxyribonucleicAcid(DNA)分析的Flowcy tometry(FCM) )样品保存新方法 ,即新鲜组织块乙醇直接固定法。所用样品为头颈部肿瘤手术切除的新鲜标本 3 0例 ,每例标本重约 0 5～ 1 g ,均等分为两份 ,1份置 70 %乙醇直接固定 ,室温放置 ,待两年后FCM检测。另一份置生理盐水中立即行流式细胞术DNA分析。两组样品经机械法制成单细胞悬液 ,PI染色后上机检测。结果显示 :从两组样品的DNA直方图分析 ,CV(coefficiencyofvariation)值、GO/G1、S及G2 /M各期比率无显著差异 (P >0 0 5)。我们认为在样品收集短期内难以完成 ,需积累保存 ,或需保存半年以上者 ,且不具备低温冷冻设备的条件下 ,新鲜组织块乙醇直接固定法是优于将组织块先制备成单细胞悬液再行乙醇固定的流式细胞术DNA样品保存方法     

石蜡包埋组织用于流式细胞光度术的单细胞悬液样品制备的研究

流式细胞光度术(Flow Cytometry)是一种快速定量分析细胞核酸含量的新技术,近年来已广泛用于肿瘤研究。单细胞悬液制备方法是应用该技术的重要环节。文献报道多采用新鲜肿瘤组织制备单细胞悬液。因此,不能结合恶性肿瘤病人     

抗人原发性肝细胞癌单克隆抗体的制备及其相应抗原的免疫组化定位的研究

本文报告应用肝癌新鲜组织细胞悬液制备抗人HCC的Mab,采用组织学免疫酶标记定位技术进行抗体的检测,获得一株具有肝癌相关的单克隆抗体Ab20,用此抗体在福尔马林固定石蜡切片肝癌组织进行组织学定位,35例中29例阳性,阳性率82.9％,与增生胆小管上皮,正常胃粘膜及胰腺腺泡上皮,肠癌、胃癌组织存在不同程度的交叉反应,而正常肝、胎儿肝及胚胎肝组织中无Ab20相应抗原的表达,对Ab20相应抗原的特性及Ab 20的应用价值有待于进一步的研究。     

HB防腐固定液对尸体固定效果的观察

目的探讨HB防腐固定液(HB液)是否能够取代福尔马林用于尸体防腐固定。方法检测HB液中的挥发性有害成分,观察单纯使用HB液和福尔马林固定后以及先用福尔马林固定再用HB液浸泡固定尸体的防腐效果(肉眼、组织学、病原学检查)及其对尸体的长期保存效果。结果 HB液中的挥发性有害成分明显低于福尔马林,但对新鲜标本的固定效果不良且易发生腐败;先经福尔马林固定的标本再用HB液浸泡固定能够有效地防止尸体腐败、保存组织结构、保持标本的弹性、韧性和完整性;HB液长期浸泡固定标本的效果与福尔马林的固定效果相同。结论使用HB液能够取代福尔马林进行尸体防腐,降低空气中挥发性有毒物质的含量,减少甲醛对师生们的刺激。但HB液不能直接用于新鲜标本的防腐固定。     

家鼠类肾上腺嗜铬细胞简易染色法

一、染色方法 :( 1 )固定小家鼠肾上腺髓质于下列固定液中 2 4hr:即 3%重铬酸钾水溶液 1 0 ml,1 0 %福尔马林 2 0 ml,蒸馏水2 0 ml。 ( 2 )移浸入 3%重铬酸钾水溶液 48hr。( 3)水洗 2 4hr。 ( 4 )石蜡包埋、切片。 ( 5 )切片脱蜡至蒸馏水。 ( 6 )常规苏木素染液 1 5 min、水洗。 ( 7) 1 %盐酸酒精分化适度、水洗1 5 min。 ( 8)各级酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。结果 :肾上腺髓质嗜铬细胞颗粒呈现棕黄色 ,细胞核呈蓝色。二、注意事项 :( 1 )动物选择家鼠类 ,组织力求新鲜。 ( 2 )固定液临用前配制。 ( 3)组织铬化过程需每日更换新液…     

胃腺细胞染色的探讨

显示胃底(体)粘膜的被覆上皮和腺上皮细胞(主细胞、壁细胞等)最常用的方法是10%福尔马林固定和HE染色,但染色效果常不佳,以致胃底(体)粘膜3种细胞对比不太清晰。为了寻求较佳的固定和染色方法,本文试用几种不同的固定液不同的染色方法对胃底(体)粘膜进行染色,并将其结果加以分     

Tween-40软化剂在组织切片技术上的应用

在制备临床和科研组织标本时 ,我们常会遇到一种既韧又硬的组织 ,如病变的指甲和眼球中的晶状体。以前对该类组织没有相适宜的技术方法制备组织切片 ,病甲的切片只有放弃 ;全眼切片只能把晶状体从眼球中挑出后进行 ,破坏了眼球的完整结构。这对于该类组织的结构和病变的研究十分不利。笔者参考有关文献[1] ,配制了 10 %～ 2 0 %的Ｔｗｅｅｎ 4 0软化剂 ,可以很好的软化该类组织并制备石蜡组织切片 ,然后进行ＨＥ染色和免疫组织化学染色 ,效果十分满意。一、材料和方法1 指甲 :把病人剪下的指甲 (如灰指甲 )投入 4 %甲醛液中固定 2～ 3ｄ ,置…     

Van Gieson染色液的配制及染色体会

VanGieson染色简称VG染色,是一种成熟的结缔组织染色方法,用于区别胶原纤维和肌纤维。其操作简单,结果可靠,是实验室常规特染方法之一。VG染色液配制的关键主要是酸性品红和苦味酸饱和液的比例。一些文献资料记载差异比较大,我们拟通过实验找出其最佳配制比例。1材料与方法取外科手术子宫平滑肌、皮肤组织、小肠肠壁新鲜组织;用10%福尔马林固定,常规石蜡切片,厚5μm,备用。从文献资料提供VG染液配制的多种比例中,选出6种进行染色对比(表1)。表16种比例配方染色比较分组1%酸性品红苦味酸饱和液结果1200100平滑肌胶原纤维呈深红-紫色21001…     

无醛固定液与甲醛固定液对组织形态学保存效果比较

组织固定是组织处理过程中最重要的环节,在病理诊断学中,10%中性缓冲福尔马林以其低成本、易配制和固定后组织保持优异的组织形态学特点而成为具有悠久传统的国际通用组织固定液。近年来,随着人们环保意识的提高,甲醛的危害性逐渐动摇了其作为病理学界固定“金标准”的地位,病理工作人员长期暴露于甲醛严重超标的环境中,对身体健康造成严重危害[1]。国外发达国家已经推广应用环保型固定液取代甲醛固定液。本实验通过配制3种无醛固定液来进行组织固定,通过 HE染色、组织化学染色(特殊染色),并以NBF作为对照来比较不同固定液对组织形态学方面的影响,试图建立新的高质量的组织固定液。     

大鼠肺组织单细胞悬液制备方法的研究

流式细胞术(flow cytometry,FCM)中细胞的分析检测均以单个细胞为基础,而各种单细胞悬液的制备是其中的关键环节,若细胞数量不足、细胞粘连成块、样品中杂质碎片过多均可造成分析失败。本实验采用胰酶消化法和研磨法制备新鲜大鼠肺实体组织单细胞悬液,通过细胞活力测定、FCM检测分析比较两种方法优劣。     

视网膜母细胞瘤的免疫组化研究

本文旨在研究神经元特异性稀醇化酶(NSE),神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和S-100蛋白在视网膜中的分布,视网膜母细胞瘤(Retino-blastoma,简称RB)的组织学起源及与预后的关系。材料取自我院手术切除的RB标本28例,经10%福尔马林固定,石蜡包埋,应用ABC法染色。抗体来自Dako公司。观察结果:GFAP在视网膜中Muller细胞、节细胞胞浆标记阳性,在肿瘤组织中阳性细胞17例分布于     

凋亡相关基因产物Fas和bcl-2蛋白在胃癌组织中的表达

用流式细胞免疫技术检测胃癌组织中Ｆａｓ及ｂｃｌ－２蛋白表达,报告如下。１　材料与方法１．１　一般资料　２７例进展期胃癌病人中男１５人,女１２人,年龄２７～６６岁。术前未化疗、放疗。即取新鲜癌组织和切缘正常粘膜组织各１．０ｇ左右,ＰＢＳ冲洗两遍,滤纸吸干后放入１０％福尔马林中待检。１．２　方法　制备单细胞悬液,调整细胞为１０９／ｍｌ。取两试管,每管加细胞悬液１００μｌ,其中一管加Ｆａｓ－ＦＩＴＣ（或ｂｃｌ－２－ＦＩＴＣ）（法国国际免疫公司提供）２０μｌ,一管加ＩｇＧ１－ＦＩＴ－Ｃ２０μｌ,室温避光…     

胃粘膜异型增生MG7-Ag表达与PHA_L受体的关系

胃粘膜异型增生(dysplasia)已公认是一种癌前病变,具有癌变的潜在趋向,本文应用胃癌单克隆抗体MG7和菜豆凝集素PHA_L对胃粘膜异型增生和胃癌进行对比研究,探讨两者的关系。1 材料和方法 本文选用1986～1988年间胃镜检查粘膜活检诊断的正常胃粘膜20例,胃粘膜异型增生100例,(按Ming和Morson等标准将异型增生分为轻度20例,中度60例,重度20例);胃癌30例;所有组织均用常规福尔马林固定,石蜡包埋。试剂:①胃癌单克隆抗体MG7由第四军医大学馈赠。②菜豆凝集素PHA_L及ABC试剂盒为美国Vector公司产品。染色方法用ABC法进行。     

抗人原发性肝细胞癌单克隆抗体的制备及其相应抗原的免疫组化定位

本文报告应用人体手术切除的肝癌新鲜标本制备细胞悬液免疫近交系BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0融合。抗体检测采用酒精或中性福尔马林固定,石蜡包埋的肝癌组织和癌周肝组织制作复合抗原片,应用ABC免疫组化技术。 本研究共进行了10次融合,计40×96孔,其中1778孔有杂交瘤生长,检出与肝癌相关性较明显者8孔,其中1孔经重复检测证实与抗原片肝组织无交叉,经连续克隆化达100％阳性,该株抗体定名为Ab20,经琼脂双扩测定为小鼠IgM型。用此抗体在常规福尔马林固定、石蜡切片组织进行了相应抗原的免疫组化定位。结果为:肝癌29/35(阳性/总例数,下同),癌旁肝组织 2/24,肝硬化1/11,正常肝组织0/6,11～20周龄胚胎肝0/5,30～40周龄胎儿     

机械法与机械-酶消化法制备大鼠膈肌组织单细胞悬液的比较

文题释义： 流式细胞分析技术：简称流式细胞术,是20世纪70年代初发展起来的一种在功能水平上可以对单个细胞或其他生物离子进行快速定量的一项新型分析技术和分选技术。它能够在短时间内高速分析上万个细胞,可以同时测量如细胞或粒子的体积、内部结构以及膜电位变化等生物或化学性质,进行多信息分析,具有快速、高灵敏、准确、多参数等特点。 单细胞悬液：是进行细胞体外培养和流式细胞分析的基础,即将组织分散成单个游离细胞,使其悬浮在液体培养基中,当然如外周血及骨髓标本等本身即为天然的单细胞悬液,这些细胞经过简单处理,就可以应用于流式分析、细胞分选、细胞培养等实验。如果2个或多个细胞粘连在一起或细胞碎片过多都将影响流式分析结果,进而导致实验失败。 背景：流式细胞术作为目前先进的细胞分析技术,其研究基础是单细胞悬液,但目前尚无有关膈肌组织单细胞悬液制备方法的相关报道。 目的：探索应用机械法与机械-酶消化法分别制备大鼠膈肌单细胞悬液的可行性并比较2种方法获得单细胞的数量和活性。 方法：以SD大鼠的新鲜膈肌组织为标本,在机械法的基础上,选用胰蛋白酶、胶原酶Ⅰ、胶原酶Ⅱ、胶原酶Ⅳ及其不同组合进行消化制备膈肌单细胞悬液,观察细胞形态并经锥虫蓝染色后测定细胞活性,对活细胞、失活细胞和细胞团块进行计数并计算出细胞存活率和单细胞悬液浓度,结果进行统计学比较分析。 结果与结论：①机械-酶消化法所制得的单细胞悬液较机械研磨法细胞分散度好、形态完整、边界清楚、杂质及细胞碎片较少、背景较干净;②单纯机械研磨法制备的单细胞悬液活细胞数较低,失活细胞数较高,细胞存活率最低,团块较多;③在机械法的基础上,加入胰蛋白酶、胶原酶Ⅰ和胶原酶Ⅳ3种等体积混合酶所得单细胞悬液的活细胞数及悬液浓度最高,每0.1 g膈肌组织可获得(1.0-2.0)×10⁶个细胞,细胞存活率较高,与单纯机械法获得单细胞悬液比较,在活细胞、失活细胞、细胞团块、细胞存活率及悬液浓度方面差异均有显著性意义(P < 0.05);其次是加入胰蛋白酶和胶原酶Ⅳ这2种等体积混合酶消化法,所得单细胞悬液浓度、细胞成活率及细胞团块方面也均较为理想;④结果表明,机械法和机械-酶消化法均能成功制备出大鼠膈肌单细胞悬液,机械-酶消化法优于单纯机械法,其中加入胰蛋白酶、胶原酶Ⅰ和胶原酶Ⅳ3种等体积混合酶的机械-酶消化法所得单细胞悬液效果最佳,是较优选的膈肌单细胞悬液制作方法。 ORCID: 0000-0002-4486-5917(张远圆) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

气道抽吸液标本单细胞转录组测序前细胞处理技术的比较

目的探索适用于气道抽吸液标本单细胞转录组测序的细胞前处理方法。方法从4例急性呼吸道感染患者中新鲜采集4份气道抽吸液标本, 用痰消化液消化后过细胞滤网制备成单细胞悬液, 分别用新鲜细胞直接建库(direct emulsion, DE)、用10×Genomics的单细胞RNA固定试剂固定后混合建库(direct-fix, DF)、将细胞冻存复苏再固定后(frozen-fix, FF)混合建库3种方法操作, 3种方法均以104个细胞进行油包水处理, 用10×Genomics平台进行单细胞测序, 对获取的细胞数量、数据质量、注释的细胞种类、标记基因的表达水平进行比较分析, 用Pearson相关性分析3种前处理方法获得的同种细胞亚群高变基因表达差异。比较3种前处理方法获得的同一细胞亚群的差异基因在不同方法之间的表达水平。通过Pearson相关分析研究3种前处理方法获得的同一细胞亚群之间差异基因表达的相关性。结果 DE、FF、DF方法获得的单细胞数量中位数分别为2 733、1 140和5 897个(P>0.05), 唯一分子识别符高于500, 基因中位数分别为801、887、1 259(P&...