骨形态发生蛋白9对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖与凋亡的作用研究

目的:研究骨形态发生蛋白9（Bonemorphogeneticprotein9,BMP9）对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、周期及凋亡的影响。方法:半定量RT-PCR法检测高转移性乳腺癌细胞MDA-MB-231和低转移性乳腺癌细胞MCF-7中BMP9的表达,用人BMP9重组腺病毒（AdBMP9）感染MDA-MB-231细胞作为实验组,含GFP的空载腺病毒（AdGFP）感染MDA-MB-231细胞作为对照组,MTT法观察细胞增殖的变化,流式细胞仪分析周期及凋亡的变化。结果:半定量RT-PCR显示,乳腺癌细胞MDA-MB-231中未检测到BMP9mRNA的表达;MTT结果显示,AdBMP9处理可引起MDA-MB-231细胞增殖抑制,第5dMDA-MB-231/BMP9组的细胞增殖率（0.8860±0.0532）显著低于MDA-MB-231/GFP组（1.2240±0.1031）（P<0.05）;流式细胞仪分析结果显示,腺病毒感染后第2d和第3d,MDA-MB-231/BMP9组细胞周期各相发生变化,G2/M期细胞明显增加,分别为MDA-MB-231/GFP组的3.2倍和2.4倍（P<0.05）;同时BMP9可诱发细胞凋亡,腺病毒感染后第3dMDA-MB-231/BMP9组细胞凋亡百分率（31.55%±8.26%）明显高于MDA-MB-231/GFP组（3.80%±0.46%）（P<0.05）。结论:提示BMP9可通过阻滞细胞周期进程和诱导细胞凋亡来抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖。     

淫羊藿苷对体外培养的成骨细胞骨形态发生蛋白-2表达的影响

目的:检测不同浓度淫羊藿苷(ICA)对体外培养的成骨细胞MC3T3-E1中骨形态发生蛋白-2(BMP-2)表达的影响。方法:分别用10、20、40ng/mL的淫羊藿苷作用MC3T3-E1细胞,观察细胞生长情况;MTT法测绘细胞生长曲线;FCM法测定细胞生长周期;免疫细胞化学方法和Western bloting测定细胞BMP-2蛋白表达情况。结果:淫羊藿苷组可使细胞的生长曲线明显上移,S期细胞百分率升高,G1期细胞百分率减少以及BMP-2蛋白表达量增加,其中20ng/mL组作用更为显著,各组间比较有显著差异(P(0.01)。结论:淫羊藿苷可以促进成骨细胞增殖,增加成骨细胞BMP-2的表达。     

骨形态发生蛋白2基因治疗骨缺损研究进展

因创伤、肿瘤切除等原因造成的骨缺损的治疗一直是临床医师面临的一大难题。自体骨移植或异体骨移植治疗骨缺损仍然是临床上治疗骨缺损的金标准。目前应用骨形态发生蛋白2基因结合骨组织工程的方法治疗修复骨缺损是新的研究热点。骨形态发生蛋白2基因结合人工合成支架、生物可降解支架和自体组织移植是最新的研究解决方法,并取得一定的骨缺损修复效果。     

骨形态发生蛋白受体Ⅱ对肝癌细胞增殖与侵袭的影响

目的探讨骨形态发生蛋白受体Ⅱ(bone morphogenetic protein receptorⅡ,BMPR-Ⅱ)对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其可能的机制。方法构建BMPR-Ⅱ过表达载体(overexpression-LV-BMPR-Ⅱ组)和BMPR-ⅡsiRNA干扰表达载体(LV-SH-BMPR-Ⅱ组),同时设立BMPR-Ⅱ过表达阴性对照组(overexpression-LV-CON组)与BMPR-ⅡsiRNA干扰表达阴性对照组(LV-SH-CON组),分别转染人肝癌Hep G2细胞,使用Real-time PCR和Western blot技术检测转染后的Hep G2细胞BMPR-ⅡmRNA与蛋白的相对表达量,采用CCK-8、Transwell实验检测4组Hep G2细胞的增殖和侵袭能力,通过Western blot检测PI3K/AKT/m-TOR信号通路相关蛋白的表达水平。结果 BMPR-ⅡmRNA和蛋白表达水平、Hep G2细胞的增殖和侵袭能力及p-PI3K、p-AKT、pm-TOR蛋白表达水平,overexpression-LV-BMPR-Ⅱ组较overexpression-LV-CON组均显著增加(P<0.05),LVSH-BMPR-Ⅱ组较LV-SH-CON组均显著减少(P<0.05)。结论 BMPR-Ⅱ通过上调PI3K/AKT/m-TOR信号通路促进肝癌HepG2细胞增殖和侵袭能力。     

骨形态发生蛋白2临床应用的不良反应

骨形态发生蛋白2（BMP2）是一种能够诱导骨形成的活性蛋白质,参与并调控诱导间充质干细胞向成骨细胞分化过程,于2002年被美国食品药品管理局批准用于单节段腰椎前路椎体融合术。然而在临床使用BMP2过程中,逐渐发现其可导致异位骨化、骨溶解及移植物下沉、骨囊肿形成、炎症反应相关并发症、神经根炎、逆行性射精和肿瘤形成等不良反应的发生。这些不良反应可能与BMP2的超适应证使用、超生理剂量使用存在一定相关性。本文主要对BMP2临床应用的不良反应进行综述,以为临床更加安全、有效地应用BMP2提供参考。     

骨形态发生蛋白-2在骨修复中的作用研究进展

骨修复是一个十分复杂的过程，受到多种因素的控制，其中骨生长因子对于局部成骨的重要作用已经实验证实，而骨形态发生蛋白（bone morphogenetic proteins，BMPs）是诸多因子中唯一能够单独诱导骨组织形成的局部生长因子。在BMPs众多亚型中最重要的并且近年来研究较多的是骨形态发生蛋白-2（BMP-2），本文仅对BMP-2在骨修复过程中的作用研究进展综述如下。     

AGAP2-AS1对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响

目的探究AGAP2-AS1在结肠癌组织中的表达及对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响。方法从美国TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库结直肠数据下载结肠癌患者的RNA-Seq数据。通过TCGA数据库获得356例结直肠癌,145例健康样本,通过定量实时PCR(Polymerase Chain Reaction)检测结直肠癌细胞和正常肠黏膜上皮细胞AGAP2-AS1表达水平。用siRNA(Small interfering RNA)抑制结直肠癌细胞中AGAP2-AS1的表达,再次分析其细胞增殖、凋亡的改变。结果 AGAP2-AS1在结肠癌组织和细胞中表达均显著增加。抑制AGAP2-AS1后肿瘤细胞增殖能力显著降低,凋亡显著增加(P0.05)。结论 AGAP2-AS1在结肠癌细胞系中高表达,抑制AGAP2-AS1表达可抑制结肠癌细胞增殖,并诱导其凋亡。     

骨形态发生蛋白对人骨髓基质细胞的体外成骨分化影响

目的 提取牛骨形态发生蛋白，并观察其对人骨髓基质细胞的体外成骨分化作用，为将骨形态发生蛋白与骨髓基质细胞用于进一步的缺损修复研究提供实验依据。方法 从小牛骨中的提取骨形态发生蛋白，配制条件培养液，并作用于培养状态的人骨髓基质细胞，染色检测细胞碱性磷酸酶，I型胶原表达情况，放免法测定培养液中骨钙素含量。结果 人骨髓基质细胞经衣导培养后，碱性磷酸酶，I型胶原，骨钙素表达明显增加。结论 体外培养时，天然骨形态发生蛋白可促进人骨髓基质细胞的成骨分化。     

骨形态发生蛋白2缓释载体的研究进展

自体骨移植一直是骨修复的"金标准",但仍存在一些问题。异体骨移植同样存在着骨愈合缓慢及排斥反应等问题。随着组织工程学的发展,应用骨组织工程方法来修复骨缺损成为研究热点。骨组织工程主要包括支架材料、种子细胞、生长因子三个方面。骨形态发生蛋白2是目前最强的促骨生长因子,其在体内半衰期很短,必须依靠缓释载体才能发挥其较长效的促骨生长作用。     

骨形态发生蛋白的研究进展

骨形态发生蛋白家族是诱导骨发生的主要活性因子,它具有独特的异位骨诱导活性,与胚胎组织的发育、功能维持及组织的修复均密切相关.本文就骨形态发生蛋白在成骨作用方面的近期研究做一综述.     

人参皂甙单体Rh2对K562细胞增殖和凋亡作用的实验研究

目的 研究人参皂甙单体-Rh2(GS-Rh2)对人K562细胞增殖和凋亡作用的影响.方法 采用MTT比色法观察GS-Rh2对体外培养的K562细胞生长的抑制作用;在光学显微镜下观察不同浓度GS-Rh2对K562细胞的凋亡作用及计数凋亡率(AR).结果 MTT比色法测定显示,细胞经GS-Rh2作用后生长受抑制,呈剂量依赖性和时间依赖性,半数抑制浓度(IC50)为25.8 μg/ml.结论 GS-Rh2能抑制体外培养的K562细胞增殖并诱导其凋亡.     

骨形成蛋白4在结肠癌组织中的表达及临床意义

目的研究骨形成蛋白4（BMP-4）在结肠癌中的表达及其临床意义。方法以免疫组织化学法（SP法）检测65例结肠癌、30例结肠腺瘤、30例正常结肠组织石蜡切片中BMP-4的表达,并分析其与临床病理的关系。结果结肠癌组织中BMP-4阳性表达率为61．5％（40／65例）,结肠腺瘤表达率为17％（5／30例）,正常结肠组织阳性表达率为7％（Z／30）且两者间比较差异有统计学意义（P〉0．05）。此外,BMP-4的阳性表达在不同性别、年龄及肿瘤大小的结肠癌组织患者间无统计学差异（P〉0．05）;BMP-4的阳性表达在分期、分化程度及有无淋巴结转移中有统计学差异（P〈O．05）。结论结肠癌组织中存在BMP-4的阳性表达,其表达与结肠癌的恶性程度相关。     

丁酸钠对HT-29结肠癌细胞增殖及ICAM-1表达的影响

目的 观察丁酸钠对HT-29结肠癌细胞株增殖的影响,并检测丁酸钠对HT-29细胞表面ICAM-1表达的影响,探讨丁酸钠影响结肠癌增殖的作用机制。方法 使用MTT法观察丁酸钠对HT-29细胞增殖活力的效应;利用流式细胞术检测丁酸钠对HT-29细胞周期分布、细胞凋亡以及细胞表面ICAM-1的表达。结果 丁酸钠能够明显抑制HT-29细胞的增殖,提高G0/G1细胞比例,降低S期细胞比例和增殖指数,并诱导HT-29细胞凋亡,且这些作用呈现明显的浓度和时间依赖性。同时,丁酸钠还能够显著下调HT-29细胞表面ICAM-1的相对表达量。结论 丁酸钠具有抑制HT-29结肠癌细胞增殖的作用,其机制可能与阻遏细胞周期、诱导细胞凋亡及下调HT-29细胞表面ICAM-1的表达有关。     

5-氮-2-脱氧胞苷联合曲古抑菌素A对人胃癌细胞系MGC-803细胞增殖和凋亡的影响

目的研究人胃癌细胞系MGC-803经DNA甲基转移酶抑制剂5-氮-2-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A（TSA）作用后细胞增殖和凋亡变化。方法MTT比色法测定各组细胞的增殖情况,Annexin V染色法检测各组细胞凋亡率。结果单独应用5-Aza-CdR或TSA作用于胃癌细胞系MGC-803后,细胞增殖均受到抑制,生长抑制率分别为68.0%、65.8%;凋亡率分别为（42.31±4.53）%、（39.30±5.37）%,而联合用药组细胞生长抑制率明显增加,达到86.3%,细胞凋亡率为（68.20±7.14）%。结论与单用5-Aza-CdR或TSA相比,联合应用两种药物更能显著的诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,这可能为胃癌的生物治疗提供一种新的思路。     

米非司酮对子宫内膜癌细胞KLE和HHUA体外增殖和凋亡的研究

目的:探讨米非司酮(Mifepristone,MIF)对子宫内膜癌细胞系KLE和HHUA体外增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法:KLE和HHUA在含不同浓度MIF(0、1×10-6、1×10-5、5×10-5、1×10-4mol/L)培养液中培养,应用MTT比色法、流式细胞术检测MIF对KLE和HHUA生长和细胞周期的影响,应用免疫组化SABC法检测肿瘤细胞ER、PR、Bcl-2和Bax的表达。结果:低浓度(≤10-6mol/L)MIF对KLE和HHUA细胞生长的抑制作用较弱,高浓度(5×10-5和1×10-4mol/L)MIF以时间-剂量依赖性方式显著抑制细胞生长。MIF阻滞细胞周期停滞于G1期,明显降低了S期细胞比例(P<0.05);MIF(≥10-5mol/L)显著降调ER、PR、Bcl-2表达,升调Bax表达,促进细胞凋亡。MIF对HHUA细胞的影响较KLE明显。结论:MIF通过阻滞细胞停滞于G1期和降低S期细胞比例,抑制KLE和HHUA细胞体外增殖;通过降调ER、PR、Bcl-2和升调Bax表达,促进KLE和HHUA细胞凋亡。     

塞来昔布对大肠癌细胞株HT-29增殖和凋亡的影响

目的体外观察塞来昔布对大肠癌细胞株HT-29细胞增殖和凋亡的影响,探讨其可能的作用机制.方法采用噻唑蓝(MTT)比色法,流式细胞(FCM)、吖啶橙/溴化乙啶染色结合荧光显微镜、Western印迹法等技术,研究塞来昔布对HT-29细胞增殖的抑制和可能的机制.结果塞来昔布抑制HT-29细胞生长,呈浓度和时间依赖性.流式术检测出典型的亚二倍体"凋亡峰",凋亡率(7.31±2.37)%～(48.30±2.86)%;使G0/G1期细胞比例升高,S期和G2/M期比例缩小、细胞核固缩、凋亡小体形成等.凋亡比例呈剂量和时间依赖.塞来昔布降低细胞周期素依赖蛋白激酶CDK2和CDK4的表达、上调细胞周期素依赖蛋白激酶抑制因子p21WAF1/CIP1n蛋白表达.结论体外塞来昔布抑制HT-29细胞增殖,并诱导细胞凋亡;下调CDK2和CDK4蛋白表达,上调P21WAF1/CIPln蛋白表达.塞来昔布抑制HT-29细胞增殖、诱导凋亡可能与阻止细胞周期进展有关.     

小蘖碱对人卵巢癌细胞株SKOV-3增殖和凋亡的影响

目的探讨小蘖碱对体外培养人卵巢癌SKOV-3细胞增殖和凋亡的影响。方法选用人卵巢癌细胞株SKOV-3进行体外培养,以5-100μmol/L小蘖碱分别处理SKOV-3细胞24-72h,MTT法检测细胞的生长抑制率;流式细胞仪检测细胞周期;SABC法检测survivin、caspase-3在细胞中的表达。结果小蘖碱能显著抑制SKOV-3细胞体外生长,呈时间剂量依赖性。小蘖碱作用24h随浓度的升高survivin阳性表达逐渐降低,caspase-3阳性表达逐渐升高。流式细胞仪分析证实小蘖碱能使SKOV-3细胞积聚在S期和G2/M期。结论小蘖碱对人卵巢癌细胞株SKOV-3的生长有显著的抑制作用,survivin的表达下降、caspase-3的表达上调可能参与了诱导细胞凋亡。     

低氧对人结肠癌细胞HT-29体外侵袭转移潜能的影响

目的 探讨低氧与人结肠癌细胞HT-29恶性转化的关系,检测骨桥蛋白（osteopontin,OPN）、细胞核内核转录因子（NF—κB／p65）表达和MMP-2、MMP-9活性变化,以探索其恶性转化的潜在机制。方法 参照体内肿瘤的氧分压,建立低氧模型。MTT比色试验测定HT-29细胞的异质性黏附能力,Transwell侵袭试验判定其侵袭游走能力;将HT-29细胞低氧处理0、6、12、24、48h,明胶酶谱分析检测分泌的MMP-2、MMP-9活性变化,RT—PCR和Western blot检测OPN mRNA和蛋白表达,提取细胞核蛋白,Western blot检测细胞核内NF—κB／065蛋白表达。结果 低氧诱导24h后,HT-29细胞的异质性黏附能力、侵袭游走能力显著增加。低氧下6h,MMP-2、MMP-9活性无明显变化,随着低氧时间的延长,其活性逐渐显著上调,24h达顶峰,48h与24h无显著性差异。HT-29细胞在低氧的诱导下,其OPN mRNA和蛋白以及细胞核内NF—κB／065蛋白的表达趋势与MMP-2、MMP-9活性变化趋势类同。结论 低氧能诱导HT-29细胞异质性黏附能力、侵袭游走能力显著增加,MMP-2、MMPO活性上调而促使其向恶性表型转化。OPN—NF—κB可能是低氧下继HIF-1之外的另一重要调节途径,该途径与低氧诱导的恶性表型有密切关系。