Ca2＋对小鼠骨髓基质干细胞定向分化为肝细胞的作用

目的研究小鼠骨髓基质干细胞（BMSCs）向肝细胞定向分化过程中Ca2＋的变化,探讨BMSCs向肝细胞定向分化的机制。方法无菌分离小鼠骨髓,贴壁法纯化和扩增BMSCs。分别添加肝组织提取液、β-神经生长因子（β-NGF）、β-NGF＋尼莫地平诱导BMSCs向肝细胞分化,对照组添加等量营养液。光镜下观察分化细胞的形态;免疫细胞化学染色法检测分化细胞的肝细胞特异性标志物α-1-抗胰蛋白酶（AAT）和清蛋白（ALB）的表达;吲哚靛青绿（ICG）摄取实验鉴定分化细胞的转运功能;流式细胞技术对比检测肝样分化细胞内游离Ca2＋的含量;MTT法检测钙离子拮抗剂尼莫地平对干细胞增殖和定向分化能力的影响。结果肝组织提取液和β-NGF诱导后,分化细胞逐渐变圆、呈肝前体细胞特定形态;分化细胞摄取ICG,呈绿色;分化细胞呈AAT和ALB阳性表达;肝组织提取液组和β-NGF组比较差异无显著意义。β-NGF诱导形成的肝样分化细胞Ca2＋含量显著高于对照组细胞（t=8.757,P〈0.01）。尼莫地平可以阻断BMSCs向肝细胞的诱导分化,抑制干细胞的增殖。结论 Ca2＋对BMSCs的增殖和向肝细胞定向分化具有重要的作用。     

小鼠胚胎干细胞向肝细胞定向分化过程中NF-κB表达

目的了解小鼠胚胎肝脏发育的过程和体外干细胞向肝细胞定向分化与NF-κB表达的关系,探讨干细胞向肝细胞定向分化的分子机制。方法分离培养扩增小鼠原始生殖嵴细胞,向培养液中分别加入20μg/L的β-神经细胞生长因子(β-NGF)、0.5g/L新生鼠肝脏提取液和胎肝细胞上清液,体外诱导小鼠生殖嵴来源的胚胎干细胞(PGCs)向肝样细胞定向分化。观察细胞的形态学变化;免疫细胞荧光法检测肝样分化细胞内α1-抗胰蛋白酶(AAT)及NF-κB的表达,Real-Time PCR方法检测诱导分化过程中NF-κB mRNA的表达。免疫组化法检测胚胎发育11.5、14.5、18.5d的肝脏组织中NF-κB的表达。结果 PGCs培养液中加入β-NGF、新生鼠肝脏提取液和胎肝细胞上清液可见部分细胞变为圆形或卵圆形;诱导12d后,圆形或卵圆形细胞呈ATT阳性表达;在诱导分化过程中NF-κB的表达逐渐增强,伴随肝细胞的成熟而呈阳性表达并由胞质转入胞核。Real-Time PCR方法检测结果显示,在诱导分化过程中NF-κB的表达升高(t=50.229~75.344,P<0.01)。在胎肝发育过程中随肝原细胞向肝成熟细胞转化,肝细胞胞质中NF-κB的表达逐渐增强,并向细胞核内转移。结论 NF-κB在PGCs体外向肝细胞分化和体内肝发生过程中变化一致。     

NF-κB和Ubc9在HGF和β-NGF诱导骨髓基质干细胞分化为肝细胞中的作用

目的探讨核因子κB(NF-κB)和泛蛋白连接酶(Ubc9)在肝细胞生长因子(HGF)和β-神经生长因子(β-NGF)诱导骨髓基质干细胞(BMSCs)向肝样细胞分化中的作用。方法取小鼠股骨骨髓,直接贴壁法分离纯化BMSCs,传代,取第3代BMSCs,分为HGF组(胎肝细胞加入30μg/L的HGF诱导14d)、β-NGF组(胎肝细胞加入50μg/L的β-NGF诱导14d)、阳性对照组(胎肝细胞培养12d)和阴性对照组(不加诱导剂的BMSCs)。显微镜下观察诱导不同时间各组细胞形态变化,应用免疫荧光法鉴定肝细胞特异表达蛋白α1-抗胰蛋白酶(AAT)表达,免疫荧光及Realtime-PCR方法检测诱导14d后细胞NF-κB、Ubc9蛋白和mRNA的表达。结果显微镜下观察显示,经过HGF与β-NGF诱导14d后部分细胞呈圆形或卵圆形,与阳性对照组细胞形态一致;免疫荧光结果显示,经HGF与β-NGF诱导14d后细胞胞质AAT均呈阳性表达,部分细胞胞质与胞核同时呈阳性表达。与阴性对照组比较,经HGF与β-NGF诱导后NF-κB和Ubc9主要在细胞胞质中呈阳性表达,荧光强度随细胞形态向肝细胞分化呈现逐渐增强趋势。Realtime-PCR结果显示,HGF组、β-NGF组NF-κB、Ubc9mRNA的表达均较阳性对照组增高,差异有显著性(F=2 272.6、866.4,P<0.01)。结论 HGF和β-NGF诱导BMSCs向肝细胞分化过程中NF-κB和Ubc9均呈阳性表达,在BMSCs向肝细胞诱导分化过程中发挥重要作用。     

bFGF、EGF对新生大鼠海马神经干细胞分化的影响

目的　观察碱性成纤维生长因子 (bFGF)、表皮生长因子 (EGF)对新生大鼠海马神经干细胞生长和分化的影响。方法　从新生大鼠海马分离培养神经干细胞 ,采用免疫荧光法检测神经上皮干细胞蛋白 (Nestin)的表达 ,使用bFGF、EGF作为诱导因子 ,通过免疫荧光染色和流式细胞仪分选细胞的方法检测神经干细胞分化为 3种神经细胞的状况。结果　取材细胞大部分为Nestin免疫阳性细胞 ,各实验组均可促进培养细胞的生长和分化 ,bFGF能明显增加神经元特异性烯醇化酶 (NSE)的表达 (P <0 .0 5 ) ,EGF能明显增加胶质原纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达(P <0 .0 5 )。结论　bFGF倾向于诱导干细胞增殖并向神经元方向分化 ,EGF则倾向于诱导干细胞向胶质细胞分化 (P <0 .0 5 )。     

脊髓源神经干细胞向胆碱能神经元诱导分化的研究

目的 研究胚胎大鼠脊髓源性神经干细胞的培养和在体外骨髓基质细胞诱导其分化的情况。方法 从孕龄13d的胚胎大鼠脊髓组织中分离获得神经干细胞，采用含表皮生长因子（EGF）及碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的无血清限定性培养基培养，同时进行诱导分化，观测脊髓神经干细胞向胆碱能神经元分化的情况，用细胞免疫荧光化学方法鉴定分化结果。结果 可从胚胎脊髓中分离得到大量的神经于细胞，通过限定性培养基培养可获得于细胞球，经从骨髓基质细胞培养液中获得的限制性培养液在体外可被诱导分化，用细胞免疫荧光化学法鉴定，可见有胆碱能神经元生成。结论 胚胎大鼠脊髓神经干细胞在添加EGF与bFGF的限定性培养基中可以增殖并长期保持稳定的性状，在体外可以被诱导分化为胆碱能神经元。     

肝样细胞的诱导分化及处理胆红素的能力

目的：利用肝细胞生长因子（HGF）、表皮生长因子（EGF）和成纤维细胞生长因子-4（FGF-4）诱导骨髓间充质干细胞（MSCs）向肝细胞分化,为肝组织工程提供新的细胞来源。方法：取志愿者骨髓,使用密度梯度离心法联合贴壁筛选法获取MSCs,用含有HGF、EGF、FGF的培养基进行培养。用流式细胞仪、免疫细胞化学法鉴定细胞表型,检测诱导后细胞胆红素处理能力。结果：骨髓MSCs生长良好,表型为CD29阳性,CD34阴性。诱导后细胞可在21～28 d时形成肝样细胞。诱导7 d后细胞检测到AFP的表达,第14天时CK18呈阳性表达,随着诱导时间的延长,阳性率增加,并能显著降低胆红素浓度。结论：HGF、EGF、FGF联合能诱导骨髓MSCs分化为具有处理胆红素能力的肝样细胞。     

大鼠骨髓间充质干细胞体外分化为肝细胞诱导条件的筛选

目的比较目前常用的诱导因素诱导MSCs分化为肝细胞的效果,以探讨大鼠骨髓MSCs向肝细胞方向分化的最佳诱导条件.方法无菌条件下取成年大鼠四肢骨骨髓分离出骨髓来源的间充质干细胞（marrowmesenchymal stemcells,MSCs）.在培养液中分别添加不同量的干细胞因子（SCF）、肝细胞生长因子（HGF）、成纤维生长因子-4（FGF-4）和不同组合的细胞因子以及不同量的肝细胞提取液,诱导MSCs向肝细胞方向分化,以未加任何诱导因素的培养液作为对照组,观察诱导细胞的形态学变化,并且应用生化检测诱导培养液上清中白蛋白和尿素的产生量,免疫组化检测分化后细胞的细胞角蛋白-18（CK18）的表达,并观察分化后细胞吲哚靛青绿（ICG）的摄入情况.结果诱导分化后的细胞呈圆形或多角形,类似肝细胞形态.未加任何诱导因素的培养细胞仍旧呈长梭形.不同用量的单一SCF、HGF和FGF-4、不同组合的细胞因子以及不同用量的肝细胞提取液均能诱导MSCs向肝细胞方向分化,但肝细胞提取液（1.0 mg/mL）组的诱导效果最佳.各诱导培养上清液中均有不同量的白蛋白和尿素的产生,诱导分化后细胞均见不同程度CK18的表达,并见分化后细胞不同程度的摄入ICG.未加任何诱导因素的细胞培养上清液中未见白蛋白和尿素产生,细胞不表达CK18,同时不能摄入ICG.结论细胞因子（SCF、HGF、FGF-4）和肝细胞提取液均能诱导MSCs向肝细胞方向分化,其中肝细胞提取液的诱导效果最佳.     

大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导向神经细胞样细胞分化

目的 研究大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)离体分离和培养方法,探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)、全反式维甲酸(RA)、骨形态发生蛋白-7(BMP-7)在体外诱导BMSCs向神经干细胞(NSCs)分化的作用.方法 采用出生4周SD大鼠的全骨髓细胞进行培养,传至第3代时,分为3组:A组,bFGF EGF RA进行诱导分化;B组,BMP-7进行诱导分化;C组,不加因子继续培养.在倒置显微镜下每日观察、记录BMSCs的诱导分化情况,并应用免疫组化技术对细胞进行兔抗神经元特异性烯醇化酶(NSE)单抗鉴定.结果 A组诱导7 d后有部分细胞具备神经元样细胞形态,胞体呈锥形或圆形,有较长单极或多极的突起,有NSE阳性细胞表达.而B组、C组细胞仍为典型的成纤维细胞形态,无NSE阳性细胞.结论 bFGF、EGF和RA可以联合诱导BMSCs向NSCs分化,并可调控神经元分化,而BMP-7在此种诱导条件下未见明显的诱导BMSCs向NSCs分化的作用.     

大鼠骨髓间充质干细胞分化为肝样细胞的实验研究

目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外诱导分化为肝样细胞的能力。方法利用密度梯度离心法分离、纯化培养大鼠骨髓间充质干细胞,在特定的培养液中加入肝细胞生长因子(HGF)和表皮细胞生长因子(EGF)联合培养进行定向诱导,分别于1周和2周后通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定经诱导后细胞甲胎蛋白(AFP)和白蛋白(ALB)的表达。结果诱导1周后RT-PCR检测MSCs示AFP表达,诱导2周后的MSCs AFP呈阴性,而ALB检测结果呈阳性。结论MSCs在体外特定的条件下可定向诱导分化为肝样细胞。     

ICR小鼠胚胎NSCs体外培养和诱导分化

利用表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维生长因子（bFGF）的联合促进作用使原代胚胎皮层神经干细胞（Neural Stem Cells,NSCs)稳定增殖,以此来分离培养ICR小鼠胚胎NSCs,并在体外高效诱导成神经元。通过诱导分化的对照实验获得神经元分化比例最高的方法。免疫细胞化学不仅证实了培养的NSCs可表达Nestin并具有多分化潜能,还发现NSCs与支持细胞(SCs)共培养时神经元分化比例高达60%(P＜5)。研究发现细胞生长因子EGF（20 ng/mL）和bFGF(20 ng/mL)能有效促使NSCs在无血清条件下增殖,并且支持细胞促进其向神经元分化。     

Hepatic differentiation from embryonic stem cells in vitro

Objective To investigate an method for hepatic differentiation from embryonic stem cells (ES cells) in vitro and the resulting differentiation ratio, in order to develop a procedure for producing a new type of hepatocyte for hepatocyte replacement therapy in the treament of liver failure.Methods ES cells from Balb/C mice were cultured and maintained in an undifferentiated state in gelatin-coated dishes using Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM) containing 1000 U/ml leukemia inhibitory factor (LIF). Then, LIF was withdrawn from the DMEM to allow the ES cells to develop into embryonic bodies (EBs). EBs were plated onto tissue culture dishes, and growth factors such as acidicfibroblast growth factor (aFGF) and hepatocyte growth factor (HGF) were added to the medium to promote directional differentiation. The course of development and differentiation was observed dynamically using an inversion microscope. The expression of hepatic proteins, such as α-fetoprotein (AFP), albumin (ALB), cytokeratin 8 (CK8), cytokeratin 18 (CK18), in cytoplasm was analyzed by immunocytochemistry (ICC). The concentration of ALB in the medium was determined dynamically by radioimmunoassay (RIA). Results ES cells replicated as clones, without differentiating, in DMEM containing LIF. They developed into EBs in medium without LIF. Our ICC assay showed that differentiating cells did not express hepatic proteins, such as AFP, ALB, CK8, and CK18 until day 7, day 9, day 11, and day 11, respectively (up to 2 days later when growth factors are not present). The concentration of AFP in the medium was first detected on day 8, at a concentration of 3.4 ng/ml, and increased to 22.8 ng/ml by day 15. The concentration of ALB in the medium was 0.2 μg/ml on day 11, and increased to 2.2 μg/ml by day 15. ALB-positive cells under ICC manifest morphological structures were consistent with normal mouse hepatocytes. The differentiation ratio of hepatocytes in the ES cell differentiation system was 30％ on day 15 (significantly lower without the presence of growth factors).Conclusions ES cells can differentiate into mature hepatocytes. Growth factors, such as aFGF and HGF, can enhance this differentiation and produce sufficient numbers of functional hepatocytes. This method may be a reliable new way of differentiating ES cells into hepatocytes for use in replacement therapy in the treament of liver failure.     

胚胎干细胞向肝细胞定向诱导分化的体外实验研究

目的 探讨胚胎干细胞体外定向诱导分化为肝细胞的条件和机制。方法 选用Balb／c小鼠胚胎干细胞,经过拟胚体发育分化5d后开始定向诱导培养,将拟胚体转入白明胶处理的培养板中贴壁生长,在不同时间段分别在细胞培养基中添加酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)、肝细胞生长因子(HGF)等细胞生长因子进行肝细胞定向诱导。细胞分化过程的形态学变化用倒置显微镜追踪观察;用放免法对细胞培养上清中抗小鼠甲胎蛋白(AFP)和抗小鼠白蛋白(ALB)进行动态检测,用免疫细胞化学法检测肝细胞分化标记物AFP,ALB,CK8,CK18,并计算其阳性表达率(肝细胞分化率)。结果 胚胎干细胞在重组小鼠白血病抑制因子(LIF)存在的情况下保持未分化生长状态,撤去LIF后很快发育为拟胚体并继续分化。在第8天检测到上清中AFP出现,浓度为3．4n/ml,ALB在第11天开始检测到,浓度为0．2μg／ml,随培养时间延长,AFP和ALB浓度逐渐增加。第8天分化细胞开始出现AFP阳性,第10天出现CK8、CK18阳性,第11天出现ALB阳性,阳性细胞结构符合正常肝细胞结构特点。计算分化细胞中ALB阳性细胞率,得到肝细胞的分化率为30％。结论 胚胎干细胞经过拟胚体发育阶段,在特定培养条件和aFGF、HGF、等生长因子的作用下,可定向分化为肝细胞,这种细胞分化系统有望成为肝细胞替代疗法中的新型肝细胞来源。     

肝细胞生长因子诱导人骨髓来源的多能成体祖细胞向肝样细胞分化的可行性

目的探索人骨髓来源多能成体祖细胞(mulfipotent adult progenitor cells from human bone marrow，hMAPCs)在一定诱导条件下分化为肝细胞的可行性，为肝组织工程提供新的种子细胞来源。方法分组：A组1(hepatocyte growth factor，HGF)20ng／mL诱导；B组(阳性对照组)：L-02人肝细胞株；C组(阴性对照组)：未加任何诱导因素的MAPCs。免疫细胞化学鉴定不同诱导分化阶段细胞的白蛋白(albumin，ALB)、甲胎蛋白(alpha fetoprotein，AVP)、细胞角蛋白18(cytokeratin 18，CK-18)、细胞角蛋白19(cytokeratin 19，CK-19)等肝细胞特征的表型变化并计数阳性细胞比率；Western blot检测诱导分化第21、35天后细胞的ALB的表达。结果免疫细胞化学结果：ALB、CK-18在不同时间段基本为阳性着色；CK-19在各组均为阴性着色，AFP作为早期不成熟肝细胞的一个标志，仅在诱导第7天为阳性着色；Western blot检测结果：在诱导分化第21、35天，ALB均有阳性表达。结论hMAPCs在一定诱导条件下具有向肝样细胞分化的潜能。     

体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向肝细胞分化的实验研究

目的：探讨大鼠骨髓间充质干细胞（mMSCs）在体外定向诱导分化为肝细胞及其方法。方法：采用梯度离心法分离纯化雄性SD大鼠的mMSCs。A组原代培养；B组原代培养分别加刺激因子50ng／ml肝细胞生长因子（HGF）和50ng／ml成纤维细胞生长因子4（FGF-4），倒置显微镜连续观察细胞分化过程的形态学变化。于培养的7、14、21、28d，细胞免疫荧光法检测各组细胞甲胎蛋白（AFP）、白蛋白（ALB）、细胞角蛋白18（CK-18）、细胞角蛋白19（CK-19）的表达。采用过碘酸希夫（PAS）染色法检测各组细胞糖原染色情况。结果：分离纯化B组大鼠的mMSCs，应用HGF和FGF-4诱导10d后变为肝细胞样圆形。细胞免疫荧光测定B组显示，培养第7dAFP即出现阳性，第21d表达明显减弱；第7dCK-19染色阳性，以后增强；第14d白蛋白与CK-18染色开始阳性，以后表达逐渐加强。A组在培养过程中不表达AFP、ALB、CK-18和CK-19。糖原染色显示，B组第14d开始阳性，-直持续到第28d；A组未见阳性染色。结论：大鼠mMSCs在较高浓度的HGF及FGF-4诱导下可分化为肝细胞。     

利用细胞因子和丁酸钠将小鼠诱导多能干细胞高效诱导为有功能的肝细胞

Background  Hepatocyte transplantation has been proposed as an alternative to whole-organ transplantation to support many forms of hepatic insufficiency. Unfortunately, the lack of donor livers makes it difficult to obtain enough viable human hepatocytes for hepatocyte-based therapies. Therefore, it is urgent to find new ways to provide ample hepatocytes. Induced pluripotent stem (iPS) cells, a breakthrough in stem cell research, may terminate these hinders for cell transplantation. For the promise of iPS cells to be realized in liver diseases, it is necessary to determine if and how efficient they can be differentiated into functional hepatocytes.      

Methods  In this study, we directly compared the hepatic-differentiation capacity of mouse iPS cells and embryonic stem (ES) cells with three different induction approaches: conditions via embryonic body (EB) formation plus cytokines, conditions by combination of dimethyl sulfoxide and sodium butyrate and chemically defined, serum free monolayer conditions. Among these three induction conditions, more homogenous populations can be promoted under chemically defined, serum free conditions. The cells generated under these conditions exhibited hepatic functions in vitro, including glycogen storage, indocynine green (ICG) uptake and release as well as urea secretion. Although efficient hepatocytes differentiation from mouse iPS cells were observed, mouse iPS cells showed relatively lower hepatic induction efficiency compared with mouse ES cells.

Results  Mouse iPS cells would be efficiently differentiated into functional hepatocytes in vitro, which may be helpful in facilitating the development of hepatocytes for transplantation and for research on drug discovery.

Conclusion We demonstrate that mouse iPS cells retain full potential for fetal liver development and describe procedures that facilitates the efficient generation of highly differentiated human hepatocyte-like cells from iPS cells in vitro.

     

人源多能干细胞体外定向诱导分化为肝细胞

目的: 探索人源诱导多能干细胞（human induced pluripotent stem cells,hiPSCs）在体外二维条件下诱导分化生成肝细胞的条件,并初步探讨三维条件下 hiPSCs 的肝细胞诱导分化。方法: 通过测定4种诱导培养基中白蛋白和甲胎蛋白含量,筛选诱导分化的最佳方案。用筛选出的最优培养基对hiPSCs进行二维培养,采用免疫荧光法、蛋白质印迹法检测诱导后的细胞中肝脏标志蛋白的表达,采用酶联免疫吸附法检测肝细胞功能相关蛋白的含量;对hiPSCs进行三维培养,用酶联免疫吸附法对比二维与三维条件下肝细胞功能,并用 HE 染色法观察三维条件下形成细胞的形态。结果： 二维条件下诱导分化23 d,倒置显微镜下细胞呈典型的肝细胞形态;免疫荧光法、蛋白质印迹法检测到诱导分化后的细胞阳性表达肝脏特征蛋白（甲胎蛋白、白蛋白、角蛋白CK8、角蛋白CK18、SOX17）,且与胚胎干细胞来源肝细胞（hESCs HEPs）内含量相近;酶联免疫吸附法测定结果显示,诱导形成的肝细胞具有正常肝细胞功能,表明hiPSCs已分化为肝细胞;HE染色结果显示三维条件下诱导形成的细胞具有明显双核,呈现典型肝细胞形态;酶联免疫法测定结果显示,三维条件下,诱导形成的肝细胞功能没有受到损伤,仍具有正常肝细胞功能。 结论： 在二维与三维培养体系下,采用最佳诱导分化方案,hiPSCs 能够被诱导分化为肝细胞,且表达肝脏相关蛋白,并具有正常肝细胞功能。     

肝细胞损伤条件培养基对大鼠骨髓间充质干细胞肝向分化的促进作用

目的：制备肝细胞损伤条件培养基（CM）,体外模拟损伤组织微环境,探讨其对大鼠骨髓间充质干细胞（BMMSCs）肝向分化的作用。方法：取1周龄乳鼠,经差时贴壁和差速梯度法结合优化梯度离心和贴壁换液时间分离培养BMMSCs。取6~8周龄大鼠,腹腔注射60%四氯化碳溶液（0.75 mL·kg^-1）制备肝细胞损伤组织匀浆上清（CM1）和肝细胞损伤血清（CM2）。将第3代（P3）BMMSCs随机分为0% CM组（对照组,采用10% FBS L-DMEM培养）、10% CM1组、20% CM2组和10% CM1+10% CM2组。倒置显微镜下观察细胞形态表现,免疫组织化学法检测各组BMMSCs表面标志物CD105和各组细胞中白蛋白（ALB）的阳性表达率,油红O染色法检测BMMSCs成脂分化的脂滴形成阳性率;RT-PCR法检测各组细胞中甲胎蛋白（AFP）和ALB的表达水平,糖原染色法检测细胞中糖原合成阳性率,鉴定并比较各组BMMSCs肝向分化能力。结果：骨髓细胞原代培养72 h,贴壁细胞呈圆形或梭形,铺满瓶底时呈均匀有序的成纤维梭形状,P3 BMMSCs表面标志物CD105呈阳性表达。P3 BMMSCs经地塞米松、胰岛素、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤和消炎痛（DX+IBMX+IS+ID）联合诱导后4 d,镜下可见脂滴形成。P3 BMMSCs经CM诱导后细胞中AFP和ALB呈阳性表达,细胞糖原染色呈阳性。诱导后7 d,含CM成分的3组BMMSCs中均可见细胞胞浆内容物变得丰富,细胞呈圆形、三角形或肝板样排列;诱导后7、14和21 d,与对照组比较,含CM成分的3组BMMSCs中ALB阳性表达率均明显增加（P<0.01）;10% CM1+10% CM2组BMMSCs中ALB阳性表达率高于10% CM1组和20% CM2组（P<0.05）。诱导后7和14 d,与对照组比较,含CM成分的3组BMMSCs中糖原合成阳性率均明显增加（P<0.01）;10% CM1+10% CM2组BMMSCs中糖原合成阳性率高于10% CM1组和20% CM2组（P<0.05）。结论：CM1和CM2可诱导大鼠BMMSCs向肝细胞分化,在达到相同诱导作用效果时所需的CM1和CM2浓度更低;CM1和CM2提供的微环境更有利于BMMSCs向肝细胞分化,其诱导细胞分化效率更高。     

大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为肝细胞

目的：研究HGF、aFGF及OSM诱导MSCs成为肝细胞的能力及其在分化中的作用。方法：用HGF、aFGF、OSM诱导分化MSCs后,用化学发光法、RT—PCR法及谷氨酸脱氢酶法检测细胞AFP、ALB及尿素的表达情况。结果：除对照组外其余各组细胞均有AFP表达（P〈0．05）;对照组及a＋O组无ALB、尿素的表达,其余各组出现ALB及尿素的表达（P〈0．05）。结论：HGF联合aFGF、OSM及aFGF能够诱导MSCs分化为表达AFP、ALB、尿素的肝细胞;aFGF与OSM在没有HGF存在时不能诱导MSCs向较为成熟的肝细胞的分化。