人脐血间充质细胞体外分离培养方法及培养基特性

目的：采用不同的培养基分离培养融合状态的间充质细胞，以筛选一种较好的体外培养人脐血问充质细胞的方法。 方法：实验于2003-11／2004-10在郑州大学医学院干细胞中心完成。选择郑州大学医学院第三附属医院产科足月妊娠健康产妇的脐血用于实验（产妇均签署知情同意书），随机分为4组：低糖DMEM（Dulbecco改良的Eagle培养基）组、高糖DMEM组、低糖DMEM＋干细胞因子组、Msencuh TM（一种特殊成分的液体培养基，与其添加物配合使用可促进间充质干细胞分化为脂肪细胞）组。待新生儿娩出后，立即断脐，消毒母侧脐带断端，60mL无菌注射针穿刺脐静脉取血，立即导入肝素抗凝的无菌采血袋内。取新鲜采集的脐带血，用1．077g／cm^3的淋巴细胞分层液，密度梯度离心法分离脐血单个核细胞，将脐血单个核细胞接种于37℃、体积分数为0．05的CO2培养箱内培养，倒置显微镜观察细胞数量和形态的变化。 结果：①各组间充质细胞培养24h后贴壁细胞数和细胞存活率的比较：Msencult TM组、低糖DMEM＋干细胞因子组的贴壁细胞数明显多于高糖DMEM组、低糖DMEM组[（40．5&;#177;9．7），（31．5&;#177;4．2），（14．0&;#177;1．4），（7．5&;#177;1．6）个，P〈0．05]，细胞存活率亦明显高于高糖DMEM组、低糖DMEM组[（97．1&;#177;0．9），（95．3&;#177;2．6），（84．1&;#177;1．9），（81.2&;#177;1．1）％，P〈0．051。②各组间充质细胞在不同培养时间下生长状态的比较：培养第3，7，10，14天Msencuh TM组、低糖DMEM＋干细胞因子组细胞增殖的速度均快于高糖DMEM组、低糖DMEM组（P〈0．05），且Msencult TM组细胞克隆数最多[（1&;#177;1．22），（0.83&;#177;0．75），（0．2&;#177;0．4），0个，P〈0．05]。 结论：采用低糖DMEM＋干细胞因子与单纯Mesencult TM培养基培养的细胞生长旺盛，但由于干细胞因子用量较大，价格昂贵，因此低糖DMEM联合应用干细胞因子的方法并不十分适用。而Mesencuh TM为酸性培养基，有利于脐血细胞的生长，并可形成克隆，为脐血间充质细胞的成功培养创造了条件，是一种适合脐血间充质细胞生长的培养基。     

不同体积分数脐血血清与骨髓间充质干细胞的增殖

背景：制备脐血血清体外扩增、培养间充质干细胞成为目前的研究热点,但尚无不同体积分数脐血血清对骨髓间充质干细胞的增殖能力的影响的报道。目的：观察比较不同体积分数的脐血血清对骨髓间充质干细胞的增殖能力的影响。方法：无菌条件下取20例人骨髓标本,采用密度梯度离心法提取单个核细胞,分别用体积分数为5%,7.5%,10%,15%,20%的脐血血清＋DMEM/F12培养基,行骨髓间充质细胞培养,取第3代细胞,用MTT法观察不同体积分数的脐血血清对间充质干细胞的增殖能力的影响。结果与结论：在体积分数5%,7.5%,10%的脐血血清＋DMEM/F12培养基组,细胞增殖能力较佳,明显优于体积分数15%,20%的脐血血清＋DMEM/F12培养基组,差异有显著性意义（P〈0.05）。说明在较低体积分数脐血血清培养体系中,骨髓间充质干细胞增殖状态活跃。     

人脐血间充质细胞体外分离培养方法及培养基特性

目的:采用不同的培养基分离培养融合状态的间充质细胞,以筛选一种较好的体外培养人脐血间充质细胞的方法。方法:实验于2003-11/2004-10在郑州大学医学院干细胞中心完成。选择郑州大学医学院第三附属医院产科足月妊娠健康产妇的脐血用于实验(产妇均签署知情同意书),随机分为4组:低糖DMEM(Dulbecco改良的Eagle培养基)组、高糖DMEM组、低糖DMEM+干细胞因子组、MsencultTM(一种特殊成分的液体培养基,与其添加物配合使用可促进间充质干细胞分化为脂肪细胞)组。待新生儿娩出后,立即断脐,消毒母侧脐带断端,60mL无菌注射针穿刺脐静脉取血,立即导入肝素抗凝的无菌采血袋内。取新鲜采集的脐带血,用1.077g/cm3的淋巴细胞分层液,密度梯度离心法分离脐血单个核细胞,将脐血单个核细胞接种于37℃、体积分数为0.05的CO2培养箱内培养,倒置显微镜观察细胞数量和形态的变化。结果:①各组间充质细胞培养24h后贴壁细胞数和细胞存活率的比较:MsencultTM组、低糖DMEM+干细胞因子组的贴壁细胞数明显多于高糖DMEM组、低糖DMEM组[(40.5±9.7),(31.5±4.2),(14.0±1.4),(7.5±1.6)个,P<0.05],细胞存活率亦明显高于高糖DMEM组、低糖DMEM组[(97.1±0.9),(95.3±2.6),(84.1±1.9),(81.2±1.1)%,P<0.05]。②各组间充质细胞在不同培养时间下生长状态的比较:培养第3,7,10,14天MsencultTM组、低糖DMEM+干细胞因子组细胞增殖的速度均快于高糖DMEM组、低糖DMEM组(P<0.05),且MsencultTM组细胞克隆数最多[(1±1.22),(0.83±0.75),(0.2±0.4),0个,P<0.05]。结论:采用低糖DMEM+干细胞因子与单纯MesencultTM培养基培养的细胞生长旺盛,但由于干细胞因子用量较大,价格昂贵,因此低糖DMEM联合应用干细胞因子的方法并不十分适用。而MesencultTM为酸性培养基,有利于脐血细胞的生长,并可形成克隆,为脐血间充质细胞的成功培养创造了条件,是一种适合脐血间充质细胞生长的培养基。     

人脐血间充质干细胞培养方法的比较

背景：脐血中含丰富的间充质干细胞,可以作为组织工程中一种新的种子细胞来源。目的：应用两种培养基体外培养、扩增、分离纯化脐血间充质干细胞,比较其生物学特性的差异。方法：无菌条件下采取40份足月顺产的脐血,肝素抗凝。应用Ficol 密度梯度离心法分离脐血单核细胞,随机分为两组,其中20份用MesenGro人间充质干细胞培养基进行培养,20份用DMEM培养基进行培养。对比两组梭形的间充质干细胞出现时间、细胞集落出现时间、培养时间、原代细胞数量。选用生长情况良好的原代脐血间充质干细胞,用流式细胞仪检测间充质干细胞表面特异性标记表达情况。结果与结论：MesenGro组梭形的间充质干细胞平均出现时间、细胞集落平均出现时间、原代细胞平均培养时间、原代细胞平均数量为均优于DMEM组（P 〈0.01）。流式细胞仪检测显示,培养的细胞强表达间充质干细胞表面标志CD73和CD105,阳性率99.1%,不表达造血干细胞表面标志CD45和CD34,阴性率99.3%。结果提示在培养间充质干细胞的数量、形态、生长速度和培养时间诸方面,MesenGro 人间充质干细胞培养基均优于DMEM培养基。选用MesenGro人间充质干细胞培养基可以更纯、更快、更好地从脐血中培养出表达间充质干细胞表面标志的细胞。     

两种来源的单个核细胞的培养比较

[目的] 观察体外分离培养的两种来源（脐血与骨髓）的单个核细胞，探讨其培养特点和差异。[方法] 体外分离、纯化和培养脐血与骨髓中单个核细胞（MNC），观察其形态和生长特性。[结果] 分离18份脐血，脐血标本的个体差异非常大，只有12份获得了贴壁细胞，MNC体外培养可以获得贴壁细胞，但形态不均一，主要为破骨样细胞和纤维样细胞，传代不超过二次。分离12份骨髓，均获得了贴壁细胞，MNC体外培养可以获得形态均一的纤维样间充质干细胞（MSC），可多次传代。[结论] 脐血不能获得典型的间充质样干细胞，骨髓中存在典型的间充质干细胞。     

脐血间充质干细胞体外扩增和向神经元样细胞的定向诱导

背景:骨髓间充质干细胞存在取材困难、供体有限,可能病毒污染等缺陷,限制了其临床应用,而目前已证实间充质干细胞不仅存在于骨髓,还存在于外周血,尤其是脐血.目的:探讨人脐血间充质干细胞的体外分离、扩增纯化方法及其神经分化潜能.设计、时间及地点:应用研究,体外细胞学观察,于2005-10/2007-10在南方医科大学神经生物学教研室完成.材料:新鲜脐血来自南方医科大学南方医院足月剖宫产新生儿脐带,取脐血前征得新生儿监护人的知情同意.方法:无菌条件下收集脐血,去除红细胞,采用低糖DMEM/F12进行培养:取扩增第3或4代的人脐血间危质干细胞,培养基中添加碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子和全反式维甲酸.主要观察指标:用流式细胞仪检测贴壁细胞的表面标志;用免疫组化法检测诱导后细胞神经元特异性烯醇化酶、巢蛋白、神经元特异性核内抗原和神经丝蛋白表达.结果:人脐血间充质干细胞强表达CD13、CD29、CD44和CD105,弱表达CD106,不表达CD34、CD11a、CD14、CD33和CD45.培养基添加神经营养因了诱导后的细胞呈现典型的神经元样表型,诱导后高表达巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶、神经元特异性核内抗原和神经丝蛋白.结论:人脐血富含间充质干细胞,分离培养后于培养基添加神经营养因子能够分化为神经元样细胞.     

脐血间充质干细胞的适宜培养条件

背景：目前有关脐血间充质干细胞培养的实验较多,主要从改善培养基成分、脐血细胞的分离方法以及首次换液时间等方面进行调整,目前尚未建立一个安全、高效的培养体系。目的：探讨脐血间充质干细胞的适宜培养条件。方法：于新疆医科大学第一附属医院产科取健康产妇的脐血,比较不同换液时间、不同培养基、不同体积分数的胎牛血清对脐血间充质干细胞原代培养效果的影响。结果与结论：首次第5～7天换液、低糖DMEM、IMDM培养基有利于脐血间充质干细胞的生长。但还不能认为含体积分数为30%胎牛血清与含体积分数为20%胎牛血清的培养基在培养脐血间充质干细胞方面有差别。     

影响脐血间充质干细胞分离培养的关键环节

背景：脐血中存在间充质干细胞,目前国内外尚未见到对脐血间充质干细胞体外分离、培养及扩增较统一且有效的方法。目的：探讨影响人脐血间充质干细胞成功分离培养的相关因素。方法：分别从不同胎龄（≥40 周,37 周和≤32 周）,脐血中单个核细胞数量（≥2.5×109L-1,〈2.5×109 L-1）, 不同细胞接种浓度（1×107,1×109,1×1011 L-1）,不同体积分数胎牛血清（5%,10%,15%,20%）以及培养瓶是否被胎牛血清包被等方面对人脐血间充质干细胞分离培养成功率进行比较。结果与结论：脐血间充质干细胞的分离培养成功率为 58.3%,且随胎龄的增高而培养成功率降低（P〈0.01）;脐血中单个核细胞浓度≥2.5×109 L-1组培养成功率高于〈2.5×109 L-1组（P〈0.01）;相同容量脐血中单个核细胞数量与胎龄呈负相关（r=-0.95,P〈0.01）;1×1011 L-1 组原代及传代培养的间充质干细胞生长及扩增情况高于 1×107,1×109 L-1;体积分数 5%FBS 组间充质干细胞贴壁速度较其他 3 组略慢,但细胞纯度较高,且细胞传代速度与其他 3 组无明显差别;胎牛血清包被组脐血间充质干细胞原代和传代后的纯度及扩增能力均高于未包被组。提示脐血间充质干细胞分离培养成功率受多种因素的影响：通过选择较低胎龄的胎儿,采集足够量的脐血,以较高的细胞密度接种,培养基中添加较低浓度的胎牛血清,并将培养瓶预先用胎牛血清进行包被,能在体外建立稳定的脐血间充质干细胞培养体系。     

人脐血间充质干细胞体外分离培养条件的优化及其鉴定

背景:相对于骨髓间充质干细胞来说,脐血间充质干细胞是一种较为理想的新的组织工程种子细胞来源,但其培养成功率较低.目的:通过对培养基的选择、离心速度及时间、接种密度、生长因子的选择、首次换液时间等条件进行优化,拟建立一种稳定可靠的人脐血间充质干细胞的体外分离培养方法.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-01/10在白求恩国际和平医院输血科完成.材料:健康足月剖宫产新生儿脐带血20份,由白求恩国际和平医院干细胞中心提供,产妇及其家属均知情同意.方法:无菌条件下采集脐血,采用密度梯度离心法(1500 r/min离心15 min)结合直接贴壁法体外分离脐血间充质干细胞,加入含体积分数为10%人脐带血血清、5 μg,L GM-CSF、15 μg/L白细胞介素3的DMEM/F12培养基,调整细胞密度为1×1010L-1接种于人脐带血血清包被过的塑料培养瓶中,置于37℃、体积分数为5%的CO2饱和湿度环境下培养,3 d后首次换液,去除未贴壁细胞,以后每隔24 h换液1次.当培养瓶中的细胞生长到80%融合时,胰酶-EDTA混合液消化传代.主要观察指标:倒置相差显微镜下观察细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞免疫表型.结果:24 h后可见有少量细胞贴壁,48 h后贴壁细胞增多,并出现少量单极梭形细胞,7d后可见细胞形成集落,培养两三周形成平行排列、辐射状或漩涡状细胞界限不清楚的成纤维样细胞,且80%～90%呈现融合.第2代细胞接种后12 h开始贴壁,10 d即可达80%～90%融合.流式细胞仪分析显示,此类细胞稳定地表达相关抗原标记CD29及CD44,但不表达造血细胞系表面标记CD34.结论:实验在体外改良培养条件下成功分离出人脐血间充质干细胞,培养周期较短,细胞纯度较高,贴壁细胞稳定表达间充质干细胞表面相关抗原.     

重型肝病患者血清诱导脐血间充质干细胞表达白蛋白和细胞角蛋白18

背景:脐血富含间充质干细胞,刺激后进入细胞周期的速度以及自分泌生长因子的能力均强于骨髓及外周血干细胞。目的:观察肝衰竭患者血清对人脐血间充质干细胞的诱导分化作用。方法:密度梯度离心和贴壁培养法相结合分离纯化脐血间充质干细胞并鉴定,以20%肝衰竭患者血清诱导培养,培养7,14,21d采用免疫组织化学方法检测白蛋白和细胞角蛋白18的表达。结果与结论:实验分离获得了高纯度贴壁生长的间充质干细胞,人脐血间充质干细胞高表达CD44和CD29,不表达CD34,体外可以分化为脂肪细胞;人脐血间充质干细胞在肝病患者血清的低糖DMEM培养基中形态发生明显改变,镜下观察细胞变得稍大而扁平,呈类上皮样细胞,SP染色显示实验组培养7d时仅少数细胞表达白蛋白和细胞角蛋白18,培养14,21d,白蛋白和细胞角蛋白18表达阳性率逐渐升高,与对照组相比差异有显著性意义(P<0.05)。提示密度梯度离心和贴壁培养法相结合可以获得纯度较高的脐血间充质干细胞,肝衰竭患者血清可诱导间充质干细胞表达白蛋白和细胞角蛋白18。     

人脐带间充质干细胞与乳鼠许旺细胞共培养向类神经元样细胞的分化

背景：间充质干细胞可以通过化学诱导或者共培养的方法分化为类神经细胞,但是对于间充质干细胞是与许旺细胞共培养分化为类神经元还是类许旺细胞,还存在争议。 目的：探索大鼠许旺细胞对人脐带间充质干细胞诱导分化作用。 方法：将1×109 L-1人脐带间充质干细胞通过Transwel 隔离小室与1×109 L-1SD乳鼠许旺细胞共培养2周,观察脐带间充质干细胞的形态变化,并用免疫荧光法检测其表型变化。 结果与结论：共培养2周后,部分间充质干细胞出现类似神经元的形态,且表达nestin,NF-200,β-Ⅲ-tubulin等神经元特异性标记物,不表达许旺细胞特异性表记物S100和胶质细胞特异性标记物MAB1580。提示人脐带间充质干细胞可以与大鼠许旺细胞非接触共培养分化为类神经元。     

骨组织工程中干细胞的研究与应用

背景：是否可以通过改进对已知的可以分化成骨的干细胞的培养方式或者寻找到新的干细胞,为骨组织工程找到更为合适的种子细胞.目的：从干细胞的分离培养、生物学特性及标志物等方面对各类干细胞的在骨组织工程中的应用进行综述.方法：以英文检索词为“bone tissue engineering,seed cel s,stem cel ,osteoblast differentiation”及中文检索词为“骨组织工程,种子细胞,干细胞,成骨分化”,由第一作者检索1995年至2012年PubMed 数据库及中国知网中文科技数据库,查阅近年种子细胞相关文献,最终保留50篇文献,从分离培养方法、基本特性及在骨组织工程中的应用3方面进行综述.结果与结论：文章分别对各类干细胞（包括：胚胎干细胞、骨髓间充质干细胞、滑膜间充质干细胞、脐带间充质干细胞和脐带血间充质干细胞、外周血来源的多潜能间充质干细胞、脂肪干细胞、子宫内膜基质干细胞、人羊膜基质细胞、牙髓干细胞）的分离方法、生物学特性、标志物等相关实验研究进行了探讨.目前用于分离纯化骨髓间充质干细胞的方法主要有4种：密度梯度离心法、全骨髓贴壁培养法、流式细胞仪分离法和免疫磁珠法.研究证实各类干细胞在特定条件下均有分化成骨的能力.     

Notch信号通路阻断剂对人脐带间充质干细胞软骨分化的影响

背景：Notch信号通路作为一条在细胞增殖和分化过程中起重要作用的信号通路,目前它在人脐带间充质干细胞在体外向软骨细胞诱导分化过程中的作用仍然未知。目的：首次探讨Notch信号通路特异性阻断剂2,4-二氨基-5-苯噻唑（DAPT）对人脐带间充质干细胞向软骨细胞诱导分化的影响。方法：从人脐带中分离获得间充质干细胞,体外向软骨细胞诱导分化。实验分4组：①无诱导组换成含体积分数5%胎牛血清和1%双抗的DMEM高糖培养基培养。②单纯诱导组换成终浓度为6.25 mg/L胰岛素、6.25 mg/L转铁蛋白、10μg/L转化生长因子β1、0.1μmol/L地塞米松、50 mg/L维生素C、体积分数5%胎牛血清和1%双抗的软骨诱导培养基培养。③二甲基亚砜组在软骨诱导培养基中加入终浓度为0.1%的二甲基亚砜培养。④2,4-二氨基-5-苯噻唑组在软骨诱导培养基中加入终浓度为5μmol/L的2,4-二氨基-5-苯噻唑（溶于二甲基亚砜）培养,二甲基亚砜终浓度为0.1%。结果与结论：诱导人脐带间充质干细胞向软骨细胞分化后,细胞形态由长梭形变为多边形,且甲苯胺蓝染色和免疫荧光染色均呈现阳性;软骨诱导分化后Jag-1、PS-1、Notch-1、Hes-1的基因表达均明显下降（P〈0.01）;添加2,4-二氨基-5-苯噻唑后,与单纯诱导组相比,人脐带间充质干细胞中Jag-1、PS-1、Hes-1（P〈0.01）和Notch-1（P〈0.05）的基因表达显著降低;蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白含量均降低（P〈0.01）;蛋白聚糖的基因表达显著降低（P〈0.01）,Ⅱ型胶原蛋白的基因表达也出现一定程度的下降。提示Notch信号存在于人脐带间充质干细胞中,诱导人脐带间充质干细胞向软骨细胞分化后,这种信号强度迅速减弱;2,4-二氨基-5-苯噻唑可能通过Jag-1-Notch-1-Hes-1途径抑制人脐带间充质干细胞向软骨细胞分化。     

人脐带间充质干细胞移植治疗初发1型糖尿病鼠

背景：间充质干细胞具有自我复制、诱导免疫耐受和组织修复的特性,而1型糖尿病是以胰岛β细胞受损为主的自身免疫性疾病.鉴于此,考虑间充质干细胞可预防治疗1型糖尿病.目的：观察脐带间充质干细胞对初发1型糖尿病鼠（NOD鼠）的治疗作用.方法：选用1型糖尿病模型鼠（NOD 小鼠）,分为3组,正常对照组为未发病鼠,尾静脉注射生理盐水1 mL;发病后脐带间充质干细胞干预组尾静脉注射脐带间充质干细胞1 mL,1.0×10^6/只;发病后未用干细胞干预组尾静脉注射生理盐水1 mL.观察3个月,检测NOD鼠血糖、每天胰岛素使用剂量;流式细胞仪检测反应性CD4^＋、CD8^＋T细胞、CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的数量及比例;ELISA法检测白细胞介素2、白细胞介素10、肿瘤坏死因子α水平;酶联免疫双抗体夹心法测定空腹和餐后2 h C肽水平;病理切片观察胰岛的形态,淋巴细胞浸润情况;免疫组化观察胰岛α和β细胞的数量和体积.结果与结论：①与未用干细胞干预组比较,脐带间充质干细胞干预组免疫组化证实淋巴细胞浸润明显减少,胰岛α、β细胞结构更完整,α和β细胞数量明显上升且一致.②脐带间充质干细胞干预组CD4＋T细胞数量、CD4^＋/CD8^＋T 细胞比值均低于未用干细胞干预组（P 〈0.05）,而脐带间充质干细胞干预组CD4^＋CD25^＋调节性T细胞数量明显高于未用干细胞干预组（P〈0.01）.③脐带间充质干细胞干预组肿瘤坏死因子α水平明显低于未用干细胞干预组,而白细胞介素10水平较未用干细胞干预组明显上升（P 〈0.01）.④脐带间充质干细胞干预组血糖水平及胰岛素用量明显小于未用干细胞干预组,C肽水平较未用干细胞干预组升高（P 〈0.05）.结果可见脐带间充质干细胞可降低初发1型糖尿病的血糖及胰岛素的用量,治疗1型糖尿病效果比较明显.     

人脐带间充质干细胞联合番茄红素延缓比格犬的自然衰老

背景：实验室前期已初步表明干细胞联合番茄红素对D-半乳糖衰老模型小鼠的抗衰老作用显著,且能明显改变衰老机体的免疫功能。 目的：观察人脐带间充质干细胞联合番茄红素对自然衰老比格犬的抗衰老作用。 方法：选用自然衰老的健康比格犬（6至7岁龄）16只,随机分为衰老对照组和衰老治疗组,以健康青年犬（3至4岁龄）作为青年对照组。衰老治疗组给予人脐带间充质干细胞和番茄红素联合治疗,其余两组给予等量的DMEM/F12细胞培养液和等量葵花籽油。治疗过程中定期观察各组犬的一般状况,测定血清中超氧化物歧化酶活性、丙二醛浓度及谷胱甘肽过氧化物酶活性。治疗24周后处死全部动物,观察各器官组织结构的病理变化。 结果与结论：①治疗前,衰老对照组和衰老治疗组血清超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性均低于青年对照组,血清丙二醛浓度均高于青年对照组,差异有显著性意义（P均＜0.05）,而衰老对照组和衰老治疗组之间差异无显著性意义（P＜0.05）。②衰老治疗组经24周治疗后,比格犬皮毛明显光滑,活动力加强,食欲较好;与治疗前和衰老对照组比较,血清中超氧化物歧化酶活性从治疗第8周起显著升高,谷胱甘肽过氧化物酶活性从第6周起显著升高（P均＜0.05）,血清丙二醛浓度从治疗第4周起显著降低（P均＜0.05）。③实验结束后,与衰老对照组比较,衰老治疗组各组织器官结构清晰,基本无炎性浸润,无明显坏死及纤维化病变,与青年对照组组织器官表现基本一致。以上结果表明脐带间充质干细胞联合番茄红素治疗能不同程度提高自然衰老比格犬血清抗氧化物酶的活性,降低丙二醛浓度,且能促进修复改善组织器官结构及功能,故具有明显的抗衰老作用。     

冷冻前后脐带间充质干细胞造血支持能力的比较

背景：低温冻存脐带间充质干细胞已成为研究热点,但关于冻存后其造血支持能力变化的报道甚少。目的：比较冷冻前后脐带间充质干细胞体外支持成人骨髓单个核细胞造血集落生成的能力。方法：分别将冷冻前后的人脐带间充质干细胞和人骨髓来源的间充质干细胞培养至第3代,经2.5g/L丝裂霉素C处理制备为细胞滋养层,与成人异体骨髓单个核细胞共培养。体外培养至35d应用甲基纤维素法检测造血干/祖细胞集落的增殖状态。结果与结论：冷冻人脐带间充质干细胞组集落形态、大小上与骨髓间充质干细胞组和未冷冻人脐带间充质干细胞组相似,3者均比空白组集落数量多,差异有显著性意义（P〈0.05）。与未冷冻人脐带间充质干细胞组相比,冷冻人脐带间充质干细胞组集落数更少,差异有显著性意义（P〈0.05）。实验结果说明冷冻前后人脐带间充质干细胞与骨髓间充质干细胞对骨髓单个核细胞均有造血刺激作用,但人脐带间充质干细胞冷冻后的造血支持作用有所减弱。     

补阳还五汤生物碱有效部位对人脐血干细胞体外增殖的影响

背景：研究表明补阳还五汤对各种细胞均有保护作用,但机制尚不清楚,有研究推测是它的生物碱有效部位起作用.目的：观察补阳还五汤生物碱有效部位对人脐血干细胞体外增殖的影响.方法：获取临床健康产妇的新鲜脐血,制备人脐血干细胞悬液,将纯化的人脐血干细胞接种于40个培养皿中进行传代.分组：川芎嗪组给予100 g/L川芎嗪,阿魏酸组给予50 g/L阿魏酸,生物碱有效部位组（川芎嗪＋阿魏酸组）给予100 g/L川芎嗪＋50 g/L阿魏酸;对照组：继续用含体积分数为20%小牛血清的DMEM培养液培养.培养2,4,6,8,10 d观察人脐血干细胞增殖情况;24,72 h后流式细胞仪测定S期细胞的比例,培养10 d后电流钳模式记录细胞静息膜电位变化.结果与结论：川芎嗪组和阿魏酸组人脐血干细胞的增殖作用不明显,培养10 d时生物碱有效部位组细胞增殖情况明显高于川芎嗪组、阿魏酸组和对照组（P〈0.01）.生物碱有效部位组在培养24,72 h后处于S期的人脐血干细胞明显增多;川芎嗪＋阿魏酸组细胞静息膜电位高于川芎嗪组、阿魏酸组和对照组（P〈0.01）.提示补阳还五汤生物碱有效部位能促进人脐血干细胞的体外增殖.     

Toll样受体3对胚胎骨髓来源间充质干细胞免疫调节Th17细胞的作用

背景：课题组前期研究发现胚胎骨髓来源的间充质干细胞促进人Th17细胞增殖,但内在的调节机制尚需阐明。目的：探讨Tol 样受体3对胚胎骨髓来源间充质干细胞免疫调节Th17细胞的作用。 方法：应用免疫磁珠分离正常人 CD4＋ T 细胞,单独或与胚胎来源骨髓间充质干细胞共培养4 d。实时定量PCR测定白细胞介素17、Tol 样受体3及MyD88相关基因的表达水平。〈br〉 结果与结论：相对于CD4＋T细胞单独培养组,间充质干细胞共培养组白细胞介素17 mRNA表达水平明显升高（3.59±0.11 vs.1.14±0.08,P ＜0.01）;进一步发现 Tol 样受体3 mRNA 亦相应升高（3.10±1.60 vs.0.94±0.01,P ＜0.05）。而且,相对于CD4＋T细胞单独培养组,胚胎骨髓来源间充质干细胞共培养组促进了MyD88的表达（2.29±0.05 vs.1.85±0.31,P＜0.01）。研究结果表明Tol 样受体3可能对胚胎骨髓来源间充质干细胞免疫调节Th17细胞发挥作用,为今后潜在的细胞治疗策略提供可能的实验依据。     

人脐血间充质干细胞移植治疗大鼠肝硬化模型

背景：研究表明,脐血间充质干细胞可在特定环境下诱导为肝样细胞,移植入体内能行使正常肝细胞的功能.目的：应用四氯化碳诱导制作大鼠肝硬化模型,观察脐血间充质干细胞移植对肝硬化模型大鼠的治疗作用.方法：经四氯化碳诱导制作大鼠肝硬化模型,将20只肝硬化SD大鼠随机分为2组,对照组经尾静脉注射0.5 mL生理盐水,治疗组经尾静脉注射氯甲基苯甲酰胺标记的脐血间充质干细胞混悬液,干细胞量为1×106个.2周后处死所有大鼠,取大鼠静脉血检测肝功能指标,并行肝脏组织切片观察.结果与结论：肝硬化模型大鼠肝细胞疏松、浊肿,部分细胞变性、坏死,肝小叶结构模糊不清,有多个大小不等的假小叶形成,符合肝硬化诊断标准.与对照组相比,治疗组大鼠血清白蛋白质量浓度显著增高（P〈0.05）,胆红素浓度显著降低（P〈0.05）,转氨酶活性显著降低（P〈0.05）.治疗组大鼠肝脏内有大量氯甲基苯甲酰胺标记的红色脐血间充质干细胞.提示脐血间充质干细胞可通过肝硬化模型大鼠尾静脉有效改善肝组织的生理功能.     

脐血来源间充质干细胞的分化潜能

背景：脐血源间充质干细胞是来源于发育早期中胚层的一类多能干细胞,因其具有多向分化潜能的特点而日益受到关注。目的：综述脐血来源间充质干细胞的诱导分化潜能。方法：应用计算机检索Pubmed数据库中1999年1月至2012年12月关于脐血源间充质干细胞分化潜能的文章,在标题和摘要中以＂umblical cord blood,mesenchymal stem cells,potential,differentiation＂为检索词进行检索。最终选择关于脐血源间充质干细胞分化潜能的52篇文献进行综述。结果与结论：虽然很多实验已经证实人脐血间充质干细胞可以成功向多种细胞系分化,但对其了解程度尚浅。如果能掌握脐血间充质干细胞分化潜能的特点,那么很可能用它来修复许多骨缺损、心肌缺损等。目前研究正处于起步阶段,在分离纯化技术、分化方向的调控、体外扩增、免疫原性等方面尚有待进一步深入研究。