巨细胞病毒的形态学及结构多肽分析

对人巨细胞病毒的形态进行了观察,并对其结构多肽进行了SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,结果表明巨细胞病毒有23条结构多肽。分子量范围19k～112k。     

感染日本血吸虫病兔循环抗原的提纯与分析

采用免疫亲和层析法,从感染日本血吸虫的兔血清中提纯日本血吸虫病循环抗原。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、PAS染色、酶联免疫印渍等方法分析,日本血吸虫病循环抗原显示7个组份,分子量分别为144、118、100、88、63、57、46kD;其中144、118、100、63、57kD为糖蛋白,并证实虫卵释放的循环抗原中含分子量分别为144、118kD的糖蛋白。     

斯氏狸殖吸虫可溶性抗原-SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

为提高免疫学诊断在诊断斯氏狸殖吸虫病的准确性,亟待解决该虫抗原的纯化问题,我们试用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,对该虫可溶性抗原中蛋白质和多肽组分的分子量进行了初步分析,简报如下。1材料和方法1.1可溶性抗原制备采自本省铜仁市郊的斯氏狸殖吸虫囊幼实验感染家猫,     

结核分支杆菌MPT64基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达、纯化和诊断运用

目的利用大肠杆菌表达系统大量获得重组MPT64蛋白,分析其生物学、免疫学特性,并初步评估其在结核病血清学诊断方面的价值.方法用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分支杆菌H37Rv中获得了MPT64基因,并构建大肠杆菌表达株;聚丙烯酰胺凝胶电泳重组蛋白;Western印迹及酶联免疫吸附测定法(ELISA)分析重组蛋白免疫原性,并检测血清的抗结核抗体.结果构建了能表达重组MPT64的大肠杆菌工程菌,表达的重组蛋白蛋白为可溶性形式,表达量占细胞总蛋白的30%,分子量约23kD.经离子交换柱纯化后,重组蛋白纯度达90%以上.Western印迹结果证实该重组蛋白能与抗结核分支杆菌多克隆抗体发生特异免疫结合反应.ELISA分析表明该纯化的重组抗原能区别抗结核抗体阳性患者血清及正常人血清.结论该实验获得了能高效表达MPT64蛋白抗原的大肠杆菌工程菌.纯化的该重组蛋白具有特异的免疫原性,有一定的诊断运用价值.     

梭子蟹过敏原致敏组分的分析研究

目的应用免疫印迹(Western blotting)的方法分析梭子蟹[Portunus pelogicus(Linnaeus)]的致敏组分,为蟹过敏原的纯化和标准化变应原疫苗的研制提供理论依据。方法取常规方法制备的梭子蟹浸出液,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离,用考马斯亮蓝染色分析其抗原蛋白的组分,同时用对蟹过敏的病人血清进行免疫印迹。结果SDS- PAGE显示梭子蟹可辨有19条蛋白带,分子量在13kD-90kD之间,其中主带有9条,分子量是20.9kD、24.2kD、27.1kD、29.2kD、33.7kD、38.9kD、48.7kD、74.7kD、89.1kD。Western blotting结果表明,16例蟹过敏患者血清全部呈阳性反应,浸出液中共有5条致敏条带,其中分子量在74.4kD、48.7kD的是主要致敏组分,阳性反应率均为100%。结论梭子蟹74.4kD和48.7kD组分为主要过敏原。     

肺炎支原体蛋白质抗原分析的研究

用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫吸印方法,分析肺炎支原体蛋白质抗原成份。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳经考马斯亮蓝染色可见多条泳带。免疫吸印法转移到硝酸纤维素膜,经酶标记染色可见12条带,其中明显可见者5条带,蛋白质分子量分别为165 000,90 000,65 000,46 000和28 000。其中有个别泳带未见报道,其意义有待进一步研究。     

红参须根中多肽成分的分离与鉴定

用反相高效液相色谱技术从红参须根中分得一个新的多肽化合物。根据氨基酸组成分析，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和高效排阻层析分子量测定结果，鉴定为33肽。文中还报道应用组织培养技术和免疫手段．研究了红参须根多肽的活性，并与人参皂甙的活性进行了对比。     

部分纯化抗原半定量检测幽门螺杆菌感染

鉴定并提取幽门螺杆菌特异性抗原，建立测定抗ＨＰ抗体的半定量免疫酶技术。方法：１０株ＨＰ可溶性蛋白用于十二烷在磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白印迹分析，凝胶层析提取特异性抗原，方阵滴定建立免疫酶方法。纯化抗原与全菌抗原同批检测１３６例患者，以蛋白印迹分析作为金标准。     

人类乳头瘤病毒结构多肽的电泳分析

用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳对从寻常疣、蹠疣组织中提取的人类乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)的结构蛋白进行了分析,初步测定了每条蛋白多肽的分子量。HPV的电泳分析结果表明来自寻常疣、蹠疣的HPV具有不同的结构蛋白图型,其主要和次要衣壳蛋白多肽的分子量具有明显的差异。     

不同幽门螺杆菌临床分离株的菌体蛋白

了解不同幽门螺杆蓖的菌体蛋白构成及其免疫印迹条带与胃十二指肠的疾病的关系。方法：将６株幽门螺杆菌临床分离株的菌体蛋白进行十二烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳，以免疫印迹技术分析其免疫原性；以６株Ｈｐ菌体收白的等量混合物为抗原，检测了６２例胃十二指肠疾病患血清抗Ｈｐ－ＩｇＧ的免疫印迹条带。     

恶性疟基因工程疫苗的研究Ⅲ．恶性疟原虫保护性抗原复合基因在大肠杆菌中的表达及产物分析

将人工合成的恶性疟原虫保护性抗原复合基因ＨＧＦＣ和ＨＧＦＣＡＣ分别与表达载体ｐＢＶ２２０重组并转化大肠杆菌ＤＨ５χ，挑取工程菌进行发酵试验并用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表达产物。结果显示经温度诱导后的工程菌在相当于分子量１０ｋｄ和２５ｋｄ的位置出现表达产物的条带，扫描测定表达产物的量占菌体蛋白总量的５％左右。免疫印迹分析显示表达产物可与免抗恶性疟原虫多肽抗原的抗体发生特异性免疫反应，提示表达产物为具有恶性疟原虫抗原位点活性的重组复合蛋白。     

周围神经43kD蛋白单克隆抗体的制备

目的：制备周围神经43kD蛋白单克隆抗体。方法：通过SDS－聚丙烯酰胺凝胶系统,从周围神经组织中分离回收43kD蛋白作为抗原,免疫BALB／C小鼠,通过杂交瘤技术,点膜印迹法检测,获得相应的分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并以Western blot方法检测抗体的特异性。结果：阳性克隆可持续稳定分泌抗43kD蛋白抗体,Western Blot显示在43kD处出现特异的阳性反应条带。结论：建立了分泌抗43kD蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,获得了43kD蛋白单克隆抗体。     

抗人白血病细胞单克隆抗体C_3H_6的产生及初步鉴定

本文报告了抗人白血病细胞单克隆抗体C_3H_6的产生.运用间接免疫荧光技术、ELISA、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹技术对其特征作了初步分析.结果表明:单抗C_3H_6与白血病细胞S_(7811)(免疫原)和K_(562)细胞有强阳性反应,与Raji 细胞和U_(937)细胞反应较弱.单抗C_3H_6主要与髓性白血病细胞有阳性反应.对鉴别AML 与ALL 有显著意义.并与AML-m_5的反应有非常显著意义,从而有助于鉴别AML-M_5与其他AML 的亚类(M_(1～4)).免疫印迹结果显示C_3H_6抗原为单一的肽链结构.其分子量为57kd.C_3H_6抗原很可能为一新的髓性白细胞分化抗原.     

SP-B中间产物特异性抗体的制备与鉴定

目的制备和鉴定表面活性物质蛋白B(surfactant protein B,SP-B)加工处理过程中部分中间产物的特异性抗体。方法利用Lasergene 7.0和Macvector 11.0.4软件进行抗原表位分析,确定作为抗原的3条多肽序列,将人工合成的多肽与钥孔戚血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶联,免疫兔制备抗血清,间接酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测免疫前血清背景和免疫后血清效价,抗原亲和纯化抗血清,超滤浓缩抗体,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测抗体纯度,间接ELISA法检测抗体效价,蛋白质印迹(Western blot)鉴定抗体特异性。结果免疫前兔血清背景均低,免疫后抗血清效价均达到要求,抗原亲和纯化后所得抗体纯度及效价高,特异性好。结论成功制备了3种SP-B中间产物特异性多克隆抗体,为深入研究SP-B的加工处理奠定了基础。     

Dane颗粒SDS-PAGE后电泳洗脱收集P_(31)多肽的方法

纯化的Dane颗粒经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后,用自制漏斗形玻璃电泳收集杯电泳洗脱,获得HBV外壳HBsAg上分子量31 000的多肽P_(31),     

刺苋花粉特异性变应原成分的分析研究

目的：分析刺苋花粉的抗原成分以及刺苋花粉特异性变应原组分,为刺苋花粉变应原的纯化和标准化变应原疫苗的研制提供理论依据.方法：取刺苋花粉浸出液,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDSPAGE）分离,以16例刺苋花粉过敏的病人血清为探针,进行免疫印迹（Western blotting）,检测刺苋花粉浸出液的致敏组分.结果：SDS-PAGE显示可辨蛋白条带有11条,分子量在15～80 kD之间,其中主带有9条,分子量依次为18 kD、24 kD、29 kD、35 kD、39 kD、40 kD、42 kD、62 kD、78kD.Western blotting结果表明,16份刺苋花粉过敏患者的血清全部呈阳性反应,浸出液中共有4条致敏条带,其中主要致敏蛋白的分子量是78 kD和40 kD.结论：刺苋花粉78 kD和40 kD的变应原为主要特异性变应原.     

日本血吸虫表皮膜蛋白的研究 Ⅱ.生化及免疫活性分析

日本血吸虫表皮膜蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后至少显示19个蛋白带,其中3条蛋白带含醣,分子量分别为24KD、17.5KD和15KD。用免疫印班技术能检出与日本血吸虫病人血清反应的表皮膜抗原组分,其分子量分别为125KD、100KD和57KD     

酶联免疫印迹法对弓形虫速殖子功能性抗原分析

目的：研究弓形虫功能性抗原,为开发弓形虫诊断试剂及商苗提供理论基础。方法：采用十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹方法,对弓形虫抗原及弓形虫速殖子抗原中能与免疫兔血清和弓形虫抗体阳性人血清起特异性反应的抗原组分进行分析。结果;弓形虫速殖子抗原的蛋白组分在ＳＤＳ－ＡＧＥ中用１２５ｇ／Ｌ的分离胶可产生较好的分辨率,分离出３０多条区带。     

人肌肉型醛缩酶的纯化和抗血清制备

以硫酸铵分级和磷酸纤维素亲和层折法分离和纯化了人肌醛缩酶。经醋酸纤维素膜电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定均为一条带。用Swensson法测得酶比活力为48U/mg,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定酶的亚单位为一条带,亚基分子量约为40,000。纯化的酶免疫鸡产生     

免疫印迹法在幽门螺杆菌检测中的应用

印迹技术是20世纪分子生物学领域三大发现之一。它与内切酶的发现和PCR基因扩增技术,给人类生物工程带来了革命性进展。1975年Southern首先用该法来分析DNA,称为Southern blot,1979年Alwine将此法用于RNA研究,称为Northern blot,同年Towbin等又将其扩展到蛋白质分析,取名为Western blot(WBT),又称为Immunoblot(IBT),即免疫印迹[1]。用免疫印迹检测幽门螺杆菌(heleicobacter pylori,Hp)试验的原理是先将幽门螺杆菌的全菌体蛋白抗原用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,按分子量大小不同分开,再将其转移至硝酸纤维膜上。如果被检血清有相应抗…