丝裂原活化蛋白激酶参与血小板源生长因子刺激的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖(英文)

选择大鼠主动脉平滑肌细胞作为细胞模型 ,观察丝裂原活化蛋白激酶 ( MAPK)信号通路在血小板源生长因子 ( PDGF)诱导的血管平滑肌细胞( VSMC)增殖中的作用。用 [3 H]Td R参入率作为衡量 VSMC增殖的指标 ,以 Western-印迹方法 ,用磷酸化一抗测 MAPK磷酸化的程度作为衡量 MAPK活性的指标 ,实验结果发现 ,PDGF( 0 .0 2 - 2 0μg·L-1)诱导 VSMC增殖呈剂量依赖性。 PDGF( 2μg· L-1)能持续性激活 MAPK。用 PD980 59( 1 0 -1 0 0 mol· L-1)预处理 1 5min后 ,MAPK活性较对照组均有明显差别 ( P<0 .0 5) .MAPK反义寡核苷酸能明显抑制 PDGF诱导的 MAPK的激活 ,并明显抑制 VSMC[3 H]Td R参入。上述结果表明 ,MAPK参与 PDGF促细胞增殖的信号途经 ,它的持续性激活与细胞增殖有关 ,针对 p42 /p44MAPK设计的反义寡核苷酸类能有效抑制 PDGF诱导的血管平滑肌细胞增殖。     

牛磺酸对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

观察了牛磺酸对自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）和Ｗｉｓｔａｒ－Ｋｙｏｔｏ大鼠（ＷＫＹ）动脉血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的影响．结果显示牛磺酸（１．０ｍｍｏｌＬ－１）虽然抑制ＷＫＹ的ＶＳＭＣ的增殖，对ＳＨＲ的ＶＳＭＣ的生长却无影响，同时发现牛磺酸（１０ｍｍｏｌＬ－１）也不能减低小牛血清所致的ＳＨＲ的ＶＳＭＣ内肌醇磷脂量的异常增加．提示牛磺酸虽然可以通过抑制ＷＫＹ的ＶＳＭＣ增殖进而在防治某些血管性病变中发挥作用，但是对于ＳＨＲ这一遗传性高血压大鼠，牛磺酸既不能抑制ＶＳＭＣ的异常增殖也未能阻止肌醇磷脂量的增加．     

普洛托品对兔胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的　观察普洛托品 (Pro)对正常和内皮素 (ET)诱导的血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的影响。方法　采用组织块贴壁法培养兔胸主动脉VSMC ,应用细胞计数、[3 H] TdR参入量、微量MTT比色测定及电镜法 ,观察Pro对VSMC增殖、DNA合成和细胞超微结构的变化。结果　ET对VSMC的增殖和DNA合成有显著的促进作用 ;1、10、10 0μmol·L-1浓度Pro能够逆转ET所致的 [3 H] TdR参入量、MTT比色的吸光度、细胞计数的增多及电镜下细胞超微结构的改变 ,且随着浓度的增加及时间的延长 ,抑制作用愈显著 ;10、10 0 μmol·L-1浓度Pro对未经ET处理的VSMC有抑制其增殖作用 ,但其抑制作用弱于ET处理组。结论　Pro可显著地抑制正常及ET诱导的VSMC增殖 ,并且对ET诱导的VSMC增殖抑制作用更明显 ,提示Pro可作为临床防治动脉粥样硬化的有效药物。     

胰岛素样生长因子-1对大鼠血管平滑肌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨在动脉粥样硬化过程中胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及凋亡的影响。方法用脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞RAW264.7制备炎症培养基(IM)。体外培养VSMC分为4组,给予IM、IM+IGF-1 60 ng/ml、IM+IGF-1 90 ng/ml、IM+IGF-1 120 ng/ml进行干预,然后分别用溴化噻唑蓝四氮唑(MTT)法和Annexin-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)流式细胞术对平滑肌细胞的细胞活力[用吸光度(A)值表示]及凋亡率进行检测。结果各组VSMC在不同干预下,用MTT法测得的A值分别是(0.26±0.06),(0.30±0.10),(0.62±0.09),(0.55±0.05)。IM+IGF-1 90 ng/ml组、IM+IGF-1 120 ng/ml组与IM组相比较差异有统计学意义(P<0.01)。不同干预条件下,各组VSMC凋亡率分别是(10.86±0.15)%,(9.64±0.65)%,(3.85±0.51)%,(4.82±0.08)%。干预后的3组与IM组相比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在动脉粥样硬化发生发展过程中,IGF-1在促进VSMC增殖的同时抑制VSMC凋亡。     

金粉蕨素抑制大鼠主动脉平滑肌增殖作用及机制

目的 :观察金粉蕨素对牛血清刺激的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用 ,并对其作用机制进行初步探讨。方法 :体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞 ,以终浓度为 10 %的新生牛血清 (NCS)作为刺激因素 ,用噻唑蓝 (MTT)比色法和细胞计数法观察细胞增殖状况 ,用流式细胞仪分析细胞周期 ,用Westernblot实验测定蛋白表达。结果 :与 10 %牛血清组相比 ,不同浓度金粉蕨素组的MTT测定值与细胞数目均明显下降 (P <0 .0 5 ) ,其下降幅度呈浓度依赖性 ;10 μmol·L-1时达峰值 (P <0 .0 1) ;细胞周期分析显示 ,金粉蕨素组G1期百分比 (85 .1% )高于10 %牛血清组 (70 .0 % ) ,而S期比例 (4 .3% )低于10 %牛血清组 (16.4 % ) ;Westernblot结果显示给药组P ERK1 2蛋白表达明显低于同时间点牛血清组。结论 :金粉蕨素能阻止细胞周期由G0 G1期向S期推进 ,抑制血管平滑肌细胞增殖 ,此作用与其抑制ERK1 2磷酸化、影响MAPK ERK通路激活有关。     

参麦注射液对培养大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响和机理研究

目的 研究参麦注射液对血管平滑肌细胞增殖的影响和机理。方法 以培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞为模型，通过细胞计数及测量3H-胸腺嘧啶核苷掺入量观察细胞增殖情况，同时测定培养液中超氧化物歧化酶(SOD)活性、脂质过氧化物、前列环素(PGI2)的含量，比较分析加入不同剂量参麦注射液后上述指标的变化和相互关系。结果 不同剂量参麦注射液组的平滑肌细胞增殖及3H—胸腺嘧啶核苷掺入量均显著低于对照组，SOD活性及PGI2含量显著高于对照组，脂质过氧化程度显著降低。结论 参麦注射液对血管平滑肌细胞增殖具有抑制作用，并呈剂量依赖关系，其作用可能与增加SOD活性、降低脂质过氧化物水平，升高PGI2／TXA2有关。     

多沙唑嗪抑制人血管平滑肌细胞增殖的实验研究

目的探讨多沙唑嗪对人血管平滑肌细胞(VSMCS)增殖的抑制作用。方法将0.1、1、10、25μmol/L的多沙唑嗪(Doxazosin,Dox)作用于体外培养的VSMCS,采用氚-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入的方法检测细胞的增殖。结果在1、10、25μmol/L的Dox作用下,VSMCS的3H-TdR的掺入量分别为(983±58.7)cpm、(730±54.9)cpm、(500±64.1)cpm,显著低于对照组的(1270±96.5)cpm(P<0.01),并表现为剂量依赖性(P<0.01)。结论多沙唑嗪能够抑制人VSMCS的增殖,对经皮腔内冠状动脉成形术(PTCA)后再狭窄可能有防治作用。     

Effects of alpinetin on rat vascular smooth muscle cells

The object of this work was to study the effects of alpinetin on cultured rat aortic smooth muscle cells. It was observed that H2O2 (100 micromol L(-1)) induced increase of LDH (lactate dehydrogenase) leakage in the medium of VSMC by 7.4% (p < 0.01) and 10(-7) mol L(-1) alpinetin significantly decreased LDH leakage induced by H2O2 (p < 0.01). Alpinetin had the effects of inhibiting VSMC proliferation in a dose-dependent manner under the condition of serum stimulation for 24 and 48 h, but with serum stimulation for 72 h adverse effects on VSMC proliferation appeared. 10(-7) and 10(-8) mol L(-1) alpinetin had significantly inhibitory effects on VSMC migration by 67.9% (p < 0.001) and 34.1% (p < 0.01) respectively. It was also found that alpinetin (10(-7)-10(-9) mol L(-1)) could significantly inhibit the production of NO in cultured VSMC induced by TNFalpha (200 U ml(-1)). At 10(-7), 10(-8) and 10(-9) mol L(-1) the modulation of NO was by 22.6% (p < 0.001), 20.6% (p < 0.01) and 13.9% (p < 0.05), respectively. In summary, the data show that alpinetin has, to some extent, protective effects on VSMC.     

激活血管平滑肌细胞OX40-OX40L系统对其增殖及迁移能力的影响

目的 研究OX40-OX40L轴的激活对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移能力的影响.方法 原代培养大鼠主动脉VSMC并传代,培养液中添加OX40L(0、0.1、1、10或20 mg/L)刺激24 h,或在培养基中加入选定浓度OX40L 10 mg/L,刺激6、12、24、36、48 h.以CCK-8法测定VSMC增殖率,以划痕法测定VSMC迁移率.结果 在OX40L浓度从0～20 mg/L范围内,刺激24 h后,VSMC的增殖、迁移能力的增强与OX40L浓度呈剂量依赖性,并明显大于OX40L 0 mg/L组(P＜0.05).OX40L浓度达到10 mg/L时,VSMC的增殖、迁移能力已接近最大值.应用10 mg/L的OX40L刺激不同时间(6、12、24、36、48 h)后,发现随着刺激时间的延长,VSMC增殖、迁移能力逐渐增强;刺激至24 h,VSMC增殖能力达到最大值.结论 OX40-OX40L轴的激活可能通过促进VSMC的增殖及迁移影响动脉粥样斑块的进展.     

胰岛素样生长因子-1对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法用脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞RAW264.7极化为M1型巨噬细胞,制备炎症模型即条件培养基(CM),未加LPS诱导组为对照组即非条件培养基(nCM)。体外培养VSMC分为5组,分别予nCM、CM、CM+IGF-1 60 ng/ml、CM+IGF-190 ng/ml、CM+IGF-1 120 ng/ml干预,用噻唑蓝(MTT)法检测各组吸光度(A)值,以A值反应各组VSMC的数量。结果巨噬细胞RAW264.7在LPS 0 ng/ml、10 ng/ml、100 ng/ml、1μg/ml、10μg/ml浓度刺激下各组上清液中IL-6的浓度分别是(6.75±0.12)pg/ml、(7.82±1.53)pg/ml、(44.09±1.58)pg/ml、(155.71±23.93)pg/ml、(436.59±3.15)pg/ml,差异有统计学意义(P<0.01);VSMC在5组不同干预下各组A值分别是(0.53±0.07)、(0.26±0.06)、(0.30±0.10)、(0.62±0.09)、(0.55±0.05),差异有统计学意义(P<0.01)。结论 M1型巨噬细胞可抑制VSMC增殖,但IGF-1可拮抗M1型巨噬细胞对VSMC增殖的抑制作用,本实验中IGF-1促进VSMC增殖的最适浓度为90 ng/ml。     

龙胆苦苷对大鼠血管平滑肌细胞增殖、迁移的影响

目的 观察龙胆苦苷对血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMC）增殖、迁移能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 体外分离培养大鼠血管平滑肌细胞,将血管平滑肌细胞随机分为分为control组、GPS处理组、PF-3758309+GPS组。采用噻唑蓝(MTT)法观察各组细胞增殖能力,计算细胞增殖抑制率;采用细胞划痕实验观察各组细胞迁移能力,计算细胞迁移率。采用Western blotting法检测各组细胞Pak4及MMP-2表达情况。结果 与对照组相比,龙胆苦苷处理组细胞增殖率及迁移率明显降低（P<0.01）,GPS组细胞内Pak4、MMP-2 表达水平明显降低（P<0.01）;而与GPS组相比,PF-3758309+GPS组可明显增加细胞增殖率及迁移率（P<0.05）,血管平滑肌细胞内 MMP-2 表达水平明显上调（P<0.05）。 结论 龙胆苦苷具有抑制血管平滑肌细胞增殖及迁移,其机制可能与抑制Pak4相关。     

胰岛素-反义c-myb-硫代磷酸寡脱氧核苷酸对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的研究新制剂胰岛素 反义c myb 硫代磷酸寡脱氧核苷酸 (PS ODN)对平滑肌细胞增殖的抑制作用。方法大鼠主动脉平滑肌细胞 (SMC)置DMEM中培养。用 2 0 %胎牛血清刺激SMC快速增殖。胰岛素与反义c myb PS ODN在一定条件下 ,如反应液、pH、温度、离子浓度 ,共孵育形成交联物。通过高效液相色谱定性和纯化该交联物。用3H TdR掺入率反映SMC增殖抑制效率。结果在加 2 0 %FBS的DMEM中生长的SMC胰岛素结合力明显增强。交联物胰岛素 反义c myb PS ODN对SMC增殖的抑制作用比单纯反义c myb PS ODN的抑制作用强 ,抑制效率分别为 4 8.3 %和 2 9.5 %。结论胰岛素受体靶向途径可能为一种治疗再狭窄的有效方法。     

缬沙坦对球囊损伤后血管平滑肌细胞增生的影响

目的 探讨缬沙坦因子防治人类血管成形术后再狭窄的可行性方法观察新的非肽类血管紧张素Ⅱ的Ⅰ型(AT_1)受体拮抗剂,缬沙坦(Valsartan),对血管平滑肌细胞(VSMC)增生的影响。对大鼠髂动脉球囊内皮剥脱术后过度增生模型采用~3H-TdR和~3H-Leu掺入,免疫组化染色检测VSMC中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及图象分析血管壁形态学变化。结果 缬沙坦显著减少~3H-TdR和~3H-Leu的掺入量,减少新生内膜面积和PCNA阳性细胞数。结论 缬沙坦能抑制大鼠动脉的球褒内皮损伤后的VSMC增生,可能它是防治血管成形术再狭窄的有效药物。     

叶酸抑制同型半胱氨酸诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的研究

目的探讨叶酸抑制同型半胱氨酸致大鼠血管平滑肌细胞增殖的研究。方法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC),流式细胞仪检测VSMC周期,[3H]TdR参入测定VSMC的DNA合成。结果同型半胱氨酸以剂量依赖关系使VSMC周期中的G0/G1期细胞比例明显减少,S期细胞比例显著增多,增加VSMC的[3H]TdR参入。叶酸可明显抑制同型半胱氨酸诱导的作用。结论同型半胱氨酸能诱导VSMC增殖,叶酸能抑制同型半胱氨酸诱导的VSMC增殖。     

Effects of isorhynchophylline on angiotensin II‐induced proliferation in rat vascular smooth muscle cells

Proliferation of vascular smooth muscle cells (VSMCs) is a crucial event in cardiovascular diseases. Isorhynchophylline, an alkaloid from a traditional Chinese medicine Gambirplant, has been used to treat cardiovascular diseases. The aim of this study was to investigate the effects of isorhynchophylline on angiotensin II (Ang II)‐induced proliferation of rat VSMCs. VSMCs were isolated from rat artery and cultured for 14 days before experimentation. The effect of isorhynchophylline on Ang II‐induced proliferation was evaluated by cell number, MTT assay and flow cytometry, and nitric oxide (NO) content and activity of NO synthase (NOS) were measured. The expression of proto‐oncogene c‐fos, osteopontin (OPN) and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) mRNAs was measured by real‐time RT‐PCR. VSMC cultures were verified by morphology and immunostaining with α‐smooth muscle actin. Isorhynchophylline (0.1–10.0 μM) was not toxic to VSMCs, but markedly decreased Ang II (1.0 μm )‐enhanced cell number and MTT intensity, and blocked cell transition from G₀/G₁ to S phase. Furthermore, isorhynchophylline increased the NO content and NOS activity, and suppressed Ang II‐induced over‐expression of c‐fos, OPN and PCNA. Thus, isorhynchophylline was effective against Ang‐II induced cell proliferation, an effect that appears to be due, at least in part, to increased NO production, regulation of the cell cycle, and depressed expression of c‐fos, OPN and PCNA related to VMSC proliferation.     

Ligustilide inhibits vascular smooth muscle cells proliferation

Proliferation and migration of vascular smooth muscle cells (VSMCs) are believed to develop atherosclerosis and venous bypass graft disease. Ligustilide is widely used to treat some pathological settings such as atherosclerosis and hypertension. The aim of this study was to examine the effect of ligustilide on VSMCs proliferation. The results show that ligustilide significantly inhibited VSMCs proliferation and cell cycle progression. Further analysis shows that ligustilide suppressed reactive oxygen species production and extracellular signal-related kinases (ERK), c-Jun N-terminal protein kinase (JNK), and p38 MAP kinase. Cells were treated with antioxidant, superoxide dismutase, catalase, and DPI, respectively, leading to repress ERK, JNK, and p38 activation. The inhibitors of mitogen activated protein kinase (MAPK), PD98059, SB203580, and Sp600125, inhibited cell proliferation. These findings suggest the antiproliferative effect of ligustilide was associated with the decrement of reactive oxygen species resulting in the suppression of MAPK pathway. Thus, ligustilide contribute to be the effective agent in preventing cardiovascular diseases.     

IGF对大鼠平滑肌细胞骨桥蛋白表达的影响

目的　研究胰岛素样生长因子 (IGF)对培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞骨桥蛋白表达的影响。方法　大鼠平滑肌细胞被随机分为对照组 ,IGF I不同浓度 (5、10、2 0、3 0μg·L-1)及时间 (3、2 4、48h)干预组 ,用RT PCR及Western blotting技术结合光密度扫描分析 ,观察IGF I对培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞内骨桥蛋白基因表达的影响。结果　IGF I 2 0 μg·L-1即能刺激平滑肌细胞内骨桥蛋白的表达 ,RT PCR结果分析骨桥蛋白与 β actinmRNA比值 3h干预组 1 0 2 9± 0 0 60 ,2 4h干预组 1 0 3 2± 0 0 71和 48h干预组1 13 2± 0 190分别较对照组提高了 3 9 70 % ,40 44 %和5 4 0 5 % ;Western blotting分析 3h干预组骨桥蛋白量 19 5 1± 16 983 ,2 4h后 167 98± 15 780和 48h后 175 64±9 913分别较对照组提高 5 3 3 0 %、1 15倍和 1 2 5倍。结论　说明IGF I能在基因水平上刺激大鼠平滑肌细胞内骨桥蛋白的表达     

甘草次酸对血管平滑肌细胞c-fos mRNA表达及细胞增殖的影响

目的　研究甘草次酸 (GA)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)原癌基因c fosmRNA表达及细胞增殖的影响 ,探讨GA与血管紧张素Ⅱ (AⅡ )受体结合的可能机制。方法　原代培养大鼠血管平滑肌细胞 ,[3H]TdR参入DNA、MTT分析法、Northernblot。结果　①低浓度GA( 1× 10 -9mol·L-1)及高浓度GA( 1× 10 -5mol·L-1)均能导致c fosmRNA迅速表达 ;1× 10 -5mol·L-1Sar AⅡ能够阻断AⅡ、GA诱导的VSMCc fos表达 ;低浓度和高浓度GA都能促进AⅡ ( 1× 10 -5mol·L-1)诱导的VSMCc fos表达 ;②低浓度GA对细胞的增殖有促进作用 ;随着浓度的升高 ,促增殖作用减弱 ;高浓度GA抑制细胞的增殖。Sar AⅡ单独作用于VSMC ,不影响细胞增殖 ;Sar AⅡ能够阻断AⅡ对细胞增殖的促进作用 ;Sar AⅡ既抑制低浓度GA促细胞增殖作用 ,也消除高浓度GA抑制细胞增殖作用 ;低浓度GA与AⅡ联合作用 ,对细胞增殖的促进作用更加显著 ;高浓度GA与AⅡ联合作用于VSMC ,则可减轻高浓度GA对细胞增殖的抑制作用。结论　GA能激活c fos转录因子 ,从而产生对VSMC的增殖作用 ,因此 ,GA具有AT1受体的激动剂2 0 0 2 0 4 0 3收稿 ,2 0 0 2 0 7 2 3修回作者简介 :张凤云 ,女 ,33岁 ,硕士 ;贺师鹏 ,男 ,67岁 ,教授。研究方向 :酶和受体的拮抗剂样作用     

重组人白介素-10对大鼠血管平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响

目的　观察重组人白介素 10 (rhIL 10 )分别对肿瘤坏死因子 (TNF α)和血小板源性生长因子 (PDGF BB)刺激下离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响。方法　体外培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞 ,采用MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态 ,应用流式细胞术测定细胞周期。结果　与对照组相比 ,肿瘤坏死因子和血小板源性生长因子均对血管平滑肌细胞增殖具有明显的刺激作用 (P <0 0 5 )。rhIL 10单独应用对血管平滑肌细胞生长没有影响 (P >0 0 5 )。在TNF α和血小板源性生长因子分别刺激下 ,rhIL 10均可抑制血管平滑肌细胞的生长(P <0 0 5 )。流式细胞术测定的结果显示rhIL 10分别可以使TNF α和PDGF BB作用下的VSMCs大部分处于G0 /G1期 ,与对照组相比差异有显著性 (P <0 0 1)。结论　重组人白介素 10可抑制细胞因子和生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖     

重组平颏海蛇磷脂酶A2对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:观察重组平颏海蛇磷脂酶A2(rPLA2)对离体大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响。方法:体外培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,采用MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。应用流式细胞术测定细胞周期。结果:各组的细胞增殖率分别为对照组(0.781±0.463);rPLA2100mg·L-1组(0.415±0.205);rPLA210mg·L-1(0.942±0.258);rPLA21mg·L-1组(1.005±0.350),,其中高剂量rPLA2100mg·L-1组与对照组相比细胞增殖率有显著差异(P<0.05);低剂量rPLA210mg·L-1和rPLA21mg·L-1组与对照组相比均无显著差异(P>0.05)。流式细胞术测定的结果显示rPLA2100mg·L-1组可以使VSMC大部分处于G0/G1期,与对照组相比有明显差异(P<0.01)。结论:重组平颏海蛇磷脂酶A2对大鼠血管平滑肌细胞增殖有一定的抑制作用。