p14ARF基因甲基化及蛋白表达在直肠癌中的作用

目的:研究p14ARF基因甲基化及蛋白表达在直肠癌中的作用,探讨p14ARF基因与直肠癌生物学行为的关系.方法:采用MSP方法(甲基化特异性PCR)检测30例直肠癌组织、腺瘤组织、正常黏膜组织p14ARF基因甲基化情况.采用RT-PCR方法(半定量逆转录PCR)检测P14ARF基因在大肠癌组织、腺瘤组织、正常黏膜组织中的表达情况及采用免疫组织化学法(SP法)检测p14ARF蛋白在这些组织中的表达情况,然后用t检验及卡方检验对其数据进行分析.结果:p14ARF基因在30例直肠癌组织、腺瘤组织、直肠正常黏膜组织中表达量分别为0.283±0.011,0.721±0.023,0.958±0.015.直肠癌组织中P14AR基因表达低于腺瘤组织(P<0.05),明显低于直肠正常黏膜组织(P<0.01),三者差异有统计学意义(P<0.05).P14ARF蛋白在30例直肠癌组织、腺瘤组织、正常黏膜组织中表达率分别为20.0%、56.7%、76.7%.p14ARF蛋白在正常组织中的表达高于直肠腺瘤(P<0.05),明显高于直肠癌组织(P<0.01):p14ARF甲基化在30例直肠癌组织、腺瘤组织、正常黏膜组织中表达率分别为46.6%、20.0%、0.0%.三者差异有统计学意义.p14ARF基因甲基化与直肠癌分化程度及淋巴转移密切相关(P<0.05).结论:p14ARF甲基化可能参与了直肠腺瘤-腺癌的演变过程,可能是直肠癌发生的早期事件.p14ARF甲基化状态可作为直肠癌患者早期诊断的一个生物学指标.     

TGF-β1及Smad4在结直肠腺瘤癌变过程中的表达及意义

目的探讨TGF-β1和Smad4在结直肠腺瘤癌变发生、发展中的作用。方法采用RT-PCR和免疫组化法分别检测30例结直肠腺癌、28例结直肠腺瘤和20例正常结直肠黏膜组织中TGF-β1、Smad4的mRNA和蛋白表达情况。结果结直肠腺癌组织中TGF-β1mRNA、蛋白明显高于而Smad4 mRNA、蛋白表达均明显低于结直肠腺瘤组织和正常大肠黏膜组织（P均〈0.01）;TGF-β1 mRNA与Smad4 mRNA表达呈明显负相关（r=-0.5,P〈0.05）。结论 TGF-β1、Smad4均参与了结直肠腺瘤的癌变过程,Smad4低表达通过负反馈作用使TGF-β1表达增加。     

KLK6、KLK10在结直肠癌的表达及与临床病理的关系

目的探讨人组织激肽释放酶家族成员KLK6及KLK10蛋白在结直肠癌发生发展中的作用及与临床、病理的关系。方法采用SP免疫组织化学染色法检测57例结直肠腺癌、21例结直肠腺瘤及11例正常结直肠黏膜组织KLK6及KLK10的表达情况,并分析二者的表达与结直肠癌临床病理指标的关系。结果 KLK6及KLK10在结直肠腺癌的阳性率分别为52.6%(30/57)和66.7%(38/57),在结直肠腺瘤的阳性率分别为33.3%(7/21)和38.1%(8/21),在正常结直肠黏膜组织中的阳性率为9.1%(1/11)和27.3%(3/11)。KLK6及KLK10在结直肠腺癌、结直肠腺瘤及正常结直肠黏膜组织中的表达均具有显著差异(P均<0.05)。KLK6及KLK10的表达均与患者的TNM分期、淋巴结转移及肝转移情况相关(P均<0.05)。KLK6还与肿瘤的分化程度相关(P=0.015)。KLK6及KLK10在结直肠癌的表达呈正相关(r=0.745,P=0.000)。KLK10在KLK6阳性组中的表达明显高于在KLK6阴性组中的表达。结论 KLK6及KLK10参与结直肠癌的发生发展并与结直肠癌的转移相关,可作为较为理想的肿瘤标志物辅助判断患者预后并指导临床治疗。     

XAF1转录变异体在结直肠肿瘤中的差异表达

背景:X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)相关因子1(XAF1)能与XIAP结合而拮抗其caspase抑制活性,从而促进细胞凋亡,已被认定是一种肿瘤抑制基因。在多种肿瘤细胞中可检测到XAF1转录变异体,但不同转录变异体在结直肠肿瘤中的表达情况尚不明确。目的:检测XAF1及其转录变异体在不同结直肠组织中的表达,初步探讨其在结直肠肿瘤发生、发展中的作用。方法:收集结直肠癌及其配对癌旁组织、增生性息肉、腺瘤和正常结直肠黏膜组织样本,以免疫组化法和蛋白质印迹法检测XAF1蛋白表达,RT-PCR检测XAF1转录变异体表达。结果:与正常结直肠黏膜相比,XAF1蛋白在增生性息肉、腺瘤和癌组织中的胞核表达强度显著降低(P0.05),胞质表达强度有所增高(P0.05),总体表达强度显著降低(P0.05)。结直肠癌组织中的XAF1A蛋白表达显著低于相应癌旁组织(P0.05)。转录变异体XAF1A、XAF1B、XAF1C mRNA在结直肠肿瘤中的表达均显著低于正常结直肠黏膜(P0.05)。结论:XAF1及其转录变异体在结直肠肿瘤和正常结直肠黏膜中存在差异表达,腺瘤阶段即已出现XAF1表达下降并由胞核向胞质易位。转录后修饰可能影响XAF1基因功能。     

脂联素受体在结直肠癌和结直肠腺瘤组织中表达

目的:检测脂联素受体1(adiponectin receptors1,R1)和R2在人结直肠癌组织、腺瘤组织、癌旁组织中的表达情况与临床病理特征的关系及3种组织中R1和R2的关联性.方法:采用免疫组织化学SP法检测51例新鲜结直肠癌组织,42例结直肠腺瘤组织,35例癌旁组织中脂联素受体R1和R2的表达.结果:免疫组织化学结果显示R1在人结直肠癌组织中表达高于腺瘤组织(P=0.047),结直肠癌组织中表达高于癌旁组织(P=0.002),腺瘤组织中的表达高于癌旁组织(P=0.042).R2在人结直肠癌组织中表达高于腺瘤组织(P=0.035),结直肠癌组织中表达高于癌旁组织(P=0.002),腺瘤组织中表达高于癌旁组织(P=0.046).在3种组织中,R1与R2的表达无关联性(P>0.05).在51例结直肠癌组织中脂联素受体表达与分化程度、淋巴结转移、TNM分期相关(均P<0.05),与性别、年龄、肿瘤大小、组织学类型无明显相关(P>0.05).结论:脂联素受体在人结直肠癌组织、腺瘤组织、癌旁组织中普遍表达,且在结直肠癌组织中的表达最高,腺瘤次之.脂联素受体表达与分化程度、淋巴结转移、TNM(tumor regional lymph node and metastasis)分期有关.脂联素受体有可能成为结直肠癌治疗的一个新靶点.     

PKC-a、K-ras蛋白在结直肠癌组织中的表达及意义

目的探讨蛋白激酶C(PKC)及K-ras蛋白在结直肠癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组化法分别检测76份结直肠腺癌组织(腺癌组)、15份结直肠腺瘤组织(腺瘤组)及10份正常结直肠黏膜(正常组)中PKC-a及K-ras蛋白表达,分析两者的相关性及其与肿瘤临床病理特征的关系。另采用Western blot法检测30份结直肠癌黏膜组织和10份癌旁黏膜组织(距肿瘤10 cm)中PKC-a和K-ras蛋白表达水平。结果腺癌组PKC-a阳性率明显低于、K-ras阳性率明显高于腺瘤组及正常组,P均<0.05。PKC-a和K-ras表达与结直肠癌临床病理分级有关,随着病理分级增加,PKC-a表达率逐渐降低,K-ras升高;二者表达与性别、年龄、淋巴结转移及Dukes分期均无关。PKC-a与K-ras蛋白的表达之间呈负相关(r=-0.930)。结论 PKC-a蛋白与K-ras蛋白与结直肠癌的发生及发展有关。     

黑色素瘤抗原基因MAGE-A1在直肠癌组织的表达

[目的]检测黑色素瘤抗原基因MAGE-A1在直肠癌组织中的表达,探索其与直肠癌临床病理的关系及其在直肠癌免疫治疗中的应用价值。[方法]采用RT-PCR法,对66例直肠癌患者的癌组织、癌旁"正常"黏膜组织和手术切缘组织(乙状结肠端)以及3例直肠息肉标本(无瘤)的MAGE-A1的表达情况进行检测,并对RT-PCR扩增产物中的目的基因片段进行DNA测序验证。[结果]66例直肠癌患者的直肠癌组织、癌旁"正常"黏膜组织、手术切缘组织MAGE-A1基因的表达阳性率分别为30.30%(20/66)、12.12%(8/66)、12.12%(8/66),3例直肠息肉标本未见MAGE-A1表达。肿瘤组织MAGE-A1基因表达阳性率均显著高于癌旁"正常"黏膜组织、手术切缘组织(P0.05);而与年龄、性别、组织学类型、Dukes分期及淋巴结转移无关(P0.05)。[结论]基于MAGE-A1基因在直肠癌中的高表达率,MAGE-A1表达蛋白可以作为一种有前途的靶点用于免疫治疗,同时有望成为一种筛查和随访指标。     

XAF1在结直肠腺瘤中的表达及其意义

目的 检测抑癌基因XAF1在结直肠腺瘤中的表达情况,初步探讨其在结直肠腺瘤发生发展中的作用.方法 半定量RT-PCR方法检测71例结直肠腺瘤性息肉、9例增生性息肉及25例正常黏膜组织中XAF1的表达情况,免疫组织化学方法检测51例结直肠腺瘤性息肉、24例增生性息肉及36例正常黏膜组织中XAF1的表达情况.结果 XAF1 mRNA在结直肠腺瘤性息肉、增生性息肉及正常黏膜组织中均表达,其相对表达强度分别为0.65±0.39、0.67±0.23、0.67±0.31,腺瘤中表达偏低,但差异无显著性(F=0.035,P=0.966).XAF1蛋白在结直肠正常黏膜及增生性息肉中主要表达于细胞核,胞浆也有表达;在腺瘤中细胞核表达减少(P<0.05),而细胞浆表达相对增多(P<0.05),总体表达强度降低(P<0.05).结论 XAF1蛋白在结直肠腺瘤中存在表达降低和胞浆异位表达,XAF1基因在结直肠腺瘤的发生及向腺癌的演变中可能起抑癌基因的作用.     

结直肠癌中三联脆性组氨酸、Bcl-2基因的表达及意义

目的探讨三联脆性组氨酸(FHIT)及Bcl-2在结直肠癌中的表达及意义。方法通过免疫组织化学SP法检测89例结直肠癌、20例癌旁正常结直肠黏膜中FHIT及Bcl-2的表达情况,分析FHIT、Bcl-2的表达与结直肠癌临床病理特征的关系。结果 37例结直肠癌(39.3%)、1例癌旁正常结直肠黏膜(5%)可监测到FHIT基因表达降低甚至缺失(P<0.01)。FHIT基因在结直肠癌中的表达与组织学分级、Dukes分期和淋巴结转移有关(P<0.05),与患者年龄、性别无关。Bcl-2在结直肠癌、癌旁正常结直肠黏膜中的阳性率分别为71.9%、40.0%(P<0.01)。Bcl-2在结直肠癌中的表达与组织学分级、淋巴结转移有关(P<0.05);与Dukes分期、年龄、性别无关。FHIT和Bcl-2在结直肠癌的表达有一定相关性。结论FHIT基因表达降低和Bcl-2表达升高与结直肠癌的发生、发展及淋巴结转移有关,二者可以作为判断结直肠癌恶性程度及预后的指标。     

MS-HRM在遗传性非息肉性大肠癌筛查中的应用

目的探讨甲基化敏感性高分辨率熔解曲线分析(MS-HRM)在遗传性非息肉性大肠癌(HNPCC)筛查中的应用价值。方法采用实时荧光定量PCR技术检测miR-195在41例散发性大肠癌(SCRC)和9例HNPCC患者癌组织及对应癌旁正常组织(距离癌组织5 cm)中的表达水平,随后使用MS-HRM检测miR-195启动子区域CpG岛甲基化情况。结果 miR-195在HNPCC癌组织中的表达量为1.20±1.48,甲基化比例为55.56%(5/9);miR-195在SCRC组织中的表达量为0.76±1.06,甲基化比例为58.54%(24/41),差异无统计学意义(P0.05);miR-195在肠癌组织及癌旁正常组织中的平均表达水平分别为0.837±1.145和2.236±2.468,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 miR-195在SCRC和HNPCC癌组织中的表达有无差异尚待进一步研究。miR-195可能有助于抑制肠癌发展,并且因其甲基化而参于大肠癌的发病机制。     

载脂蛋白E和补体C4b1在人胰腺癌组织中的表达及意义

目的 检测载脂蛋白E(ApoE)和补体C4b1在人胰腺癌组织中的表达,探讨其意义.方法 应用免疫组化法检测38例胰腺癌和相应癌旁正常胰腺组织ApoE、C4b1蛋白表达;应用RT-PCR法检测20例胰腺癌和相应癌旁正常胰腺组织ApoE、C4b1 mRNA表达.分析ApoE、C4b1的表达与胰腺癌生物特征的相关性.结果 胰腺癌组织ApoE、C4b1蛋白表达阳性率分别为86.8%(33/38)和76.3%(29/38),显著高于癌旁正常胰腺组织的42.1%(16/38)和26.3%(10/38)(P值均＜0.01);有淋巴结转移的胰腺癌组织ApoE、C4b1蛋白表达阳性率分别为78.3%(18/23)和73.9%(17/23),明显高于无转移者的33.3%(5/15)和40.0%(6/15)(P值均＜0.05).胰腺癌ApoE、C4b1 mRNA表达量分别为4.83±0.65、7.94±0.95,明显高于癌旁正常胰腺组织的1.78±0.74、1.22±0.57(P值均＜0.01);有淋巴结转移的胰腺癌组织ApoE、C4b1 mRNA的表达量为5.05±0.71、8.24±1.07,显著高于无转移者的4.42±0.25、7.39±0.15(P值均＜0.05).结论 ApoE、C4b1在胰腺癌组织中高表达,并与胰腺癌淋巴结转移相关.     

转化生长因子-β1、Smad3、Smad4和Smad7在结直肠癌发生中的作用

结直肠腺瘤-腺癌序列是目前公认的结直肠癌发生学说，但关于结直肠腺瘤，特别是高危型结直肠腺瘤中转化生长因子（TGF）-β1通路蛋白表达的临床研究较少。目的：探讨TGF—β1、Smad3、Smad4和Smad7在结直肠癌发生中的作用。方法：选取2000年8月-2006年12月六安市人民医院结直肠息肉标本110例（包括腺瘤性和非腺瘤性息肉）、结直肠癌40例和正常结直肠组织20例，以免疫组化染色检测TGF—β1、Smad3、Smad4和Smad7在各组中的表达．并分析高危型腺瘤中TGF-IM、Smad3、Smad4和Smad7表达与临床病理特征的关系。结果：TGF-IM、Smad3、Smad4、Smad7在息肉组、结直肠癌组和对照组中的表达有显著差异（P〈0．05），其表达与高危型腺瘤患者的临床病理特征均不相关。高危型腺瘤和DukesA期结直肠癌中TGF-IM、Smad3、Smad7的表达有显著差异（P〈0．05），而Smad4表达无显著差异。结论：TGF—β1通路可能参与了结直肠癌的发生过程，TGF—β1、Smad3和Smad7可能在结直肠腺瘤的癌变早期起作用。     

Hypermethylation and expression regulation of secreted frizzled-related protein genes in colorectal tumor

INTRODUCTION Secreted frizzled-related proteins (sFRPs) comprise a family of five secreted glycoproteins that antagonize Wnt canonical and noncanonical signaling by different mechanisms directly or indirectly[1]. Wnt signaling regulates cell growth, motil…     

胃癌死亡相关蛋白激酶基因甲基化对其信使核糖核酸和蛋白表达的影响

目的 研究胃癌组织死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因启动子区甲基化对原发性胃癌组织中DAPK mRNA及蛋白表达的影响.方法 采用逆转录(RT)-PCR法检测62例原发性胃癌及癌旁组织DAPK mRNA表达,甲基化特异性PCR(MSP)法检测DAPK启动子区CpG岛甲基化状态,对其中34例胃癌组织甲基化阳性者的DAPK蛋白表达进行Western印迹法检测.结果 胃癌组织中DAPKmRNA和蛋白表达水平明显低于癌旁组织,分别为0.2863±0.2027比0.5736±0.1968、0.2616±0.0913比0.6529±0.1808,差异均有统计学意义(P值均＜0.01).DAPK在胃癌组织和癌旁组织中的甲基化频率分别为54.8%和17.7%,差异有统计学意义(P＜0.01).在胃癌组织中,甲基化组DAPKmRNA表达明显低于非甲基化组(0.1399±0.0835比0.4640±0.1569,P＜0.01).DAPK基因甲基化与胃癌TNM分期显著相关(P=0.04).结论 原发性胃癌组织DAPK mRNA和蛋白表达缺失或低下与其启动子甲基化程度增高显著相关.     

Cyr61在胃癌中的表达和意义

背景：Cyr61为CCN家族成员之一,又名CCN1,是一种分泌性蛋白。研究发现Cyr61过表达在多种人类恶性肿瘤的发生、侵袭、转移、复发中发挥重要作用。近年来,Cyr61与胃癌的关系日益受到关注。目的：检测Cyr61在胃癌组织和配对癌旁非癌胃黏膜中的表达并探讨其意义。方法：以RT—PCR检测43例胃癌、40例癌旁非癌胃黏膜标本的Cyr61mRNA表达．以免疫组化方法检测82例胃癌、80例癌旁非癌胃黏膜石蜡包埋组织的Cyr61蛋白表达,分析Cvr61在癌旁非癌胃黏膜和不同浸润深度胃癌组织中的表达差异。结果：胃癌组织Cyr61mRNA相对表达量和Cyr61蛋白高表达率均显著高于癌旁非癌胃黏膜（Cvr61mRNA：0．5286＋0．2139对0．3450＋0．1862,P=0．000;Cyr61蛋白：61．0％对32．5％,P〈0．05）。T。期胃癌组织Cyr61蛋白高表达率显著高于T。。期胃癌组织和癌旁非癌胃黏膜（72．2％对39．3％和32．5％,P〈0．05）,T1-2期胃癌组织与癌旁非癌胃黏膜之间则无明显差异（P〉0．05）。结论：Cyr61在胃癌组织中呈过表达．其表达与胃癌浸润深度相关．提示Cyr61可促进胃癌侵袭,并有望成为预测胃癌预后的分子标记物。     

TMPRSS4在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的 检测Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶4( TMPRSS4)在胰腺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系.方法 采用实时PCR法和蛋白质印迹法检测16例胰腺癌和配对癌旁组织TMPRSS4 mRNA和蛋白表达;采用免疫组织化学法检测61例胰腺癌标本、26例配对癌旁组织、4例正常胰腺组织TMPRSS4蛋白的表达,分析其与临床病理特征的相关性.结果 胰腺癌组织TMPRSS4mRNA和蛋白表达明显高于配对癌旁组织(9.09±7.01比1.27±0.72;1.223±0.125比0.667 ±0.106,P值均＜0.01),胰腺癌组织TMPRSS4蛋白阳性表达率为67.2％ (41/61),显著高于癌旁组织3.8％ (1/26)的阳性表达率(P＜0.01).正常胰腺组织未见TMPRSS4蛋白表达.胰腺癌TMPRSS4表达与患者年龄、性别及肿瘤部位、肿瘤大小无关,而与肿瘤分化程度、淋巴结转移、临床分期密切相关(P值均＜0.05).结论 胰腺癌组织高表达TMPRSS4,其表达与肿瘤的恶性程度相关.     

c-Jun、Smad7蛋白在大肠腺癌中的表达及临床意义

目的探讨c-Jun、Smad7蛋白在大肠癌中的表达及其对肿瘤发生、发展的影响。方法采用免疫组化方法,分别检测20例正常大肠黏膜、20例大肠腺瘤及65例大肠腺癌中c-Jun、Smad7蛋白表达水平,比较两种蛋白的表达情况。结果 c-Jun蛋白在大肠腺癌组织中的表达率为72.30%,与正常对照组比较差异有统计学意义(P0.05);高分化腺癌与中-低分化腺癌相比,差异有统计学意义(P0.05);TNMⅢ+Ⅳ期表达率显著低于Ⅰ+Ⅱ期(P0.05);Smad7蛋白在大肠腺癌组织中的表达率为89.23%,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);中-低分化者、有淋巴结转移者与高分化者、无淋巴结转移者比较差异均有统计学意义(P均0.05)。c-Jun蛋白与Smad7蛋白在大肠腺癌中的表达水平呈正相关(P0.05,r s=0.3460)。结论 c-Jun、Smad7蛋白在大肠腺癌的发生、发展整个过程的不同阶段具有促进作用,对于临床诊断大肠癌及判断病情、预后有重要意义。