丙戊酸钠逆转组蛋白低乙酰化水平对肝癌细胞侵袭转移的体外实验研究

目的探讨丙戊酸钠(VPA)逆转组蛋白低乙酰化水平对体外培养的人肝癌细胞系SMMC-7721细胞体外侵袭、转移能力的影响及其可能的作用机制。方法流式细胞仪(FCM)分析不同浓度VPA对SMMC-7721细胞凋亡及细胞周期的影响;分别采用划痕试验,Transwell侵袭小室和细胞-基质黏附试验测定细胞体外迁移、侵袭和黏附能力;Western blot观察不同浓度VPA处理后HPA和PCNA蛋白的表达变化。结果 VPA诱导SMMC-7721细胞凋亡,阻滞细胞于G2/M期,抑制细胞增殖。VPA试验组细胞的侵袭、迁移能力以及黏附能力均显著低于对照组(P<0.05)。随浓度和时间增加,VPA能明显降低HPA和PCNA蛋白表达。结论 VPA可通过逆转染色体组蛋白低乙酰化水平,显著抑制肝癌细胞增殖,降低肝癌细胞侵袭、迁移和黏附能力。下调HPA和PCNA表达可能是其发挥作用的主要机制之一。     

应用丙戊酸钠调节组蛋白乙酰化修饰抑制肝癌细胞增殖的作用及机制

目的观察应用组蛋白脱乙酰酶抑制剂丙戊酸钠调节染色体组蛋白低乙酰化水平对肝癌细胞增殖的作用，并进一步检测Cyctin A、Cyclin D1、Cyclin E、P21^Waf/cip1蛋白及mRNA表达变化，探讨其分子作用机制。方法应用0．75～4．0mmol／L丙戊酸钠作用于肝癌细胞系HepG2细胞后，MTT法检测细胞生长抑制、细胞克隆形成试验观察克隆形成率、碘化丙啶标记流式细胞术检测细胞周期、间接免疫荧光法分析Cyclin A、Cyclin D1、Cyclin E、P21^Waf/cip1蛋白表达，RT—PCR检测分析Cyclin A、Cyclin D1、Cyclin E、P21^Waf/cip1 mRNA表达。结果0．75～4．0mmol／L丙戊酸钠作用24、48、72、96h，观察组出现了时间-剂量依赖趋势的生长抑制，同时细胞克隆形成率显著降低，对照组细胞增殖周期G1、S、M期所占比例未见明显改变，而观察组则随药物浓度、作用时间的不同而出现不同程度的细胞增殖周期G1期阻滞，G1期比例由55．4％～82．8％不等，差异有统计学意义（P〈0．01）。观察组Cyclin A、Cyclin D1蛋白及mRNA表达均被明显下调而P21^Waf/cip1蛋白、mRNA表达则被明显上调，与对照组比较差异均有统计学意义（均P〈0．01）；而Cyclin E蛋白和mRNA表达变化则未见明显差异（P〉0．05）。结论通过应用特异性组蛋白脱乙酰酶抑制剂调节组蛋白乙酰化修饰可明显抑制肝癌细胞生长、抑制细胞克隆形成、阻滞细胞增殖周期于G1期；丙戊酸钠作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂可明显抑制肝癌细胞增殖，其作用机制是通过上调P21^Waf/cip1 mRNA蛋白表达，下调Cyclin D1、Cyclin A mRNA蛋白表达分别和／或协同实现。     

转移相关基因干扰对肝癌转移潜能的影响

目的：通过干扰高转移潜能肝癌细胞（ MHCC97?H）中的骨桥蛋白（ OPN）、肿瘤增殖性因子肿瘤生长因子β1（ TGFβ1）基因,使之减少OPN、TGFβ1表达,观察MHCC97?H转移能力的变化情况。方法对MHCC97?H细胞行OPN、TGFβ1基因干扰,qPCR法检测干扰效果。 MHCC97?H细胞迁移细胞学实验采用transwells法。肺转移动物模型制作方法：裸鼠尾静脉注射各组细胞,含细胞数5×106个／只,隔天连续注射3次,2周后观察肺脏组织。离体肺脏组织标本制作,DAPI 染核处理10 min,甘油PBS 封片,置于荧光显微镜下观察。免疫荧光法检测裸鼠动物模型整合素αvβ3表达。结果经基因干扰后MHCC97?H表达OPN和TGFβ1明显降低（ P＜0．05）。细胞学实验显示与对照组比较,经OPN和TGFβ?1干扰组MHCC97?H细胞迁移数量明显减少（ P＜0．01）。动物模型实验显示与对照组比较,OPN和TGFβ1干扰组肺组织中肝癌细胞较少,定量分析显示OPN和TGFβ1干扰组肺脏组织中肝癌细胞IOD值明显低于对照组（ P＜0．05）。 OPN和TGFβ1干扰组与对照组比较整合素αvβ3表达IOD值差异无统计学意义（ P＞0．05）。结论经OPN和TGFβ1基因干扰的MHCC97?H细胞肺转移能力有明显的下降,尤其是TGFβ1基因干扰组下降更加明显,但经OPN和TGFβ1基因干扰的MHCC97?H细胞表达整合素αvβ3能力无变化,整合素αvβ3介导参与了OPN和TGFβ1共同作用肝癌转移行为的变化。     

丙戊酸钠对肿瘤细胞影响的体外研究

目的以K562细胞为研究对象,观察丙戊酸钠体外(VPA)对肿瘤细胞的影响,以进一步指导VPA用于白血病的治疗。方法(1)应用MTT实验研究VPA对肿瘤细胞增殖抑制实验。(2)应用ELISA方法检测VPA诱导K562细胞株细胞凋亡的作用。结果(1)VPA对K562细胞增殖表现出很明显的抑制作用,且在0.1～100mg/ml范围内增殖抑制作用有明显的量效关系。(2)作用时间越长VPA促肿瘤细胞凋亡的现象越明显,各时间段结果比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论VPA对K562细胞具有增殖抑制作用,且作用具有显著的浓度依赖性。进一步的实验证实,高浓度VPA对K562细胞增殖抑制的的机制是通过诱导细胞凋亡实现的,且促凋亡作用有显著的时间依赖性。     

姜黄素对人肝癌细胞SMMC7721侵袭转移的影响

目的 研究姜黄素在体外对人肝癌细胞株SMMC7721细胞黏附、迁移及侵袭的抑制作用.方法 分别以不同浓度姜黄素在体外处理SMMC7721细胞48 h,通过细胞黏附、迁移和侵袭实验观察姜黄素对SMMC7721细胞黏附力、运动力和侵袭力的影响.结果 姜黄素20.0、40.0、60.0μmol/L处理SMMC7721细胞48 h,对细胞侵袭能力的抑制率分别为(17.31±1.78)%、(60.30±4.54)%、(100.00±0.00)%(P<0.01).SMMC7721细胞迁移能力抑制率分别为(15.70±1.33)%、(41.90±3.34)%、(100.00±0.00)%(P<0.01).姜黄素20.0、40.0、60.0μmol/L均能有效抑制SMMC7721细胞与Matrigel胶的黏附力.结论 姜黄素具有抑制人肝癌细胞体外侵袭和转移的作用.     

雷帕霉素对皮肤鳞癌细胞体外转移潜能的影响

目的研究雷帕霉素(rapamycin,RAPA)在体外对上皮鳞癌细胞系A431的增殖、迁移以及侵袭能力的影响。方法体外培养人上皮鳞癌细胞A431,通过噻唑蓝(MTT)实验检测不同浓度的RAPA(5、10、20 nmol·L-1)对A431增殖的影响,并筛选出最适浓度。依此浓度分别通过划痕、Transwell试验检测A431的迁移和侵袭能力变化。经RAPA处理后,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测A431中骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的mRNA和蛋白的表达水平的变化。结果 MTT实验结果显示不同浓度RAPA对A431增殖有抑制作用,且表现浓度依赖性。RAPA作用于A431细胞48 h后,划痕实验及Transwell实验显示A431的迁移和侵袭能力受到明显抑制。RT-PCR和Western blot结果都显示RAPA处理的A431细胞中OPN的表达下调。结论 RAPA可降低鳞癌细胞A431的增殖、迁移以及侵袭能力,其机制可能与RAPA抑制OPN的表达有关。     

蚯蚓纤溶酶对人肝癌细胞侵袭转移潜能的影响

目的 探讨蚯蚓纤溶酶(EFE)对人肝癌细胞系SMMC-7721细胞侵袭、转移潜能的影响.方法 将不同浓度EFE作用于体外培养的SMMC-7721细胞,通过细胞-基质粘附实验检测SMMC-7721细胞与基质胶(matrigel)黏附性,transwell小室模型测定细胞侵袭能力和迁移能力的改变,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹(Western blot)分别检测不同药物浓度作用后细胞内黏着斑激酶(FAK)mRNA及蛋白表达量的变化.结果 与对照组相比,EFE 2、4、6 uku/ml作用于SMMC-7721细胞能降低肝癌细胞与基质胶的黏附性(P<0.01)、降低SMMC-7721细胞的侵袭力及迁移能力(P<0.05或P<0.01);同时能够下调FAK mRNA和蛋白的表达(P<0.01).结论 EFE能抑制肝癌SMMC-7721细胞的侵袭和转移,其机制可能与其抑制FAK的表达有关,EFE具有潜在的抗肝癌细胞侵袭、转移作用.     

DC-GPC3联合CIK 细胞的体外抗肝癌作用

摘要： 目的 探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3 （GPC3） 基因转染的树突状细胞 （DC-GPC3） 与细胞因子诱导杀伤细胞（CIK） 共培养 （DCIK-GPC3） 后, 对 CIK 的生物活性及体外抗肝癌细胞作用。方法 流式细胞术检测 DCIK-GPC3、 DC-CIK 及 CIK 各组效应细胞免疫表型, MTT 法检测各组效应细胞培养上清液中白细胞介素 （IL） -2 生物活性, 酶联免疫吸附试验 （ELISA） 检测细胞培养上清液中 IL-2、 干扰素 γ （IFN-γ） 浓度。乳酸脱氢酶释放实验分别检测各组效应细胞对肝癌 HepG2 细胞的细胞毒活性。结果 DCIK-GPC3 表面高表达 CD3+ CD8+ 和 CD3+ CD56+ 双阳性细胞, 与 DCIK 及 CIK 比较差异有统计学意义 （P＜0.05）; CIK、 DCIK、 DCIK-GPC3 培养上清液中 IL-2 生物活性、 浓度以及 IFN-γ 浓度均依次升高, 组间多重比较差异有统计学意义 （P＜0.05）; 在 20∶1 及 50 ∶1 效靶比, CIK、 DCIK、 DCIK- GPC3 对 HepG2 细胞的细胞毒活性依次升高, 组间多重比较差异均有统计学意义 （P＜0.05）。结论 CIK 与 DC- GPC3共培养可获得更强的体外杀伤肝癌细胞活性, 为DCIK-GPC3用于临床免疫治疗提供了理论和实验依据。     

Possible relation between histone 3 and cytokeratin 18 in human hepatocellular carcinoma

BACKGROUND: Previously we found some low molecular weight proteins identified as histone in hepatocelluar carcinoma. Our objective was to clarify whether the coimmunoprecipitation of histone and cytokeratin 18 was an artifact or not. MATERIALS AND METHODS: Histone 3 and cytokeratin 18 were investigated in three cases of human hepatocellular carcinoma and one case of normal liver tissue. Nuclei of the tissues were isolated; the proteins inside the nuclei were analyzed by Western blot. RESULTS: The results revealed histone was co-immunoprecipitated with cytokeratin 18 in hepatocellular carcinoma. It was speculated that modulation of the cytoskeleton in human hepatocellular carcinoma might disturb the organization of the nucleoskeleton. The unstable nucleoskeleton might further cause instability and fragility of nuclei, thus possibly exposing the histone and co-immunoprecipitating it with cytokeratin 18. CONCLUSION: The evidence might indicate that expression of histone 3 was highly related to modulation of cytokeratin 18 and might play an important role in tumorigenesis of hepatocellular carcinoma.     

靶向沉默SSBP1基因对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移的影响

目的 观察靶向沉默线粒体单链DNA结合蛋白(SSBP1)基因对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移的影响.方法 设计并构建靶向SSBP1 基因的特异性siRNA,采用脂质体介导瞬时转染肝癌HepG2细胞,细胞分3组:对照组、空白转染组、转染组.Real time-PCR和Western-blot检测靶向干扰后SSBP1 mRNA和蛋白表达变化.CCK-8法检测细胞增殖.流式细胞仪检测细胞周期、凋亡率及线粒体膜电位.划痕实验及Transwell 侵袭实验检测细胞侵袭转移能力.Western-blot检测增殖、侵袭转移相关基因蛋白表达状况.结果 SSBP1 siRNA能够显著抑制SSBP1 mRNA和蛋白表达.与对照组和空白转染组比较,转染SSBP1 siRNA后HepG2细胞增殖能力、G2期和S期细胞比例、线粒体膜电位明显降低,G1期细胞比例、细胞凋亡率明显升高(P<0.05);同时细胞增殖相关基因PCNA、凋亡抑制基因Bcl-2、转移相关基因MMP-9蛋白表达显著下调,凋亡诱导基因Bax蛋白表达显著上调(P<0.05).结论 靶向沉默SSBP1基因能够通过线粒体途径抑制肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移,并诱导其凋亡.     

人参皂苷Rg3抗肝癌作用研究进展

2018年GLOBOCAN数据显示,肝癌发病例数位居恶性肿瘤第4位,死亡例数位居第2位。中晚期肝癌患者推荐中医中药辅助肝癌的治疗。人参皂苷Rg3是一种四环三萜达玛烷型稀有人参皂苷,存在20（R）和20（S）两种对映异构体。以人参皂苷Rg3单体为主要成分的抗癌新药参一胶囊于2003年上市,主要应用于肺癌、肝癌的辅助治疗。人参皂苷Rg3体内外研究均证实其有良好的抗肝癌活性。人参皂苷Rg3抗肝癌的作用机制是多方面的,包括诱导肝癌细胞凋亡、调控自噬逆转耐药、抑制细胞侵袭及转移、抑制血管生成。本文就人参皂苷Rg3治疗肝癌的临床前及临床研究进展进行综述,以期对后续研究提供参考。     

MicroRNA-155在肝细胞癌对索拉非尼抗药中的作用研究

目的探讨微小RNA155(microRNA-155,miR-155)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)对索拉非尼(sorafenib)抗药中的作用。方法将miR-155抑制慢病毒(miR-155 inhibitor)转染miR-155表达相对较高的SMMC-7721细胞,而miR-155过表达慢病毒(miR-155)转染miR-155表达相对较低的Hep G2细胞;用荧光定量PCR(qPCR)检测经慢病毒转染的SMMC-7721细胞及HepG2细胞miR-155表达量,以验证慢病毒转染效果;通过CCK-8法及流式细胞术检测各组细胞经索拉非尼作用后的存活率及凋亡情况;用Western blot检测凋亡相关蛋白活性caspase-3表达量,从而进一步探究各组细胞凋亡情况。结果与对照组相比,转染miR-155抑制慢病毒的SMMC-7721细胞表达miR-155明显下调(P<0.01),经索拉非尼处理后其存活率明显降低(P<0.05),而索拉非尼诱导其凋亡明显增加(P<0.01),其活性caspase-3表达量明显上调(P<0.01);miR-155过表达慢病毒转染HepG2细胞后,则相反。结论 miR-155参与肝细胞癌对索拉非尼的抗药,有希望成为一个肝癌治疗的新靶标。     

原发性肝癌根治性切除术后骨转移的危险因素分析

目的 探讨原发性肝癌根治性切除术后骨转移的危险因素。方法 回顾性分析2005年1月至2012年12月我院349例原发性肝癌行根治性手术治疗患者的临床资料。结果 术后随访期内出现骨转移43例。甲胎蛋白（AFP）〉400mg/mL、肿瘤数目、肿瘤大小、微血管侵犯对于原发性肝癌根治性手术治疗后是否出现骨转移的差异有统计学意义。Logistic回归分析显示,AFP〉400mg/mL、肿瘤数目、微血管侵犯是原发性肝癌根治性切除术后骨转移的独立影响因素。结论 对于术前AFP升高、肿瘤多发以及存在微血管侵犯的患者,术后容易出现骨转移,需密切随访。     

A case report: tumorectomy for brain metastasis of hepatocellular carcinoma

Described here is a rare case of an operation for brain metastasis of hepatocellular carcinoma (HCC) after hepatectomy. We admitted a 45-year-old male patient complaining chiefly of a visual field disturbance and headaches. He had undergone a hepatectomy due to HCC one year prior to hospitalization. He was diagnosed with a brain metastasis with intratumoral hemorrhage. He underwent a tumorectomy and hemorrhage excision. After the surgery, his neurological symptoms improved, and he was temporarily rehabilitated. The decision to operate in this case could be questionable because the patient already had a pulmonary metastasis. Nevertheless, we concluded that local therapy for such a brain metastatic lesion would be effective in alleviating his discomforts and improving his quality of life as long as the primary lesion was under control.     

MMP-8在不同转移潜能人肝癌细胞株的差异性表达及其对肝癌细胞迁移侵袭的影响

<正>基质金属蛋白酶-8(matrix metalloproteinases-8,MMP-8)属于基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)家族,在肿瘤的发生发展中起重要作用。近年来研究发现,MMP-8在肿瘤侵袭转移中具有双重作用,在不同的肿瘤中,既可促进肿瘤的进展,又可抑制肿瘤的进展[1]。但目前,MMP-8与肝癌侵袭转移的关系尚不清楚。本研究通过观察不同转移潜能人肝癌细胞株的MMP-8表达情况,以及过表达MMP-8对肝癌细胞迁移侵袭的影响,以期为寻找抑制肝癌转移侵袭的分子靶点提供新的实验依据。     

组蛋白乙酰化调控异常与大鼠抑郁行为的关系研究

目的研究组蛋白乙酰化与慢性不可预见刺激(chronic unpredictable stress,CUS)致大鼠抑郁行为的关系。方法30只♂Sprague Dawley(SD)大鼠随机分为对照组和模型组,采用孤养结合CUS方式连续刺激28 d建立大鼠抑郁症模型;以开场实验和强迫游泳实验评价大鼠抑郁行为;采用实时荧光定量PCR法检测大鼠前脑皮层和海马组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)mRNA表达;采用Western blot法检测大鼠前脑皮层和海马组蛋白H3(histone3,H3)、组蛋白H4(histone 4,H4)、乙酰化组蛋白H3(actylation-histone 3,ac H3)及乙酰化组蛋白H4(actylation-histone4,ac H4)蛋白表达水平。结果与对照组大鼠相比,模型组大鼠开场实验得分明显降低(P<0.01)、强迫游泳实验不动时间明显延长(P<0.01)、前脑皮层和海马HDAC2 mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.01)、组蛋白H3和组蛋白H4蛋白表达均无明显差异、ac H3及ac H4蛋白水平均明显降低(P<0.01)。结论 CUS诱导大鼠产生抑郁样行为改变,其机制可能与脑内HDAC表达增高致组蛋白乙酰化修饰水平降低有关。     

γδT细胞对肝癌细胞的杀伤作用

目的 探讨γδT细胞对肝癌细胞的杀伤作用.方法 异戊烯焦磷酸(isopentenyl pyrophosphate,IPP)和rhIL-2活化正常人外周血单个核细胞(PBMC),用流式细胞仪分析活化后的γδT细胞含量,用ELISA法检测培养上清液中IFN-γ含量,用乳酸脱氢酶释放法测定活化γδT细胞的杀伤活性.结果 体外活化的PBMC在10 d时γδT细胞比例从扩增前(4.34±1.79)%增加到(55.65±6.88)%,PBMC经IPP刺激培养后IFN-γ分泌量较不含IPP的对照组有显著增高,至第7天达峰值,活化后的淋巴细胞对肝癌细胞有较高杀伤活性.结论 IPP作为刺激剂可获得大量γδT细胞,刺激PBMC后可分泌大量IFN-γ,γδT细胞在体外对肝癌细胞有较高的杀伤活性.     

白头翁皂苷D联合索拉非尼对人肝癌细胞侵袭与转移的影响

[摘要]目的 探讨白头翁皂苷D联合索拉非尼对人肝癌细胞株侵袭与转移的影响。 方法 将人肝癌细胞BEL-7402分为白头翁皂苷D单药处理组、索拉非尼单药处理组及两药联合处理组,观察比较三种处理方式对肝癌细胞侵袭和转移的影响。结果 检测分析各组黏附抑制率,作用3h,索拉非尼组显著高于白头翁皂苷D组（P＜0.05或＜0.01）,联合用药组显著高于索拉非尼组和白头翁皂苷D组（P＜0.01）;作用5h,白头翁皂苷D组黏附抑制率显著高于索拉非尼组（P＜0.01）,并且高于白头翁皂苷D组作用3h（P＜0.01）,说明两药联合对肝癌细胞的黏附抑制率具有协同作用（Q=2.33＞1.15）;检测分析各组迁移抑制率,索拉非尼单药组和两药联合组对肝癌细胞的迁移抑制率均显著高于白头翁皂苷D单药组（P＜0.01）,并且两药联合组的抑制率显著高于索拉非尼单药组（P＜0.01）,说明两药联合对肝癌细胞的迁移抑制作用具有协同作用（Q=1.39＞1.15）;检测分析侵袭抑制率,索拉非尼单药组和两药联合组均显著高于白头翁皂苷D组（P＜0.01）,说明两药联合对肝癌细胞的侵袭抑制作用具有拮抗作用（Q=0.68＜0.85）。各组的VEGF-C、MMP-9表达情况：白头翁皂苷D单药组的MMP-9表达水平显著下降,索拉非尼组和两药联合组的VEGF-C、MMP-9及表达水平均显著下降（P＜0.05）;与白头翁皂苷D单药组比较,两药联合组的VEGF-C表达水平显著下降;两药联合组较白头翁皂苷D单药组VEGF-C水平显著下降（P＜0.05）。结论 白头翁皂苷D、索拉非尼单药以及两药联合对肝癌细胞BEL-7402细胞株的黏附、迁移、侵袭具有一定的抑制作用,且二者对肝癌细胞的黏附、迁移的抑制具有协同作用。