去甲二氢愈创木酸对恶性胶质瘤细胞增殖和分化的影响

观察去甲二氢愈创木酸对人恶性胶质瘤细胞系ＳＨＧ－４４细胞增殖和分化的影响。方法细胞培养、免疫组化、光镜和电镜观察及流式细胞仪检测。结论：ＮＤＧＡ对ＳＨＧ－４４细胞有明显的增殖抑制和诱导分化作用,且这种作用有周期特异性。     

去甲二氢愈创木酸对恶性胶质瘤细胞裸鼠移植瘤的作用

探讨去甲二氢愈创木酸对恶性胶质瘤细胞裸鼠移植瘤的作用,方法采用光镜和电镜观察移植瘤细胞的形态变化,用流式细胞仪进行细胞周期分析;用免疫组化检测肿瘤细胞中ＧＦＡＰ、ＰＣＮＡ的蛋白表达情况。结果（１）ＮＤＧＡ可明显降低裸鼠移植瘤的成瘤率;（２）ＮＤＧＡ能抑制移植瘤细胞的生长和诱导其分化,使细胞增殖受阻于Ｇ１→Ｓ期。结论：ＮＤＧＡ在体内与体外有相同的抗胶质瘤作用。     

CDK4在去甲二氢愈创木酸抑制恶性胶质瘤细胞增殖中的作用

目的：探讨细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4（CDK4）在去甲二氢愈创木酸（NDGA）抑制人恶性胶质瘤细胞系SHG－44细胞增殖中的作用。方法：采用细胞培养、细胞计数、流式细胞仪检测、免疫沉淀、免疫组化及图像分析等技术方法。结果：①在10－200μmol/L浓度范围内,NDGA可使SHG－44细胞增殖受阻,且NDGA液浓度越高,这种作用越明显,即呈明显的剂量依赖性;②NDGA对细胞周期抑制作用主要表现于G1→期;③NDGA处理后,SHG－44细胞CDK4蛋白激酶的活性降低,且这种作用与NDGA的处理浓度呈正相关,与NDGA对SHG－44细胞的增殖抑制作用相一致;④NDGA处理后,SHG－44细胞CDK4基因的蛋白表达明显减弱。结论：CDK4蛋白激酶活性降低在NDGA抑制SHG－44细胞增殖中起着十分重要的作用。     

去甲二氢愈创木酸对SHG-44胶质瘤细胞GFAP基因表达的影响

目的：探讨去甲二氢愈创木酸（NDGA）诱导恶性胶质瘤细胞分化过程中中对GFAP基因表达的影响及其意义。方法：用免疫组织化学和原位杂交方法定性、定量检测人恶性胶质瘤细胞系SHG－44细胞GFAP基因的表达水平。结果：NDGA处理后,瘤细胞GFAP蛋白及mRNA表达水平明显增高（P＜0.01）。结论：NDGA具有诱导恶性胶质瘤细胞GFAP基因表达的作用,推测GFAP基因表达上调可能是NDGA诱导胶质瘤细胞分化的作用机制之一。     

bcl-2、c-myc基因表达在去甲二氢愈创木酸诱导人恶性胶质瘤细胞凋亡中的意义

目的：观察bcl-2、c-myc在去甲二氢愈创木酸（NDGA）诱导恶性胶质瘤细胞系SHG－44细胞凋亡中的变化及意义。方法：利用光镜和电镜观察及TUNEL法检测培养细胞凋亡的情况,用免疫组织化学、原位杂交和图像分析等方法检测bcl-2、c-myc基因mRNA和蛋白的表达水平。结果:①一定浓度的NDGA处理SHG－44细胞12－96h,均可诱导SHG－44细胞发生凋亡,且随着作用时间的延长,凋亡细胞数增加越明显;②经NDGA处理细胞后,出现SHG－44细胞bcl-2、c-myc蛋白表达水平降低,且随着作用时间的延长,这种趋势更加明显,与细胞调亡的发生密切相关;③原位杂交结果显示,NDGA处理细胞不同时间后,出现SHG－44细胞bcl-2、c-myc基因mRNA的表达水平降低,结果与免疫组化检测一致。结论：NDGA诱导SHG－44细胞的凋亡可能与其下调bcl-2、c-myc基因的表达有关,但其确切机制有待进一步深入研究。     

去甲二氢愈创木酸对人恶性胶质瘤细胞系CHG-5生长的影响

目的观察去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)对人恶性胶质瘤细胞系CHG-5体内外生长的影响.方法采用MTT法、流式细胞仪、光镜等技术观察CHG-5细胞体外增殖、细胞周期、凋亡和裸鼠移植瘤生长情况.结果NDGA可显著抑制CHG-5细胞体外增殖,G0/G1期细胞明显增多,S、G2/M期细胞减少,凋亡细胞增加.采用接种后第5天按50 mg/kg腹腔内注射给药,治疗组移植瘤体积较对照组缩小,未见明显的毒副作用.结论NDGA对CHG-5细胞的体内外生长具有一定的抑制作用,其作用可能与细胞周期阻滞和诱导细胞凋亡有关.     

去甲二氢愈创木酸与氨甲喋呤、长春新碱配伍对人恶性胶质瘤细胞株的作用

目的：观察体外应用去甲二氢愈创木酸（NDGA）、氨甲喋呤（MTX）、长春新碱（VCR）3种药物单用或合用对人恶性胶质瘤细胞株SHG－44细胞的作用,并探讨其作用的可能机制。方法：用MTT法检测药物作用效应,用免疫组化染色法检测细胞CyclinD1基因的蛋白表达情况。结果：①3种药物单用及两药合用时随着药物浓度的增加其抗肿瘤效应也增加,且两药合用药物的效应增强;②先给NDGA24h后再给MTX或VCR,与同时给药对该细胞的抗肿瘤效应差异无显著性（P＞0.05）,而先给MTX或VCR24h后再给NDGA,与同时给药对细胞的抗肿瘤效应差异有显著性（P＜0.05）;③免疫组化染色结果显示,与对照组相比,NDGA处理后该细胞Cyclin D1基因的蛋白表达明显降低。结论：NDGA与MTX或VCR间有 协同作用,且这种作用可能与NDGA降低细胞cyclin D1基因的蛋白表达有关。     

去甲二氢愈创木酸的抗肿瘤作用研究进展

去甲二氢愈创木酸(Nordihydroguaiareticacid,NDGA)是一种天然物质,广泛存在于多种含树脂的植物中,以常青灌木分叉拉瑞阿(Larreadivaricata)中含量最为丰富,化学合成这一物质也已有不少报道[1].     

去甲二氢愈创木酸抑制骨肉瘤细胞黏附、迁移和侵袭

目的研究去甲二氢愈创木酸(NDGA)对骨肉瘤MG63细胞株黏附、迁移和侵袭特性的影响,并初步探讨其相关机制。方法不同浓度的NDGA处理MG63细胞,用CCK-8法、细胞划痕试验和Transwell小室模型分别测定其黏附力、迁移力和侵袭力,Western blot法检测MG63细胞基质金属酶(MMPs)表达量的变化。结果 NDGA明显抑制骨肉瘤MG63细胞株黏附、迁移和侵袭力(P<0.05);NDGA抑制MG63细胞的黏附、迁移和侵袭力呈剂量依赖性;Westernblot检测表明MG63细胞MMP-2和MMP-9的表达明显下调。结论 NDGA可抑制骨肉瘤MG63细胞的体外黏附,迁移和侵袭,这种抑制效应可能是通过减少骨肿瘤细胞MMP-2和MMP-9的表达来实现。     

去甲二氢愈创木酸对VEGF及其受体KDR基因表达影响的研究

目的：探讨去甲二氢愈创木酸（NDGA）对血管生成因子（VEGF）及其相应受体KDR基因表达状况的影响及其意义。方法：采用免疫组化、原位杂交及图像分析等技术方法观测NDGA作用下人恶性胶质瘤细胞系SHG－44细胞VEGF基因、人脐静脉内皮细胞系ECV－304细胞VEGF的相应受体KDR基因表达的变化。结果:①100μmol/L的NDGA处理胶质瘤细胞1－3d ,引起VEGF蛋白及mRNA表达水平的降低;②100μmol/L的NDGA处理内皮细胞1－3d,受体KDR的蛋白表达也呈下降趋势,且KDR基因表达的降 低较胶质瘤细胞VEGF的降低更为明显。结论：NDGA对胶质瘤细胞VEGF的表达有抑制作用,NDGA也抑制了内皮细胞KDR的表达,此抑制作用可能是NDGA抗血管生成的重要分子基础。     

Study of apoptosis induced by nordihydroguaiaretic acid in human ma-lignant glioma cell line SHG-44

Objective: To investigate the effect and mechanism of nordihydroguaiaretic acid (NDGA) on apop-tosis in human malignant glioma cell line SHG-44. Methods: Cell growth inhibition was measured with MTT assay. Cell apoptosis was observed with light and electron microscopy and TUNEL. Expression of bcl-2 gene was measured with immunohistochemistry, in situ hybridization and image analyses. Results: NDGA at the concentration of 100 μmol/L inhibited the proliferation of SHG-44 cells and induced apoptosis in a time-de-pendent manner. The expression of Bcl-2 protein in SHG-44 cells was decreased in the present of 100 μmol/L NDGA along with the duration of treatment in a negative correlation with the degree of cell apoptosis. The bcl-2 mRNA expressed in SHG-44 cells was reduced after treatment with 100 μmol/L NDGA, apparently consistent with the immunohistochemical results. Conclusion.- NDGA can induce apoptosis of human malig-nant glioma cells probably by down-regulating expression of bcl-2 gene, though the exact mechanism needs further study.     

NDGA诱导人胶质瘤细胞株分化过程中基因组甲基化及甲基转移酶的变化及意义

目的 了解去甲二氢愈创木酸(Nordihydroguaiaretic acid,NDGA)处理前后两种人胶质瘤细胞系CHC-5、SHC-44甲基转移酶(DNA methyltransferase，DNMT)活性、DBNT mRNA表达和基因组甲基化程度的改变。方法 以NDAG处理人恶性胶质瘤细胞系CHC-5及SHC-44，观察两种细胞增殖和分化状态；采用同位素微量示踪法测定甲基转移酶活性和基因组DNA甲基化程度；应用RT-PCR法测定洲DNMT mRNA表达水平。结果 NDMT处理后两种细胞增殖速度明显减缓，分化水平升高；DNMT活性显著降低、基因组甲基化程度明显升高；而DNMT mRNA改变不明显。结论 NDGA能抑制甲基转移酶的活性，升高基因组甲基化水平，这些作用可能与其诱导恶性胶质细胞瘤分化的机制有关。     

胶质瘤组织和细胞系中 Nanog 基因启动子区甲基化检测

目的：检测胶质瘤组织和细胞系中 Nanog 基因启动子区甲基化状态与 Nanog 基因的表达,并探讨其在胶质瘤发展中的作用。方法采用甲基化特异性 PCR(MSP)法分别检测正常脑组织、胶质瘤组织、胶质瘤癌旁组织、胶质瘤细胞系 U87和 U251中 Nanog 基因启动子区甲基化状态,实时定量 PCR(RT-PCR)法检测相应组织和细胞系中 Nanog 表达情况。结果 MSP 法检测胶质瘤组织 Nanog 基因启动子区呈非甲基化状态,且非甲基化检出率(58．82%)高于癌旁组织(13．63%),差异有统计学意义(χ2=14．852,P <0．01)。对MSP 法检测结果行灰度值分析,高级别胶质瘤中 Nanog 基因启动子区非甲基化程度高于低级别组。 U87和 U251细胞系中 Nanog 基因启动子区呈非甲基化状态。 RT-PCR 结果显示高级别胶质瘤中 Nanog mRNA 相对表达量高于低级别组, U87和 U251细胞系中 Nanog mRNA 的转录明显增多。结论胶质瘤中 Nanog 基因启动子区呈非甲基化状态,且可能促进 Nanog 基因的转录,影响胶质瘤的发生与发展。     

高效液相色谱法测定去甲二氢愈创木酸的含量及其有关物质

目的 建立测定去甲二氢愈创木酸(NDGA)含量和检查有关物质的HPLC方法.方法 采用Zorbax SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),检测波长为282 nm.含量测定以三氟醋酸-水-乙腈(0.05∶45∶55,pH 3.5)为流动相,有关物质检查采用梯度洗脱,以三氟醋酸-水(0.05∶100)为流动相A,三氟醋酸-乙腈(0.05∶100)为流动相B,洗脱梯度:0～15 min,流动相B的比例为40%～70%,15～30 min,流动相B的比例为70%.结果 NDGA浓度为5.0～100.0 μg/ml时,峰面积与其浓度呈良好的线性关系(r=0.999 9),检测限为1.2 ng(S/n=3),含量测定重复性试验RSD为0.54%(n=6).有关物质检查重复性试验RSD1.8% (n=6).结论 本法简便、准确、快速、灵敏,可用于NDGA的质量控制.