检测克罗恩病肠组织中副结核分枝杆菌DNA发现的新序列

克罗恩病(CD)目前病因未明,与副结核分枝杆菌(Mycobacterium paratuberculosis,MP)的关系一直是研究的热点.本研究旨在通过采用实时荧光定量聚合酶链反应(fluorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)TaqMan技术检测CD与肠结核(intestinal tuberculosis,ITB)患者肠道病变组织MP,探索CD病原学诊断的试验方法,为ITB和CD的鉴别诊断提供实验依据.     

克罗恩病患者肠道组织中存在副结核分枝杆菌IS900DNA

背景和目的:关于克罗恩病患者组织中是否存在副结核分枝杆菌所特有IS900DNA,目前仍有争议。我们观察了100例克罗恩病患者、100例溃疡性结肠炎患者,研究他们肠道组织中IS900DNA存在的情况。我们假设IS90DNA同克罗恩病具有特征性的临床表现有关。方法:副结核分枝杆菌DNA通过机械性酶分离装置来筛选,并且通过IS900DNA特有的聚合酶链反应来定位。克罗恩病患者根据Vienna分级标准和其临床特征来进行分级。结果:IS900DNA聚合酶链反应检出率在克罗恩病组织中为52%,明显高于溃疡性结肠炎(2%)及非炎症性肠病(5%)的检出率(P<0.0001)。在克…     

在Crohn病组织检出副结核分枝杆菌DNA

长期以来人们一直怀疑副结核分枝杆菌是人类Crohn病的病原菌,但由于该菌在体外培养生长缓慢,用常规方法又难以和鸟分枝杆菌相鉴别,故难以确定它在Crohn病发生中的确切作用。本文应用PCR技术在Crohn病组织中检测副结核分枝杆菌DNA。材料和方法:Crohn病患者40例,溃疡性结肠炎23例,无炎症性肠病者40例作为对照。自手术切除标本取约2cm~2全层肠组织,在-20℃环境中保存备用。苯酚氯仿混合提取法抽提组织DNA,作PCR扩增。两个引物扩增片段位于副结核杆菌特异DNA插入片段IS900的5′区域(第22～421nt),长400bp。模板DNA(1％)用量5μl(相当于0.03 g原始组织,检测灵敏度相当于300个细菌/克组织),用其他分枝杆菌、肠道菌及链霉菌属菌株检测PCR特异性。待测标本同时作PCR阴性对照(只含缓冲液)及阳性对照(模板用10fg副结核杆菌DNA)。结果:IS 900 PCR技术可扩增5fg副结核杆菌DNA,相当于1个靶细菌。各组病人阳性率如下:Crohn病组65％(26/40),其中19例来自小肠,7例来     

肠结核与克罗恩病的临床鉴别及肠黏膜结核分枝杆菌聚合酶链反应检测的意义

目的总结肠结核与克罗恩病临床症状、内镜、病理表现的差异及肠黏膜组织结核分枝杆菌聚合酶链反应（polymerasechain reaction for Mycobacterium tuberculosis,TB-PCR）对二者鉴别诊断的意义。方法回顾分析1994年1月-2006年2月于我院确诊的42例肠结核和60例克罗恩病病例,记录患者的临床、内镜、病理表现特点及肠黏膜TB-PCR检测结果。结果克罗恩病患者临床表现为消化道出血者占56.9%（33/58）,较肠结核（16.1%,5/31）多见（P〈0.001）;29.3%克罗恩病患者有肠外表现（口腔溃疡、皮疹、关节痛、肛周病变）,而肠结核患者未见;内镜下克罗恩病表现为纵行/裂隙样溃疡（44.9%,22/49）、卵石征（28.6%,14/49）、节段性病变（51.0%,25/49）多于肠结核（7.7%、3.9%、0）（P值分别为0.001、0.011、0.000）;克罗恩病患者肠黏膜组织病理表现为淋巴细胞聚集占34%（18/53）,小血管炎占26.4%（14/53）,明显较肠结核多见（0%、3.8%）（P值分别为0.001、0.016）。82.4%（14/17）的肠结核患者试验性抗结核1-2周症状改善,而5例克罗恩病患者试验性抗结核治疗4-8周均无效。肠黏膜组织TB-PCR检测阳性率肠结核组为11.5%（3/26）;与CD组（14.3%,3/21）比较无显著差异（P〉0.5）。结论肠结核与克罗恩病鉴别需结合临床表现、内镜、影像学表现综合判断;肠黏膜TB-PCR对肠结核与CD鉴别诊断的意义有限;试验性抗结核治疗及内镜随访仍是鉴别肠结核与克罗恩病的有效方法。     

应用DNA探针直接检测结核分枝杆菌DNA

由于ＤＮＡ探针杂交反应特异性高 ,国内外研究者已采用ＤＮＡ探针杂交技术检测结核分枝杆菌。但该检测方法敏感性较低 ,通常采用与聚合酶链反应 (ＰＣＲ)扩增相结合的方法。但这样增加了实验的费用和交叉污染的机会。我们在对ＤＮＡ探针与ＰＣＲ结合检测临床标本进行系统研究的基础上 ,发现临床标本简化法处理 ,即ＤＮＡ探针化学发光检测 ,ＤＮＡ损失较少 ,还可提高检测的敏感性 ,现将结果报道如下。材料与方法一、菌种来源受试分枝杆菌标准株来自中国药品生物制品检定所。二、标本收集结核患者痰标本 2 31份 ,血液标本 85份 ,脑脊液、胸、…     

淋巴细胞部分结核分枝杆菌DNA检测的临床意义

目的 判别淋巴细胞部分ＴＢ－ＤＮＡ检测的临床意义。方法 将淋巴细胞分离液血细胞方法与ＰＣＲ方法结合，对１５０例活动性结果、５０例非结核、３０例结核病已于三年前治愈者，３０例健康对照者同步检测外周血淋巴细胞部分和血浆部分的ＴＢ－ＤＮＡ１２３ｂｐ和２４５ｂｐ；并３０例初治肺结核病人外周血淋巴细胞部分ＴＢ－ＤＮＡ转阴时间。整个研究采取双盲法。结果 确立有ＴＢ－ＤＮＡ存在于活动性肺结核病人淋巴细胞部分而不     

淋巴细胞部份结核分枝杆菌DNA检测的临床意义

目的 判别淋巴细胞部份 T B D N A 检测的临床意义?方法 将淋巴细胞分离液分离血细胞方法与 P C R 方法结合,对150 例活动性结核?50 例非结核?30 例结核病已于三年前治愈者?30 例健康对照者同步检测外周血淋巴细胞部份和血浆部份的 T B D N A123bp 和245bp ;并观察30 例初治肺结核病人外周血淋巴细胞部份 T B D N A 转阴时间?整个研究采取双盲法?结果 确实有 T B D N A 存在于活动性肺结核病人淋巴细胞部份而不是血浆部份?在结核病诊断中,检测123bp 的敏感性91.3 % ,特异性100 % ;检测245bp的敏感性83.3 % ,特异性92 % ?初治结核病人正规治疗后 T B D N A 大多在第9 个月转阴性,不会持续阳性?结论 淋巴细胞部份 T B D N A P C R 检测更易质量控制,更能反映结核病的活动性?     

淋巴细胞部份结核分枝杆菌DNA检测的临床意义

目的 判别淋巴细胞部份ＴＢ－ＤＮＡ检测的临床意义。方法 将淋巴细胞分离液分离血细胞方法与ＰＣＲ方法结合，对１５０例活动性结核、５０例非结核、３０例结核病已于三年前治愈率、３０例健康对照者同步检测外周血淋巴细胞部分和血浆部份的ＴＢ－ＤＮＡ１２３ｂｐ和２４５ｂｐ；并观察３０例初治肺结核病人外周血淋巴细胞部份ＴＢ－ＤＮＡ转阴时间。整个研究采取双盲法。结果 确实有ＴＢ－ＤＮＡ存在于活动性肺结核病人淋巴细胞     

DNA芯片技术检测结核分枝杆菌耐药基因

目的应用DNA芯片杂交技术快速检测临床分离株中结核分枝杆菌对异烟肼（INH）、利福平（RIF）、链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）的耐药性,并评价其临床应用价值。方法采用DNA芯片技术,将固定于硝酸纤维素膜上的四种药物常见耐药基因的特异性探针,与结核分枝杆菌临床分离株生物素标记的聚合酶链反应产物进行杂交,共对97株临床分离株进行检测,并将结果与绝对浓度法药敏试验结果进行比较。结果INH、RIF、SM和EMB的耐药基因检出的灵敏度分别为89．6％、98．6％、81．8％和88．2％,特异度分别为93．3％、100％、100％和100％。结论简便快速敏感的DNA芯片杂交方法适用于临床批量结核分枝杆菌耐药性的初筛。     

痰结核分枝杆菌DNA检测诊断肺结核的临床意义

目的评估痰结核分枝杆菌DNA检测诊断肺结核的可行性及临床意义。方法回顾性分析2016年5月—12月在我科住院的经痰结核分枝杆菌培养确诊的136例肺结核患者的临床资料,比较痰涂片找抗酸杆菌和痰结核分枝杆菌DNA检测2种方法的检出率。结果 136例确诊的肺结核患者中,痰涂片阳性的有64例(47.06%),痰结核分枝杆菌DNA检测阳性的88例(64.71%),痰结核分枝杆菌DNA检测阳性率明显高于痰涂片找抗酸杆菌(P0.05)。72例痰涂片阴性患者中痰结核分枝杆菌DNA检测阳性29例,占痰涂片阴性肺结核患者比例的40.28%。结论痰结核分枝杆菌DNA检测优于痰涂片找抗酸杆菌,能够辅助涂阳肺结核的诊断,并提高涂阴肺结核的诊断水平,是一种快速、敏感的病原学诊断方法。     

结核分枝杆菌DNA疫苗研究进展

20世纪 90年代初 ,有关质粒DNA诱导对其编码的抗原的免疫反应报道之后 ,DNA疫苗便成为疫苗技术增长最迅速的领域[1,2 ] 。现将DNA疫苗的概况及结核分枝杆菌DNA疫苗的研究现状介绍如下。一、DNA疫苗概况(一 )DNA疫苗作用原理与重组细菌或病毒疫苗相比 ,DNA疫苗仅由DNA(如质粒 )或RNA(如mRNA)组成 ,疫苗抗原的编码基因插入适当的真核细胞质粒DNA的始动子及终止密码之间 ,它可在细菌体内复制 ,而不能在人类宿主细胞内复制。此质粒可由大肠杆菌培养中纯化而得到。DNA被肌肉细胞摄取进入细胞核内 ,在此抗原基因被转录 ,mRNA被转…     

DNA数目可变串联重复序列用于结核分枝杆菌分型研究

目的　采用数目可变串联重复序列(VNTR)分型方法对安徽省的52株结核分枝杆菌进行分子分型研究,探讨该方法用于结核分枝杆菌分型的作用。方法 设计引物,采用PCR和琼脂糖凝胶电泳技术对结核分枝杆菌13个VNTR位点进行检测,并通过BioNumerics30软件进行DNA指纹图谱多态性分析。结果 52株结核分枝杆菌可分4个类别,其中88.5%菌株属于一个型,其他3个型所占比例很小,分别为5.8%、3.8%和1.9%。结论 来自安徽的结核分枝杆菌存在主要的流行型,VNTR分型技术简便、快速,是较好的结核分枝杆菌分型方法。     

DNA数目可变串联重复序列用于结核分枝杆菌分型研究

目的采用数目可变串联重复序列(VNTR)分型方法对安徽省的52株结核分枝杆菌进行分子分型研究,探讨该方法用于结核分枝杆菌分型的作用.方法设计引物,采用PCR和琼脂糖凝胶电泳技术对结核分枝杆菌13个VNTR位点进行检测,并通过BioNumerics 3.0软件进行DNA指纹图谱多态性分析.结果 52株结核分枝杆菌可分4个类别,其中88.5%菌株属于一个型,其他3个型所占比例很小,分别为5.8%、3.8%和1.9%.结论来自安徽的结核分枝杆菌存在主要的流行型,VNTR分型技术简便、快速,是较好的结核分枝杆菌分型方法.     

结核分枝杆菌IS6110序列在石蜡组织中的检测、克隆与测序

目的：探讨套式-聚合酶链反应（Nested-PCR)检测石蜡组织中结核分枝杆菌的特异性和敏感性。方法：采用套式-PCR检测石蜡包埋组织中结核菌复合体特异插入序列IS6110,并对部分标本的PCR产物进行克隆和测序。结果：31例结核标本石蜡组织检出结核菌DNA共28例,套式-PCR的敏感度为90.3%,特异度为100%。阳性预测值为100%。随机选取两例PCR产物没是序结果与结核菌标准株H37Rv同源性分别为97%和95.3%。结论：套式-PCR检测常规石蜡包埋组织中结核菌IS6110序列具有特异性强和敏感性高的特点,可应用于临床诊断,尤其是对那些常规苏木精-伊红染色和抗酸染色无法确诊的病例更具意义。     

解释结核分枝杆菌DNA指纹簇

许多研究已在其结核分枝杆菌分离株共享DNA指纹的基础上定义了患者簇。成簇相当于最近的传播,并且对伴随结核分枝杆菌正在高度传播人群亚组来说,与成簇有关的因素已作为指标被找出。在进行和解释这些研究中值得考虑的提醒应予以注意。例如,根据标志物的稳定性和长时间在人群中的菌株数量,某些并非近期传播的原因使菌株组可能完全相同。如果病例对特定人群是新移民或在研究中不是所有人群中的病例都被包括的话,确定由近期传播引发的病例可能不作为成簇被见到。所见的成簇数量将根据研究持续的时间。在研究的设计、所包括病例的比例、补充和所使用成簇的界定上,研究应给出精确的资料。成簇的数据应至少被年龄、性别和移民状况分开。为了最大的获得信息,研究应涉及一个人群中所有病例的高比例、与传统的流行病学接触调查结合进行(如果可能的话)、并且提供人群中结核病发病资料和患者的年龄、性别、人类免疫缺损病毒状况、耐药性及社会和种族组资料。     

血浆结核分枝杆菌游离DNA检测对结核病的诊断价值

目的探讨血浆结核分枝杆菌游离DNA(cfDNA)检测对结核病(TB)诊断的临床应用价值。方法选取临床细菌学确诊结核病患者118例作为研究组,另选取同期非结核其他肺部疾病患者61例作为对照组。采用实时荧光定量PCR(Q-PCR)技术检测研究对象血浆中的结核分枝杆菌cfDNA,绘制ROC曲线分析其对结核病的诊断价值。并应用T-SPOT.TB检测、Xpert MTB/RIF (Xpert)检测对入组对象进行验证性诊断,采用配对四格表χ~2检验比较结核分枝杆菌cfDNA检测与T-SPOT.TB、Xpert检测在结核病诊断中的差异。结果结核分枝杆菌cfDNA检测诊断结核病的ROC曲线下面积(AUG)为:0.884,最佳诊断阈值(cut-off值)为38.69。T-SPOT.TB、Xpert、结核分枝杆菌cfDNA检测诊断结核病的灵敏性和特异性分别为:81.36%和40.98%、61.01%和96.72%、79.70%和95.10%。另外,结核分枝杆菌cfDNA检测对肺结核组(PTB)或肺外结核组(EPTB)患者的阳性检出率均高于Xpert检测(P0.05),但与T-SPOT.TB检测相比差异均无统计学意义(P0.05)。结论通过Q-PCR技术可以在结核病患者血浆中检测到结核分枝杆菌cfDNA,能够显著提高结核病的阳性检出率,并且有望成为肺外结核病快速诊断的新靶标。     

DNA微阵列芯片法检测耐药结核分枝杆菌的价值探讨

目的评价DNA微阵列芯片法快速检测耐药结核分枝杆菌的效果。方法对125份结核分枝杆菌痰涂片阳性标本和40份结核分枝杆菌传统培养阳性菌株样本,采用DNA微阵列芯片法进行异烟肼(isoniazid,INH)、利福平(rifampin,RFP)耐药性快速检测。同时以传统结核杆菌药物敏感试验方法作为金标准,对DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌耐药性的一致率进行评价分析。结果 DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌对INH耐药的敏感度为87.5%,特异度为100%,与传统药物敏感法的一致率为98.8%。DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌对RFP耐药的敏感度为83.3%,特异度为100%,与传统药物敏感法的一致率为99.4%。DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌耐多药的敏感度为100%,特异度为100%,与传统药物敏感法的一致率为100%。结论 DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌的耐药性与传统药物敏感法有较高的一致率,较为可靠,且检测所需时间短,可以作为临床肺结核耐药性的快速筛查方法。     

细胞壁缺陷结核分枝杆菌IS986序列的检测与分析

插入序列(IS)是染色体的特殊组分,是导致染色体大片段基因突变的主要原因。许多细菌的IS在其进化及作为一种基因标志在流行病学中的作用已被证实[1] ,因此我们探讨细胞壁缺陷变异对结核分枝杆菌染色体DNA保守重复序列IS986的影响。材料与方法　菌种:(1)结核分枝杆菌(TB) :编号930 0 9,中国药品生物制品检定所提供。(2 )结核分枝杆菌稳定L型(TBL) :按文献方法[2 ] 获得传代纯培养物。结核聚合酶链反应(TB PCR)检测试剂盒:由华美生物工程公司提供。纯化试剂盒:ResincolumnTM琼脂糖纯化系统,由华美生物工程公司提供。IS986扩增:按TB…     

非结核分枝杆菌病的研究进展

非结核分枝杆菌( non-tuberculous Mycobacteria,NTM)是指除MTB、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌和田鼠分枝杆菌等MTB复合群及麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌总称.迄今为止,共发现NTM菌种154种和13个亚种,其中大部分为腐物寄生菌,仅少部分NTM对人体致病,可侵犯肺脏、淋巴结、骨骼、关节、皮肤和软组织等组织和器官,并可引起全身播散性疾病[1-3].近年来,NTM病呈增多趋势,现就其流行病学、诊断及治疗等方面的研究进展进行综述[4-5].     

结核分枝杆菌耐药性检测新进展

结核分枝杆菌(MTB)的耐药形势日趋严重,耐药结核病的及时诊断对患者的治疗结局及结核病的控制十分重要.MTB传统的培养及药敏结果回报需时2～3个月,MTB耐药性的快速准确诊断是一个急需解决的问题.本文总结了MTB耐药性检测的传统技术包括罗氏培养及快速培养,并对比分析了其优缺点.综合国内外文献阐述了显微镜观察药物敏感性测定法的研究进展及分子生物学快速诊断技术包括线性探针杂交技术、Xpert MTB/RIF检测技术、基因芯片诊断技术及滚环扩增技术对于MTB及其耐药性检测的最新动态、各种检测方法的适用范围,并对比分析了各种检测方法的优缺点,为临床医师选择快速准确的诊断工具提供最佳的选择.